《醫(yī)學實驗動物學》9第六章 動物模型和免疫缺陷動物

第六章人類疾病動物模型免疫缺陷動物精選課件第一節(jié)人類疾病動物模型定義和意義精選課件一、定義

人類疾病動物模型是指在醫(yī)學研究中，在動物身上建立，或形成類似人類疾病動物。通過動物模型直接，或間接反映疾病的發(fā)生和發(fā)展過程，在了解疾病的基礎上開創(chuàng)和改進、優(yōu)化疾病的治療。

精選課件二、使用人類疾病動物模型意義

應用動物模型的意義主要表現(xiàn)在如下幾個方面：(1)

避免人體實驗造成的危害

動物可以作為人類的替難者，可在人為設計的特定實驗條件下反復實驗研究。使用動物模型除了能克服在人類研究中經(jīng)常遇到的倫理和社會道德限制外，還能采用某些不能應用于人類研究的方法和途徑，甚至為了實驗目的需要還可以損傷動物組織、器官以至處死。

(2)

應用動物模型可研究平時不易見到的疾病

平時臨床很難見到放射病、毒氣中毒、烈性傳染病、戰(zhàn)傷等疾病，根據(jù)實驗要求能復制該疾病的動物模型，供研究使用。精選課件(3)可提供發(fā)病率低，潛伏期和病程長的疾病的動物模型

有些疾病如免疫性、代謝性、內(nèi)分泌和血液等疾病在臨床上發(fā)病率低，人們可選用動物種群中發(fā)病率高的類似于人的疾病作為動物模型，也可通過不同方法復制這些疾病的動物模型從事研究工作。還有些疾病如腫瘤、慢性氣管炎、動脈粥樣硬化、遺傳病、肺心病、類風濕等疾病發(fā)生發(fā)展速度緩慢，潛伏期長，病程也長，短的幾年，長的十幾年甚至幾十年，有的疾病要隔代或者幾代才能顯性發(fā)病。大多動物由于生命周期比較短，在短時間內(nèi)進行一代或幾代的觀察就顯得十分容易．應用動物模型來研究就克服了以上不足。精選課件(4)克服復雜因素，增加方法學上的可比性

臨床上許多疾病是十分復雜的：病人并非患有一種疾病，有的幾種疾病同時并存，即使某單一疾病，由于病人的年齡、性別、體質、遺傳以及社會因素對其疾病發(fā)生發(fā)展都會有影響，產(chǎn)生不同的效果。而用動物復制的疾病模型，就可以選擇相同品種、品系、性別、年齡、體重、健康狀態(tài)以及在相同的環(huán)境因素內(nèi)進行觀察研究，這樣對該疾病及其發(fā)展過程的研究就可以排除其他影響因素，使得到的結果更加準確，也可單一變換某一因素，使實驗研究的結果更加深入，增加了因素的可比性。精選課件(5)樣品收集方便，實驗結果易分析

動物模型作為研究人類疾病的“代替品”，便于實驗操作人員按時采集所需各種樣品，及時或分批處死動物收集樣本，以便更好地了解疾病過程，完成實驗目的，這點在臨床是不易辦到的。(6)有利于更全面地認識疾病的本質

有些病原體不僅引起人類發(fā)生疾病，也可引起動物感染，其臨床表現(xiàn)各有特點，通過對人畜共患病的比較，可觀察到同一病原體在不同的機體引起的損害，更有利于全面地認識疾病的本質。綜上所述，動物模型在醫(yī)學科學研究中做出了巨大的貢獻。精選課件三、動物疾病模型具有的特點①應再現(xiàn)所要研究的人類疾病，動物疾病表現(xiàn)應與人類疾病相類似；②動物能重復產(chǎn)生該疾病，最好能在2種動物體復制該?。虎蹖嶒瀯游锖细?，動物背景資料完整，生命周期要滿足實驗需要；④動物要價廉、來源充足、便于運送；⑤盡可能選用體型小的動物。

精選課件四、影響動物模型質量的因素1．致模因素對動物模型復制的影響選擇好致模因素是復制動物模型的第一步。應明確研究目的，清楚相應人類疾病的發(fā)生、臨床癥狀和發(fā)病機制，熟悉致病因素對動物所產(chǎn)生的臨床癥狀和發(fā)病情況，致病因素的劑量。

精選課件

2．動物因素對動物模型復制的影響

復制動物模型的動物種類繁多，如實驗動物、家養(yǎng)動物和野生動物。野生動物屬自然生態(tài)類型，其微生物感染復雜，遺傳背景不清楚，來源困難，很難飼養(yǎng)，因此不便使用；家養(yǎng)動物飼養(yǎng)方便，來源容易，但微生物控制不嚴，遺傳背景不清楚也不提倡使用；應盡可能使用標準化實驗動物。此外，動物種類、品系、年齡和體重、性別、生理狀態(tài)和健康因素等均對動物模型質量有不同程度的影響。精選課件3．實驗技術因素對動物模型復制的影響(1)實驗季節(jié)動物體對外界的反應情況，同樣受春、夏、秋、冬不同季節(jié)的影響，不同實驗季節(jié)，動物的機體反應性在某些方面有一定的改變，這種影響在進行跨季節(jié)的動物模型實驗時應引起重視。(2)晝夜不同時間的影響實驗動物的體溫、血糖、基礎代謝率、內(nèi)分泌激素的分泌等隨著晝夜的不同發(fā)生節(jié)律性的變化。在復制動物模型進行實驗研究時，應注意實驗中某種處理的時間順序對結果的影響。精選課件

(3)麻醉深度的影響在復制動物模型時往往需要將動物麻醉后才能進行各種手術，實施某些致模因素。不同麻醉藥物和不同麻醉劑量有不同的藥理作用和不良反應，如麻醉過深動物處于深度抑制狀態(tài)，甚至瀕死狀態(tài)，動物各種反應受到抑制，結果的可靠性受影響；麻醉過淺，在動物身上進行手術或實施某些致模因素，將造成動物強烈的疼痛刺激，引起動物全身特別是呼吸、循環(huán)、消化等功能發(fā)生改變，同樣會影響造模的準確性。精選課件

(4)手術技巧的影響在實驗手術造模時，首先要選擇好最佳的手術路線，以免過大、過繁的手術給機體帶來影響。手術技術熟練與否也是影響因素，技術熟練可以減少對動物的刺激、創(chuàng)傷和出血，將提高造模的成功率。(5)實驗給藥的影響在造模過程中給藥是常規(guī)工作，但對造模也是影響因素，如給藥的途徑、劑量、熟練程度等影響。(6)對照組對造模的影響在復制動物模型時常常因忽視或錯誤應用對照的問題，而造成動物模型的失敗或誤導錯誤結論，應根據(jù)不同要求設置好對照組。精選課件4．環(huán)境因素和營養(yǎng)因素對復制動物模型的影響營養(yǎng)因素對復制動物模型，特別是長期實驗，影響顯著，應予以重視。如采用國家標準飼料則問題就會解決。造模過程中應注意給水量充分和給予符合衛(wèi)生標準的飲水。環(huán)境因素是影響造模及其實驗結果的重要因素，居住條件、飼料、營養(yǎng)、光照、噪聲、氨濃度、溫度、濕度、氣流速度等任何一項都不容忽視。精選課件第二節(jié)人類疾病動物模型的分類精選課件一.醫(yī)學動物模型基本分類

1．誘發(fā)性動物疾病模型

是指以物理學、化學、生物學等致病手段，人為導致動物組織、器官或整體成為人類疾病動物模型；使其在功能、代謝、形態(tài)結構等方面發(fā)生改變，即人為地誘發(fā)動物產(chǎn)生類似人類疾病模型。

精選課件2．自發(fā)性動物模型

是指不加任何人工誘發(fā)，在自然條件下動物自然產(chǎn)生的疾病，或者由于基因突變的異常表現(xiàn)，通過遺傳育種保留下來的動物疾病模型。其中包括近交系的腫瘤疾病模型和突變系的遺傳性疾病模型。

精選課件3．抗疾病型動物模型

是指特定的疾病不會在某種動物身上發(fā)生。因此，可借以探討何種動物對該疾病有天然的抵抗力。如哺乳動物均易感染血吸蟲病，而居于洞庭湖流域的東方田鼠卻不能復制血吸蟲病，因此將之用于血吸蟲病的發(fā)病機制和抗病機制的研究。

精選課件4．生物醫(yī)學動物模型

是指以動物生物學特征來提供人類疾病相似表現(xiàn)的疾病模型。如沙鼠缺乏完整的基底動脈環(huán)，左右大腦供血相對獨立，是研究中風的理想動物模型；鹿的正常紅細胞是鐮刀形的，多年來被供作鐮刀形紅細胞貧血研究；兔胸腔的特殊結構用于胸外手術研究比較方便；但這類動物模型與人類疾病存在著一定的差異，研究人員應加以分析比較。精選課件二、按系統(tǒng)范圍分類1．疾病基本病理過程動物模型

是指致病因素在一定條件下作用于動物后，所出現(xiàn)的共同性的功能、代謝和形態(tài)結構某些改變的動物模型。

精選課件2．各系統(tǒng)疾病動物模型

是指與人類各系統(tǒng)疾病相應的動物模型，如神經(jīng)、心血管、呼吸、消化、泌尿等系統(tǒng)疾病相應的動物模型。精選課件

[A.神經(jīng)系統(tǒng)]1．大鼠囊狀腦動脈瘤結扎大鼠頸總動脈，同時佐以脫氧皮質酮和高滲鹽水處理，飼喂含有β氨基丙睛的飼料，復制囊狀動脈瘤模型，為研究人類腦動脈瘤與血液動力學的關系、病變的發(fā)展及發(fā)病機理提供有益的幫助。

