中藥制劑鑒別

中藥制劑的鑒別：利用一定的方法來確定中藥制劑中原料藥的組成，從而判斷該制劑的真?zhèn)?。性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別第一頁，共49頁。第一節(jié)性狀鑒別中藥制劑的性狀：指除去包裝后的性狀。制劑的性狀指成品的顏色、形狀、氣味等。片劑、丸劑如有包衣的還應(yīng)描述出去包衣后的片心、丸心的顏色及氣味；硬膠囊劑應(yīng)寫明出去膠囊后內(nèi)容物的性狀。第二頁，共49頁。包括：顏色、形態(tài)、形狀、氣、味、其他（如含滑石的制劑，手捻有滑膩感）。物理常數(shù)：折光率、旋光度、比旋度、凝點、熔點、相對密度性狀的內(nèi)容第三頁，共49頁。第二節(jié)顯微鑒別中藥制劑的顯微鑒別：利用顯微鏡來觀察中藥制劑中原藥材的組織碎片、細胞或內(nèi)含物等特征，從而鑒別制劑的處方組成。

《中藥藥典》常用鑒別中藥制劑的方法第四頁，共49頁。特點一般選取制成劑型后可以重現(xiàn)各味藥的主要特征作為制劑的鑒別特征。如以原粉入藥的藥材。選擇制劑的顯微鑒別指標(biāo)時，用能相互區(qū)別，互不干擾，能表明該藥味存在的顯微特征作為鑒別依據(jù)。如“六味地黃丸”中川貝的淀粉粒。第五頁，共49頁。第三節(jié)理化鑒別

定義：針對所含藥材的主要化學(xué)成分，采用物理的、化學(xué)的或物理化學(xué)的方法進行檢定，以確定該藥材是否在制劑中真的存在，從而判別真?zhèn)巍?/p>

藥材的選擇：

1力爭全部進行鑒別

2首選選擇君藥3其次選擇臣藥4毒劇藥、貴細第六頁，共49頁。一化學(xué)反應(yīng)法

二微量升華法

三光譜法

四色譜法目前中國藥典收載的理化鑒別方法有：化學(xué)反應(yīng)法、微量升華法、光譜法和色譜法。其中色譜法尤其是薄層色譜法得到廣泛的應(yīng)用，這主要是由于色譜法具有分離分析雙重功能，從而大大提高了鑒別工作的靈敏度和專屬性，并成為今后中藥制劑鑒別的發(fā)展方向。第七頁，共49頁。一化學(xué)反應(yīng)法1原理：利用檢測試劑與制劑中的指標(biāo)性成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，根據(jù)所產(chǎn)生的顏色、沉淀或氣體等現(xiàn)象，來判斷某些成分或某些藥味的有無。2特點：（1）操作簡便，適用性較強（2）其否定功能往往強于肯定功能,專屬性較差。逐漸被專屬性較強的薄層鑒別法取代。2005年版《藥典》在鑒別制劑中的大黃、決明子、何首烏等藥味時，已不再采用蒽醌的顏色反應(yīng)，而收載了薄層鑒別法。第八頁，共49頁。（3）易發(fā)生假陽性或假陰性反應(yīng)

解決方法如下：

①對樣品進行預(yù)處理，除去干擾性成分，富集被檢成分。

②選用專屬性較強的檢測試劑。

③必要時做陽性或陰性對照試驗加以驗證，保證其專屬性和靈敏度。3提取操作：（1）酸性乙醇回流：酚類、有機酸、生物堿等。（2）水冷浸：氨基酸、蛋白質(zhì)。（3）水溫浸：單糖、多糖、鞣質(zhì)、皂苷等。（4）乙醚等低極性有機試劑：苷元。（5）揮去乙醚的藥渣用甲醇超聲：苷。（6）水蒸氣蒸餾：揮發(fā)油。第九頁，共49頁。4常用的一般化學(xué)反應(yīng)主要用于制劑中生物堿、黃酮類、蒽醌類、皂苷、香豆素、萜類以及各種礦物類成分的鑒別（1）生物堿碘化鉍鉀反應(yīng)產(chǎn)生紅棕色沉淀碘化汞鉀反應(yīng)產(chǎn)生類白色沉淀硅鎢酸反應(yīng)產(chǎn)生白色沉淀苦味酸反應(yīng)產(chǎn)生黃色結(jié)晶性沉淀需在酸性條件下進行。注意事先排除其它成分的干擾。少數(shù)生物堿不與上述通用沉淀試劑反應(yīng)，而具有專屬性較強的其它反應(yīng)。第十頁，共49頁。

