2023年雙特異性抗體回想

本文格式為Word版，下載可任意編輯——2023年雙特異性抗體回想現(xiàn)代藥物摸索雜志，2023年3月，00卷00號(hào)刊

導(dǎo)語(yǔ)：雙特異性抗體將兩種抗體的功能結(jié)合在一個(gè)分子中。目前市場(chǎng)上有兩個(gè)雙特異性抗體（一個(gè)近期被批準(zhǔn)），還有更多正處于臨床研發(fā)中。在大型制藥企業(yè)的推動(dòng)下，雙特異性抗體正成為新一代的生物制品。

雙特異性抗體

：RolandE.Kontermann和UlrichBrinkmann免疫和細(xì)胞生物學(xué)學(xué)院，斯圖加特大學(xué)，德國(guó)

羅氏制藥早期研發(fā)，大分子研究，羅氏創(chuàng)新中心，羅氏制藥的研究和早期發(fā)展（PRED），大分子研究，羅氏彭茨貝格創(chuàng)新中心，彭茨貝格，德國(guó)

雙特異性抗體（bsAbs）結(jié)合了兩種抗體的特異性，可同時(shí)定位不同的抗原或表位。具有雙目標(biāo)靶向功能性的BsAbs可與多個(gè)表面受體或相關(guān)配體發(fā)生相互作用，例如與癌癥、增殖或炎癥進(jìn)程。BsAbs還可以拉近多個(gè)目標(biāo)，在一個(gè)細(xì)胞中支持蛋白復(fù)合物的形成，或使多個(gè)細(xì)胞發(fā)生接觸?！皬?qiáng)制連接〞功能的例子有在凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)或靶向免疫細(xì)胞招募劑和/或激活劑中，bsAbs支持蛋白質(zhì)絡(luò)合。經(jīng)過多年的研究和研發(fā)（R＆D），2023年第一個(gè)bsAb被批準(zhǔn)。其次個(gè)bsAb上市是在2023年12月，還有幾個(gè)處在臨床試驗(yàn)階段。在這里，我們描述bsAbs成為下一波抗體為基礎(chǔ)的治療方法的潛力，側(cè)重于臨床開發(fā)中的分子。

重組雙特異性抗體

重組類IgG雙特異性抗體的概念原型二十多年前就被設(shè)計(jì)出來了。Morrison和他的同事們利用靈活的連接肽段將具有不同結(jié)合特異性的單鏈可變區(qū)融合到IgG重鏈的C末端。這種分子由于具有雙重功能而與正?？贵w區(qū)分開來。最初技術(shù)的瓶頸阻礙了其進(jìn)一步發(fā)展，使雙功能抗體始終主要是學(xué)術(shù)和生物技術(shù)領(lǐng)域研發(fā)的一個(gè)話題。然而，技術(shù)的快速發(fā)展使重組蛋白衍生物工程設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和發(fā)展成為可能，加上來自制藥工業(yè)的新的興趣，雙特異性抗體研究領(lǐng)域正式啟動(dòng)?，F(xiàn)在，已經(jīng)可以獲得大量適合作為治療用蛋白的不同的bsAb形式。初始階段在學(xué)術(shù)領(lǐng)域中時(shí)常發(fā)生，多種蛋白構(gòu)型都被證明足夠有力支撐其臨床應(yīng)用。這也隨后引發(fā)了制藥企業(yè)的濃重興趣，包括羅氏公司、輝瑞、基因泰克、賽諾菲安萬特，艾伯維，中外制藥，安進(jìn)和其他公司，現(xiàn)在都在研發(fā)雙特異性抗體藥物。

起初，bsAb是將兩個(gè)不同的、純化的單克隆抗體（mAbs）通過化學(xué)交聯(lián)生成，或者是將2株表達(dá)不同單克隆抗體的雜交瘤融合，構(gòu)建4倍體雜交瘤。但是，兩株異源抗體的輕重鏈隨機(jī)裝配，理論上體系中會(huì)有10多種不同組合的抗體存在，為抗體純化和質(zhì)控帶來了巨大的挑戰(zhàn)。在過去的二十多年里，基因工程技術(shù)導(dǎo)致了一系列雙特異性重組抗體形式的產(chǎn)生，現(xiàn)在已經(jīng)有50多種不同的形式。這使得治療和診斷用的bsAb的發(fā)展發(fā)生了革命性變化，使研究人員可以根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物特性要求來調(diào)整bsAbs的大小、化合價(jià)、靈活性、半衰期和體內(nèi)分布。