精選課件2．結扎大鼠中動脈的大鼠卒中模型結扎大鼠大腦中動脈，復制中風模型其優(yōu)點是能產(chǎn)生非致命性的孤立性病灶損害，可提供長期的行為學和生物化學的研究。精選課件3.維生素A缺乏引起的兔腦積水模型選用雌性幼兔，飼以限制維生素A飼料，誘發(fā)兔腦積水。該模型優(yōu)點是易復制，易收集胎兔和新生兔的標本樣品，通過血清維生素A的監(jiān)測，可控制血清中維生素A的濃度，有利進行生化和形態(tài)學的研究。精選課件[B.心血管系統(tǒng)]

1.動脈粥樣硬化長期以來用兔飼以高脂肪、高膽固醇飼料誘發(fā)動脈粥樣硬化的動物模型。給小型豬飼喂高脂肪、膽固醇飼料誘發(fā)動脈粥樣硬化病變，其解剖部位，病理特點均與人類相似，有時還伴有心肌梗塞，較易飼養(yǎng)管理，小型豬是一種很好的模型動物。

精選課件2．心肌缺血和心肌梗塞①電刺激法：雄性成年免麻醉后，用弱、強刺激(弱為0.8～1.6毫安，強為4～6毫安)交替刺激右側下丘腦背側核，復制心肌缺血動物模型；②藥物法；給大鼠、兔注射異丙腎上腺素，犬靜脈給予麥角新鹼制備冠狀動脈痙攣模型；③冠狀動脈阻斷法：應用大鼠、犬麻醉后,分離冠狀動脈套上自制的冠狀動脈壓迫環(huán)，制備心肌缺血和心肌梗死模型。

精選課件3．高血壓目前，應用最廣泛的是日本學者培育的突變系SHR大鼠。該鼠自發(fā)性高血壓的變化與人類相似，并且可產(chǎn)生腦血栓、梗塞、出血、腎硬化、心肌梗死和纖維化等變化。在SHR的基礎上，又培育了兩個亞系SHRSP和SHRSR，前者出生后，除出現(xiàn)嚴重高血壓外,90％以上患腦卒中(腦出血和腦栓塞)；SHRSR則是抗腦卒個的自發(fā)性高血壓大鼠。

精選課件

[C.呼吸系統(tǒng)]

1．用異性蛋白注射致豚鼠過敏癥動物模型，包括支氣管痙攣、哮喘和過敏性休克。1974年Petterson和Kelly發(fā)現(xiàn)狗可以對空氣中過敏原(草、樹、灰塵和貓抗原)引起過敏癥的模型。主要表現(xiàn)為豚草花粉病、患犬出現(xiàn)眼結膜炎、鼻炎、重度搔癢性皮炎，血液內(nèi)有抗豚草抗原的循環(huán)抗體，相當于人體免疫球蛋白IgE。這些是臨床研究和生產(chǎn)檢定過敏癥的動物模型。

精選課件2．慢性支氣管炎和肺炎

70年代初學者應用SO2、煙霧、甲醛蒸氣、辣性氣體等制備誘發(fā)性猴、免、大鼠、小鼠的慢性支氣管炎動物模型。

精選課件3.肺氣腫：

1978年Kartinsky和Snider曾總結自發(fā)的和誘發(fā)的肺氣腫動物模型，在馬、兔、大鼠、小鼠中發(fā)現(xiàn)肺氣腫。其中特別是花斑小鼠，自發(fā)性進行性全小葉肺氣腫的模型，檢到有遺傳性彈力纖維合成障礙，把肺氣腫的發(fā)生機制與彈力組織網(wǎng)遺傳性結合成缺陷聯(lián)系起來，為研究人類肺氣腫的病因開拓了思路。

精選課件[D.消化系統(tǒng)]1．先天性高膽紅素血癥模型：已發(fā)現(xiàn)非洲嚙齒類胃潰瘍、地鼠的肝淀粉樣變、羊和大鼠的先天性高膽紅素血癥動物模型。尤其是South-downe變種羊，因其先天性肝臟攝取有機陰離子缺陷(膽紅素)，造成血中未結合的膽紅素增高。精選課件2．小牛輪狀病毒性腸炎模型：

輪狀病毒性腸炎對人類及許多動物都能引起感染，如小鼠、兔、羊、豬等。在實驗中發(fā)現(xiàn)人類與動物可交叉感染，小牛輪狀病毒性模型有利于生產(chǎn)大量血清與抗原，便于手術、糞便特征容易監(jiān)測，是傳染病學、生理學研究較好模型。精選課件3．豚鼠潰瘍性結腸炎模型：

豚鼠口服變質角叉菜(從紅海藻中提取)溶液，產(chǎn)生潰瘍性結腸炎、臨床表現(xiàn)與人類潰瘍性結腸炎相似，是研究潰瘍性的發(fā)病機理、綜合癥對全身影響，和治療方法的模型。精選課件

[E.泌尿系統(tǒng)]1.誘發(fā)性腎小球腎炎模型：給兔、貓、狗注射異種抗腎血清、細菌抗原與腎組織復合抗原，以及抗原抗體誘發(fā)動物腎小球腎炎模型。

精選課件2.自發(fā)性腎臟疾患模型：如芬蘭的Landrace羊羔中有一種發(fā)展迅速致死的腎小球腎炎，伴有腎小球免疫熒光復合物的沉積。狗、貓自發(fā)的免疫介導腎小球腎炎動物模型。精選課件3.繼發(fā)性腎炎模型：小鼠淋巴脈絡膜炎、乳酸脫氫酶、鼠類的白血病病毒感染等均能復制繼發(fā)性腎炎。

精選課件[F.內(nèi)分泌與代謝](1)手術糖尿病模型：

自從德國的WonMening將犬作胰腺全切除術，造成糖尿病后，陸續(xù)報道貓、大鼠、兔、豬、猴等切除80％一90％胰腺，并受到高糖飲食刺激后，引起永久性糖尿病。精選課件(2)化學物質損傷胰島細胞：①鏈脲佐菌素(STZ)一次腹腔或靜脈注射30一100mg／kg幾天后可使狗、大鼠等動物產(chǎn)生永久性高血糖。②四氧嘧啶(A11oxan)一次靜脈或腹腔注射30—150mg／kg，可復制糖尿病模型，但可造成肝、腎組織的損害，而且較多的資料證明，它在生理上不同于人類所患的糖尿病。

精選課件③環(huán)丙庚哌,給大鼠連續(xù)給藥4周后，可見高血糖癥狀。④鼠腦炎、心肌炎(EMC)病毒M型變異可誘發(fā)若干品系的成年小鼠糖尿病，如DBA／2、CD-l、C3H、C57BL、BALB／cj。

精選課件(3)遺傳性及自發(fā)性糖尿?。孩賙k小鼠由日本雜種小鼠交配得來的遺傳性糖尿病小鼠，其生物特性類似ob小鼠，屬先天遺傳缺陷性小鼠。②C57BL／ks小鼠是一種具有db基因的近交小鼠，其表現(xiàn)多食肥胖及血糖升高，類似人類中年肥胖合并糖尿病。精選課件③中國地鼠(黑線倉鼠)有50％自發(fā)產(chǎn)生糖尿病，屬多基因遺傳，病鼠耐糖曲線類似人類Ⅱ型非胰島素依賴性)糖尿病。④BBWistar系大鼠：是一種典型自發(fā)遺傳I型(胰島素依賴性)糖尿病的動物模型。其臨床表現(xiàn)為多飲、多食、體重下降、高血糖及酮尿。精選課件三、中醫(yī)證候動物模型中醫(yī)動物模型經(jīng)30余年的研究，已形成獨特的體系。為中醫(yī)基礎病理學、基礎藥理學研究提供了重要依據(jù)。精選課件1960年發(fā)現(xiàn),過量使用腎上腺皮質激素的小鼠表現(xiàn)為陽虛征象：體重下降、萎靡、耐寒力低。1963年又發(fā)現(xiàn)用助陽藥(附子、肉桂、淡眾蓉、仙靈脾)能治療這種狀態(tài)。1964年，易寧育用六昧地黃湯治療類似陰虛的腎性高血壓大鼠。1977年，上海中醫(yī)學院用腎上腺皮質激素和甲狀腺，加利血平復制小鼠陽虛、陰虛模型并用助陽藥、滋陰藥治療。精選課件1979年，張啟元嘗試用灌喂大黃煎劑“瀉下傷脾”，建立小鼠脾虛證模型。1988年，由楊云主持研究的“勞倦和饑飽所致大鼠脾虛證模型”獲得國家中醫(yī)藥管理局科技進步二等獎。精選課件四、設計動物模型的注意事項1．盡可能重視所要的人類疾病的模型。2．注意選用標準化和實用價值高的動物。①生活在標準化的環(huán)境內(nèi)，有清楚的遺傳背景和微生物學質量控制標準，具有較強的敏感性、較好的重復性和反應均一性的特點。②有嚴格的飼養(yǎng)規(guī)程。

③易獲取大樣本實驗和觀察。精選課件3．慎重選用近交系。4．注意環(huán)境因素對模型動物的影響。精選課件第三節(jié)免疫缺陷動物模型精選課件一、免疫缺陷動物的定義

免疫缺陷動物是指由于先天性遺傳突變，或用人工方法，培育一種或多種免疫功能缺陷的動物。免疫缺陷動物開創(chuàng)了腫瘤學、免疫學、細胞生物學的新的里程碑。精選課件二、免疫功能缺陷動物的分類按免疫功能缺陷的種類常分為:1.T-淋巴細胞功能缺陷動物：裸小鼠、裸大鼠、裸牛、裸豚鼠等。2.B-淋巴細胞功能缺陷動物：CBA/N小鼠、Arabin馬和Quarter馬等馬屬動物。3.NK細胞功能缺陷動物：Beige小鼠。4.聯(lián)合免疫缺陷動物：Scid小鼠等其他人工定向培育的多種免疫功能缺陷動物。