（2）黃酮類化合物最多使用的檢識反應(yīng)為鹽酸-鎂粉反應(yīng)，呈紫紅色。大山楂丸（山楂）、抗骨增生丸（淫羊藿）、參茸保胎丸（黃芩）等。此外，黃芩提取物采用二氯氧鋯-鹽酸顯色反應(yīng)進行檢識。（3）蒽醌類化合物主要應(yīng)用堿液反應(yīng)（Borntrager反應(yīng)），陽性反應(yīng)呈紅色，加酸紅色褪去呈黃色。例如大黃流浸膏。第十一頁，共49頁。（4）皂苷常用的定性鑒別反應(yīng)有：①泡沫反應(yīng)樣品水溶液振搖后，產(chǎn)生持久性泡沫。②醋酐-濃硫酸反應(yīng)甾體皂苷呈現(xiàn)污綠色，三萜皂苷呈現(xiàn)紅、紅紫色。③濃硫酸反應(yīng)呈現(xiàn)紅、紅紫色。④三氯化銻或五氯化銻反應(yīng)氯仿液呈紫蘭色。⑤氯仿-濃硫酸反應(yīng)氯仿層出現(xiàn)紅色或蘭色，并具綠色熒光。地奧心血康膠囊（黃山藥和穿山龍薯蕷的提取物）、養(yǎng)心定悸膏（甘草、紅參、麥冬）。第十二頁，共49頁。（5）香豆素、內(nèi)酯類和酚類①氯亞氨基-2，6-二氯醌-四硼酸鈉反應(yīng)（Gibbs反應(yīng)），呈現(xiàn)藍色。②異羥肟酸鐵反應(yīng)呈紅色。應(yīng)用品種有：養(yǎng)陰清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮）等。（6）揮發(fā)性成分主要使用香草醛-濃硫酸反應(yīng)檢識此類成分，正反應(yīng)呈紅、紅紫色。應(yīng)用品種主要有：萬應(yīng)錠（冰片）、牛黃解毒片（冰片）、養(yǎng)心定悸膏（桂枝、生姜）等。第十三頁，共49頁。二微量升華法1原理：利用某些成分的升華性，在一定溫度下將其從制劑中升華分離出來，并以升華物所具有的某些理化性質(zhì)作為制劑鑒別的依據(jù)。2特點：簡便、實用，由于升華性僅為少數(shù)中藥化學(xué)成分所具有且升華物純度較高，故專屬性較好。3操作方法：微量升華法常用，少數(shù)使用坩堝法或蒸發(fā)皿法。第十四頁，共49頁。第十五頁，共49頁。三光譜法1紫外光譜法利用藥材中成分共軛體系產(chǎn)生的紫外吸收特征。木香檳榔丸處方：木香、檳榔、枳殼、陳皮、青皮（醋炒）、香附（醋制）、三棱（醋制）、莪術(shù)（醋制）取本品粉末4g，置蒸餾瓶中，加水10ml，使供試品濕潤后，水蒸汽蒸餾，收集餾液約100ml，照紫外分光光度法（中國藥典附錄VA）測定，在253nm波長處有最大吸收。第十六頁，共49頁。2熒光鑒別法利用制劑中某些成分在可見光或紫外光照射下能產(chǎn)生一定顏色熒光的性質(zhì)，對中藥制劑進行鑒別。有的成分本身不具熒光性，但加酸、堿處理后，或經(jīng)其它化學(xué)方法處理后也可產(chǎn)生熒光供鑒別用。3紅外光譜法

