生殖免疫與其免疫檢測(cè)

第二十九章生殖免疫及其免疫檢測(cè)王芳第一頁，共50頁。目錄第一節(jié)概述第二節(jié)常用的生殖相關(guān)免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法和臨床意義第二頁，共50頁。人類生殖過程圖示第三頁，共50頁。生殖免疫學(xué)是近年來發(fā)展起來的生殖生物學(xué)與免疫生物學(xué)交叉的邊緣學(xué)科，著眼于研究生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域免疫學(xué)問題。主要包括神經(jīng)-生殖內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)、母-胎免疫調(diào)節(jié)及生殖免疫調(diào)節(jié)等方面。第四頁，共50頁。第一節(jié)概述第五頁，共50頁。重點(diǎn)提示生殖道組織的局部免疫妊娠與免疫自然流產(chǎn)與免疫性激素與免疫第六頁，共50頁。一、生殖道組織的局部免疫

（一）宮頸與陰道免疫1.抗原提呈細(xì)胞（1）性質(zhì)：樹突狀巨噬細(xì)胞（2）分布：宮頸和陰道上皮層2.T細(xì)胞（1）成分：主要為CD8+T細(xì)胞（2）分布：宮頸天然上皮、轉(zhuǎn)化區(qū)上皮細(xì)胞3.B細(xì)胞（1）分布：陰道、宮頸陰道部、宮頸管組織（2）分泌抗體：分泌型IgA第七頁，共50頁。一、生殖道組織的局部免疫

（二）子宮局部免疫1.T細(xì)胞（1）免疫營(yíng)養(yǎng)作用（2）免疫殺傷作用2.巨噬細(xì)胞

主要的抗原提呈細(xì)胞3.大顆粒淋巴細(xì)胞（LGL）

第八頁，共50頁。一、生殖道組織的局部免疫

（三）卵巢免疫1.免疫細(xì)胞（1）巨噬細(xì)胞（2）淋巴細(xì)胞（3）肥大細(xì)胞（4）多形核細(xì)胞2.細(xì)胞因子（1）胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）（2）轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β）（3）表皮生長(zhǎng)因子（EGF）第九頁，共50頁。

二、妊娠與免疫（一）配子免疫1.精子抗原（1）膜抗原（2）結(jié)構(gòu)抗原（3）血型抗原（4）組織相容性抗原（5）精子內(nèi)部各種酶系抗原第十頁，共50頁。二、妊娠與免疫2.卵細(xì)胞---透明帶抗原由顆粒細(xì)胞分泌并包裹于卵細(xì)胞膜表面的一層基質(zhì)，為糖蛋白，在受精過程中起重要作用。透明帶抗原可誘發(fā)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗透明帶抗體，當(dāng)抗體與透明帶結(jié)合可影響卵細(xì)胞的受精及著床。第十一頁，共50頁。二、妊娠與免疫（二）胚胎免疫

胚胎同種抗原（1）定義：來源于胚胎期和胚胎組織的一類抗原。（2）分類：①胚胎同種抗原；②HLA；③AFP

第十二頁，共50頁。二、妊娠與免疫（三）母體-胎兒免疫

胎兒不被母體所排斥的因素：（1）妊娠期母體的免疫防御反應(yīng)受到嚴(yán)重抑制；（2）胎盤的免疫屏障作用將胎兒抗原封閉起來；（3）母體的抗體及其他免疫因子受到胎盤屏障的阻礙。第十三頁，共50頁。妊娠與免疫（四）胎盤免疫1.胎盤機(jī)械屏障作用；

2.胎盤限制大分子抗原物質(zhì)進(jìn)入胎兒血液循環(huán)；

3.滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)的HLA-G抗原發(fā)揮免疫抑制作用；

4.胎盤分泌多種具有免疫抑制作用的蛋白質(zhì)及激素。第十四頁，共50頁。三、自然流產(chǎn)與免疫免疫機(jī)制非免疫相關(guān)免疫相關(guān)40%-50%50%-60%染色體異常生殖道解剖異常內(nèi)分泌異常生殖道感染自身免疫型同種免疫型第十五頁，共50頁。三、自然流產(chǎn)與免疫1.自身免疫型（1）抗磷脂抗體

