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1第十章動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果分析第一節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)第二節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備與預(yù)實(shí)驗(yàn)第三節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集與處理第四節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及應(yīng)注意的問題第五節(jié)

2生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究可分為整體水平、器官水平、細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平、分子水平等層次研究,一個(gè)課題可以僅在一個(gè)水平層次進(jìn)行研究,但更多的是多個(gè)水平層次的綜合研究。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究是以整體水平層次為主的研究。正確選題立項(xiàng):目的性科學(xué)性創(chuàng)造性可行性第一節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)3一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的定義動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是指研究者根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅\(yùn)用有關(guān)科學(xué)知識(shí)和原理,結(jié)合統(tǒng)計(jì)分析及倫理學(xué)的要求而制定的在動(dòng)物身上進(jìn)行試驗(yàn)的實(shí)施計(jì)劃和方案,并用文字記錄或流程圖表述的實(shí)驗(yàn)方案和技術(shù)路線。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果能否取得預(yù)期效果、達(dá)到研究目的很大程度上取決于研究者動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否科學(xué)、嚴(yán)密。5動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括三個(gè)基本要素:1.處理因素處理因素是實(shí)驗(yàn)中需進(jìn)行重點(diǎn)考察的內(nèi)容,處理因素不同,實(shí)驗(yàn)結(jié)果也不同。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中處理因素應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)。在一次實(shí)驗(yàn)中處理因素不宜過多,也不應(yīng)過少。過多增加分析的難度,過少則實(shí)驗(yàn)結(jié)果蘊(yùn)藏的信息量不足。2.受試對(duì)象在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,受試對(duì)象是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。根據(jù)研究課題不同,選擇適合本課題研究的動(dòng)物的種屬、品種品系、年齡、性別(體重)等,確定分組情況、每組的樣本量和受試對(duì)象總數(shù)。在一般情況下,應(yīng)優(yōu)先使用標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量。3.實(shí)驗(yàn)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)是指處理因素作用于受試對(duì)象后所起的作用,它通過觀察指標(biāo)來實(shí)現(xiàn)。觀察指標(biāo)分為主觀指標(biāo)和客觀指標(biāo)。為保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性和可比性,在選擇指標(biāo)時(shí)應(yīng)盡可能選擇客觀指標(biāo),或盡可能將主觀指標(biāo)轉(zhuǎn)化成客觀指標(biāo),并要求有一定的靈敏度和精確性。6二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則(一)對(duì)照性原則對(duì)照性原則是要求在實(shí)驗(yàn)中設(shè)立可與實(shí)驗(yàn)組比較,用以消除各種無關(guān)因素影響的對(duì)照組。

對(duì)照應(yīng)有可比性:同時(shí)同地同條件一個(gè)完整實(shí)驗(yàn)除了實(shí)驗(yàn)組外,還應(yīng)包括下列對(duì)照組,所有動(dòng)物應(yīng)根據(jù)隨機(jī)原則分配到各組內(nèi)。①

陰性對(duì)照組

陰性對(duì)照組包括空白對(duì)照組、正常對(duì)照組和假手術(shù)組,需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體情況設(shè)置②

陽(yáng)性對(duì)照組

陽(yáng)性對(duì)照組是用已知的能達(dá)到預(yù)期陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)果的處理因素作用于動(dòng)物,其余非處理因素應(yīng)與其它組一致。

陽(yáng)性對(duì)照組有2個(gè)作用,一是檢驗(yàn)試驗(yàn)體系是否正確,如果陽(yáng)性對(duì)照未出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,就應(yīng)該檢查試驗(yàn)體系的哪個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題;二是以陽(yáng)性對(duì)照作為參照物,比較和評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)組的陽(yáng)性結(jié)果是高于還是低于陽(yáng)性對(duì)照。③

實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(模型對(duì)照組)

實(shí)驗(yàn)對(duì)照組是指在研究過程中,給對(duì)照組施加部分處理因素,但不是被研究的處理因素。例如:為了研究某種藥物對(duì)某一病種或證型的治療作用,常常采用一定的動(dòng)物模型。對(duì)動(dòng)物模型的處理方法實(shí)驗(yàn)治療組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組完全相同,但是治療組給予藥物,而實(shí)驗(yàn)對(duì)照組不給藥物。7④