一般來說，bsAb可以分成兩大類，一類是含有Fc區(qū)，另一類是缺乏Fc區(qū)的，后者尋常小于免疫球蛋白和含有Fc區(qū)的類IgG雙特異性分子（圖1）。Fc區(qū)有利于采用已建立的針對(duì)IgG分子的流程來對(duì)bsAb進(jìn)行純化，并且能改善其溶解性和穩(wěn)定性。此外，F(xiàn)c區(qū)還對(duì)Fc-介導(dǎo)的效應(yīng)功能有影響，可能是一些治療應(yīng)用所需的附加效應(yīng)，例如抗體依靠的細(xì)胞毒性（ADCC）、補(bǔ)體結(jié)合（CDC）和由于其具有更大的分子量和Fc新生兒受體（FcRn）介導(dǎo)的循

環(huán)過程而導(dǎo)致的長(zhǎng)半衰期。這些功能可以通過基因工程的手段進(jìn)一步利用，例如，通過消除ADCC和/或CDC同時(shí)保存長(zhǎng)半衰期。相比之下，缺乏Fc區(qū)的bsAb完全依靠其抗原結(jié)合能力來發(fā)揮治療效力。

圖1由兩個(gè)不同抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體形成雙特異性抗體的不同機(jī)制圖解。

雙特異性IgG分子可以由同一個(gè)細(xì)胞株表達(dá)的兩條不同的輕鏈和重鏈組裝而成。然而，由于不同肽鏈之間的隨機(jī)組合會(huì)產(chǎn)生大量的相對(duì)雙特異性抗體來說非功能性的分子。一個(gè)簡(jiǎn)單的解決方法是融合其次個(gè)結(jié)合部分，例如單鏈的Fv片段、單獨(dú)的重鏈或輕鏈的N端或C端結(jié)構(gòu)域、整個(gè)抗體的N端或C端結(jié)構(gòu)域，這樣產(chǎn)生一個(gè)對(duì)每個(gè)抗原有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的四價(jià)分子（如圖1）。含雙可變區(qū)的免疫球蛋白(DVD-Ig)也屬于對(duì)稱的雙特異性IgG和類IgG分子，其次個(gè)重鏈可變區(qū)與一個(gè)重鏈的可變區(qū)融合在一起，其次個(gè)輕鏈可變區(qū)與輕鏈融合（如圖2）。通過選擇VH和VL結(jié)構(gòu)域結(jié)合兩種不同抗原的能力可以實(shí)現(xiàn)雙重識(shí)別（圖2）。這種二合一抗體是二價(jià)的，有別于正常的IgG分子。

二價(jià)雙特異性抗體分子的產(chǎn)生的一個(gè)突破是knobs-into-holes技術(shù)的發(fā)展。

（knobs-into-holes雜二聚技術(shù)，原理很簡(jiǎn)單，利用基因工程技術(shù)，在其中一條重鏈上做一個(gè)鈕（knob），在另一條重鏈上做一個(gè)扣（hole），然后兩個(gè)咬合在一起形成雙抗。）通過在兩個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域引入不同的突變來促使重鏈發(fā)生異源二聚化，由此產(chǎn)生不對(duì)稱抗體。近年來在一般方法的基礎(chǔ)上建立了好多新方法，例如利用選擇性突變、靜電轉(zhuǎn)向效應(yīng)、或IgG和IgA來源的混合CH3結(jié)構(gòu)域。然而這些方法都有一個(gè)稱為light-chainproblem

