免疫分析演示文稿

免疫分析演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有39頁\編輯于星期三第一節(jié)酶免疫分析儀一、酶免疫分析技術(shù)的分類：酶免疫分析(enzymeimmunoassay，EIA)

根據(jù)是否需要分離結(jié)合與游離的酶標(biāo)記物，可分為:

酶擴(kuò)大免疫測定均相酶免疫測定克隆酶供體免疫測定

液相酶免疫法非均相酶免疫測定固相酶免疫法(酶聯(lián)免疫吸附測定enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）現(xiàn)在是2頁\一共有39頁\編輯于星期三需要了解的基本概念酶免疫測定（EnzymeImmunoassay,EIA)均相酶免測定對象為小分子抗原或半抗原，主要用于藥物測定異相酶免測定需經(jīng)過結(jié)合的標(biāo)記物和游離的標(biāo)記物的分離才能測定.分離的方法主要通過固相載體，故此法稱為固相酶免疫測定ELISA。ELISA的測定模式:雙抗體夾心法間接法競爭法現(xiàn)在是3頁\一共有39頁\編輯于星期三雙抗體夾心法（三明治法）原理固相支持物表面包被抗體標(biāo)記抗體待測物現(xiàn)在是4頁\一共有39頁\編輯于星期三夾心法的劑量--反應(yīng)關(guān)系曲線信號(hào)強(qiáng)度（Y）線性范圍待測物濃度（X）Hook效應(yīng)現(xiàn)在是5頁\一共有39頁\編輯于星期三競爭法的原理固相支持物表面待測物包被抗體標(biāo)記抗原現(xiàn)在是6頁\一共有39頁\編輯于星期三競爭法的劑量--反應(yīng)關(guān)系曲線待測物濃度（X）信號(hào)強(qiáng)度（Y）線性范圍現(xiàn)在是7頁\一共有39頁\編輯于星期三間接法原理包被體待測抗體包被抗原標(biāo)記抗體（二抗）現(xiàn)在是8頁\一共有39頁\編輯于星期三俘獲法原理俘獲抗體（二抗）待測抗體標(biāo)記抗原包被體現(xiàn)在是9頁\一共有39頁\編輯于星期三雙抗原夾心法原理包被體待測抗體包被抗原標(biāo)記抗原現(xiàn)在是10頁\一共有39頁\編輯于星期三

我們把采用酶標(biāo)的方法測定物質(zhì)含量的設(shè)備稱為酶標(biāo)儀。一般簡單的酶標(biāo)儀只有讀數(shù)、數(shù)據(jù)處理的功能，還需要配置孵育箱，洗板機(jī)，人工操作步驟繁瑣。全自動(dòng)酶聯(lián)免疫系統(tǒng)集加樣品、加試劑、孵育、震蕩、洗板、讀數(shù)、數(shù)據(jù)處理7大功能于一體。現(xiàn)在是11頁\一共有39頁\編輯于星期三二、酶免疫分析儀的類型、工作原理及基本結(jié)構(gòu)微孔板固相酶免疫測定儀器(酶標(biāo)儀)半自動(dòng)微孔板ELISA分析儀全自動(dòng)微孔板ELISA分析儀管式固相酶免疫測定儀器小珠固相酶免疫測定儀器磁微粒固相酶免疫測定儀器等現(xiàn)在是12頁\一共有39頁\編輯于星期三有單通道和多通道兩種類型工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)相同不同之處在于：

比色液的容器是塑料微孔板以垂直光束通過待測液通常使用光密度OD來表示吸光度1、微孔板固相酶免疫測定儀器現(xiàn)在是13頁\一共有39頁\編輯于星期三現(xiàn)在是14頁\一共有39頁\編輯于星期三現(xiàn)在是15頁\一共有39頁\編輯于星期三2、半自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀在酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上再配置:加液器溫育器洗板機(jī)測讀儀

測定中需由手工將微孔板移至下一步驟的儀器中進(jìn)行。現(xiàn)在是16頁\一共有39頁\編輯于星期三3、全自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀自動(dòng)化酶免疫分析系統(tǒng)由:加樣系統(tǒng)溫育系統(tǒng)洗板系統(tǒng)判讀系統(tǒng)機(jī)械臂系統(tǒng)液路動(dòng)力系統(tǒng)軟件控制系統(tǒng)等組成現(xiàn)在是17頁\一共有39頁\編輯于星期三現(xiàn)在是18頁\一共有39頁\編輯于星期三溫育箱反應(yīng)板迭式存儲(chǔ)器現(xiàn)在是19頁\一共有39頁\編輯于星期三X-Y頭架現(xiàn)在是20頁\一共有39頁\編輯于星期三