精選課件三、免疫缺陷動物歷史裸小鼠：19世紀50年代先后發(fā)現(xiàn)無毛小鼠，并知其后代也屬無毛遺傳；1907年Campbell證實無毛性狀為隱性突變；1962年Flanagan用全同胞B×S近交（Nu/+♂×Nu/+♀）繁殖后代，形成了最早的裸鼠群體；精選課件1968年Pantelouris首次報告無胸腺，即先天缺陷T淋巴細胞。至此受到廣泛重視；1975年首臺無菌隔離器問世，裸小鼠能夠正常生長和繁殖；同年，丹麥人Rygaard首次將人結腸癌移植到裸鼠獲得成功；1973年起，每隔三年舉行一次裸鼠國際會議。后改名為“免疫缺陷動物實驗國際會議”。 精選課件四、常見的免疫缺陷動物1.裸小鼠是指先天性無胸腺，且無被毛的小鼠,簡稱為裸小鼠。其突變基因為裸基因,符號為:nu,是一個隱性突變基因,位于小鼠的第11號染色體上。目前，此基因已導入到不同品系的小鼠中,常見的有BALB/c-nu、C3H-nu、C57BL/6-nu等。精選課件裸鼠的解剖生理特點：

①毛囊發(fā)育不良，外觀上看幾乎沒有被毛，故稱“裸鼠”；②無胸腺，僅有胸像殘跡或異常的胸腺上皮。故不能分泌胸腺素，不能使T細胞正常分化，而T細胞是移植排異的主要細胞。有較高的NK細胞數(shù)量和活性。③因為IgG的產(chǎn)生需要T細胞和巨噬細胞的參與，其免疫球蛋白主要是IgM，只有極少量的IgG。精選課件④自發(fā)腫瘤現(xiàn)象罕見，可能與NK細胞的活性高有關。⑤裸鼠易患鼠肝炎和病毒性肺炎。⑥純合裸鼠母性極差，且受孕率低，乳房發(fā)育不良。通常以純合雄鼠與帶有nu基因的雜合雌鼠（♀nu/+♂nu/nu）可獲1/2裸鼠。⑦裸鼠需飼養(yǎng)在屏障環(huán)境中。精選課件

裸鼠的應用

（1）腫瘤學。（2）微生物學。（3）免疫學。（4）寄生蟲學。（5）遺傳學。（6）臨床醫(yī)學。

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裸鼠的繁育（1）Nu/Nu♂×Nu/Nu♀？（2）Nu/+♂Nu/+♀？（3）Nu/+♂×Nu/Nu♀？（4）Nu/Nu♂Nu/+！精選課件精選課件

2.裸大鼠

1953年，英國科學家首次在大鼠中發(fā)現(xiàn)一種外觀與裸小鼠相似，只是被毛不像裸小鼠那樣全無，通過解剖和免疫學檢查發(fā)現(xiàn)其也是無胸腺、缺乏T細胞功能，T細胞功能正常，細胞活力增強，繁殖方式與裸小鼠相同，且能接受異種組織和細胞移植。精選課件3.Beige（bg）小鼠

為NK細胞活性缺陷的突變系小鼠，bg是隱性突變基因，位于第13號染色體上。純合的小鼠（bg/bg）被毛完整，但毛色變淺，耳廓和尾尖色素很淡。這種小鼠其內(nèi)源性NK細胞功能缺陷。純合bg基因降低殺菌活性。bg對化膿性細菌感染非常敏感，對各種病原因子也都較敏感，bg小鼠必須在屏障環(huán)境中才能較好的生存。繁殖時可采用純合子的親本。

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4.SCID小鼠

SCID小鼠的全稱為“重癥聯(lián)合免疫缺陷”小鼠。其突變點在16號染色體上，為單基因突變，突變符號為scid，當其純合時，性狀表現(xiàn)為淋巴細胞抗原受體基因編碼順序異常，造成T、B淋巴細胞不能分化為特異性的淋巴細胞，目前已有多種不同品系的SCID小鼠。

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SCID小鼠的生物學特征：

外觀與普通小鼠無異樣，但其胸腺、脾、淋巴結等免役器官的重量不到正常小鼠的30%。其胸腺多為脂肪組織包圍，沒有皮質結構，僅殘存的髓質。外周白細胞較少，淋巴細胞僅占總數(shù)的10-20%（正常小鼠為70%）。精選課件

SCID小鼠需在屏障環(huán)境（空氣潔凈度萬級以下）中，方能存活一年以上。其繁殖生產(chǎn)，以近交系繁殖方式進行，產(chǎn)子率和離乳率均低于正常小鼠。精選課件

5.Motheaten小鼠

突變基因（me）位于第6號染色體上，出生后兩天內(nèi)即可有病變現(xiàn)象，表現(xiàn)為皮膚膿腫，有嚴重的聯(lián)合免疫缺陷現(xiàn)象。對胸腺依賴和不依賴抗原均無反應，細胞毒和自然殺傷細胞活性低下。此小鼠對于先天性早期免疫缺陷和某些自身免疫疾病的研究有著重要的價值。精選課件

6.人工定向培育的多聯(lián)免疫缺陷型小鼠

目前，常見的三種小鼠的三個隱性免疫基因，即NK細胞缺陷的Beige基因、T細胞缺陷的nu基因和B細胞缺陷的Xid基因?？蓪⑺鼈冸s交-回交，篩選出T、B、NK細胞三聯(lián)免疫缺陷小鼠。這種小鼠對于實驗性的腫瘤移植和免疫功能的研究有著極其重要的作用。

精選課件⑤NIH肥胖大鼠品系(SHR／N-cp)是新培育的一種用于肥胖癥和糖尿病研究的遺傳動物模型，其特征主要是脂肪聚積層，脂肪細胞的體積和數(shù)量增加，并有損傷發(fā)熱作用。雄性肥胖大鼠有輕度高血壓，當飼喂高糖類飲食時．表現(xiàn)出與人非胰島素依賴性糖尿病相似的代謝改變，包括胰島素分泌過多、高血脂不耐葡萄糖和糖尿病。精選課件精選課件第三節(jié)腫瘤動物模型腫瘤動物模型(animalmodelsoftumor)在腫瘤病因學、發(fā)病機制及防治等方面的研究上具有重要意義。本節(jié)介紹誘發(fā)性動物腫瘤模型和動物自發(fā)性腫瘤及可移植瘤株。精選課件一、誘發(fā)性腫瘤動物模型(animalmodelofinducedtumor)指使用致癌因素(carcinogens)在實驗條件下誘發(fā)動物發(fā)生腫瘤的動物模型，它是進行實驗腫瘤學研究的常用方法。常用于驗證可疑致癌因素的作用，也越來越多地應用于腫瘤發(fā)生機理的研究及防治效果的觀察上，在腫瘤病因學、遺傳學、生物學等方面的研究中有重要地位。由于誘發(fā)因素和條件可人為控制，誘發(fā)率遠高于自然發(fā)病率，故在腫瘤實驗研究中優(yōu)于自發(fā)瘤。用于誘發(fā)實驗性腫瘤的動物種類很多，它們因種族不同而對相同致癌因素有不同的反應性。常用的動物以哺乳動物為主，其中嚙齒類動物的使用最多，應用最廣，包括各種大鼠、小鼠、豚鼠等。精選課件

誘發(fā)性腫瘤模型的原理是利用外源性致癌因素引起細胞遺傳特性異常而呈現(xiàn)出異常生長和高增殖活性，形成腫瘤。致癌因素主要有化學性、物理性及生物性致癌物，而化學性致癌物(chemicalcarcinogens)最常見，已確知的多達一千余種，用于誘發(fā)實驗性腫瘤的種類亦很多，如苯并芘、甲基膽蒽、聯(lián)苯胺、亞硝胺類、黃曲霉毒素類。各種致癌物的致癌強度、致癌譜等特性相差較大，同一種致癌物經(jīng)不同途徑給藥所致腫瘤部位或類型可有很大差異。有些化學性致癌物具有明顯的親器官或組織特性。因此，實驗工作中應根據(jù)需要選用適當致癌物和致癌途徑，并確定其他影響因素或實驗條件。精選課件(一)誘發(fā)方法誘發(fā)性動物腫瘤的誘發(fā)方式包括原位誘發(fā)和異位誘發(fā)。原位誘發(fā)是指將致癌物直接與動物靶組織或靶器官接觸而誘發(fā)該組織或器官發(fā)生腫瘤，接觸方法可通過涂抹、灌注、喂養(yǎng)或埋置等；異位誘發(fā)是將與致癌物接觸后的動物組織或器官埋置于該動物或另一正常動物皮下而產(chǎn)生的該組織或器官的腫瘤。異位誘發(fā)腫瘤具有易于觀察和取材的優(yōu)點。精選課件放射性物質致瘤方法主要是用放射線照射或局部注射同位素。能誘發(fā)動物腫瘤的病毒亦很多，例如用小鼠白血病病毒(murineleukovirus，MLV)、雞白血病病毒(fowlleukosisvirus，F(xiàn)LV)和貓白血病病毒(felineleukosisvirus，F(xiàn)eLV)分別誘發(fā)小鼠、雞和貓白血?。籖ous雞肉瘤病毒可誘發(fā)田鼠、雞、鴨、鵪鶉、猴和蛇等動物發(fā)生肉瘤；貓肉瘤病毒(felinesarcomavirus，F(xiàn)SV)可使大鼠、貓、犬和猴發(fā)生肉瘤；人腺病毒能誘發(fā)小鼠、田鼠發(fā)生肉瘤和淋巴瘤。精選課件在進行誘發(fā)動物腫瘤的實驗中，應盡量簡便可行，有較好的重復性，并利于與人腫瘤比較研究；選擇對所用致癌物敏感的方法和種系動物。致癌物的劑量應能保證動物存活率較高、誘發(fā)期較短而又可誘發(fā)較高頻率的腫瘤。常用的給藥基本方法和途徑有口服、注入、埋藏和涂抹等方式。1．涂抹法將致癌物涂抹于動物背側及耳部皮膚，主要用于誘發(fā)皮膚腫瘤(如乳頭狀瘤、鱗癌等)。常用的致癌物有煤焦油、3，4-苯并芘及20-甲基膽蒽等。精選課件