標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組在以動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組時(shí),常設(shè)立一個(gè)不造模處理的正常對(duì)照組,即標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組,在與實(shí)驗(yàn)組和治療組同樣的條件和環(huán)境中完全按常規(guī)飼養(yǎng)。例如在老年病研究中,除了設(shè)立老年對(duì)照組外,還需設(shè)立一個(gè)青年對(duì)照組。青年對(duì)照組的動(dòng)物種類、性別與老年對(duì)照組和治療組相同,只是月齡?。ǔ赡辏T谶@里,青年對(duì)照組相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組,其實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)于老年對(duì)照組(模型對(duì)照組)而言,相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)值或正常值。有的實(shí)驗(yàn)還可設(shè)自身對(duì)照。同一個(gè)體身上觀察實(shí)驗(yàn)處理前后某種指標(biāo)的變化同一動(dòng)物在施加實(shí)驗(yàn)因素的一側(cè)與不施加實(shí)驗(yàn)因素的另一側(cè)作左右的對(duì)照。

自體對(duì)照可有效減少個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)處理反應(yīng)的影響。凡可進(jìn)行自身對(duì)照設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)應(yīng)盡量加以采用。在藥理學(xué)和毒理學(xué)試驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)組還進(jìn)一步分成多個(gè)劑量組,以此觀察不同劑量的量效關(guān)系。不同劑量組也可互視為劑量對(duì)照組。9(四)一致性原則

一致性原則是指在實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組除了處理因素不同外,非處理因素基本保證均衡一致。均衡一致是處理因素具有可比性的基礎(chǔ)。

非處理因素:實(shí)驗(yàn)對(duì)象:動(dòng)物品系、體重、年齡、性別、實(shí)驗(yàn)條件:飼料和飼養(yǎng)方式、實(shí)驗(yàn)環(huán)境:實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度、氣壓、季節(jié)實(shí)驗(yàn)時(shí)間:藥品:藥物廠商、批號(hào)、純度、劑型、劑量、注射容量和速度、酸堿度、溫度、給藥途徑和給藥順序儀器、設(shè)備:儀器種類、型號(hào)、靈敏度、精確度、零點(diǎn)漂移、電壓穩(wěn)定性操作人員:操作步驟熟練程度10(五)客觀性原則

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中要力戒主觀偏性干擾,選擇觀察指標(biāo)時(shí),不用或盡量少用帶主觀成分的指標(biāo)。結(jié)果判斷要客觀,更不能以主觀的意愿對(duì)結(jié)果或數(shù)據(jù)作任意的改動(dòng)和取舍。如中醫(yī)辨證“氣虛”癥狀為面色晃白,頭暈?zāi)垦?,少氣懶言,神疲乏力,甚則暈厥。在大小鼠辯證中可用自發(fā)活動(dòng)儀記錄小鼠的自發(fā)活動(dòng)情況、舌苔顏色可用拍照和與標(biāo)準(zhǔn)色卡對(duì)比記錄,并與正常對(duì)照組比較。