樣品架

50根裝

50×3現(xiàn)在是21頁\一共有39頁\編輯于星期三

4根獨(dú)立上下吸移管現(xiàn)在是22頁\一共有39頁\編輯于星期三

檢

測

光

纖現(xiàn)在是23頁\一共有39頁\編輯于星期三

反應(yīng)板

反應(yīng)板夾具現(xiàn)在是24頁\一共有39頁\編輯于星期三

清洗裝置現(xiàn)在是25頁\一共有39頁\編輯于星期三

供水箱

廢水箱現(xiàn)在是26頁\一共有39頁\編輯于星期三檢測時(shí)間:以乙肝兩對半（立可讀）為例

儀器操作各單元如下（滿板）加樣品時(shí)間：6-7分鐘；9-10分鐘（使用液面?zhèn)鞲衅鳎┘用笗r(shí)間：4分46秒(洗5遍，不浸泡)加兩種顯色劑A、B共：5分30秒加終止液：2分42秒讀板時(shí)間：2分58秒現(xiàn)在是27頁\一共有39頁\編輯于星期三優(yōu)勢自動(dòng)化程度高：

前后處理一體化設(shè)計(jì)，減少人與樣品的接觸機(jī)會(huì)，降低感染。各種自動(dòng)安全檢測能。穩(wěn)定：

只要避免人為操作錯(cuò)誤，可連續(xù)數(shù)年良好工作。準(zhǔn)確：

不存在交叉感染。反應(yīng)振蕩，確保檢測準(zhǔn)確。現(xiàn)在是28頁\一共有39頁\編輯于星期三高速：

加注、讀板速度快擴(kuò)展性：

軟件可升級(jí)，樣本量增加，可聯(lián)機(jī)使用用戶做主更多：

開放式試劑

WINDOW操作系統(tǒng)中/英/日自選操作界面自定義編程自動(dòng)/自定義時(shí)間表無限存檔現(xiàn)在是29頁\一共有39頁\編輯于星期三4、管式固相酶免疫測定儀1990年德國推出的全自動(dòng)管式ELISA分析系統(tǒng)和配套試劑用鏈霉親和素包被的聚苯乙烯管、生物素結(jié)合的抗原或抗體，辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體和顯色底物ABTS測定中標(biāo)準(zhǔn)曲線可使用2星期，每次測定只需一點(diǎn)定標(biāo)測定的精密度CV在3%左右現(xiàn)在是30頁\一共有39頁\編輯于星期三5、微粒固相酶免疫測定儀美國生產(chǎn)自動(dòng)酶免疫分析儀應(yīng)用聚苯乙烯微粒（顆粒直徑0.47μm）作為固相，特異抗體或抗原包被在微粒上。第一次抗原抗體反應(yīng)后，將反應(yīng)液通過特制的玻璃纖維膜，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纖維膜上，液體則通過膜濾出。以后的反應(yīng)在膜上進(jìn)行，標(biāo)記酶為ALP，底物為4-甲基傘酮磷酸酶，反應(yīng)后進(jìn)行熒光測定?，F(xiàn)在是31頁\一共有39頁\編輯于星期三6、磁微粒固相酶免疫測定儀

瑞士出品的分析系統(tǒng)由分光光度測讀儀、磁鐵板和試劑組成：試劑包括：抗異硫氰酸熒光素（FITC）抗體特異抗體或抗原包被的磁微粒（顆粒直徑1μm）FITC結(jié)合的特異抗體或抗原堿性磷酸酶標(biāo)記的特異抗體或抗原底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯反應(yīng)結(jié)束后將試管架放在磁鐵板上，磁微粒被磁鐵吸引至管底，完成固相與液相的分離。酶作用后反應(yīng)液呈粉紅色。什么樣的反應(yīng)現(xiàn)在是32頁\一共有39頁\編輯于星期三磁顆粒ELISA是將兩株單抗分別標(biāo)記酶和異硫氰酸熒光素(FITC)，另將一抗FITC抗體經(jīng)化學(xué)反應(yīng)與磁顆粒偶聯(lián)，制成可磁化固相通用分離劑。測定時(shí)將樣品和兩種標(biāo)記單抗加至試管中溫育，然后加入可磁化抗FITC顆粒分離劑，生成夾心免疫復(fù)合物，洗滌，加酶底物顯色?，F(xiàn)在是33頁\一共有39頁\編輯于星期三三、酶免疫分析儀的性能評價(jià)和維護(hù)保養(yǎng)（一）評價(jià)指標(biāo)和方法1．濾光片波長精度檢查及其峰值測定2．靈敏度和準(zhǔn)確度3．通道差與孔間差檢測4．零點(diǎn)飄移5．精密度評價(jià)6．線性測定7．雙波長評價(jià)現(xiàn)在是34頁\一共有39頁\編輯于星期三重點(diǎn)是光學(xué)部分

1．濾光片波長精度檢查

2．通道差與孔間差檢測現(xiàn)在是35頁\一共有39頁\編輯于星期三四、酶免疫分析儀的臨床應(yīng)用１．病原體及其抗體的檢測