2．經(jīng)口給藥法本法是將化學致癌物溶于飲水或以某種方式混合于動物食物中自然喂養(yǎng)或灌喂動物而使之發(fā)生腫瘤。食管癌、胃癌、大腸癌等腫瘤常用此方法。3．注射法注射法是將化學致癌物制成溶液或懸浮物，經(jīng)皮下、肌肉、靜脈或體腔等途徑注入體內(nèi)而誘發(fā)腫瘤。本法亦常用，其中皮下和靜脈注射又最常用。

4．氣管灌注法常用于誘發(fā)肺癌。將顆粒性致癌物制成懸浮液直接注入或用導液管注入動物氣管內(nèi)。多使用金倉鼠和大鼠為實驗動物。精選課件

5．穿線法適用于將多環(huán)芳烴類致癌物直接置于某特定部位或器官，如宮頸、食管和腺胃等。方法是將一定量的致癌物放置于無菌試管內(nèi)，加熱使致癌物升華，吸附于預制的線結上；將含有致癌物的線結穿人靶器官或靶組織而誘發(fā)腫瘤。6．埋藏法將致癌物包埋于皮下或其他組織內(nèi)，或將經(jīng)致癌物作用過的器官、組織移植于同種或同種系動物皮下進行腫瘤的誘發(fā)實驗。精選課件(二)常見腫瘤的動物模型1．肺癌(carcinomaofthelung)誘發(fā)模型較多，方法也很成熟。常用方法有：(1)二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)小鼠肺癌模型：采用小白鼠每周皮下注射l%DEN水溶液一次(劑量為56mg/kg體重，總劑量為868mg)。觀察時間100天左右。此模型誘發(fā)率約40％。若將DEN總劑量增到1176mg時，半年誘發(fā)率可達90％以上。精選課件(2)烏拉坦誘發(fā)肺多發(fā)性腫瘤模型采用A系小鼠(1～1.5月齡)，每次每只腹腔注射10％烏拉坦生理鹽水液0.1～0.3ml，間隔3～5天，共注射2～3個月，每只動物用量共約100mg。觀察3個月，誘發(fā)率可達100％。(3)氣管內(nèi)灌注致癌物誘發(fā)肺癌模型向氣管內(nèi)注入苯并芘、硫酸銨氣溶膠或甲基膽蒽等物質。常用的有：①猴氣管內(nèi)灌注3,4-苯并芘與氧化鐵的混合液，每周1次，共10次，可誘發(fā)肺鱗狀細胞癌。②大鼠吸入硫酸銨氣溶劑可誘發(fā)肺腺癌。精選課件2．鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma)(1)二甲基膽蒽(DMC)誘發(fā)大鼠鼻咽癌模型將結晶DMC置于錐形塑料管中(可用直徑2～3mm硬質塑料管在酒精燈上拉制)，使塑料管尖端進入并長期留置鼻咽腔。MC循小孔緩慢溢出，至半年以上，取材。誘發(fā)率可達60％以上。(2)二乙基亞硝胺(DEN)滴鼻法誘發(fā)大鼠鼻咽癌用磨平針尖的8號針頭從前鼻插入大白鼠(體重120g左右)鼻咽腔，經(jīng)注射器灌注1％吐溫80新配的33.3％DEN混懸液0.02m1，每周1次，共15～20次。精選課件3．食管癌(carcinomaoftheesophagus)(1)甲基芐基亞硝胺(MBNA)誘發(fā)大鼠食管癌模型將MBNA溶于飲水中，并摻人飼料，喂養(yǎng)Wistar大鼠(體重100g以上)，使之每日攝入量達0.75～1.5mg/kg體重，經(jīng)3個月左右可誘發(fā)食管癌。亦可用0.2％或0.005％MBNA水溶液給大鼠經(jīng)口灌喂，每天1次(1mg/kg體重)，經(jīng)11個月可使誘發(fā)率達53％。(2)二烴黃樟素(Dihydrosaforle)誘發(fā)大鼠食管癌模型將二烴黃樟素加入大鼠飼料(濃度2500～10000mg/kg)喂養(yǎng)大鼠，誘發(fā)率達20％～75％。精選課件4．胃癌(carcinomaofthestomach)(1)甲基膽蒽(MC)誘發(fā)小鼠胃癌模型用細線打結后，使MC加溫液化并滲人線結中；小鼠(體重20g左右)腺胃粘膜面穿掛含MC的線結。埋線后4～8個周可成功地誘發(fā)胃癌。MC的濃度為0.5～0.1g20-甲基膽蒽浸入10～20根線。(2)不對稱亞硝胺誘發(fā)小鼠胃癌模型用0.25mg/kg體重的不對稱亞硝胺，經(jīng)7～8個月可誘發(fā)昆明種小鼠前胃癌。精選課件(3)甲基亞硝基醋酸尿素誘發(fā)大鼠胃癌模型在SD大鼠飲水中按2mg/kg體重加入甲基亞硝基醋酸尿素，每周5次飲用，經(jīng)520天可使100％大鼠發(fā)生腺胃癌。(4)金黃倉鼠胃癌模型雄性金黃倉鼠口服甲基硝基亞硝基胍(MNNG)（83ug/m1）4個月，約1年后30％～40％的倉鼠發(fā)生胃腺癌并出現(xiàn)局部轉移。亦可用濃度為91ug/ml的乙基硝基亞硝基胍(ENNG)口服喂養(yǎng)雄性金黃倉鼠12個月，可誘發(fā)胃腺癌和十二指腸腺癌。此外，用MNNG（125ug/ml水溶液）經(jīng)口給藥，亦可使A/Jms、RP/Jms等系小鼠誘發(fā)胃癌。精選課件(5)甲基芐基亞硝胺(MBNA)誘發(fā)小鼠前胃癌模型選用A系、昆明種或615系小鼠，以每天0.25或1mg/kg體重的劑量用40.07％MBNA水溶液灌胃，每天1次。第7～8個月可誘發(fā)出85％～100％的前胃鱗狀細胞癌。(6)肌氨酸乙酯和亞硝酸鈉誘發(fā)雞胃癌模型采用6月齡林縣家雞，喂以肌氨酸乙酯及亞硝酸鈉，誘發(fā)家雞腺胃腺癌。精選課件5.大腸癌(carcinomaofthelargeintestine)(1)二甲基芐肼（DMH）誘發(fā)大腸癌模型將DMH先配成濃度為100ml中含400mg的溶液，加入EDTA27mg，用0.1mol/LNaOH將pH值調(diào)整至6.5。用上述DMH經(jīng)皮下注射給4周齡雄性Wistar大鼠，每次劑量21mg/kg體重，每周1次，連續(xù)21周。(2)甲基硝基亞硝基胍(MNNG)誘發(fā)大鼠大腸癌模型用MNNG在Wistar大鼠采用直腸灌人法誘發(fā)大腸癌。精選課件6．肝癌(carcinomaoftheliver)(1)二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)大白鼠肝癌模型0.25％DEN水溶液灌胃(按10mg/kg體重)，每周剩余6d用0.025％DEN水溶液讓其自由飲用。共約4個月即可誘發(fā)出肝癌，5～6個月誘癌率達80％以上。亦可用0.005％DEN的飲水喂養(yǎng)8個月誘發(fā)。(2)4-二甲基氨基偶氮苯(DAB)誘發(fā)大鼠肝癌模型使用含有0.06％DAB的飼料喂養(yǎng)大鼠，同時控制飼料中維生素B2含量(不超過1.5～2mg/kg體重)。經(jīng)4～6個月可誘發(fā)成功。精選課件(3)2-乙酰氨基芴(2AAF)誘發(fā)動物肝癌給成年大鼠含0.03％2AAF標準飼料，每日每只2～3mg2AAF，經(jīng)3～4個月即可誘發(fā)成功。此方法也可用于誘發(fā)小鼠、狗、貓、雞、兔等動物肝癌。(4)亞胺基偶氮甲苯(OAAT)誘發(fā)小鼠肝癌用1％OAAT苯溶液涂于動物兩肩胛間皮膚上，隔日1次，每次2～3滴，一般涂100次。7個月以上誘發(fā)肝腫瘤率55％。亦可用2.5mgOAAT溶于葵花籽油中，皮下注射C3H小鼠，每10天一次。(5)黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌在大鼠飼料中加入黃曲霉素，含0.011～0.015mg/kg，喂養(yǎng)6個月，誘發(fā)率達80％。精選課件(6)二甲氨誘發(fā)肝癌模型將二甲氨用食用菜油配制成3％的溶液，按98g精白碎米加2ml3%二甲氨溶液的比例配制飼料(相當于每克碎米含0.06mg二甲氨)，喂養(yǎng)雄性大白鼠(體重150～200g)4～6周，停藥1周(以精白碎米代替)，后改用基礎飼料加0.12％二甲氨繼續(xù)喂養(yǎng)12～13周，即可誘發(fā)出肝癌。(7)黃曲霉素B2誘發(fā)麻鴨肝癌模型采用半月齡雛鴨，自由食取肝癌高發(fā)區(qū)啟東霉玉米配合飼料(內(nèi)含黃曲霉素B1)，同時飲高發(fā)區(qū)淺井水，直至動物自然死亡，可見麻鴨發(fā)生肝細胞癌。精選課件7．腦腫瘤(braintumor)(1)乙基亞硝基脲(ENU)誘發(fā)大鼠膠質瘤

