臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)課件抗凝物質(zhì)與纖溶活性的檢驗(yàn)

抗凝系統(tǒng)檢驗(yàn)

纖溶活性檢驗(yàn)廣醫(yī)二院王忠英止血血管壁血小板凝血凝血因子抗凝細(xì)胞、體液抗凝物質(zhì)纖溶纖溶酶原的活化與抑制物抗凝系統(tǒng)檢驗(yàn)抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）組織因子途徑抑制物（TFPI）（自學(xué)）肝素、類肝素物質(zhì)血漿狼瘡抗凝物血漿凝血因子抑制物（自學(xué)）抗凝系統(tǒng)檢驗(yàn)抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）組織因子途徑抑制物（TFPI）（自學(xué)）肝素、類肝素物質(zhì)血漿狼瘡抗凝物血漿凝血因子抑制物（自學(xué)）抗凝血酶檢測(cè)Antithrombinactivity,AT:A發(fā)色底物法Antithrombinantigen,AT:Ag免疫火箭電泳ELISA免疫比濁法AT活性檢測(cè)原理：發(fā)色底物法反應(yīng)原理：InhibitorsTargetprotease(s)AntithrombinThrombin,IXa,Xa,othersa2-macroglobulinNon-specificTrypsininhibitorNeutrophil

elastase,Thrombin,othersHeparincofactorIIThrombin血漿中的凝血酶抑制物肝素輔因子II，凝血酶特異的絲氨酸蛋白酶抑制劑臨床意義AT降低：遺傳性AT缺陷:AD，易栓癥（thrombophilia)TypeⅠ,TypeⅡ，雜合子在40%-60%遺傳性AT缺乏的臨床特點(diǎn)：年輕（40-45）發(fā)生血栓?有靜脈血栓家族史?復(fù)發(fā)性靜脈血栓形成?少見(jiàn)部位的血栓形成?懷孕期間血栓形成?肝素抵抗臨床意義獲得性AT缺乏：合成減少（肝病，早產(chǎn)兒）丟失過(guò)多（腎病綜合征）消耗增加（DIC）藥物誘導(dǎo)（肝素、L-門(mén)冬酰胺酶）

AT升高：口服抗凝藥，急性出血期等

抗凝系統(tǒng)檢驗(yàn)抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）組織因子途徑抑制物（TFPI）（自學(xué)）肝素、類肝素物質(zhì)血漿狼瘡抗凝物血漿凝血因子抑制物（自學(xué)）APCDomainstructureofthrombomodulin→TheproteinCanticoagulantpathway血漿蛋白C（PC）的檢測(cè)PC:activity,PC:A凝固法（APTT）發(fā)色底物法PC:antigen,PC:Ag免疫火箭電泳血漿蛋白C（PC）活性檢測(cè)凝固法-APTTchromogenicsubstrateassay血漿蛋白C（PC）檢測(cè)PC活性檢測(cè)方法評(píng)價(jià)凝固法影響因素多，如存在狼瘡抗凝物質(zhì)、FⅧ活性升高、FⅤ變異等。若存在APC抵抗時(shí)，血漿凝固時(shí)間假性縮短?？捎梅C的基質(zhì)血漿進(jìn)行稀釋以糾正。確診遺傳性PC缺乏，活性測(cè)定應(yīng)選發(fā)色底物法。血漿蛋白C（PC）抗原檢測(cè)ELISAClassificationofproteinCdeficiencytypeⅠ，typeⅡ純合子0-20%，雜合子<50%1.