分子的官能團信息和譜中的指紋區(qū)信息。第十七頁，共49頁。四色譜法（一）薄層色譜法（二）氣相色譜法（三）高效液相色譜法第十八頁，共49頁。（一）薄層色譜鑒別法

1原理相同物質(zhì)在同一的色譜條件下，表現(xiàn)出相同的色譜行為。在同一塊薄層板上點供試品和對照物，在相同條件下展開，顯色檢出色譜斑點后，計算各斑點的比移值（Rf）并將所得供試品與對照物的色譜圖進行對比分析，從而對藥品進行定性鑒別。限度檢查時要求供試品中的待檢斑點顏色或熒光強度不得更深。含量測定采用薄層色譜掃描法。

2特點簡便、快速、易普及、具有分離和分析雙重功能，且采用供試品與標(biāo)準(zhǔn)對照物同板對比分析法，專屬性亦較強。第十九頁，共49頁。第二十頁，共49頁。3用途除用于鑒別外，還用于限度檢查和含量測定。4要求：系統(tǒng)適用性試驗（05版藥典新增）

①

檢測靈敏度（限量檢查時要求）采用供試品溶液和對照品溶液與稀釋若干倍的對照品溶液在規(guī)定的色譜條件下，于同一塊薄層板上點樣、展開、檢視，后者應(yīng)顯示清晰的斑點。

②

分離度鑒別時要求對照品溶液與供試品溶液中相應(yīng)的主斑點，應(yīng)顯示兩個清晰分離的斑點。用于限量檢查和含量測定時，要求定量斑點與相鄰斑點之間有較好的分離度，除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.0。第二十一頁，共49頁。分離度（R）的計算公式

R=2(d2-d1)/(W1+W2)d1后一成分斑點（峰）與原點的距離；

d2前一成分斑點（峰）與原點的距離；

W1及W2為相鄰兩成分斑（峰）點各自的點的展向長度（峰寬）。ABW1W2d1d2第二十二頁，共49頁。

C

A

B

化合物A的Rf=a/c

a

化合物B的Rf=b/c

b

起始線溶劑前沿

比移值(Rf)

樣品經(jīng)展開后，化合物斑點相對位置的表示，是化合物在兩相(吸附劑與展開劑系統(tǒng))中遷移位置，通過計算求出數(shù)值：

Rf＝原點至化合物斑點中心的距離(x)/原點至展開劑前沿的距離(C)第二十三頁，共49頁。

③重復(fù)性（含量測定時要求）同一供試品溶液在同一塊薄層板上平行點樣的待測成分的峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)不大于3.0%；需顯色后測量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于5.0%。

5材料（1）薄層板

藥典中分析大多數(shù)品種采用硅膠薄層色譜法，少數(shù)使用聚酰胺薄層色譜法和氧化鋁色譜法。常用的有硅膠薄層板、硅膠GF254薄層板。除另有規(guī)定外，一般要求使用市售薄層板。市售薄層板分普通薄層板和高效薄層板兩種。此外尚有纖維素薄層板、C18鍵合相薄層板、氨基鍵合相薄層板、腈基鍵合相薄層板、二醇基鍵合相薄層板等。第二十四頁，共49頁。附：自制薄層板自制薄層板通常使用玻璃，規(guī)格常有10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm、20cm×20cm。常用的固定相有硅膠G、硅膠GF254、硅膠H、硅膠HF254等。其顆粒大小，一般要求直徑為10～40μm。薄層板多采用濕法制備，能使固定相在玻板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層（250～300μm）