11三、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的主要內(nèi)容(一)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)前應(yīng)考慮的問題1.動(dòng)物福利和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理問題在進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)前,實(shí)驗(yàn)者必須思考:①這個(gè)實(shí)驗(yàn)是否一定要用動(dòng)物才能達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康??是否可用其它試?yàn)方法來代替?②如果實(shí)驗(yàn)必須要在動(dòng)物身上進(jìn)行,那么應(yīng)該如何善待動(dòng)物,在實(shí)驗(yàn)中減輕動(dòng)物的痛苦和不安?實(shí)驗(yàn)者必須提出令人信服的理由證明這個(gè)實(shí)驗(yàn)必須要用動(dòng)物做,而且在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中采取了善待動(dòng)物和減輕動(dòng)物痛苦的具體措施,并承諾本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法和目的符合人類的道德倫理標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)際慣例,在動(dòng)物試驗(yàn)期間遵守有關(guān)的法規(guī)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理福利原則和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度。13(二)實(shí)驗(yàn)方案的制定一個(gè)完整的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)包括以下內(nèi)容:1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬、品種品系、性別、年齡(體重)的選擇2.實(shí)驗(yàn)組數(shù)的確定3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)的基本類型①單組比較設(shè)計(jì)②完全隨機(jī)化設(shè)計(jì)③隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)④配對(duì)設(shè)計(jì)144.每組樣本量的確定每組的樣本量反映了同一處理的重復(fù)個(gè)數(shù)。樣本量過小,抽樣誤差大,不易發(fā)現(xiàn)實(shí)際存在的差異,得不出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)論;樣本量過大,不符合動(dòng)物福利的原則,也浪費(fèi)人力、物力和財(cái)力。一般情況下嚙齒類大小鼠實(shí)驗(yàn)分組每組10-20只,雌雄各半即可滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的要求。大動(dòng)物如兔、犬和豬的實(shí)驗(yàn)一般每組6-10只。一般來說,各組樣本量相等時(shí),統(tǒng)計(jì)效率最高。在實(shí)際工作中,因一批動(dòng)物中個(gè)別不均一性而剔出、實(shí)驗(yàn)人員操作技術(shù)不熟練或技術(shù)復(fù)雜、高劑量組因毒性的不確定等而在實(shí)驗(yàn)中致動(dòng)物死亡等的情況屢有發(fā)生,因而實(shí)際使用的動(dòng)物數(shù)量應(yīng)比理論計(jì)算的樣本量要適當(dāng)增加。155.實(shí)驗(yàn)處理方法和指標(biāo)的選定實(shí)驗(yàn)處理包括處理因素、處理時(shí)間、次數(shù)、強(qiáng)度(劑量)、途徑等,這些都要在實(shí)驗(yàn)方案中確定下來。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指標(biāo)一般包括兩部分:試驗(yàn)期間活體觀察指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死解剖觀察取材測(cè)試指標(biāo)。試驗(yàn)期間活體觀察指標(biāo)包括一般觀察、無創(chuàng)傷性測(cè)定指標(biāo)和創(chuàng)傷性測(cè)定指標(biāo)。一般觀察包括動(dòng)物的精神、行為、營(yíng)養(yǎng)、被毛、攝食情況、大小便及口鼻耳陰部分泌物等,一般無需驚動(dòng)動(dòng)物;無創(chuàng)傷性測(cè)定指標(biāo)包括心電圖、血壓、呼吸、自主活動(dòng)等測(cè)試,有的需要無線遙控設(shè)備。無線遙控?zé)o創(chuàng)傷觀察測(cè)試可避免干擾動(dòng)物,減少動(dòng)物應(yīng)激,因而測(cè)試數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠。創(chuàng)傷性測(cè)定指標(biāo)包括手術(shù)、取血取材等,對(duì)動(dòng)物長(zhǎng)期觀察忽多忽少產(chǎn)生影響。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)要考慮研究團(tuán)隊(duì)有無技術(shù)基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)條件,以及評(píng)估創(chuàng)傷性試驗(yàn)對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死解剖觀察取材測(cè)試涉及到麻醉、取全血/血漿/血清、臟器稱重、病理組織取材及固定等一系列步驟,可依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)指標(biāo)選擇部分或全部進(jìn)行。176.實(shí)驗(yàn)周期的確定一個(gè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)周期要持續(xù)多長(zhǎng)時(shí)間取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮褪欠衲軓膭?dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到所需要的試驗(yàn)結(jié)果。例如,用兔制作動(dòng)脈粥樣硬化模型,飼喂高脂、高膽固醇飼料后一個(gè)半月,兔的主動(dòng)脈上可產(chǎn)生肉眼可見粥樣斑塊,表明造模成功。如果此時(shí)用藥物干預(yù)治療,還需要再增加4周以上治療時(shí)間,總的實(shí)驗(yàn)周期在3個(gè)月左右。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中需參照文獻(xiàn)報(bào)道或根據(jù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn),或通過預(yù)試驗(yàn)摸索。