（輕鏈問題）的麻煩，就是不同的輕鏈與重鏈異源二聚體會(huì)發(fā)生隨機(jī)配對(duì)。這可以通過采用一個(gè)能夠同時(shí)結(jié)合兩個(gè)抗原的共同的輕鏈來解決。然而，不是所有的抗體都適用。在這種狀況下，可以采用細(xì)菌表達(dá)和組裝分別含有匹配的輕-重鏈、含有凸起或凹洞的半抗體。CrossMab技術(shù)提供了一個(gè)完美的解決方案。正確配對(duì)的輕鏈?zhǔn)峭ㄟ^交換一條重鏈的CH1結(jié)構(gòu)域和對(duì)應(yīng)輕鏈的CL（輕鏈恒定區(qū)）結(jié)構(gòu)域來獲得的（圖2）。最近，突變也被引入到Fab片段的表面的CH1-CL以及VH-VL區(qū)，由此產(chǎn)生輕重鏈的正確配對(duì)。值得注意的是，通過進(jìn)一步融合一個(gè)抗原結(jié)合部分，非對(duì)稱的重鏈同樣可以作為產(chǎn)生二價(jià)雙特異性，甚至三特異性抗體的基石。

圖2臨床研究階段的不同形式的雙特異性抗體

缺乏Fc區(qū)的小分子bsAb要么由兩個(gè)抗體的VH和VL區(qū)組成，要么由Fab片段組成。兩個(gè)scFv片段串聯(lián)成的scFv分子是其中一種簡(jiǎn)單的形式，在雙特異性T細(xì)胞銜接器（BiTE）技術(shù)中采用的就是這種形式。在這種形式中，兩個(gè)scFv片段以一種靈活的方式通過連接肽段連接在一起。另外一種方法是基于雙體抗體的形式。來自兩個(gè)抗體A和B的可變區(qū)作為多肽鏈被表達(dá)出來，VHA-VLB和VHB-VLA，通過一個(gè)短肽連接在一起，促使兩條鏈發(fā)生異源二聚化。二價(jià)雙體抗體形式后來被進(jìn)一步改進(jìn)，轉(zhuǎn)換成單鏈版本（scDb）和四價(jià)的二聚體衍生物（tandAb），對(duì)每種抗原有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，還有通過二硫鍵穩(wěn)定的變體，例如雙倍親和力靶向分子（DART）。這些分子的體積小，再加上缺乏Fc區(qū)，導(dǎo)致其在體內(nèi)會(huì)快速發(fā)生腎清除。盡管體積小有利于組織滲透（如在腫瘤治療中），但其血清半衰期短會(huì)影響劑量（如在頻繁注射或輸液中需要）。延長(zhǎng)半衰期的方法，包括聚乙二醇（PEG）融合、類PEG多肽融合或白蛋白結(jié)合部分的融合。

BsAbs還可以通過將不同的抗原結(jié)合部分（如scFv或Fab）與其他蛋白結(jié)構(gòu)域融合生成，

可進(jìn)一步包含新的功能。例如，兩個(gè)scFv片段與白蛋白融合，使抗體片段獲得了更長(zhǎng)的血清白蛋白循環(huán)時(shí)間。另外一個(gè)例子是基于cAMP依靠的蛋白激酶和一個(gè)激酶錨定蛋白的異源二聚化的“dock-and-lock〞方法。這些結(jié)構(gòu)可以與Fab片段或者整個(gè)抗體分子連接形成雙特異性抗體。

圖1顯示了生物技術(shù)學(xué)術(shù)界和制藥行業(yè)等不同群體用于獲得bsAb格式不同的策略示意圖。大多數(shù)的這些格式仍在臨床前評(píng)價(jià)階段和大量可能仍舊停留在這個(gè)階段。然而,一些格式已經(jīng)開始臨床開發(fā)，詳見表1。臨床開發(fā)中的bsAb格式的如圖2所示。

免疫細(xì)胞的招募和激活

四價(jià)雙特異性抗體用于T細(xì)胞招募：Trion制藥

抗上皮細(xì)胞粘附分子和抗CD3的雙特異性抗體——卡妥索單抗

（catumaxomab,Removab1）是第一個(gè)獲得上市許可的雙特異性抗體。Trion制藥將卡妥索單抗作為一個(gè)三功能bsAb、一個(gè)腫瘤抗原和小鼠來源IgG2a和老鼠來源IgG2b的CD3結(jié)合混合物。它可以靶向腫瘤，通過結(jié)合T細(xì)胞受體混合物的CD3亞基來招募T效應(yīng)細(xì)胞，同時(shí)可以通過結(jié)合FCγ受體激活單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞和NK細(xì)胞。這使其

