藥物分析第二章藥物鑒別試驗

1.取樣2.鑒別3.檢查4.含量測定5.檢驗報告工作程序藥品檢驗工作的基本內(nèi)容1第一頁，共73頁。鑒別

是根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用化學、物理化學或生物學方法來判斷藥物的真?zhèn)?鑒別方法要求:專屬性強、再現(xiàn)性好、靈敏度高、簡便快速2第二頁，共73頁。鑒別

《中國藥典》鑒別項下規(guī)定的試驗方法,僅反應藥品某些物理、化學或生物學等性質(zhì)的特征，不完全代表對該藥品化學結(jié)構(gòu)的確認3第三頁，共73頁。鑒別試驗特點1.已知物的確證試驗,不是鑒定未知物的組成和結(jié)構(gòu)，僅用于證實貯藏在有標簽容器中的藥物是否為其所標示的藥物，而非對未知物的鑒別。2.鑒別試驗是個別分析不是系統(tǒng)分析(采用靈敏度高專屬性強的方法,試驗項目少)3.選用藥物的化學鑒別反應,光譜特征,色譜行為,物理常數(shù)等不同方法鑒別同一個供試品4.鑒別制劑注意消除輔料的干擾4第四頁，共73頁。

鑒別試驗

鑒別試驗項目鑒別方法鑒別試驗條件鑒別5第五頁，共73頁。鑒別實驗項目鑒別（一）性狀（二）一般鑒別試驗（三）專屬鑒別試驗6第六頁，共73頁。性狀——包括顏色、臭味等應有的外觀以及溶解度和物理常數(shù).

是質(zhì)量重要表征之一,在一定程度上反映藥品的純度及療效.7第七頁，共73頁。1．外觀

指藥物外表感觀和色澤，包括聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭味等性質(zhì)。

如《中國藥典》對二巰基丁二鈉的描述為“本品為白色至微黃色的粉末；有類似蒜的特臭”。2．溶解度溶解度是藥物的一種物理性質(zhì)，在一定程度上反映了藥品的純度。

如磺胺嘧啶“在乙醇或丙酮中微溶，在水中幾乎不溶；在氫氧化鈉試液中易溶，在稀鹽酸中溶解”。

鑒別實驗項目8第八頁，共73頁。尼莫地平

在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在水中幾乎不溶?！吨袊幍洹?第九頁，共73頁。

3．物理常數(shù)

物理常數(shù)：評價藥品質(zhì)量的重要指標

藥物鑒別，藥品的純雜程度。

《中國藥典》收載的物理常數(shù)包括：相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。。鑒別實驗項目10第十頁，共73頁。

(1)熔點：由固體熔化成液體的溫度熔融同時分解的溫度在熔化時初熔至全熔的一段溫度。

（2）比旋度：在一定波長與溫度下，偏振光透過長1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時測得的旋光度稱為比旋度。

反映手性藥物特性及其純度的主要指標用途：鑒別藥品純度檢查含量測定鑒別實驗項目11第十一頁，共73頁。鑒別實驗項目

例1:

溴化新斯的明項下所述：“本品的熔點為171℃~176℃，熔融時同時分解”。例2：如維生素C的比旋度測定：“取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋使成每1ml中約含0.10g的溶液，依法測定，比旋度為+20.5°至+21.5°”。

12第十二頁，共73頁。

（3）吸收系數(shù)：

在給定的波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時的吸收度稱為吸收系數(shù)。

表示方法：摩爾吸收系數(shù)百分吸收系數(shù)

用途：

檢查純度測定制劑含量鑒別實驗項目13第十三頁，共73頁。依據(jù)某一類藥物的化學結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征，通過化學反應來鑒別藥物的真?zhèn)舞b別實驗項目一般鑒別試驗14第十四頁，共73頁。無機藥物:根據(jù)陰、陽離子（鈉鹽、鈣鹽、硫酸鹽、氯化物）的特殊反應,并以藥典附錄項下的一般鑒別試驗為依據(jù)；有機藥物:多采用典型的官能團反應（芳香第一胺、水楊酸鹽）.鑒別實驗項目一般鑒別試驗15第十五頁，共73頁。只能證實是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。例如:鈉鹽的焰色試驗,不能辨認是氯化鈉、苯鉀酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物.只適用于確認單一的化學藥物，對多種藥物的混合物或有干擾物存在時，不適用。鑒別實驗項目一般鑒別試驗16第十六頁，共73頁。無機酸鹽有機酸鹽無機金屬鹽類有機氟化物類芳香第一胺類托烷生物堿類丙二酰脲類《中國藥典》17第十七頁，共73頁。1.有機氟化物無機氟化物＋茜素氟藍＋硝酸亞鈰pH4.3藍紫色絡合物二、一般鑒別試驗18第十八頁，共73頁。