18(三)藥物劑量的設(shè)計(jì)和換算中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究中很大一部分是藥效學(xué)和毒理學(xué)研究,實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的好壞與劑量設(shè)計(jì)有很大的關(guān)系。一個(gè)療效好的藥物劑量過小可能在實(shí)驗(yàn)中顯示不出藥效,劑量過大可能暴露其毒性作用。因此準(zhǔn)確的劑量設(shè)計(jì)對(duì)試驗(yàn)的成功起著重要的作用。如果研究的是一種新藥,沒有臨床資料和動(dòng)物試驗(yàn)資料,那么只能通過設(shè)置多個(gè)劑量進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)摸索。如果有人的臨床用藥劑量或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)參考劑量,那么可轉(zhuǎn)換成不同動(dòng)物的等效劑量。研究證明藥物的等效劑量不是與動(dòng)物的體重成正比的,而是與單位體重體表面積成正比的,因此小動(dòng)物的等效劑量往往是人的數(shù)倍。19種屬小鼠b(0.02)大鼠b(0.150)地鼠b(0.080)豚鼠b(0.4)兔b(1.8)比格犬b(10.0)獼猴b(3.0)成人b(60.0)小鼠a1.000.500.600.3750.250.1500.250.081大鼠a2.001.001.200.750.500.300.500.162地鼠a1.671.201.000.6250.4170.250.4170.135豚鼠a2.671.331.601.000.6670.400.6670.216兔a4.002.002.401.501.000.601.000.324比格犬a(chǎn)6.673.334.002.501.671.001.670.541獼猴a4.002.002.401.501.000.601.000.324人a12.336.177.404.633.081.853.081.00注:引自黃繼漢等,藥理試驗(yàn)中動(dòng)物間和動(dòng)物與人間的等效劑量換算.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué).2004,9(9):1069-1072。括號(hào)中數(shù)值單位為kg。標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物由動(dòng)物a到動(dòng)物b的mg/kg換算系數(shù)21B=W/W標(biāo)校正系數(shù)Sa校正系數(shù)Sb0.30.6691.4940.40.7371.3570.50.7941.2600.60.8431.1860.70.8881.1260.80.9281.0770.90.9651.0361.01.0001.0001.11.0320.9691.21.0630.9411.31.0910.9161.41.1190.8941.51.1450.8741.61.1700.8551.71.1930.8381.81.2160.8221.91.2390.8072.01.2600.7942.21.3010.7692.41.3390.7472.61.3750.7272.81.4090.7093.01.4420.6933.21.4740.679表.非標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物的校正系數(shù)22非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物的換算:①非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物:給藥劑量×校正系數(shù)Sa×換算系數(shù)②標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物:給藥劑量×換算系數(shù)×校正系數(shù)Sb③非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物換算成非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物:給藥劑量×校正系數(shù)Sa×換算系數(shù)×校正系數(shù)Sb例3:長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)350g大鼠用10mg/kg,換算成8kg比格犬的用藥劑量?答:查表2,B=W/W標(biāo)=350/150=2.3,校正系數(shù)Sa=1.301。再查表1大鼠a行,比格犬b列的換算系數(shù)為0.30,故8kg比格犬的劑量=10×1.301×0.30=3.90mg/kg23第二節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備與預(yù)實(shí)驗(yàn)一、知識(shí)和技術(shù)的準(zhǔn)備1.掌握有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物方面的基礎(chǔ)知識(shí)2.掌握有關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)方面的基本技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)儀器、藥品、試劑和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等,盡可能使實(shí)驗(yàn)手段和實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化。應(yīng)注意以下幾個(gè)方面問題:1)了解和熟悉進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)規(guī)章制度,并嚴(yán)格遵守這些規(guī)章制度。25三、預(yù)實(shí)驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)者在正式實(shí)驗(yàn)前對(duì)實(shí)驗(yàn)方法和條件以及實(shí)驗(yàn)對(duì)象磨合為一個(gè)整體的過程,是正式實(shí)驗(yàn)前的模擬或者演習(xí),其目的在于檢查各項(xiàng)準(zhǔn)備工作是否完善,人員是否配齊,實(shí)驗(yàn)方法和步驟是否切實(shí)可行,技術(shù)是否熟練,儀器設(shè)備是否運(yùn)行正常,測(cè)試指標(biāo)是否穩(wěn)定可靠,劑量是否設(shè)計(jì)合理等,了解實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果的距離,從而為正式實(shí)驗(yàn)提供補(bǔ)充、修正的意見和經(jīng)驗(yàn),是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)必不可少的重要環(huán)節(jié)。預(yù)實(shí)驗(yàn)可有效地避免匆忙進(jìn)入正式試驗(yàn)后才發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)準(zhǔn)備不充分,以至于影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)展的現(xiàn)象。因此,預(yù)實(shí)驗(yàn)不僅不會(huì)浪費(fèi)錢財(cái),而且會(huì)有事半功倍的效果,增強(qiáng)正式實(shí)驗(yàn)成功的信心。