可以在卵巢癌中可殺死從而減少腫瘤細(xì)胞（圖3A），阻止和減少腹水積累。作為第一代雙特異性抗體，卡妥索單抗是一個(gè)由小鼠-老鼠雜交瘤表達(dá)的非人源的、小鼠-老鼠源雜合的抗體，每條臂結(jié)合不同的抗原。正確配對(duì)的異源二聚化抗體是通過分開目標(biāo)分子與非所期待的單特異性老鼠源或小鼠源抗體以及錯(cuò)誤連接的L鏈污染物而獲得的。L鏈的錯(cuò)配也可以減少，由于老鼠L鏈更傾向于與老鼠H鏈配對(duì)，反之亦然；小鼠的H和L鏈也會(huì)優(yōu)先配對(duì)。

卡妥索單抗是有效的，并且具有可接受的安全性，只需要很小的劑量（10-150mg）在9-13天內(nèi)腹腔輸液四到五次。除了被批準(zhǔn)用于治療惡性腹水，卡妥索單抗還被應(yīng)用于卵巢癌的臨床研究（二期）、胃癌（二期）以及上皮癌（一期和二期，見表1）。鑒于卡妥索單抗是老鼠-小鼠源雜合的，在大多數(shù)患者身上會(huì)出現(xiàn)抗小鼠IgG或抗老鼠IgG的反應(yīng)；然而，其療效并未受顯著影響。

通過雜交瘤技術(shù)有一系列的bsAb產(chǎn)生，包括同時(shí)抗CD3和CD20或HER2，以及其他的一些腫瘤抗原，像神經(jīng)節(jié)苷脂GD2和GD3。所有這些bsAb都處于臨床前評(píng)估，其中有兩個(gè)進(jìn)入了臨床試驗(yàn)階段：一個(gè)是ertumaxomab(Rexomun)，通過結(jié)合HER2靶向腫瘤細(xì)胞，通過其抗CD3臂招募T細(xì)胞，目前處于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌臨床一期階段。另一個(gè)是Lymphomun,通過靶向結(jié)合T細(xì)胞表面的CD20抗原，通過其抗CD3臂招募T細(xì)胞，目前處于B細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床一到二期研究。

圖3不同bsAb的作用機(jī)制

BiTEs招募T細(xì)胞：Amgen公司（從Micromet收購(gòu)獲得此技術(shù)）

鑒于Trion制藥研發(fā)的招募免疫細(xì)胞的類IgG雙特異性抗體是含有Fc區(qū)的，相對(duì)有更長(zhǎng)的血清半衰期，Amgen采用BiTEs技術(shù)開發(fā)了一種概念不同的招募效應(yīng)細(xì)胞的抗體形式。這些小個(gè)體是僅由抗體的單鏈可變區(qū)scFvs通過連接肽段連接在一起的。它們作為重組蛋白由CHO細(xì)胞表達(dá)，只含有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。其中一個(gè)靶向腫瘤相關(guān)的細(xì)胞表面抗原（比對(duì)CD3有更高的親和力），另一個(gè)以更低的親和力結(jié)合CD3。由于BiTEs體積更小且缺乏Fc區(qū)，其血清半衰期更短。盡管如此，它們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中劑量低至10g/ml的狀況下仍能發(fā)揮效力并誘導(dǎo)特異性的抗腫瘤細(xì)胞毒性（靶向裂解培養(yǎng)細(xì)胞）。因此，BiTEs不會(huì)被消耗，而是作為招募分子，可以在低效應(yīng)分子：靶細(xì)胞比率條件下，促使靶細(xì)胞重復(fù)被T細(xì)胞裂解。