。除手工直接鋪制外，還可采用涂布器。涂布器有手動、半自動、全自動等類型。第二十五頁，共49頁。（2）對照物和陰性對照方法①對照物

A對照物的分類：為三種，依次是化學(xué)對照品（單體化學(xué)成分）、對照藥材和對照提取物

B對照物的設(shè)置方式：有四種，依次為設(shè)置一種或數(shù)種對照品、設(shè)置對照提取物、設(shè)置一種或數(shù)種對照藥材和同時設(shè)置對照品和對照藥材。

C對照物有稱之為陽性對照。②陰性對照試驗

A目的：為了考察制劑中其他藥味對欲鑒定藥味在薄層色譜中是否有干擾。

B陰性對照溶液的制備：從制劑處方中減去欲鑒定的藥味，其他所有各藥味按制劑處方加工處理，再以供試品溶液相同的方法制得。第二十六頁，共49頁。標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)對照品第二十七頁，共49頁。標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)對照品第二十八頁，共49頁。對照藥材第二十九頁，共49頁。（3）點樣器材為了增強藥品定性鑒別的可比性，藥典規(guī)定采用定量點樣。最常用的是微升毛細管（定容毛細管），還可用點樣輔助設(shè)備，如點樣支架、半自動或自動點樣器。第三十頁，共49頁。（4）展開容器專用的展開缸有水平式及直立式兩種類型。上行展開一般使用直立展開缸，它又分為平底式和雙槽式，雙槽展開缸具有節(jié)省溶劑、便于預(yù)平衡、可控制展開箱內(nèi)的濕度等優(yōu)點。展開缸蓋子應(yīng)能密閉，體積應(yīng)與薄層板大小相適應(yīng)。第三十一頁，共49頁。（5）顯色（檢視）裝置展開后的薄層板，多需經(jīng)過顯色（檢視）方法使板上的被檢成分斑點顯色后便與觀察和檢識。噴霧顯色應(yīng)使用玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器，要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻霧狀噴出。浸漬顯色可用專用玻璃器皿或展開缸做為浸漬槽。蒸氣熏蒸顯色可在雙槽展開缸或適宜的干燥器中進行。熒光檢視裝置為可見光；254nm及365nm紫外光源的熒光燈下進行。第三十二頁，共49頁。噴霧顯色熒光顯色第三十三頁，共49頁。6操作過程

薄層板活化→點樣→展開→顯色與檢視→結(jié)果判斷（1）薄層板的活化吸附原理的薄層法用板應(yīng)在110℃活化30分鐘，放干燥器中備用。

①市售薄層板：如在貯放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶劑在展開缸中上行展開預(yù)洗后活化。

②自制薄層板：除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水（或0.2%～0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液）在研缽中向同一方向研磨混合，去除表面的氣泡后鋪板，置水平臺上室溫下晾干后，在反射光及透射光下檢查其質(zhì)量，若板面不均勻、不平整或有麻點、有氣泡、有破損及污染等情況，應(yīng)重新鋪制檢查合格后活化。第三十四頁，共49頁。（2）點樣

①供試品溶液和對照物溶液的制備

多采用易揮發(fā)溶劑溶解供試品及對照物。

②點樣的操作

除另有規(guī)定外，在干燥潔凈的環(huán)境，用專用毛細管或半自動、自動點樣器械點樣于薄層板上形成原點。原點一般為圓點狀或窄細的條帶狀。原點基線距板底邊10～15mm，高效板原點基線離底邊8～10mm。圓點狀原點直徑一般不大于3mm；條帶狀的寬度一般為5～10mm。高效板條帶寬度為4～8mm，原點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜，一般不少于8mm，高效板樣品間隔不少于5mm。毛細管接觸點樣時應(yīng)少量多次點加（每次溶劑揮干后點下一次），才能保證原點小而圓。還需注意勿損傷薄層表面，點加條帶原點時應(yīng)注意條帶的均勻性，用噴霧狀條帶點樣器，可保證點樣的質(zhì)量。第三十五頁，共49頁。原點起始線≥5mm≥8mm8~15cm1~1.5cm溶劑前沿展開劑液面原點（展開距離）(點樣位置)第三十六頁，共49頁。