用0.5％～1％ENU按60mg/kg體重給藥于Wistar大鼠。給藥途徑有兩種，即經(jīng)孕鼠胎盤給藥致其子代鼠成瘤和經(jīng)新生幼鼠皮下給藥致瘤。前者是選用正常妊娠的健康Wistar大鼠(體重340g左右)，在妊娠晚期(距預產(chǎn)期前7天)經(jīng)尾靜脈一次性緩慢注射1％ENU溶液；后者是選用3日齡健康Wistar大鼠(體重約4g)，于肩胛部或腰骶部一次性皮下注射0.5％ENU溶液。觀察12個月，誘發(fā)出腦、脊髓膠質瘤。用此方法誘發(fā)的膠質瘤在組織學上以混合性少突星形細胞瘤為主，偶伴發(fā)腎纖維肉瘤和肺癌。精選課件

(2)甲基膽蒽(MC)誘發(fā)腦腫瘤藏旭等用20％MC的膽固醇小塊埋入A系、C3HA系或昆明種小鼠大腦頂部皮層內(nèi)，誘發(fā)出大腦膠質瘤和纖維肉瘤。8.宮頸癌(cervicalcarcinoma)

用穿線法將附有0.1mgMC的棉紗線結穿入雌性小白鼠的宮頸部，并固定縫線。觀察半年左右處死動物，取宮頸組織。精選課件二、動物自發(fā)性腫瘤及移植瘤株人類腫瘤在實驗動物中幾乎都能找到相似的腫瘤性疾病。利用高發(fā)病率品系動物研究自發(fā)性腫瘤性疾病，更能接近人群發(fā)病情況，對研究人體腫瘤的防治有重要意義。精選課件動物自發(fā)性腫瘤(spontaneoustumorsinanimals)是指實驗動物未經(jīng)任何有意識的人工處置，在自然情況下所發(fā)生的腫瘤。

動物自發(fā)瘤發(fā)生于近交系動物，隨實驗動物種屬、品系的不同，腫瘤發(fā)生類型和發(fā)病率有很大差異。其中，小鼠的各種自發(fā)性腫瘤在腫瘤發(fā)生、發(fā)展的研究中具有重要意義。自發(fā)性腫瘤模型與誘發(fā)性腫瘤模型具有一定差異(如對藥物的敏感性是不同的)，但大部分自發(fā)性腫瘤動物模型是通過人為定向培養(yǎng)而成的，畢竟不同于人類自然發(fā)病情況，因此自發(fā)瘤模型和誘發(fā)瘤模型之間優(yōu)缺點是相對的。目前研究自發(fā)瘤的動物主要為哺乳類和鳥類。精選課件(一)動物移植瘤瘤株腫瘤移植實驗在腫瘤研究中具有重要作用。動物自發(fā)瘤可移植性腫瘤就是將動物自發(fā)性腫瘤移植到同系、同種或異種動物體內(nèi)生長并經(jīng)傳代后組織學類型穩(wěn)定，生長特性(包括接種成活率、生長速度、自動消退率、宿主壽命與宿主反應等)已趨穩(wěn)定；其侵襲和轉移的生物學特性，以及對化療藥物的敏感程度均已確定；能在同種或異種動物體內(nèi)繼續(xù)傳代，形成可移植性腫瘤即瘤株。精選課件

移植瘤株的穩(wěn)定性至關重要。為了達到可靠的穩(wěn)定性，通常需連續(xù)傳代15～20代。但即使已建立的瘤株再傳代后，其生物學特性亦可發(fā)生一定程度的改變，如形態(tài)學上的改變、惡性程度以及轉移特性的變化等。移植瘤的建立方法一般是選擇自發(fā)瘤或誘發(fā)瘤組織塊，無菌條件下放人組織培養(yǎng)皿內(nèi)，按1︰（3～5）的比例加入滅菌生理鹽水，制成瘤細胞懸液。取濃度約為106～107/ml的細胞懸液0.2ml接種于同系雌性小鼠皮下。如此傳代，使其移植成功率、生物學特性等趨于穩(wěn)定。亦可采用組織塊接種法。

腹水瘤的移植方法為直接將抽取的含瘤細胞的腹水(0.1～0.2ml）接種于動物腹腔。精選課件(二)常用動物自發(fā)瘤移植瘤株1．小鼠可移植性乳腺癌黃華漳等于1973年采用TA2系小鼠自發(fā)乳腺癌，接種同系雌性小鼠皮下，建立移植瘤成功。孫文義等亦建立了TA2系小鼠自發(fā)B型乳腺癌瘤株MA-737，該移植瘤具有肺轉移和侵襲腹腔特性。此后又相繼在615系小鼠自發(fā)B型乳腺癌建立瘤株(如鄭升等建立的Ca615，張鴻翔等建立的MC-615，劉金友等建立的Ca759和Ca763，劉世葉等建立的Ma782/5S，張眾等建立的B0和B9。中國醫(yī)學科學院建立的MAC887和MAC-891，還建立了為數(shù)不多的小鼠自發(fā)型乳腺癌可移植性瘤株(如錢振超等建立的Ca761及中國醫(yī)學科學院建立的MAC-8712等)。精選課件2．小鼠可移植性肺腺癌

吳德全等于1976年用18月齡雄性615系小鼠自發(fā)肺乳頭狀腺癌組織采取埋塊法在同系成年小鼠皮下移植及傳代，建立P615瘤株。該瘤株可在CFWX615系小鼠皮下移植，成功率達100％，腹腔內(nèi)移植成功率達100％。錢振超等于1978年也建立了615近交系小鼠肺腺癌瘤株HP615，馬克韶等采用615系雄性小鼠與昆明種雌性小鼠培養(yǎng)出的T739近交系小鼠自發(fā)乳頭型肺腺癌建立移植瘤株LA-795，具有高侵襲性轉移率。精選課件3．小鼠可移植性肝癌

小鼠肝癌瘤株的建立可通過動物自發(fā)瘤或化學誘發(fā)瘤。錢振超等用10月齡第5l代經(jīng)產(chǎn)雌615系小鼠自發(fā)性肝細胞癌，在同系小鼠建立了H615瘤株；強家模等用二乙基亞硝胺(DENA)喂Wistar大鼠誘發(fā)肝細胞癌，移植到經(jīng)免疫抑制Wistar幼大鼠腹腔內(nèi)并傳代。亦可皮下或肝內(nèi)移植，建株各代宿主血清甲胎蛋白(a-fetoprotein，AFP)均陽性。精選課件4．小鼠可移植性宮頸癌

小鼠宮頸癌瘤株多用誘發(fā)瘤移植建立。楊滋等于1958年采用含20-甲基膽蒽的線結穿入KM幼鼠宮頸誘發(fā)出鱗狀細胞癌后，接種KM雌小鼠皮下移植及傳代，建立小鼠宮頸未分化癌瘤株U14，移植成功率達96.7％。薛克勛等于1986年用U14瘤株復蘇后移植于615雌小鼠皮下并傳代，仍保持原生物學特性，移植率達100％。5．小鼠可移植性食管癌

國內(nèi)建立的小鼠可移植性食管癌瘤株較少，主要是丁瑞等建立的SGA-73食管鱗癌瘤株。該瘤株是由甲基膽蒽異位誘發(fā)津白1系小鼠食管鱗癌在同系小鼠皮下移植，傳代而建立，已傳40代以上。精選課件6．小鼠可移植性胃腫瘤20世紀70年代國內(nèi)先后建立了幾個胃腫瘤瘤株。林柄水等用甲基亞硝基脲灌胃法誘發(fā)津白1系小鼠前胃鱗狀細胞癌，在同系小鼠皮下移植、傳代，建立GS-741瘤株。李寶貴等利用甲基芐基亞硝胺灌喂615系小鼠胃鱗癌，同系小鼠皮下移植后傳代，建立FC瘤株。之后，林炳水等又用甲基膽蒽原位掛線法在津白2系小鼠誘發(fā)胃纖維肉瘤并建株S-784。該瘤株傳百多代，生物學特性穩(wěn)定。FC瘤株還具有侵襲肌組織能力和很高的肺轉移率（86％～90％)。精選課件7．小鼠可移植性腦膠質母細胞瘤

早在1957年，中央衛(wèi)生研究院(現(xiàn)中國醫(yī)學科學院)病理室就采用20-甲基膽蒽溶于膽固醇中，埋置于KM小鼠大腦皮層誘法的未分化神經(jīng)膠質瘤(即膠質母細胞瘤)在同系小鼠皮下移植及傳代建立B22瘤株。移植成功率達100％，已傳數(shù)百代，平均生存時間為2～4周。陳炳恒等于1964年用上述相似方法也建立KM小鼠可移植性膠質母細胞瘤株G422，可在同系小鼠皮下、肌肉、腦內(nèi)移植(成功率均為100％)，已傳350余代，無自發(fā)消退。尚未見采用動物自發(fā)腦瘤建株的報道。精選課件8.動物可移植性肉瘤

劉家勇等于1978年TA1系小鼠自發(fā)性纖維肉瘤同系雄小鼠皮下移植并傳代，建立小鼠可移植性纖維肉瘤瘤株，移植成功率100％，已傳86代。李殿俊等用3，4-苯并芘誘發(fā)的WKA大鼠皮下纖維肉瘤移植于經(jīng)免疫抑制的同系大鼠皮下，建立WBT-2大鼠可移植性纖維肉瘤瘤株，移植成功率達100％（包括肌肉、腹腔移植），無自然消退現(xiàn)象。以此瘤株經(jīng)WKA大鼠靜脈接種，多次連續(xù)移植，又建立了可移植性肺轉移肉瘤瘤株WBT-2M，其肺轉移率可達100％。此后于1981年國內(nèi)又建立615系小鼠纖維肉瘤瘤株FSC。它是由甲基膽蒽碘油皮下注射誘發(fā)的纖維肉瘤經(jīng)移植傳代而建立的。精選課件