目前臨床開發(fā)最深入的BiTE是blinatumomab(AMG103,MT103)，靶向在急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）細(xì)胞的CD19抗原，在好多臨床前模型中都顯示出了很高的清除腫瘤的效力。鑒于其效力及為了降低風(fēng)險(xiǎn)，blinatumumab應(yīng)用到患者的劑量很低（低至0.005-0.06mg/m2）。藥代動(dòng)力學(xué)（PK；短半衰期）也要求一個(gè)適合的數(shù)周連續(xù)給藥的給藥方案，以確保T細(xì)胞的靶向裂解作用持續(xù)被激活。Blinatumomab目前處于針對(duì)微小殘留性ALL的臨床三期研究（NCT02023167）、針對(duì)ALL的臨床二期、復(fù)發(fā)性ALL的臨床一到二期，以

及兒科ALL的臨床一期階段。2023年12月，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了blinatumomab(Blincyto)作為治療費(fèi)城染色體陰性B細(xì)胞急性白血病的新型免疫療法的上市申請(qǐng)。慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）B細(xì)胞在自身T細(xì)胞存在的狀況下也可以通過blinatumomab減少，對(duì)經(jīng)過不同化療的患者同樣適用。Blinatumomab對(duì)非霍奇金淋巴瘤患者也顯示出了腫瘤消退作用。

Micromet研發(fā)的其他一些BiTEs，靶向腫瘤相關(guān)的抗原有EpCAM,HER2,癌胚抗原（CEA），肝素A2(EphA2),黑色素瘤相關(guān)的軟骨素硫化蛋白多糖（MCSP）和CD33。目前靶向EpCAM-CD3的BiTE（MT110,AMG110）正在進(jìn)行大腸癌、肺癌和胃腸道癌癥的臨床一期研究。靶向CEA-CD3的抗體（MT111）正在進(jìn)行晚期胃腺癌的臨床1b研究，還有另外一個(gè)靶向前列腺特異性膜抗原PSMA-CD3的抗體正處于前列腺癌的臨床1期（MT112,Bay2023112，Bayer）。

DART招募T細(xì)胞：Servier公司和Macrogenics公司

Servier公司和Macrogenics公司開發(fā)了一種雙親和重靶向的可招募T細(xì)胞的雙特異性抗體（DART）。DARTs是由一種抗體的VH與另一種抗體的VL相連，其次種抗體的VH與第一種抗體的VL相連組成的類雙特異性抗體（如圖2），通過額外的二硫鍵穩(wěn)定形成DART。MGD006是一種人源性雙親和重靶向（DART）分子，能夠同時(shí)與白血病細(xì)胞表達(dá)的CD123抗原和T細(xì)胞表達(dá)的CD3抗原結(jié)合。該藥治療急性髓性白血?。ˋML）的Ⅰ期臨床試驗(yàn)階段2023年6月開始，作為DART候選藥物的首個(gè)臨床研究，具有標(biāo)志性意義。MGD007用于治療結(jié)腸癌，2023年7月已進(jìn)入Ⅰ期臨床試驗(yàn)階段（NCT02248805）。該藥也是一種人源性DART分子，能夠同時(shí)識(shí)別結(jié)腸癌細(xì)胞表面的GPA33抗原和T細(xì)胞表面表達(dá)的CD3抗原。相比MGD006，MGD007融合了一個(gè)Fc區(qū)，因而具有較長(zhǎng)的血清半衰期（如圖2）。

TandAbs招募NK和T細(xì)胞:Affimed

AFM13是Affimed公司開發(fā)的能在腫瘤中招募免疫細(xì)胞的TandAbs(雙特異、四價(jià)嵌合抗體)。相比上述雙特異性抗體，AFM13招募的免疫細(xì)胞不是T細(xì)胞而是NK細(xì)胞。它一方面結(jié)合CD30一方面結(jié)合NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上的CD16A。TandAbs是雙特異性融合蛋白，含有四個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，兩個(gè)結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面抗原，兩個(gè)結(jié)合免疫細(xì)胞。它不含有Fc區(qū)，比整個(gè)IgGs或者類IgG雙特異性抗體分子量小，但比BiTEs大，因此具有比IgGs更短但比BiTEs更長(zhǎng)的半衰期。AFM13目前處于霍奇金病的臨床一期。

AFM11是另一個(gè)TandAb，AFM11靶向CD19和CD3，CD19在多種惡性B細(xì)胞上表達(dá)，因此其用于治療非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴細(xì)胞性白血病，目前處于Ⅰ期臨床試驗(yàn)階段。

