抗血清的制備實(shí)驗(yàn)

抗血清的制備實(shí)驗(yàn)第1頁/共34頁選擇合適的抗原分離純化抗原選擇免疫動(dòng)物確定免疫方案和程序免疫動(dòng)物采血分離血清抗血清的純化與鑒定抗血清制備的基本流程第2頁/共34頁設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)1.設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)的理由（實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)。3.可行性（理論、人員、實(shí)驗(yàn)條件等）。4.創(chuàng)新性。5.本實(shí)驗(yàn)要解決的主要問題。6.預(yù)期目標(biāo)。每個(gè)組交一份實(shí)驗(yàn)方案（3-4個(gè)同學(xué)一組）第3頁/共34頁論文式實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、題目的選擇1、準(zhǔn)確、具體、簡潔、醒目，使人一目了然，引起重視2、作者與單位(班級(jí))，并注明所在班級(jí)和指導(dǎo)教師姓名。3、摘要和關(guān)鍵詞摘要是對(duì)論文主要內(nèi)容和觀點(diǎn)的概括第4頁/共34頁論文式實(shí)驗(yàn)報(bào)告二、關(guān)鍵詞又稱主題詞或索引詞，一篇論著(論文)一般選用2～5個(gè)關(guān)鍵詞第5頁/共34頁論文式實(shí)驗(yàn)報(bào)告三、引言(前言)引言是論文正文的開場白1、引起讀者對(duì)本論文的興趣。2、為讀者提供理解本論文所需的背景資料。第6頁/共34頁論文式實(shí)驗(yàn)報(bào)告四、材料與方法材料1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象2、實(shí)驗(yàn)材料3、實(shí)驗(yàn)分組4、實(shí)驗(yàn)過程和方法6、數(shù)據(jù)處理等內(nèi)容。第7頁/共34頁論文式實(shí)驗(yàn)報(bào)告五、結(jié)果：結(jié)果是實(shí)驗(yàn)研究成果的結(jié)晶第8頁/共34頁論文式實(shí)驗(yàn)報(bào)告六、討論1.11.21.3對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果解釋和評(píng)價(jià)第9頁/共34頁論文式實(shí)驗(yàn)報(bào)告七、參考文獻(xiàn)期刊：著者．文章名．刊物名稱，卷或年(期)：文章的起訖頁碼書籍：編著者．書名．版本．出版地：出版者，年份第10頁/共34頁一、顆粒性抗原的制備（2%~5%RBC的制備）（1）靜脈采血2-3ml，注入抗凝管中，輕輕混勻。（2）洗滌RBC將上述抗凝血移至10ml試管中，加入NS6-7ml，混勻，2500r/min離心5min,去上清。重復(fù)上述操作三次，最后一次去上清后，將紅細(xì)胞配制成2%~5%的RBC懸液。第11頁/共34頁2、取上述RBC懸液1ml免疫家兔。免疫部位：靜脈、皮內(nèi)、皮下等。每只兔子免疫8~10點(diǎn)，每點(diǎn)0.1ml左右。每隔2~4天免疫一次。第12頁/共34頁1班免疫時(shí)間表每隔2天免疫一次第13頁/共34頁2班免疫時(shí)間表每隔3天免疫一次第14頁/共34頁3班免疫時(shí)間表每隔4天免疫一次第15頁/共34頁3、心臟采血10ml，凝固后，分離血清（2000轉(zhuǎn)/min,5分鐘)。4、取兩支小試管并以A、B標(biāo)記之，將上述血清一半加入A管，另一半加入B管。將A管置于56℃水浴箱30分鐘（滅活補(bǔ)體）。第16頁/共34頁5、抗血清效價(jià)的鑒定。凝集試驗(yàn)和溶血反應(yīng)第17頁/共34頁

凝集反應(yīng)第18頁/共34頁實(shí)驗(yàn)原理指顆粒性抗原(RBC)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。第19頁/共34頁試管凝集試驗(yàn)過程1.取潔凈小試管8支，排列于試管架上，依次編號(hào)。2.向各管中加入生理鹽水200ul。第20頁/共34頁3.向第一支試管中加入A管血清200ul，充分混勻，吸出200ul放入第二管，混勻后取出200ul加入第三管中，如此類推直至第七管，混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清，為生理鹽水對(duì)照管。至此，第1~7管的血清稀釋度分別為：1：2，1：4，1：8……1：128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法，為免疫試驗(yàn)中常用的稀釋方法。第21頁/共34頁4.向每管加入200ul2%RBC懸液，此時(shí)每管的液體總量為400ul，血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻，置37℃30min。(取出試管1500r/s30秒)觀察結(jié)果。第22頁/共34頁試管凝集操作程序(倍比稀釋法)管號(hào)12345678對(duì)照生理鹽水200200200200200200200200血清200200200200200200200RBC200200200200200200200200終稀釋度1/41/81/161/321/641/1281/256--棄去單位：uL第23頁/共34頁[結(jié)果判斷]選擇適當(dāng)?shù)墓獍祵?duì)比背景，先不要振搖，觀察管底凝集物的范圍和上清液的濁度。然后輕輕搖動(dòng)試管，注意觀察凝集顆粒的大小、均勻度等。每一試管的觀察，都應(yīng)與對(duì)照管進(jìn)行比較。鹽水對(duì)照管誚無凝集現(xiàn)象，輕輕搖動(dòng)試管則RBC分散成均勻混濁；而凝集塊則沉于管底，輕搖時(shí)不易散開，凝集程度通常以“+”表示：第24頁/共34頁“4+”很強(qiáng)，全部RBC凝集，凝集塊全部沉于管底，液體澄清。“3+”強(qiáng)，RBC大部分凝集并沉于管底，液體稍混濁。“2+”中等強(qiáng)度，RBC大約一半凝集，液體較混濁?！?”弱，僅少量RBC凝集，液體明顯混濁?！?-”不凝集，液體混濁與對(duì)照管相同。只要待測血清管出現(xiàn)“2+”以上的凝集現(xiàn)象，即可判斷為反應(yīng)陽性；以出現(xiàn)“2+”凝集的最大稀釋度為待測血清的抗體效價(jià)。第25頁/共34頁

溶血試驗(yàn)第26頁/共34頁實(shí)驗(yàn)原理

溶血反應(yīng)是指補(bǔ)體參與的抗體致紅細(xì)胞的溶解反應(yīng).參與反應(yīng)的成分有紅細(xì)胞、抗紅細(xì)胞抗體，也稱溶血素、補(bǔ)體。第27頁/共34頁溶血反應(yīng)實(shí)驗(yàn)過程1.取潔凈小試管8支，排列于試管架上，依次編號(hào)。2.向各管中加入生理鹽水200ul。第28頁/共34頁3.向第一支試管中加入血清200ul，充分混勻，吸出200ul放入第二管，混勻后取出200ul加入第三管中，如此類推直至第七管，混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清，為生理鹽水對(duì)照管。至此，第1~7管的血清稀釋度分別為：1：2，1：4，1：8……1：128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法，為免疫試驗(yàn)中常用的稀釋方法。第29頁/共34頁4.向每管加入200ul2%RBC懸液，此時(shí)每管的液體總量為400ul，血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻，置37℃30min。觀察結(jié)果。第30頁/共34頁溶血反應(yīng)操作程序(倍比稀釋法)管號(hào)12345678對(duì)照生理鹽水200200200200200200200200血清200200200200200200200RBC200200200200200200200200終稀釋度1/41/81/161/321/641/1281/256--棄去單位：