定義：是一組自身免疫性抗體，包括狼瘡抗凝因子、抗心磷脂抗體、抗磷脂酸絲氨酸抗體、抗磷脂酸抗體等。意義：若陽性，則流產(chǎn)的發(fā)生率高達(dá)66%～89%。（2）抗精子抗體作用：阻礙精子獲能；干擾精子穿過卵子透明帶等。第十六頁，共50頁。三、自然流產(chǎn)與免疫2.同種免疫型（1）組織相容性抗原系統(tǒng)（HLA）與自然流產(chǎn)①HLA-DR,HLA-DQ抗原②滋養(yǎng)層-淋巴細(xì)胞交叉反應(yīng)抗原（TLX）（2）封閉抗體（blockingantibodies，BA）與自然流產(chǎn)BA與母胎界面上來自父系的抗原相結(jié)合，阻止母體Th細(xì)胞識(shí)別胎兒抗原后引發(fā)的對(duì)胚胎的攻擊。（3）細(xì)胞免疫與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)Th1/Th2平衡失調(diào)第十七頁，共50頁。四、性激素與免疫泌乳素孕激素雌激素第十八頁，共50頁。四、性激素與免疫（一）泌乳素性質(zhì)：垂體激素；分布：以胸腺、卵巢、淋巴細(xì)胞為主；作用：促進(jìn)胸腺內(nèi)T細(xì)胞分化成促進(jìn)B細(xì)胞的分化和成熟，也是NK細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)因子。第十九頁，共50頁。四、性激素與免疫（二）孕激素孕酮通過識(shí)別胎兒來源的抗原，活化γ/δTCR+形成孕酮受體對(duì)妊娠的免疫保護(hù)作用；孕酮通過PIBF干擾花生四烯酸的代謝和誘導(dǎo)免疫反應(yīng)向TH2偏移，降低NK細(xì)胞活性，有助于妊娠維持。第二十頁，共50頁。四、性激素與免疫（三）雌激素1.雌激素對(duì)免疫系統(tǒng)的作用：

①調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、增生；

②影響細(xì)胞因子的產(chǎn)生；

③刺激B細(xì)胞的活化和抗體的產(chǎn)生。2.雌激素受體（estrogenreceptor,ER）第二十一頁，共50頁。第二節(jié)常用的生殖相關(guān)免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目及其

檢測(cè)方法和臨床意義

第二十二頁，共50頁。重點(diǎn)提示不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)生殖系內(nèi)分泌功能的免疫學(xué)檢測(cè)第二十三頁，共50頁。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)

不孕癥：指婚后未避孕，同居2年未曾受孕者。抗精子抗體，抗透明帶抗體是其中重要的免疫性因素。第二十四頁，共50頁。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)（一）抗精子抗體（AsAb）1.抗精子抗體產(chǎn)生機(jī)制：

（1）男性抗精子抗體：自身抗體；

（2）女性抗精子抗體：同種異體抗體；2.抗精子抗體類型：

（1）生殖道分泌物中主要為分泌型IgA，血清中以IgG和IgM為主；

（2）臨床上通常檢測(cè)的是血清中的IgG。第二十五頁，共50頁。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)3.抗精子抗體的檢測(cè)方法（1）精子凝集試驗(yàn)原理：精子表面結(jié)合了抗體后可相互凝集；檢測(cè)方法：明膠凝集法、管板凝集法、圓盤凝集法、毛細(xì)管凝集法等；特點(diǎn)：本法特異性差，假陽性發(fā)生率高。精子凝集圖第二十六頁，共50頁。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)（2）補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)及精子制動(dòng)試驗(yàn)原理：在補(bǔ)體作用下，精子與抗體結(jié)合后不能向前移動(dòng)；特點(diǎn)：本法僅能檢測(cè)作用于精子尾干等的精子抗體，特異性強(qiáng)，敏感性差，假陰性發(fā)生率高。（3）免疫珠結(jié)合法原理：用抗人免疫球蛋白抗體包被的聚丙烯酰胺能結(jié)合于結(jié)合了精子抗體的精子表面，在相差顯微鏡可見此種免疫珠隨精子前進(jìn)而移動(dòng)。特點(diǎn)：此法可靠性好但敏感性難以肯定，不能進(jìn)行定量測(cè)定。第二十七頁，共50頁。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)（4）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是不孕不育的一項(xiàng)初篩試驗(yàn)；敏感性高，重復(fù)性好。

人抗精子抗體ELISA試劑盒第二十八頁，共50頁。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)（二）抗透明帶抗體（AzpAb）1.AzpAb產(chǎn)生機(jī)制透明帶具有抗原性，感染或育齡婦女排卵過程中透明帶反復(fù)破裂和吸收，機(jī)體處于抗原刺激的敏感狀態(tài)，產(chǎn)生AzpAb；2.AzpAb對(duì)生殖的影響阻遏精子吸附和穿過透明帶；干擾著床；影響卵細(xì)胞發(fā)育和生長(zhǎng)。第二十九頁，共50頁。不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)3.AzpAb的檢測(cè)方法（1）ELLSA及BA-ELLSA法：