干擾受體信號(hào)，滅活信號(hào)配體

受體絡(luò)氨酸激酶（RTKs），如HER家族和胰島素樣生長(zhǎng)因子IGF受體，刺激或調(diào)理腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，因此它們成為腫瘤治療中的優(yōu)先靶點(diǎn)。靶向RTK的單特異性抗體，如靶向HER1的cetuximab和panitumumab，以及靶向HER2的trastuzumab和pertuzumab，已經(jīng)在腫瘤治療中得到了廣泛的應(yīng)用。然而，腫瘤細(xì)胞可以通過信號(hào)通路的轉(zhuǎn)換來破除這些藥物對(duì)其生長(zhǎng)的抑制，因此BsAb介導(dǎo)的針對(duì)兩條RTK信號(hào)通路的治療可以減少腫瘤細(xì)胞的這種逃脫機(jī)制，從而提高療效。以類似的方式，炎癥通路中的受體或配體可以用來干擾炎癥前信號(hào)和治療炎癥或自身免疫性疾病。

靶向Her2+Her3或IGF1R+Her3的(scFv)2-HSA和四價(jià)-IgG衍生物(Tv-IgGs):Merrimack公司

MM-111，由Merrimack制藥研制，靶向HER家族的兩個(gè)成員。鑒于這個(gè)家族的四個(gè)成

員(HER1/表皮生長(zhǎng)因子受體,HER2HER3,和HER4),不同的RTK異源二聚體包含HER1,2或3結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子(EGF)有關(guān)的生長(zhǎng)因子，觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)級(jí)聯(lián),促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。一個(gè)是HER2，在乳腺癌中高表達(dá)30%，總生存期更短并可減少?gòu)?fù)發(fā)次數(shù)。在HER2高表達(dá)的乳腺癌中也發(fā)生了HER3的磷酸化，HER2和HER3的異源二聚體促進(jìn)了乳腺癌癌癥的發(fā)展。同時(shí)阻斷HER2和HER3具有更好的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)，這可以干擾HER2基因擴(kuò)增的癌細(xì)胞細(xì)胞系生長(zhǎng)，即使都是針對(duì)HER2的抗體（如trastuzumab和pertuzumab）同時(shí)作用也可以微弱地抑制配體誘導(dǎo)的HER3激活。MM-111對(duì)HER2和HER3有很高的特異性和親和力，由兩個(gè)對(duì)抗性的scFv片段連接而成，每一個(gè)片段有一種特異性（如圖2）。其中，HER2臂是最初的腫瘤細(xì)胞靶點(diǎn)，而HER3臂阻斷生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)，起到治療作用。MM111不含F(xiàn)c區(qū)，含有兩個(gè)scFv，融合調(diào)整過的人血清白蛋白以擴(kuò)展PK。目前其擬適應(yīng)證是治療晚期胃癌和食道癌，已進(jìn)行到Ⅱ期臨床試驗(yàn)階段。

Merrimack開發(fā)的另一個(gè)雙特異性抗體MM141，它可同時(shí)結(jié)合HER3和非HER家族的IGF-1R。選擇這兩個(gè)靶點(diǎn)是由于IGF-1R信號(hào)在好多癌癥中有加強(qiáng)并且該信號(hào)為腫瘤細(xì)胞提供了一種逃脫機(jī)制。MM141的形式是基于改進(jìn)的“Morrison-Prototype〞形式（如圖2）。它有穩(wěn)定的scFv結(jié)合在一個(gè)IgG分子的恒定區(qū)，含有四個(gè)結(jié)合區(qū)域，每個(gè)特異性靶點(diǎn)有兩個(gè)結(jié)合區(qū)。目前處在晚期實(shí)體瘤的臨床一期研究。