滑膜肉瘤是動物的一種少見腫瘤，錢振超等利用615系小鼠自發(fā)性滑膜肉瘤在同系小鼠皮下移植和傳代，建立ZM755瘤株，并已傳200多代。除大鼠和小鼠外的其他動物可移植性肉瘤報道很少。章魁華等于1982年應用二甲基苯并蒽丙酮液在敘利亞金黃地鼠采取涂抹頰囊粘膜的方法誘發(fā)頰肉瘤（組織起源不明），并在同種封閉群小鼠頰粘膜下、皮下或腹腔內(nèi)移植或傳代，成功率均為100％。移植后具有侵襲周圍組織能力和肺及淋巴結轉移性(轉移率分別為9％和12％)。精選課件9．小鼠可移植性淋巴造血系腫瘤

國內(nèi)已建立的動物淋巴造血系腫瘤(主要包括惡性淋巴瘤和白血病)可移植瘤株幾乎均建立于小鼠，其中惡性淋巴瘤瘤株有楊簡等建立的L1及其腹水瘤、錢振超等建立的L797及其腹水瘤、孫慧等建立的L-TA2等，白血病瘤株有陳妙蘭等建立的LⅢ、李敏民建立的L615等。值得一提的是，由于人的惡性淋巴瘤的分類方法進展較快，動物淋巴瘤的一些名稱顯得陳舊、混亂，亟待統(tǒng)一。精選課件第四節(jié)系統(tǒng)疾病動物模型一、消化系統(tǒng)疾病動物模型(一)肝、膽、胰腺疾病動物模型

1．肝纖維化動物模型(animalmodelofliverfibrosis)任何可引起肝損傷的因素長期、反復作用于肝臟，均可產(chǎn)生肝細胞變性、壞死，繼而肝細胞再生和纖維組織增生，導致肝纖維化，嚴重時發(fā)展為肝硬化、肝癌等。基于此原理建立了許多肝纖維化模型、化學性損傷模型、免疫性模型、生物學模型、乙醇性模型和營養(yǎng)性模型。精選課件(1)免疫性肝纖維化模型

免疫性肝纖維化的產(chǎn)生機制是由Ⅲ型變態(tài)反應引起的，白蛋白和血清的大分子物質，作為異種抗原進入大鼠體內(nèi)后，刺激其產(chǎn)生相應的抗體，當抗原再次進入機體后抗原抗體結合，形成抗原-抗體免疫復合物(IC)，IC可激活(或結合)補體，由于抗原的反復、長期刺激，過量的免疫復合物來不及被清除，沉積于肝臟的血管壁內(nèi)外，引起血管炎和血管周圍炎，造成肝損傷，形成廣泛的進行性慢性炎癥病變。如此反復導致肝細胞變性、壞死，肝細胞再生，纖維增生等變化，最后發(fā)展為肝纖維化、肝硬化。精選課件

動物選用雄性Wistar大鼠，體重130g左右。取豬血清0.5ml，腹腔內(nèi)注射。每周2次，共8次(豬血清的制備：取新鮮豬血，離心制血清，濾過除菌，分裝放低溫冰箱備用)。大鼠于第3周出現(xiàn)較多的肝細胞變性、壞死，第4周增生的膠原纖維形成纖維束，呈侵襲性生長，從中央靜脈到門管區(qū)之間相互伸延，發(fā)生肝纖維化。該模型的特點：①肝纖維化出現(xiàn)得早，出現(xiàn)率高達86.7％；②對動物整體損傷輕微，動物毛發(fā)光澤、生長、發(fā)育情況與正常無區(qū)別；③肝纖維化組織中大量膠原增生，故Ⅲ、Ⅳ型前膠原的mRNA增多。精選課件(2)化學損傷性肝纖維化動物模型

雄性Wistar大鼠，體重130g左右，用硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射，第一次20mg/100g體重，從第二次起12mg/100g體重，每周注射2次，共8周。硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射第3周，在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片的肝細胞變性壞死和炎細胞浸潤，變性、壞死的細胞數(shù)和嚴重程度明顯超過豬血清模型，炎細胞浸潤也超過豬血模型。6周后出現(xiàn)增生的纖維束，纖維增生明顯晚于和少于豬血清肝纖維化模型?；瘜W損傷性肝纖維化模型中肝細胞變性壞死，比免疫性肝纖維化模型嚴重且炎癥細胞浸潤明顯，在其大鼠肝纖維組織中有I型膠原的mRNA增多，轉化生長因子β1排明顯增多。精選課件(3)四氯化碳肝硬化動物模型

Wistar或SD大鼠，體重180～200g，皮下注射40％～50％四氯化碳油溶液(0.3ml/100g體重)，每周2次，第2周始，隔日以20％～30％乙醇1ml灌胃(或作為唯一飲料)，飼以單純玉米面(混以0.5％膽固醇)，共10周。實驗中大鼠成活率60％～80％。四氯化碳所致高膽固醇飲食大鼠肝硬化是目前國內(nèi)外常采用的動物模型，該模型可靠且復制時間短，肝纖維化進展穩(wěn)定，適合于肝硬化發(fā)生發(fā)展過程的動態(tài)研究。精選課件2．膽石癥動物模型(animalmodelofcholelithiasis)

我國人群中膽結石疾病，特別是原發(fā)性膽管結石發(fā)病率高，手術后復發(fā)又非常普遍，最后常因反復感染發(fā)生膽汁性肝硬化而死亡。因此是醫(yī)學領域中極為重要的課題之一。近年來對膽結石病的研究和診斷水平有了很大的提高和發(fā)展，但臨床上開展膽石癥的治療研究仍然存在著一定的局限性，因此臨床研究不易獲取符合研究需要的，系統(tǒng)性和可比性的病理標本。而膽結石動物模型的建立為臨床研究膽石癥開辟了一條新的研究途徑。自從1952年Dam及Christensen以倉鼠成功地復制成膽固醇結石的實驗動物模型以來，各國學者廣泛地開展了這方面的研究。精選課件動物可用敘利亞倉鼠、健康成年家兔、大鼠、家犬或猴等，具體方法有：(1)食餌法：①選用敘利亞倉鼠，50～60g左右，基本食餌的特點為高糖，不含不飽和脂肪酸。食餌配制方法：蔗糖74％，酪蛋白2l％，食鹽4.4％，膽堿0.1％，濃縮魚肝油0.5％。按每只倉鼠每日5～9g，分兩次喂養(yǎng)，同時每周喂青菜、麥芽1～2次，以補充維生素等，維持動物生命。14～21d倉鼠膽囊內(nèi)形成明顯結石，22d后成石率高達100％。②選用雌性豚鼠，體重250～300g。成石飼料的配制：在基礎食物中加入酪蛋白1％，蔗糖1.5％，豬油1％，纖維素1％，膽酸0.02％，膽固醇0.05％。2個月后在90％的豚鼠膽囊中可產(chǎn)生以膽色素為主的結石，其成分和結構與人類的膽色素結石相似。精選課件

③選用成年家犬，成石飼料成分：50％蔗糖、10％酪蛋白、20％玉米淀粉、5％動物油、1％膽固醇，輔以礦物質和維生素，特點為高蛋白、高碳水化合物，其中膽固醇為關鍵成分。12周后結石成石率達100％，結石為膽色素結石。本模型適用于飲食與結石生成關系及代謝和防治研究，以及膽石生成過程中膽色素、膽汁酸和糖蛋白三者間的相互關系的研究。精選課件(2)感染成石法健康成年家兔，大鼠或家犬，采用無菌條件下剖腹術，顯露十二指腸，從十二指腸乳頭逆行插入一塑料管進入膽囊，從中注入蛔蟲卵或大腸桿菌懸液?；紫x卵懸液濃度為每毫升含3萬～15萬個蛔蟲卵。7個月后膽囊呈慢性炎癥，囊內(nèi)結石形成。此模型除用于防治研究外，還可進行有關膽系感染的功能代謝變化的分析與觀察研究。精選課件(3)狹窄成石法

可選用健康成年家兔、家犬或猴，家兔誘發(fā)率高。①膽囊結扎法：健康成年家兔，無菌條件下剖腹手術，分清膽管與肝管，用銀夾適當?shù)貖A住膽囊頸部以產(chǎn)生部分梗阻。6個月后膽囊中有明顯結石形成。②膽總管結扎法：家兔剖腹后顯露膽總管，在十二指腸上緣處預先經(jīng)雙鯨蠟基-26烷磷酸鈉(dicetylsodiumphosphate)浸漬外敷纖維素粘膠(cellophane)的細帶松松結扎一道。4個月后出現(xiàn)膽總管狹窄或完全梗阻，70％～80％出現(xiàn)膽囊結石，這種結石質軟，色深，有的屬于純膽色素結石，但大多為含膽色素與膽固醇的混合結石，此實驗模型可用于進行膽色素混合結石的發(fā)病學與防治研究。精選課件(4)切除迷走神經(jīng)干成石法健康成年家兔或狗，性別不拘。①采用無菌手術探明家兔膽道及膽囊正常，然后顯露胃、賁門及食管，將食管懸吊，顯露兩側迷走神經(jīng)干，從食管下端切除兩側迷走神經(jīng)干各1.5～2.0cm。手術結束后，在腹腔內(nèi)注入50％葡萄糖20ml，術后繼續(xù)禁食16～20h。術后家兔膽汁成分明顯改變，4～5周有膽固醇結石形成。精選課件