1．

有機氟化物

（地塞米松、依諾沙星、氧氟沙星、醋酸曲安奈德、醋酸氟輕松、醋酸氟輕可的松）

取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法進行有機破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，待燃燒完全后，充分振搖，取吸收液2ml，加茜素氟藍試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍紫色，同時做空白對照試驗。

一般鑒別實驗鑒別方法19第十九頁，共73頁。

2．有機酸鹽（1）水楊酸1）鑒別方法一：取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫堇色。2）反應原理：本品在中性或弱酸性條件下，與三氯化鐵試液生成配位化合物，在中性時呈紅色，弱酸性時呈紫色。

一般鑒別實驗20第二十頁，共73頁。二、一般鑒別試驗2.水楊酸鹽鑒別方法二FeCl3反應弱酸性中性②加稀HCl，即析出白色沉淀；分離，沉淀溶于醋酸銨溶液。①21第二十一頁，共73頁。（2）酒石酸鹽1）鑒別方法：取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀即游離并附在試管內(nèi)壁成銀鏡。一般鑒別實驗22第二十二頁，共73頁。

2）

反應原理：其反應式為：HO—CH—COOH︳+2Ag(NH3)2OH→HO—CH—COOHHO—C—COONH42Ag+‖+2NH3+2H2OHO—C—COONH423第二十三頁，共73頁。3．

芳香第一胺類（1）鑒別方法：取供試品約50mg，加稀鹽酸1ml，必要時緩緩煮沸使溶，放冷，加亞硝酸鈉溶液（0.1mol/L）數(shù)滴，滴加堿性β-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成橙黃色到猩紅色沉淀。（2）反應原理：重氮化-偶合反應一般鑒別實驗24第二十四頁，共73頁。《中國藥典》2005版二部芳香第一胺反應鑒別的藥物

對乙酰氨基酚鹽酸普魯卡因艾司唑侖硝西泮奧沙西泮磺胺嘧啶25第二十五頁，共73頁。

4．

托烷生物堿類

（硫酸阿托品、氫溴酸山莨菪堿、氫溴酸東莨菪堿）

（1）鑒別方法：取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，即得黃色的殘渣，放冷，加乙醇2-3滴，加固體氫氧化鉀一小顆，即顯深紫色。（2）反應原理：托烷生物堿類均具有莨菪酸結(jié)構(gòu)，有Vitali反應，顯紫色。后馬托品具莨菪醇結(jié)構(gòu)而不具莨菪酸結(jié)構(gòu)，無此反應。一般鑒別實驗26第二十六頁，共73頁。莨菪酸三硝基衍生物醌式化合物硝基化反應莨菪醇27第二十七頁，共73頁。5．無機金屬鹽（1）Na、K、Ca的焰色反應

1）鑒別方法：取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯各離子的特征顏色。

Na+鮮黃色

K+紫色

Ca2+磚紅色一般鑒別實驗28第二十八頁，共73頁。2）測定原理：火焰光譜的譜線不同Na589.0nm、589.6nm，顯黃色。K766.49nm、769.90nm，由于人眼在此波長附近敏感度較差，顯紫色。Ca622nm、554nm、442.67nm與602nm，622nm的譜線最強，磚紅色。一般鑒別實驗29第二十九頁，共73頁。（2）銨鹽

鑒別方法：

供試品+NaOH

NH3a.發(fā)生氨臭；b.遇濕潤的紅色石蕊試紙藍c.硝酸亞汞試液濕潤的濾紙

黑一般鑒別實驗30第三十頁，共73頁。

6．

無機酸根（1）氯化物

鑒別一：硝酸銀反應：Cl-+AgNO3AgCl

NH3H2O

沉淀溶解+HNO3

沉淀生成

如供試品為生物堿或其他有機堿的鹽酸鹽，須先加氨試液使成堿性，將析出的沉淀濾過除去，取濾液進行試驗。一般鑒別實驗31第三十一頁，共73頁。

鑒別二

取供試品少量，置試管中，加等量的二氧化錳,混勻,加硫酸濕潤,緩緩加熱,即發(fā)生氯氣.