靶向HER1+HER3的雙重作用Fab(DAF)-IgG：基因泰克公司

RG7597是基因泰克公司研發(fā)的同時(shí)結(jié)合HER1和HER3的雙特異性抗體。將針對(duì)HER1和HER3兩種特異性結(jié)合在一起，可以提高癌癥治療療效，由于這樣可以完全抑制MAPK和AKT信號(hào)通路。是一種在一個(gè)特定的可變區(qū)里建造兩種特異性功能的人源化IgG。現(xiàn)金的基因工程、展示和選擇技術(shù)聯(lián)合運(yùn)用使發(fā)展和分開出兩種結(jié)合個(gè)體都對(duì)HER1和HER3具有良好的親和力(分別是1.9nMand0.4nM)。Fc區(qū)的存在使這種雙特異性抗體可以像正常人體IgG一樣，同時(shí)可以發(fā)揮免疫效力，如ADCC。RG7597目前處于頭頸癌的臨床二期。

靶向HER1和c-Met的H鏈與正交Fab的異源二聚體:EliLilly禮來制藥

LY3164530由禮來公司研制，靶點(diǎn)是MET和EGFR。它大致形式像IgG,是重鏈和兩個(gè)不同的Fab（可變區(qū)和恒定區(qū)突變的）構(gòu)成的異源二聚體。這生成一個(gè)“正交接口〞會(huì)導(dǎo)致不同的Fab片段的優(yōu)先正確的組裝。HER1c-MET在腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中有作用,同時(shí)干擾他們的受體信號(hào)可能會(huì)有利于單一應(yīng)用的HER1或者c-MET抗體。此外,正常二價(jià)免疫球蛋白結(jié)合HER1和c-MET本身可以誘導(dǎo)由IgG介導(dǎo)觸發(fā)二聚作用的受體信號(hào),。然而,這種潛在的問題不適用類IgG形式，由于它對(duì)每個(gè)抗原只有一個(gè)結(jié)合臂。

靶向受體配體TNF+IL17和IL1α+IL1β的DVDIgG：雅培和艾伯維公司

針對(duì)受體-配體系統(tǒng)的應(yīng)用不光在癌癥領(lǐng)域，在炎癥性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）中同樣適用。由艾伯維公司開發(fā)的ABT122這種雙特異性抗體針對(duì)IL-17和腫瘤壞死因子(TNF)。DVD-Ig形式由一整個(gè)結(jié)合IL17的IgG和在可變區(qū)上“ontop〞上額外結(jié)合一個(gè)靶向TNF的可變區(qū)（如圖2）。DVD-Ig分子具有更佳的結(jié)合親和力和配體通道和結(jié)合兩個(gè)靶點(diǎn)的能力，它含有恒定區(qū)（人IgG1/κ）因而血清半衰期長(zhǎng)。目前ABT122治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床試驗(yàn)處于I期階段。

ABT981是雅培研發(fā)的另外一個(gè)DVD-IgG，針對(duì)IL1α和IL1β。這兩個(gè)靶點(diǎn)都是已經(jīng)證明與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)的靶點(diǎn)，功能性地干擾它們可以阻斷炎癥前信號(hào)通過同源受體。因此，雙特異性抗體同時(shí)介導(dǎo)的抑制作用可以發(fā)揮更大的效力。目前ABT981亦處于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床試驗(yàn)I期階段。

靶向受體配體IL-17A和IL-17F或兩個(gè)Aβ抗原表位的雙納米抗體：Ablynx

ALX-0761：該藥由Ablynx公司研制，目前由Ablynx和默克雪蘭諾共同開發(fā)。ALX-0761是一種能夠同時(shí)瓦解IL-17A和IL-17F的雙特異性納米抗體，目前處于健康志愿者的Ⅰ期臨床階段。IL-17和Th17細(xì)胞與炎癥和自身免疫疾病相關(guān)，鑒于IL-17A和IL-17F是此信號(hào)通路中總要的配體，同時(shí)作用于這兩個(gè)配體的雙特異性抗體相比單特異性抗體可以更加有效地阻斷炎癥反應(yīng)。雙特異性納米抗體由兩個(gè)不同特異性的單體VH類似物結(jié)合個(gè)體以一種二價(jià)特異性的方式融合而成。這些個(gè)體含有一個(gè)半衰期延長(zhǎng)的加合物，而不是Fc區(qū)，來戰(zhàn)勝潛在的PK問題（避免極短的血清半衰期）。