②將狗麻醉后行無菌剖腹術。在隔下右側腎上腺上方找出右側內(nèi)臟大神經(jīng)，用止血鉗小心分離，直達交感神經(jīng)節(jié)，在神經(jīng)干的局部撒無菌的浮石粉(pumicepowder，一種對神經(jīng)組織有刺激作用的物質)，將放藥粉的局部與腹腔內(nèi)臟分隔，再沿胃的賁門上至食管，切斷兩側的迷走神經(jīng)干，隨后縫合腹膜，術后2個月剖腹檢查，可見多數(shù)動物呈現(xiàn)慢性或亞急性膽囊炎的變化，組織學檢查顯示膽囊粘膜下水腫，有淋巴細胞和漿細胞浸潤和不同程度的結締組織增生，約有半數(shù)個體的膽囊內(nèi)可找到大小不一、單個或多個膽色素結石。此模型可用于探討中西藥物治療措施，或對膽石形成和膽道功能的影響及其機制的研究。精選課件3.膽管囊腫動物模型(animalmodelofbileductcyst)膽管囊腫的基本發(fā)病環(huán)節(jié)有：①病變處部分或全部管壁薄弱，可能因胚胎發(fā)育的異常或感染，外傷或胰管系結構異常所致胰液逆流而引起，或者是新生期病變部發(fā)育不全；②在存在或不存在病變部位遠側膽道梗阻情況下，肝膽汁分泌與膽囊膽汁排泄所致膽道內(nèi)壓的增高。膽道梗阻亦可因不同的先天性或獲得性病因而引起。采用綿羊或山羊(出生后14d內(nèi))，雌雄不拘，具體方法為：精選課件(1)膽總管遠端結扎術戊巴比妥鈉(1.5～4mg/kg體重)腹腔內(nèi)注射麻醉，顯露肝門部，在膽總管與近側小腸段匯接點的上方(一般距幽門約4～5cm)，用1號絲線將膽總管全周縫扎，造成膽總管完全梗阻，關腹。(2)膽總管置管膽囊結扎術麻醉、手術顯露方法同前。用1號絲線近肝總管處全周縫扎膽囊管，再將膽總管前壁縱行切開，在膽總管內(nèi)置人一硅膠管，內(nèi)徑0.1cm，長約3.0cm，在硅膠管兩端約0.5cm處，分別用1號絲線全周縫扎肝總管和膽總管，使置入之硅膠管固定在膽管內(nèi)，造成膽總管不全性梗阻。精選課件該模型可應用于①為膽管囊腫病發(fā)病學研究從實驗上提供依據(jù)；②研究遠側膽道梗阻后梗阻性黃疽的近期發(fā)展與后果，以及分析其死亡原因；③不全梗阻可使動物在較長時期內(nèi)成活，這種較長期存活的膽汁淤滯的膽道擴張模型，可以于探索膽石成因之間的關系及結石生成的規(guī)律，也可對擴張膽道上皮增殖和誘發(fā)腫瘤的可能性進行觀察。精選課件4.急性胰腺炎動物模型(animalmodelofacutepancreatitis)理想的急性胰腺炎(acutepancreatltls，AP)動物模型是研究AP發(fā)病機制和藥物防治的前提。目前制備AP模型的方法很多，現(xiàn)有的一些模型中，有食物(CDED)誘導法、十二指腸閉袢法、總膽管結扎法或靜脈滴注大劑量鈴蟾肽法等，由于不能控制胰腺的病變程度，均不適合于評價藥物的最大治療效應。下面介紹兩種穩(wěn)定、可靠，能反映胰腺病變依次加重的急性胰腺炎系列模型。精選課件(1)牛膽酸鈉誘導大鼠急性胰腺炎系列模型

Wistar大鼠，重180～260g；NaTc(Sigma公司產(chǎn))實驗前用生理鹽水配制成1.0％，2.0％，3.5％備用。實驗前禁食12h，允許飲水，3％戊巴比妥鈉(40mg/kg體重)腹腔注射麻醉。剖腹后經(jīng)十二指腸用4號頭皮針頭插入胰管開口，向內(nèi)逆行注入NaTc溶液(0.1ml/100g體重)。1.0％和2.0％NaTc誘導AP后12h，血清淀粉酶依次升高，組織水腫和炎癥細胞滲出逐漸加重，病理學上屬輕度和重度水腫型急性胰腺炎。精選課件

3.5％NaTc誘導AP后，除血淀粉酶水平持續(xù)升高外，胰腺組織水腫，炎癥細胞浸潤進一步加重，并出現(xiàn)典型胰腺細胞壞死和出血，病理學上已屬壞死型胰腺炎；電鏡顯示細胞的超微結構也證實上述形態(tài)改變。隨著NaTc誘導濃度的提高，胰腺損傷依次加重。本模型適合評價藥物對水腫型和(或)壞死型胰腺炎的最大防治效應，故具有一定的實用價值。精選課件(2)犬急性壞死型胰腺炎模型成年雜種狗，10～15kg，雌雄不拘。實驗前禁食12h，不禁水，麻醉后經(jīng)上腹正中切口人腹，尋及十二指腸，于胰管開口附近切開十二指腸壁，置一細塑料管于主胰管內(nèi)，然后向內(nèi)注入胰蛋白酶和狗自身膽汁混合液2～3ml(0.3ml/kg體重，配方為1ml膽汁+4ml胰酶溶液，內(nèi)含4mg胰蛋白酶)，滯留5min后拔去塑料管，荷包縫合十二指腸壁，關腹。本實驗采用胰管內(nèi)加壓注射自身膽汁和胰蛋白酶混合物，術后1h即見血清淀粉酶明顯升高，持續(xù)24h，6h達峰值；胰腺大體和鏡下病理改變呈典型的壞死、出血及炎癥細胞浸潤，表明此方法可成功誘發(fā)犬急性壞死性胰腺炎模型。精選課件5．慢性胰腺炎動物模型(animalmodelofchronicpancreatitis)

是由于連續(xù)炎癥造成胰腺功能不可逆性損害。盡管對該病的研究已經(jīng)取得很大進展，但是它的發(fā)病機制及與其相關的診斷和治療仍有許多問題有待解決。許多學者在努力尋求適當?shù)膭游锬Ｐ汀３赡觌s種貓，在隔夜禁食后，全麻(30mg/kg體重異戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射)下施行剖腹手術，將尼龍導管插入主胰管，縫合固定后，燒灼閉合導管外露端，造成主胰管完全梗阻或先將一根尼龍導管插入主胰管內(nèi)，緩慢注入94％乙醇1.5ml，然后截下1cm長的導管留置在主胰管內(nèi)，最后用26號細針頭均勻點狀注射94%乙醇1.5ml于胰腺實質內(nèi)。精選課件6周后胰腺小葉變成圓形，被向心性纖維包繞，小葉實質內(nèi)及其周圍組織均有炎性細胞浸潤，葉間胰管明顯擴張，管腔內(nèi)偶見多形核粒細胞。11周后胰腺結構發(fā)生嚴重紊亂。26周后，胰腺小葉數(shù)目減少，間質纖維組織明顯增生，單核細胞浸潤。6周后出現(xiàn)典型的慢性胰腺炎，26周后慢性胰腺炎的發(fā)生率為100％。精選課件(二)胃腸疾病動物模型1．動物胃粘膜腸上皮化生模型(animalmodelofintestinalmetaplasia)(1)烷基硝基亞硝基胍類誘發(fā)胃粘膜腸化生模型隨著烷基碳原子數(shù)的增加，致癌性依次減弱，但誘發(fā)腸化生的能力依次增強。其中丙基硝基亞硝基胍(PNNG)是目前誘發(fā)動物胃粘膜腸化生較為理想的藥物。實驗動物一般選用4～6周齡，體重100～200g的雄性大鼠，飲水中加藥，飲水瓶涂成黑色或以錫箔紙包裹，以免致癌物遇光分解。藥物先用去離子水或蒸餾水配制成濃度為1g/L的儲存液，4℃保存，每天用前再稀釋成所需濃度的溶液，讓動物自由飲用。所用劑量為50～83ug/ml，投藥時間16～20周。精選課件(2)X線胃局部照射誘發(fā)胃粘膜腸化生模型選用5～8周齡的Wistar或JCL/SD大鼠。大鼠麻醉后置于X線光束下，動物體用0.6cm厚的鉛皮加以保護，鉛皮中央正對胃區(qū)處留有直徑為1.8cm的小孔，經(jīng)此孔進行X線照射。照射劑量每次5Gy，每日1次，共6次。(3)X線照射和N-甲基-N-硝基亞硝基胍(MNNG)聯(lián)合誘發(fā)鼠胃粘膜腸化生模型5周齡SD雄性大鼠，先用X線照射，每次0.5Gy，每日1次，共6次，8周后投給50ug/ml的MNNG溶液自由飲用4個月，觀察至第15個月時，其腸化生發(fā)生率可達100％。精選課件(4)PNNG誘發(fā)犬胃粘膜腸化生模型選用3周歲，體重11kg左右的Beagle犬自由飲用150ug/mlPNNG溶液40周，后改為自來水。第128周左右可出現(xiàn)典型的腸化生，無論胃鏡或顯微鏡下觀察，均與人類胃粘膜腸化生相類似。

精選課件(5)帶蒂胃壁瓣腸移植大鼠胃粘膜腸化生模型選用體重180～200gWistar大鼠，常規(guī)麻醉后打開腹腔，于大鼠腺胃前壁正中部取一大小約1.5cm×1cm梭形胃壁瓣，保留胃小彎側血管2～4條，0/7號線縫合胃壁。分別在十二指腸中部、空腸末端及中結腸縱形切開腸管，切口長約1.5cm，0.05％洗必泰紗條清潔傷口，將梭形胃壁瓣粘膜面向著腸腔進行側側吻合，0/7號線連續(xù)縫合，腹膜腔內(nèi)放入0.9％NaCl溶液5ml，常規(guī)關閉腹腔。術后第3個月時，移植至空腸和結腸的胃壁瓣粘膜即顯示有腸化生，術后6個月后，移植到腸道各段的胃壁瓣粘膜均可見廣泛的腸化生。