（2）透明帶沉淀反應(yīng)（3）放射免疫法（4）間接免疫熒光試驗(yàn)（5）被動(dòng)血凝法（6）精子-透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn)第三十頁，共50頁。二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（一）封閉抗體（blockingantibodies）1.定義：是人類白細(xì)胞抗（HLA）、滋養(yǎng)層及淋巴細(xì)胞交叉反應(yīng)抗原（TLX）等刺激母體免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的一類IgG型抗體。2.分類：①抗HLA-DR抗體②抗TLX抗體；③抗Fc受體抗體；④抗基因抗體；⑤抗冷B細(xì)胞抗體。第三十一頁，共50頁。二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)3.檢測(cè)方法（1）補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)女方血清內(nèi)的封閉抗體與男方外周血淋巴細(xì)胞結(jié)合，在補(bǔ)體作用下致細(xì)胞死亡，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色（使死亡細(xì)胞著色），顯微鏡下評(píng)判結(jié)果。（2）單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)封閉試驗(yàn)絲裂霉素處理男方淋巴細(xì)胞后，分別在含有AB型血清及女方血清的培養(yǎng)條件下與女方淋巴細(xì)胞混合培育，3H-胸腺嘧啶核苷摻入法檢測(cè)細(xì)胞增殖水平，結(jié)果以封閉效率表示。第三十二頁，共50頁。二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（3）流式細(xì)胞術(shù)分析封閉抗體原理:采用競(jìng)爭(zhēng)法原理，以AB型或小牛血清中抗CD3、CD4、CD25的抗體與測(cè)定管中的抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合男方細(xì)胞；測(cè)定抗CD3、CD4、CD25封閉效率大于1%為陽性。流式細(xì)胞儀第三十三頁，共50頁。二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（二）抗磷脂抗體（APLA）1.定義：是一種廣泛的、異種基因的自身抗體家族，分為狼瘡抗凝物（LAC）和抗心磷脂抗體（ACA）兩大類。2.抗心磷脂抗體（ACLA）的檢測(cè)方法ELISA法最常用第三十四頁，共50頁。二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（三）夫婦雙方HLA抗原檢測(cè)HLA-I類抗原多用血清學(xué)方法檢測(cè)；

HLA-DR抗原檢測(cè)常用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)來鑒定；（四）透明帶抗體及抗精子抗體檢測(cè)見第二十九章第二節(jié)第三十五頁，共50頁。二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（五）血型及抗血型抗體測(cè)定1.常見的血型不合引起的同種免疫病（1）ABO血型不合的同種免疫?。唬?）Rh血型不合的同種免疫??；2.診斷主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室特異性抗體檢查第三十六頁，共50頁。三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)（一）支原體檢測(cè)1.定義：是一類缺乏細(xì)胞壁，能在無生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小原核生物；2.分類：16種，5種對(duì)人有致病性(1)肺炎支原體(2)解脲支原體(3)人型支原體(4)生殖支原體(5)發(fā)酵支原體支原體示意圖第三十七頁，共50頁。三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)3.檢測(cè)方法(1)病原培養(yǎng)采用間接培養(yǎng)法(2)血清學(xué)試驗(yàn)

1)特異性血清學(xué)檢測(cè)方法：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)2)非特異性血清學(xué)檢測(cè)方法：肺炎支原體冷凝集試驗(yàn)等支原體培養(yǎng)基第三十八頁，共50頁。三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)(3)抗原檢測(cè)ELISA、間接免疫熒光法、反向間接血凝法等直接檢測(cè)分泌物和體液中支原體抗原，具有較高的特異性和靈敏度。（4）核酸檢測(cè)基因探針、PCR等方法第三十九頁，共50頁。三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)（二）衣原體檢測(cè)定義：是一類能通過細(xì)菌濾器，有獨(dú)特發(fā)育周期，專性細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞類微生物。分類：沙眼衣原體，鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體。衣原體第四十頁，共50頁。三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)3.檢測(cè)方法（1）尋找抗原1）雞胚分離培養(yǎng)；

2）細(xì)胞分離培養(yǎng)；3）涂片檢查包涵體；

4）ELISA或熒光法檢查衣原體抗原；5）金標(biāo)法衣原體快速檢測(cè)。衣原體包涵體第四十一頁，共50頁。三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)（2）尋找抗體微量免疫熒光法（3）尋找特異性核酸1）連接酶鏈反應(yīng)

2）轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增試驗(yàn)3）聚合酶鏈反應(yīng)4）實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)

第四十二頁，共50頁。四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)（一）生殖系腫瘤常用的免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)1.血清糖蛋白腫瘤標(biāo)志物（1）鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCCA）：可作為宮頸癌的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子和預(yù)后指標(biāo)。（2）CA-125（3）CA15-3（4）CA19-9（5）癌胚抗原（CEA）（6）前列腺特異性抗原（PSA）第四十三頁，共50頁。四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)2.胎兒-胎盤蛋白腫瘤標(biāo)記物（1）甲胎蛋白（AFP）（2）人絨毛膜促性腺激素（HCG）β-HCG用于早孕的診斷，對(duì)葡萄胎、絨毛膜癌等有重要的診斷和療效監(jiān)測(cè)價(jià)值。第四十四頁，共50頁。四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)3.酶類腫瘤標(biāo)記物（1）堿性磷酸酶（ALP）胎盤型ALP常作為宮頸癌和卵巢上皮性癌的腫瘤標(biāo)記物。（2）乳酸脫氫酶（LDH）用于卵巢上皮性和生殖細(xì)胞腫瘤的檢測(cè)。（3）端粒酶與細(xì)胞衰老，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及分化程度具有相關(guān)性。第四十五頁，共50頁。四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)（二）生殖系腫瘤免疫學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)

1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）2.化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)（CLEI