臨床耐多粘菌素CRE菌株的分子流行病學(xué)研究

Superbug：超級(jí)細(xì)菌MRSA碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細(xì)菌（carbapenem-resistantEnterobacteriaceae，CRE）現(xiàn)在是1頁\一共有27頁\編輯于星期三Superbug：超級(jí)細(xì)菌現(xiàn)在是2頁\一共有27頁\編輯于星期三Superbug：超級(jí)細(xì)菌一位49歲的婦女2016年4月因尿路感染癥狀在賓夕法尼亞州的部隊(duì)醫(yī)院求醫(yī)，分離到一種能夠抵抗多種藥物的大腸桿菌菌株，攜帶有15種不同的耐藥基因，集中在兩種能在細(xì)菌之間輕松移動(dòng)的質(zhì)粒上。一個(gè)質(zhì)粒含有CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；另外一個(gè)就是含有新發(fā)現(xiàn)的可怕的mcr-1基因（導(dǎo)致多粘菌素抗藥性的基因）?，F(xiàn)在是3頁\一共有27頁\編輯于星期三Superbug：超級(jí)細(xì)菌美國(guó)現(xiàn)首例“超級(jí)細(xì)菌”全球無任何抗生素可治！ColistinResistance1、多粘菌素之所以能堅(jiān)挺到現(xiàn)在，是由于它從抗生素早期開始就是一種毒性藥物，由于副作用的緣故而很少被列入處方之中；正因?yàn)槠浜苌俦皇褂?，?xì)菌才沒能適應(yīng)它。2、在此之前，許多細(xì)菌已經(jīng)能夠耐受幾乎所有的抗生素，而多粘菌素則是我們最后的防線。3、而MCR-1之所以這么麻煩，是因?yàn)樗鼮榧?xì)菌提供了抵抗多粘菌素的能力?，F(xiàn)在是4頁\一共有27頁\編輯于星期三1、

WalterReed陸軍研究所的Patrick和WalterReed國(guó)家軍事醫(yī)療中心的Kurt在報(bào)告中表示，這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)“預(yù)示著真正的泛耐藥病原菌即將出現(xiàn)”。2、“我們有身處‘后抗生素世界’的風(fēng)險(xiǎn)”，美國(guó)疾病控制和預(yù)防中心(CDC)主任弗里登(TomFrieden)。3、美國(guó)疾控中心人畜共患傳染病研究部門主任BethBell表示，疾控中心已經(jīng)開始與賓夕法尼亞衛(wèi)生局合作研究：“這位女士是如何攜帶上這種有著高度耐藥性的細(xì)菌？”4、賓夕法尼亞州州長(zhǎng)TomWolf聲明確認(rèn)了這起病例，以及疾控中心參與聯(lián)合調(diào)查一事。現(xiàn)在是5頁\一共有27頁\編輯于星期三[1]HancockRE,ScottMG.Theroleofantimicrobialpeptidesinanimaldefenses.ProcNatlAcadSciUSA,2000,97:8856-8861.細(xì)菌對(duì)多粘菌素耐受的傳統(tǒng)機(jī)制現(xiàn)在是6頁\一共有27頁\編輯于星期三細(xì)菌對(duì)多粘菌素耐受的傳統(tǒng)機(jī)制現(xiàn)在是7頁\一共有27頁\編輯于星期三Emergenceofplasmid-mediatedcolistinresistance

mechanismMCR-1inanimalsandhumanbeingsinChina現(xiàn)在是8頁\一共有27頁\編輯于星期三veryseriousphenomenonthatoccursnowadays

Super-superbugEmergenceofthemcr-1colistinresistancegeneincarbapenem-resistantEnterobacteriaceae（CRE)?現(xiàn)在是9頁\一共有27頁\編輯于星期三一、有沒有耐多粘菌素的腸桿菌科細(xì)菌？二、如有耐受菌是否同時(shí)又是CRE菌株？三、菌株是否保存？CRE

(碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細(xì)菌)+mcr-1的研究現(xiàn)在是10頁\一共有27頁\編輯于星期三CRE+mcr-1的研究

對(duì)我院（蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院）2011-2015年的多粘菌素耐受菌株進(jìn)行了調(diào)查分析，發(fā)現(xiàn)：1、有4株分離自住院病人的腸桿菌科細(xì)菌攜帶MCR-1質(zhì)粒，其中2株為MCR-1質(zhì)粒整合與含NDM-5(NewDelhimetallo-β-lactamase-5)質(zhì)粒的CRE菌株；2、

整合MCR-1質(zhì)粒的CRE菌株表現(xiàn)出對(duì)包括多粘菌素、亞胺培南、美洛培南在內(nèi)的幾乎所有抗菌藥物均耐藥，感染該菌株的患者最終由于抗生素治療無效而導(dǎo)致死亡。

現(xiàn)在是11頁\一共有27頁\編輯于星期三質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)大腸埃希菌J53AZ-RSZ03,SZ04+NaN3