HereditaryproteinCdeficiency2.Warfarin-inducedskinnecrosis（WISN)oralanticoagulanttherapywithvitaminK-antagonistssuchas

warfarin

transientbutseverehypercoagulablestate

microvascularthrombosis臨床意義3.AcquiredproteinCdeficiencyDICLiverdiseaseVitaminK-deficiencyMalignancyAdultrespiratorydistresssyndromeNeonatalperiod4.ElevatedPClevelsDiabetesNephroticsyndromeLatepregnancyOralcontraceptives臨床意義抗凝系統(tǒng)檢驗(yàn)抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）組織因子途徑抑制物（TFPI）（自學(xué)）肝素、類肝素物質(zhì)血漿狼瘡抗凝物血漿凝血因子抑制物（自學(xué)）TheproteinCanticoagulantpathwayfreePS:activity,FPS:A凝固法：PTfreePS:antigen,FPS:Ag

膠乳凝集比濁法免疫火箭電泳血漿蛋白S（PS）檢測(cè)FreePSactivityassayPT＋PSPSPSPSPSPSPSPSPS＋PSPSPSPSPSPSPSPSFreePSactivityassay膠乳凝集比濁法C4bBPClassificationofproteinSdeficiencyTypeⅠ——insufficientquantityTypeⅡ——abnormalfunctionTypeⅢ——increasedclearanceoffreePS臨床意義1.Increasewithage2.AcquiredproteinSdeficiencyDecreasesduringpregnancy,inneonatesanduseoforalcontraceptivesDecreasesduringDIC,liverdiseaseDecreasesduringanti-vitaminKtherapy臨床意義3.Hereditary

proteinSdeficiencyTypeIIdeficiencyrareTypeIandTypeIIIdifferentphenotypicexpressionsofthesameproteinSgenotypeabout140differentmutationshavebeenreportedNomutationsfoundinabout40%ofthepatients抗凝系統(tǒng)檢驗(yàn)抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）組織因子途徑抑制物（TFPI）（自學(xué)）肝素、類肝素物質(zhì)血漿狼瘡抗凝物血漿凝血因子抑制物（自學(xué)）血漿肝素及類肝素物質(zhì)的檢測(cè)檢測(cè)原理：1.甲苯胺藍(lán)糾正試驗(yàn)——TT+甲苯胺藍(lán)2.血漿肝素定量——發(fā)色底物法，抗Ⅹa活性檢測(cè)UFH：抑制thrombin、FXaLMWH：抑制FXa臨床意義：1.肝素增多：抗凝治療、體外循環(huán)、血液透析等

肝素濃度監(jiān)測(cè)，0.2-0.4U/ml。2.類肝素物質(zhì)增多：嚴(yán)重肝病、SLE、DIC、某些惡性腫瘤、腎病綜合征等抗凝系統(tǒng)檢驗(yàn)抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）組織因子途徑抑制物（TFPI）（自學(xué)）肝素、類肝素物質(zhì)血漿狼瘡抗凝物血漿凝血因子抑制物（自學(xué)）狼瘡抗凝物（Lupusanticoagulant，LA）狼瘡抗凝物是一種針對(duì)帶負(fù)電荷磷脂的自身抗體，是抗磷脂抗體的一種抗心磷脂抗體和抗β2糖蛋白1抗體在體外，可阻斷凝血酶原轉(zhuǎn)變成凝血酶，進(jìn)而延長(zhǎng)磷脂依賴性凝血試驗(yàn)的凝固時(shí)間在體內(nèi)，促進(jìn)血液凝固檢測(cè)原理RVVT

orAPTTLAC篩查試驗(yàn)

延長(zhǎng)加入正常血漿后，仍延長(zhǎng)LAC確認(rèn)試驗(yàn)