預(yù)備實(shí)驗(yàn)可使用少量動(dòng)物進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)方法和觀測(cè)指標(biāo)應(yīng)和正式試驗(yàn)一樣。但是,預(yù)備實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不能歸入正式試驗(yàn)的最后結(jié)果中一同分析。26第三節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集與處理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是指在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物采取某種(或多種)處理的觀察記錄或用物理、化學(xué)的方法檢測(cè)而獲取的原始資料或數(shù)據(jù)。原始資料還包括照片、圖片和視頻記錄。通過對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄,貯存,分類和整理,可使研究資料系統(tǒng)化,便于后期對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理??梢哉f,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集和整理是實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析和評(píng)判的基礎(chǔ),也是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)最重要的工作內(nèi)容之一。29(二)質(zhì)量性狀資料指一些能觀察到而不能直接測(cè)量的性狀資料,又稱屬性性狀資料。如毛色、性別、生死等。對(duì)于質(zhì)量性狀資料的分析,必須將質(zhì)量性狀數(shù)量化,其方法有:1.統(tǒng)計(jì)次數(shù)法:根據(jù)動(dòng)物的某一質(zhì)量性狀的類別統(tǒng)計(jì)其次數(shù),以次數(shù)作為質(zhì)量性狀的數(shù)據(jù)。在分組統(tǒng)計(jì)時(shí),可按質(zhì)量性狀的類別進(jìn)行分組,再統(tǒng)計(jì)各組出現(xiàn)的次數(shù)。2.評(píng)分法:對(duì)某一質(zhì)量性狀,因類別不同,分別給予評(píng)分或用數(shù)字劃分等級(jí),如動(dòng)物對(duì)某一病原的感染程度,可分為0(免疫)、1(一過性感染)、2(頓挫性感染)、3(致死性感染);病理組織壞死情況可分為:無(-),25%以下壞死(+),25~50%壞死(++),50%~75%壞死(+++),75%以上壞死(++++)。這樣就可將質(zhì)量性狀資料量化,以利進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)處理與分析。30五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與物理、化學(xué)試驗(yàn)可精細(xì)定量分析不同,動(dòng)物是一個(gè)非常復(fù)雜的生命體,生命現(xiàn)象的特點(diǎn)是具有變異性(個(gè)體之間存在差異)、隨機(jī)性(變異不能準(zhǔn)確推算)和復(fù)雜性(影響因素眾多,有些是未知的),如一組動(dòng)物接受同一處理后得到的反應(yīng)數(shù)據(jù)是各不相同的,但大多以平均數(shù)為中心作正態(tài)分布。用常規(guī)的數(shù)學(xué)方法不能進(jìn)行分析,只能依靠生物統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用概率進(jìn)行分析。生物統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)的方法很多,最常用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法有:各組間計(jì)量資料的比較用方差分析法(F檢驗(yàn)),各組間計(jì)數(shù)資料的比較用卡方檢驗(yàn)(X2檢驗(yàn)),通過概率計(jì)算得出各組間差異是否具有顯著性意義。一般認(rèn)為兩組數(shù)據(jù)之間差異概率P≤0.05具有顯著性意義,P≤0.01具有極顯著性意義,表明兩組數(shù)據(jù)之間的差異不是抽樣誤差,而是處理因素作用所致。現(xiàn)在一般實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有專用軟件,如SPSS、SAS、SYSTAT、GraphPadPrism等。31第四節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及應(yīng)注意的問題一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析與解釋建立在真實(shí)可靠的事實(shí)和數(shù)據(jù)之上科學(xué)、合理的解釋不要輕易否定自己在嚴(yán)密的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真的實(shí)驗(yàn)操作下做出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論32二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的外推動(dòng)物和人之間的差異可能導(dǎo)致動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果并不一定在人身上可以重復(fù)出來,有的甚至是相反的。因此將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)簡(jiǎn)單外推到其他物種(包括人類)上將可能是不可靠的。在肯定一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)最好采用兩種以上動(dòng)物進(jìn)行比較觀察。一般所選的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中一種為嚙齒類動(dòng)物,另—種應(yīng)為非嚙類動(dòng)物。嚙齒類動(dòng)物選用小鼠或大鼠,非嚙齒類動(dòng)物選用犬或猴。如一種實(shí)驗(yàn)處理在多種動(dòng)物身上產(chǎn)生共性結(jié)果,往往用在人身上也會(huì)有意義。332.謹(jǐn)慎評(píng)價(jià)近交系動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果近交系動(dòng)物因其遺傳背景清楚,實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果數(shù)據(jù)整齊、重復(fù)型好,目前制作的很多突變系疾病動(dòng)物模型的突變基因大多導(dǎo)入到近交系遺傳背景中。但不同近交品系具有各自不同的敏感特性,在近交系育成過程中所造成的近交衰退與人體的正常生理?xiàng)l件差異很大,因此在某些研究中很難說正確地反映了人體的條件。對(duì)近交系動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)更要慎重,避免因?qū)嶒?yàn)結(jié)果的誤導(dǎo)而造成難以想象的后果。34第五節(jié)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的局限性