（3）展開

展開前一般需用展開劑對展開缸進行預(yù)平衡，即使缸內(nèi)展開劑氣液兩相達到動態(tài)平衡，該過程亦稱“飽和”。為此可在展開缸內(nèi)加入適量展開劑，密閉，保持15～30分鐘。展開劑要求新鮮配制，不要多次反復(fù)使用。展開劑配制后若分層，則應(yīng)按要求放置分層后取需要的一相（上層或下層）使用。若薄層板需同時預(yù)平衡，可將點樣后的薄層板放入雙槽展開缸的一側(cè)槽中，另一側(cè)槽中加入展開劑，如上法預(yù)平衡。預(yù)平衡后，迅速將薄層板放入展開槽中，立即密閉，展開。展開時薄層板浸入展開劑的深度以液面距原點5mm為宜。溶劑前沿達到規(guī)定的展距后，取出薄層板，晾干，待檢測。一般上行展開8～15cm，高效板上行展開5～8cm。必要時可進行二次展開或雙向展開。第三十七頁，共49頁。（4）顯色與檢視

①顏色較深的成分可直接在日光下檢視其斑點。

②無色或淺色的成分多用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或再加熱使之顯色，在日光下檢視。浸漬顯色時，可將展開后的薄層板平穩(wěn)垂直地放入盛有顯色劑的浸漬槽中一至數(shù)秒鐘后取出，并揩凈薄層板背面殘存的試劑。斑點顯色均勻是其優(yōu)點，但有的樣品經(jīng)試劑浸漬后，斑點容易被浸潤而產(chǎn)生拖尾。加熱顯色應(yīng)注意加熱時間和溫度，尤其是含羧甲基纖維素鈉的薄層板，加熱溫度過高或加熱時間過長，容易引起板面焦化，若用硫酸或含硫酸的試劑加熱顯色，更易造成板面的碳化而影響檢視。

第三十八頁，共49頁。

③有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在紫外燈下觀察熒光色譜。

④有的成分可用試劑的蒸氣（如碘蒸氣、氨蒸氣）熏蒸顯色。

⑤某些無色有紫外吸收且不產(chǎn)生熒光的成分可用熒光淬滅法顯色。即在含有熒光劑的硅膠板（如硅膠GF254板），在紫外光燈（254nm）下觀察板面上該成分形成的熒光淬滅色譜。第三十九頁，共49頁。

（5）記錄薄層色譜圖象可采用照像設(shè)備拍照或掃描儀掃描記錄，以光學(xué)照片或電子圖象的形式保存。

（6）結(jié)果判斷供試品色譜中，在與對照品、對照藥材或?qū)φ仗崛∥锷V的相應(yīng)的位置上，顯相同顏色或熒光的斑點，則判斷為符合定。第四十頁，共49頁。第四十一頁，共49頁。應(yīng)用實例(1)六味地黃丸中牡丹皮的鑒別

(2)一捻金中人參的鑒別第四十二頁，共49頁。

1～12.一捻金；13.人參二醇+人參三醇

1.丹皮酚；2～5.六味地黃丸(3)牛黃解毒片中大黃的鑒別

1.大黃素

2.大黃對照藥材

3～5.樣品

12345第四十三頁，共49頁。

12345

(4)龜齡集中人參的鑒別

(5)萬氏牛黃清心丸中黃連的鑒別第四十四頁，共49頁。1～4.龜齡集；5.人參對照藥材；6.人參皂苷Rb1(S1)、Re(S2)、Rg1(S3)

1～5.萬氏牛黃清心丸；

6.黃連對照藥材；7.小檗堿(6)華佗再造丸薄層色譜圖第四十五頁，共49頁。（二）氣相色譜法

1原理在一定的色譜條件下，相同的物質(zhì)應(yīng)具有相同的色譜特性（分配系數(shù)）和色譜行為（保留值）。因此，在同一色譜條件下，將供試品溶液和對照品溶液分別注入氣相色譜儀，對二者的氣相色譜圖進行