Cl2+KI-淀粉試紙藍色一般鑒別實驗32第三十二頁，共73頁。（2）硫酸鹽

鑒別一：SO42-+BaCl2BaSO4

沉淀在HCl或HNO3中不溶解。

鑒別二：

取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。一般鑒別實驗33第三十三頁，共73頁。（3）硝酸鹽

鑒別一：取供試品溶液，加等量硫酸，混合冷卻沿壁管加FeSO4試液,使成兩液層，界面顯棕色

鑒別二：取供試品溶液，加硫酸和銅絲，加熱即生成紅棕色蒸汽。一般鑒別實驗34第三十四頁，共73頁。（三）專屬鑒別試驗證實某一種藥物的依據(jù)它根據(jù)每一種藥物化學結(jié)構(gòu)的差異及其引起的物理化學性質(zhì)不同,選用某些靈敏的定性反應,來鑒別藥物真?zhèn)?鑒別實驗項目35第三十五頁，共73頁。

一般鑒別試驗,區(qū)別不同類別的藥物。

專屬鑒別試驗，區(qū)別各個藥物單體，達到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康摹?6第三十六頁，共73頁。苯巴比妥司可巴比妥鈉巴比妥37第三十七頁，共73頁。中國藥典2005年版(二部)

用于鑒別的儀器分析法紫外-可見分光光度法546種紅外分光光度法593種高效液相色譜法484種薄層色譜法199種氣相色譜法3種38第三十八頁，共73頁?；瘜W鑒別法化學鑒別法必須反應迅速、現(xiàn)象明顯類型：(1)呈色反應鑒別法(2)沉淀生成反應鑒別法(3)熒光反應鑒別法(4)氣體生成鑒別法（5)使試劑褪色鑒別法39第三十九頁，共73頁。(1)呈色反應鑒別法①三氯化鐵呈色反應對乙酰氨基酚②異羥肟酸鐵反應氯貝丁酯

Cl化學鑒別法40第四十頁，共73頁。(1)呈色反應鑒別法③茚三酮呈色反應④重氮化-偶合呈色反應左旋多巴

對乙酰氨基酚化學鑒別法41第四十一頁，共73頁。(2)沉淀生成鑒別法①與重金屬離子沉淀反應②還原基團的銀鏡反應異煙肼化學鑒別法42第四十二頁，共73頁。

(3)熒光反應鑒別法①藥物本身在可見光下發(fā)射熒光②藥物溶液+硫酸③藥物溶液+溴④藥物溶液+間苯二酚化學鑒別法43第四十三頁，共73頁。(4)氣體生成反應鑒別法化學鑒別法①大多數(shù)伯胺（銨）類藥物、酰尿類以及某些酰胺類藥物,可經(jīng)強堿處理后加熱產(chǎn)生氨氣.②化學結(jié)構(gòu)含硫藥物,可經(jīng)強酸處理后加熱產(chǎn)生硫化氫氣體.硫鳥嘌呤

巴比妥類藥物44第四十四頁，共73頁。(4)氣體生成反應鑒別法化學鑒別法③含碘有機藥物經(jīng)直火加熱可生成紫色碘蒸氣.碘苷④含醋酸酯和乙酰胺醋酸酯類藥物經(jīng)硫酸水解后,加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味.對乙酰氨基酚45第四十五頁，共73頁。二、光譜鑒別法1.紫外光譜鑒別法(Ultravioletspectrophotometry)美法侖測定λmax，或同時測定λmin；測定一定濃度的供試液在λmax處的A規(guī)定λ和E規(guī)定λ和Aλ1/Aλ2經(jīng)化學處理后，測定其反應產(chǎn)物的吸收光譜特性。λ1λ246第四十六頁，共73頁。1紫外光譜鑒別法①測定λmax，或同時測定λmin乙胺嘧啶供試品在0.1mol/L鹽酸介質(zhì)中的紫外吸收在272nm處為峰,216nm處為谷.光譜鑒別法47第四十七頁，共73頁。②測定一定濃度的供試液在λmax處的A鹽酸布比卡因濃度0.4mg/ml溶液,在263nm、271nm光譜鑒別法48第四十八頁，共73頁。③規(guī)定λ和E