精選課件實驗動物的腸化生模型可用于①研究胃粘膜腸化生發(fā)生的原因及組織來源；②探討胃粘膜腸化生與胃癌發(fā)生的關系；③胃粘膜腸化生逆轉治療藥物的篩選和療效觀察。精選課件2．幽門螺桿菌感染動物模型(animalmodelofhelicobaeterpyloriinfection)(1)Hp感染悉生小獵狗模型給予106～109cfu的Hp菌液經(jīng)口感染悉生獵狗，組織學檢查胃粘膜可見局灶性或彌漫性淋巴細胞浸潤和淋巴濾泡形成，并伴有輕至中度中性粒細胞和嗜酸性粒細胞的浸潤，與人的胃炎相似，中性粒細胞是持續(xù)存在的，而在悉生小豬則是短暫存在。人和豬的Hp感染通常局限在胃內(nèi)，而在小狗除胃以外，在胃腸道其他部位如咽部、食管、十二指腸、空腸、結腸也檢出Hp。精選課件

(2)Hp感染家豬模型實驗豬在實驗前經(jīng)檢查無Hp存在。經(jīng)西咪替丁抑酸處理后給予Hp口服感染，每天3次，每次3ml(1.5×108cfu/m1)共4d，可在胃竇和胃體檢測到Hp，并產(chǎn)生與人類組織學相同的慢性活動性胃炎。(3)Hp感染小鼠模型109cfu的Hp菌液經(jīng)口感染無特異病原CD1小鼠、BALB/c小鼠和普通級CD1小鼠，1周后及其后的4～8周內(nèi)，小鼠體內(nèi)可查到程度不同的感染，其胃粘膜的病理變化與人感染Hp的變化相似，主要表現(xiàn)為胃腺體消失，上皮細胞脫落，潰瘍形成及粘膜固有層炎性細胞浸潤。此模型可用于觀察Hp感染的病理過程及細菌疫苗應用的研究。精選課件3．消化性潰瘍動物模型(animalmodelofpeptlculcer)(1)應激性大鼠潰瘍模型大鼠禁食24h，將動物固定于特制木板上，垂直浸入(23±0.5)℃水浴中，水深平劍突，24h后取出，脫頸處死，打開腹腔，結扎胃賁門和幽門，胃內(nèi)注入1％甲醛溶液8ml，將胃取出浸入甲醛溶液中，30min后沿胃大彎剖開，測量每個潰瘍長徑，計算全胃潰瘍長徑之和為潰瘍指數(shù)。此模型方法簡便，成功率高，可用于應激性潰瘍發(fā)生機制和粘膜保護藥物的研究。精選課件(2)組胺性大鼠潰瘍模型大鼠禁食24h，腹部皮下注射磷酸組胺50mg/kg，1h后再重復注射一次，2h后處死動物，按前述方法固定胃和記錄潰瘍指數(shù)。此方法可同時誘發(fā)食管、胃、十二指腸等發(fā)生潰瘍。可用于潰瘍發(fā)生機制及治療藥物的研究。(3)水楊酸性大鼠胃潰瘍模型大鼠禁食24h，灌胃給水楊酸100mg/kg體重，4h后脫頸處死，按前述方法固定胃，在普通放大鏡下計數(shù)腺胃出現(xiàn)的潰瘍點數(shù)目，以出血點個數(shù)作為觀察指標。(4)利血平性小鼠潰瘍模型小鼠腹部皮下注射利血平5mg/kg體重，繼續(xù)禁食18h，脫頸處死，解剖取胃，固定標本，用解剖顯微鏡計數(shù)胃潰瘍個數(shù)。精選課件

4.潰瘍性結腸炎動物模型(animalmodelofulcerativecolitis)(1)大鼠乙酸潰瘍性結腸炎模型乙酸屬有機酸，與腸粘膜接觸可直接導致炎癥損傷。選用雄性SD大鼠，體重300～350g，試驗前禁食16h，戊巴比妥鈉腹腔麻醉。用導管經(jīng)肛門插入結腸內(nèi)8cm，注入8％乙酸2ml，20s后立即注入5ml生理鹽水沖洗。其病理特點為結腸粘膜彌漫性充血水腫，炎性細胞浸潤，出現(xiàn)糜爛，嚴重者可見潰瘍形成。但早期僅見單純急性炎癥，病變進展及愈合均迅速。與人類潰瘍性結腸炎病變進展與愈合交替的特點不同，該模型炎性介質代謝與人類潰瘍性結腸炎相似。其優(yōu)點為制模簡便、重復性好、經(jīng)濟實用，但不能反映人類潰瘍性結腸炎免疫學變化。精選課件(2)聚糖硫酸鈉誘發(fā)小鼠急慢性潰瘍性結腸炎選無特定病原菌CBA/J(H-2k)或BALB/c(H-2d)雄性小鼠，8～9周齡。飲水中給予5％～10％葡聚糖硫酸鈉(DSS)飲用8～9d，即可看到結腸粘膜炎細胞浸潤、多發(fā)性糜爛、隱窩膿腫等急性炎癥表現(xiàn)。慢性潰瘍性結腸炎模型可先給予5％DDS飲用7d，再飲用自來水10d，如此3～5個循環(huán)，結腸粘膜不僅有糜爛、炎細胞浸潤，且有淋巴濾泡形成及粘膜再生改變，部分粘膜出現(xiàn)異型增生，此模型病理改變類似于人類潰瘍性結腸炎模型，不僅可用于發(fā)病機制、治療藥物研究，而且適用于與結腸癌相關的研究。精選課件(3)免疫學方法誘發(fā)大鼠潰瘍性結腸炎模型選用Wistar大鼠，體重120～130g。取一只健康大鼠的結腸內(nèi)容物，劃線于伊紅-美藍平板，37℃培養(yǎng)24h，取典型菌落擴增并做數(shù)值鑒定，確定為大腸桿菌后，冰箱保存?zhèn)溆?。免疫前取菌種擴增，用福爾馬林殺死細菌，生理鹽水洗兩次并調(diào)濃度為1.2×108/ml。免疫動物分別于第1，10，17，24d共接受4次免疫。第1次于后足跖處注射細菌懸液0.2m1；第2、3次分別于腹部和背部皮下多點注射0.4ml和0.6ml；第4次腹腔內(nèi)注射1.2ml。結腸病理改變可見粘膜水腫、炎細胞浸潤及血管炎改變。粘膜內(nèi)可見多處隱窩膿腫及潰瘍形成，同時可看到細胞免疫功能下降和免疫復合物增加。精選課件二、呼吸系統(tǒng)疾病動物模型(一)慢性支氣管炎動物模型(animalmodelofchronicbronchitis)常用簡便方法是給動物吸入二氧化硫或煙霧。1．二氧化硫吸入刺激法

分別選小鼠吸入二氧化硫2％，每天10s，60d，第14～18d出現(xiàn)支氣管病變，27d后出現(xiàn)重型氣管炎病變；吸入二氧化硫1％，每天20s，25d，第20d出現(xiàn)慢性支氣管炎病變；大鼠吸入二氧化硫23ml/10L空氣，每日30min，第56d出現(xiàn)慢性支氣管炎病變；吸入二氧化硫3ml/L空氣，每日5min，每周6次，45～51d，第36～45d出現(xiàn)慢性支氣管痙攣；猴吸入二氧化硫5～8m1/10L空氣，每日2h，每周5次，65d，在50天時腺體顯著增生，出現(xiàn)慢性支氣管炎病變。精選課件2．煙霧吸入法實驗動物選擇大鼠。(1)強煙霧吸入法鋸末200g，煙葉20g，干辣椒6g，硫磺1g，混合后在27m3(1m×3m×9m)的煙室內(nèi)點燃，形成濃煙霧，濃度約為200mg/m3，每天吸入1h，共44d。(2)弱煙霧刺激鋸末、煙葉各20g，煙葉搗碎后與鋸末混合制成長30cm、直徑3cm的煙卷，點燃后產(chǎn)生弱的煙霧，每支煙卷可在2h點完。將煙霧引入0.65m×0.80m×l.25m的已放置大鼠的煙室，每天2h。精選課件(3)香煙煙霧刺激小鼠于10000ml卡口瓶中，瓶蓋留有直徑1.5cm通氣孔，下口連接一個三通管，另兩端分別連接50ml注射器及點燃的香煙，用注射器通過三通管連續(xù)吸注香煙煙霧，每次400ml(瓶中煙霧濃度約為4％)煙熏30min。前10d上、下午各煙熏一次，后10d每天下午煙熏一次，連續(xù)30次，全程20d。小鼠、大鼠及豚鼠慢性支氣管炎病變中，以杯狀細胞增多、柱狀上皮增生及慢性炎癥細胞浸潤最為常見。盡管這些病變程度可能不盡一致，但它們的綜合出現(xiàn)，特別是在支氣管及末梢細支氣管見到這些改變，就可以作為慢性支氣管炎的形態(tài)學診斷指標。精選課件(二)肺氣腫動物模型(animalmodelofpulmonaryemphysema)常用方法是給予蛋白水解酶類。根據(jù)給藥途徑可分為兩類：1．霧化吸入法家兔1.8～2.0kg，或大鼠180～200g，隨機分為對照組和實驗組。配制50ml2％豬胰彈性蛋白酶或5％木瓜蛋白酶。經(jīng)超聲霧化器將酶液霧化后(直徑5um以下顆粒占90％以上，50ml約4h霧化完)經(jīng)管道送入自制霧化箱。實驗組動物經(jīng)霧化吸入箱的開口處吸入酶的氣霧劑。每次吸入約4h(至酶液霧化完)，每周吸入1次，共3次。末次吸入后1個月，即可作為肺氣腫動物模型進行實驗觀察。對照組動物可吸入生理鹽溶液氣霧劑。精選課件2．氣管內(nèi)滴入法

大鼠180～200g，隨機分為對照組和實驗組。配制3％豬胰彈性蛋白酶或木瓜蛋白酶。給大鼠腹腔注射20mg/kg體