+多粘菌素37℃過夜單菌落SZ03,SZ04大腸埃希菌J53AZ-R(1ml)LB+NaN3

(1ml)LB+多粘菌素37℃,250r/min16~18h鑒定各取100μl菌液(2ml)LB+NaN3+多粘菌素37℃,100r/min5~6h100μl菌液+NaN3+多粘菌素37℃過夜各取100μl菌液(2ml)LB+NaN3+多粘菌素37℃,100r/min5~6h100μl菌液+NaN3+多粘菌素37℃過夜成功獲得mcr-1的轉(zhuǎn)移結(jié)合子，證實(shí)了MCR-1質(zhì)粒能夠水平轉(zhuǎn)移至受體菌。

PCR質(zhì)粒復(fù)制子分型：MCR-1質(zhì)粒為IncI2和IncX4現(xiàn)在是12頁\一共有27頁\編輯于星期三中科院JCR分區(qū)：一區(qū)影響因子：22.433現(xiàn)在是13頁\一共有27頁\編輯于星期三相關(guān)評(píng)論現(xiàn)在是14頁\一共有27頁\編輯于星期三現(xiàn)在是15頁\一共有27頁\編輯于星期三

調(diào)查分析中國(guó)CRE菌株攜帶多粘菌素抗性基因mcr-1的臨床現(xiàn)狀現(xiàn)在是16頁\一共有27頁\編輯于星期三中美CRE合作團(tuán)隊(duì)1、高CRE流行地區(qū)（北部：北京；東部：蘇州；南部：廣州）2、低流行地區(qū)（西北：銀川和西南：成都）3、邊境地區(qū)的云南省昆明市。云南與緬甸、老撾、越南接壤，又靠近印度和孟加拉國(guó)（NDM高發(fā)病率）。6家三甲附屬醫(yī)院現(xiàn)在是17頁\一共有27頁\編輯于星期三美國(guó)Rutgers大學(xué)公共衛(wèi)生研究院Kreiswirth教授紐約斯隆凱特林紀(jì)念醫(yī)院湯一葦教授中美CRE合作團(tuán)隊(duì)現(xiàn)在是18頁\一共有27頁\編輯于星期三菌株來源菌株來自2014~2015年中國(guó)北部（北京）、東部（蘇州）、南部（廣州）、西北部（銀川）、西南部（成都和昆明）的6家三甲醫(yī)院，共264株。現(xiàn)在是19頁\一共有27頁\編輯于星期三CRE菌株耐藥基因分析

表達(dá)mcr-1基因的CRE菌株有3株大腸桿菌(CDA6,BJ10,BJ13)、2株肺炎克雷伯菌(SZ03,SZ04)碳青霉烯酶基因mcr-1KPC+NDM+IMP+VIM+多陽陰性菌株數(shù)1346918731595現(xiàn)在是20頁\一共有27頁\編輯于星期三MCR-1菌株多位點(diǎn)序列分型（MLST）肺炎克雷伯菌管家基因(rpoB,gapA,mdh,pgi,phoE,infB,tonB)大腸桿菌管家基因(adk,fumC,gyrB,icd,mdh,purA,recA)

SZ03：ST25SZ04：ST25CDA6：ST167BJ10：ST156BJ13：ST457現(xiàn)在是21頁\一共有27頁\編輯于星期三耐藥基因接合轉(zhuǎn)移藥敏試驗(yàn)123CDA6、BJ10、SZ03和SZ04攜帶的NDM-5，與NDM-1相比，該變異株具有更高的碳青霉烯酶活性。BJ13的碳青霉烯酶基因檢測(cè)結(jié)果為陰性，但是它含blaCTX-M-15和blaCMY-2，并在孔蛋白基因ompC的303位氨基酸處有一個(gè)提前終止密碼子，可以解釋其碳青霉烯酶耐藥性。CDA6、BJ10、SZ03和SZ04的mcr-1基因可以通過接合轉(zhuǎn)移法轉(zhuǎn)入J53(AZ-R)中，而BJ13的mcr-1基因難以轉(zhuǎn)移。

CDA6、BJ10、SZ03、SZ04菌株的blaNDM-5基因也可通過接合轉(zhuǎn)移法轉(zhuǎn)入大腸桿菌J53(AZ-R)中。mcr-1基因的轉(zhuǎn)移僅與blaNDM-5整合的IncX3質(zhì)粒緊密相關(guān)？

所有的mcr-1轉(zhuǎn)移接合子都只對(duì)粘菌素耐藥，而對(duì)其他抗生素均敏感，表明mcr-1的質(zhì)粒上不含有其他耐藥基因;blaNDM-5轉(zhuǎn)移接合子都對(duì)除氨曲南以外的所有β-內(nèi)酰胺類耐藥。CRE+MCR-1菌株現(xiàn)在是22頁\一共有27頁\編輯于星期三現(xiàn)在是23頁\一共有27頁\編輯于星期三1、這種耐多粘菌素的MCR-1質(zhì)粒蔓延到了CRE菌株，產(chǎn)生泛耐藥株，提示我國(guó)CRE菌株的耐藥現(xiàn)狀異常嚴(yán)峻，若想打贏抗生素耐藥性這場(chǎng)仗，就迫切需要更好的監(jiān)測(cè)和管理。結(jié)論與展望2