抗-Aβ的雙特異性納米抗體BI1034020是ALX0761抗體形式的另一個(gè)衍生物，目前處于臨床一期。它由兩個(gè)不同特異性的單結(jié)構(gòu)域和一個(gè)PK調(diào)理部分構(gòu)成，最初也是由Ablynx開發(fā)，可結(jié)合兩個(gè)抗體決定簇或淀粉β肽段-Aβ肽段的抗原決定簇，而非結(jié)合兩個(gè)配體。

靶向受體配體VEGFA和促血管生成素2的交織抗體：羅氏

RG7221是羅氏開發(fā)的靶向受體配體VEGFA和促血管生成素2的交織抗體。該抗體是通過一種形似IgG，一個(gè)臂可以結(jié)合每個(gè)配體的交織抗體（如圖2），由于具有Fc區(qū)形似IgG,這類抗體PK性質(zhì)與正常IgG一樣。腫瘤血管化是腫瘤生長(zhǎng)所必需的，受多種血管生成素因子的控制和調(diào)理，清除血管生成因子，如VEGF，可以起到治療腫瘤的作用。然而，腫瘤可以通過其他通路來逃脫這種針對(duì)血管生成通路的抑制，因此同時(shí)作用兩個(gè)或以上的信號(hào)通路可以提高抗血管生成的作用，減少逃脫機(jī)制。貝伐單抗（Avastin）的靶點(diǎn)是VEGF，可結(jié)合VEGF1和VEGF2來調(diào)控血管生成。促血管生成素2（Ang2）是Tie-2激酶的一個(gè)配體，通過結(jié)合其受體也可以起到調(diào)理腫瘤血管生成的作用。臨床前研究說明針對(duì)Ang2和VEGFA的雙特異性抗體的活性會(huì)高于其中單獨(dú)一個(gè)靶點(diǎn)的抗體。目前RG7221處于結(jié)腸直腸癌的臨床二期。

RG7716是靶向VEGFA和Ang2的另一個(gè)交織抗體，它與RG7221具有一致的大小、組成和特異性，但PK性質(zhì)不同。配體（VEGFA和Ang2）驅(qū)動(dòng)的血管生成不但是腫瘤生成中的問題，也存在于在濕性老年性黃斑變性（AMD）中。因此，RG7716交織抗體被研發(fā)用于眼科學(xué)，目前處于濕性AMD的臨床一期。

靶向受體配體IL4和IL13的TBTI(DVD)-IgG：Serono

SAR156597：該藥由賽諾菲公司研制，能同時(shí)作用于IL-4和IL-13，從而抑制它們的同源受體的信號(hào)通路，相比單獨(dú)作用其中一個(gè)靶點(diǎn)，具有更高的抑制IL4和IL13依靠性的成纖維細(xì)胞激活活性。可能適應(yīng)癥為纖維化疾病，特別是特發(fā)性肺纖維化（IPF），這是一種目前治療手段有限、成活時(shí)間很短的一種疾病。該抗體形似IgG，在重鏈和輕鏈的N端含有一個(gè)額外的V區(qū)。這種N端串聯(lián)V區(qū)（TtravalentbispecifictandemIg,TBTI,四價(jià)雙特異性串聯(lián)抗體）的形式與DVD-IgG一樣。目前處于IPF的臨床一期。

靶向受體配體IL17和IL13的ScFv-IgGs：BMS-Zymogenics

同時(shí)靶向受體配體IL17和IL13的雙抗體可以通過它們的受體干擾其信號(hào)通路，干擾該通路預(yù)計(jì)可減少炎癥反應(yīng)和細(xì)胞因子的釋放，可用于治療炎癥或自身免疫性疾病。這種雙特異性抗體形式含有融合了兩種特異性scFv的Fc區(qū)，目前處于炎癥和自身免疫性疾病的臨床一期。

用于定位或預(yù)定位承載運(yùn)輸?shù)碾p特異性抗體

用于CEA-表達(dá)細(xì)胞的放射性療法的DNL（Fab3）：Immunomedics

BsAbs不但能用于交聯(lián)蛋白、細(xì)胞、同時(shí)干擾兩個(gè)靶點(diǎn)