光譜鑒別法④經(jīng)化學處理后,測定其反應產(chǎn)物的吸收光譜特性.49第四十九頁，共73頁。⑤規(guī)定λ和Aλ1/Aλ2兩性霉素在362nm、381nm、405nm波長處有最大吸收.規(guī)定362nm與381nm處吸收度比值不大于0.6、381nm與405nm波長比值不大于0.9.光譜鑒別法50第五十頁，共73頁。在200~400nm波長范圍內(nèi)掃描兩溶液,要求在相同的波長處有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系數(shù)，或吸收比在規(guī)定的范圍內(nèi).與對照品比較,對比吸收光譜的一致性光譜鑒別法51第五十一頁，共73頁。

2紅外光譜法特點：專屬性強，應用廣（固體、液體、氣體）用途：原料藥同類藥（其他方法不易區(qū)分的）磺胺類、甾體激素類、半合成抗生素光譜鑒別法52第五十二頁，共73頁。

2紅外光譜法Ch.P（2005）采用標準圖譜對照法BP（2005）采用標準圖譜對照法USP（29）采用對照品法JP（15）采用規(guī)定條件下測定一定波數(shù)處的特征吸收峰試樣制備方法：壓片法、糊法、膜法、溶液法光譜鑒別法53第五十三頁，共73頁。光譜鑒別法特征區(qū)指紋區(qū)54第五十四頁，共73頁。

3近紅外光譜法測定物質(zhì)在近紅外譜區(qū)750－2500nm的特征光譜，用化學計量的方法提取信息進行定性、定量分析。特點：快速、準確、對樣品無破壞光譜鑒別法55第五十五頁，共73頁。光譜鑒別法3.近紅外光譜法(Near-Infraredspectrophotometry)56第五十六頁，共73頁。

4原子吸收法利用原子蒸汽可以吸收由該元素作為空心陰極燈發(fā)出的特征譜線，供試液溶液在特征譜線處的最大吸收和特征譜線強度減弱程度進行定性、定量分析。光譜鑒別法57第五十七頁，共73頁。

5核磁共振法測定供試品指定基團上質(zhì)子峰的化學位移δ和偶合常數(shù)進行藥物的鑒別光譜鑒別法58第五十八頁，共73頁。

結(jié)晶物質(zhì)的鑒別比較供試品已知物質(zhì)的X射線粉末衍射圖依據(jù)：各衍射線的衍射角（2θ）相對強度面間距X射線粉末衍射法59第五十九頁，共73頁。色譜譜鑒別法

適用于復雜環(huán)境下藥物有效成分及雜質(zhì)鑒別,具有分離、分析同時進行的特點.高效液相色譜法(HPLC)——供試品和對照品色譜峰保留時間一致.氣相色譜法(GC)——同HPLC要求薄層掃描法(TLC)——對照品比較法，供試品斑點與對照品的Rf值及斑點的顏色應一致.色譜法（HPLCGCTLCMS)60第六十頁，共73頁。1.薄層色譜法（TLC)61第六十一頁，共73頁。色譜譜鑒別法①同濃度對照品在同一塊薄層板比較②供試品與對照品等體積混合在同一塊薄層板比較③供試品與和其化學結(jié)構(gòu)相似對照品比較④將③下兩溶液等體積混合點樣、比較1.薄層色譜法（TLC)62第六十二頁，共73頁。色譜譜鑒別法高效液相色譜法(HPLC)——供試品和對照品色譜峰保留時間一致.內(nèi)標法時,藥物峰保留時間與內(nèi)標峰保留時間比值一致氣相色譜法(GC)——同HPLC要求2.高效液相色譜法（HPLC)63第六十三頁，共73頁。GC和HPLC鑒別法色譜鑒別法64第六十四頁，共73頁。色譜譜鑒別法

在高真空狀態(tài)下將被測物質(zhì)離子化,按質(zhì)子的質(zhì)荷比(m/z)大小分離進行定性和定量分析3.質(zhì)譜法（MS)65第六十五頁，共73頁。色譜鑒別法3.質(zhì)譜鑒別法(MassSpectrometry)66第六十六頁，共73頁。

生物鑒別法特點：利用微生物或?qū)嶒瀯游镞M行鑒別用途：抗生素生化藥物