加入過(guò)量磷脂中和LAC后，凝固時(shí)間縮短或恢復(fù)正常，確認(rèn)血漿中存在LAC比值計(jì)算：SR、CR、NLR臨床意義LA陽(yáng)性可見(jiàn)于：自身免疫性疾病、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、磷脂綜合征、易栓性疾病、動(dòng)靜脈栓塞、惡性腫瘤纖溶活性的檢驗(yàn)1.纖溶有關(guān)組分的檢測(cè)血漿纖溶酶原，PLG血漿組織型纖溶酶原活化劑血漿纖溶酶原活化抑制物血漿α2-抗纖溶酶血漿纖溶酶-抗纖溶酶復(fù)合物2.纖溶降解產(chǎn)物的檢測(cè)血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物，F(xiàn)DPsD-二聚體血漿魚(yú)精蛋白副凝固試驗(yàn)，3P血漿纖維蛋白肽Bβ1-42與Bβ15-42血漿纖溶酶原（PLG）的檢測(cè)檢測(cè)原理：PLG:A發(fā)色底物法PLG:AgELISA臨床意義降低：纖溶活性增高合成減少：肝實(shí)質(zhì)損傷消耗增多：DIC、溶栓治療、原發(fā)性纖溶亢進(jìn)等異常PLG血癥：活性降低，含量一般正常遺傳性PLG缺乏：極少見(jiàn)升高：纖溶活性降低血栓前狀態(tài)、血栓性疾病，某些惡性腫瘤、糖尿病方法評(píng)價(jià)：發(fā)色底物法簡(jiǎn)便、快速，影響因素多，反映纖溶的靈敏度較低血漿組織型纖溶酶原活化劑（t-PA）檢測(cè)檢測(cè)原理：t-PA:A發(fā)色底物法t-PA:AgELISA臨床意義增高：纖溶活性增強(qiáng)原發(fā)性與繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)減低：纖溶活性減低

高凝狀態(tài)、血栓性疾病、手術(shù)、口服避孕藥溶栓治療監(jiān)測(cè)血漿纖溶酶原活化抑制劑（PAI）檢測(cè)檢測(cè)原理：PAI:A發(fā)色底物法PAI:CSDS利用t-PA-PAI形成1:1無(wú)活性復(fù)合物臨床意義增高：提示發(fā)生血栓的風(fēng)險(xiǎn)增加

減低：提示出血的風(fēng)險(xiǎn)增加PAI-1是急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，與t-PA聯(lián)合檢測(cè)

纖溶活性的檢驗(yàn)1.纖溶有關(guān)組分的檢測(cè)血漿纖溶酶原，PLG血漿組織型纖溶酶原活化劑血漿纖溶酶原活化抑制物血漿α2-抗纖溶酶血漿纖溶酶-抗纖溶酶復(fù)合物2.纖溶降解產(chǎn)物的檢測(cè)血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物，F(xiàn)DPsD-二聚體血漿魚(yú)精蛋白副凝固試驗(yàn)，3P血漿纖維蛋白肽Bβ1-42與Bβ15-42

凝血酶因子ⅩⅢa

非交聯(lián)交聯(lián)纖維蛋白原纖維蛋白纖維蛋白

纖溶酶纖溶酶纖溶酶

X、Y、D、E，Bβ1～42，A、B、C、HX’、Y’、D、E’，Bβ1～42，Bβ15～42，A、B、C、HX’、Y’、D、E’，D-二聚體DD/E、DY/YDYY/DXD等FPA,FPBFDPsD-二聚體Bβ1～42Bβ15～42臨床應(yīng)用：升高：血栓前狀態(tài)與血栓性疾病，eg.DVT、DIC、肺栓塞、心梗、腦梗等，妊娠期原發(fā)性與繼發(fā)性纖溶鑒別：D-二聚體、Bβ15～42治療監(jiān)測(cè)：溶栓治療有效時(shí)，D-dimer先增高，后逐漸下降；含量持續(xù)升高或下降緩慢，提示藥物用量不足。

DIC抗凝治療中，高水平的D-dimer持續(xù)下降，間接說(shuō)明凝血過(guò)程在減緩或中止，治療有效；而持續(xù)升高說(shuō)明治療無(wú)效。D-dimer與FDPs組合分析FDPs（－）D-D（－）FDPs（－）D-D（＋）FDPs（＋）D-D（－）FDPs（＋）D-D（＋）纖溶活性正常原發(fā)性纖溶DIC,溶栓治療FDPs假陰性？血漿硫酸魚(yú)精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P）原理：繼發(fā)性纖溶時(shí)，形成可溶性FM-FDP復(fù)合物。魚(yú)精蛋白可使FM-FDP解離，F(xiàn)M-FM自行聚合沉淀，出現(xiàn)副凝固。臨床意義：陽(yáng)性：DIC早、中期陰性：DIC晚期，原發(fā)性纖溶亢進(jìn)原發(fā)性與繼發(fā)性纖溶鑒