一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究?jī)H是生物醫(yī)學(xué)研究諸多手段中的一個(gè)生物醫(yī)學(xué)研究的領(lǐng)域和范圍很廣,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究?jī)H是生物醫(yī)學(xué)研究的一部分。許多人往往認(rèn)為醫(yī)學(xué)上很多研究離不開動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。但是有些疾病如糖尿病、冠心病研究、先天性免疫缺陷癥的病因研究等的許多成果并不完全歸功于動(dòng)物實(shí)驗(yàn),而主要是來自人群的流行病學(xué)調(diào)查的結(jié)果。癌癥研究中也顯示出動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有一定的局限性。而對(duì)人群觀察卻提供了十分重要的線索。結(jié)果表明,多食用蔬菜、水果和低脂肪食物的癌癥患者存活的時(shí)間更長(zhǎng),而且復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性較小。此外,有些研究以前用動(dòng)物實(shí)驗(yàn),現(xiàn)在一般不再采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。如病毒傳代和鑒定以前通常采用動(dòng)物接種,現(xiàn)在除了個(gè)別病毒(如柯薩奇病毒、乙型腦炎病毒以及病因未明的病毒感染)外,普遍采用細(xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng)技術(shù),因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng)生產(chǎn)疫苗的現(xiàn)代方法更安全、更有效。35二、動(dòng)物種屬差異可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致的現(xiàn)象藥物或化學(xué)物質(zhì)的安全性評(píng)價(jià)主要在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上進(jìn)行。但是,不同種屬動(dòng)物所測(cè)得的結(jié)果往往不一致,甚至相互矛盾。例如,1988年,LesterLave在《自然》雜志上報(bào)道,用大鼠和小鼠測(cè)試214種化合物的致癌性的雙重試驗(yàn),其反應(yīng)一致性的僅有70%。嚙齒類動(dòng)物和人之間的相關(guān)性將會(huì)更低。DavidSalsburg也發(fā)現(xiàn),已知19種人類攝入時(shí)會(huì)致癌的化合物,如采用現(xiàn)定的標(biāo)準(zhǔn)用量,只有7種化合物能在小鼠和大鼠身上引起癌癥。許多動(dòng)物,特別是大鼠和小鼠,其體內(nèi)合成維生素C的量為人類推薦的每日允許攝

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