動(dòng)物檢疫學(xué)-第二章動(dòng)物檢疫程序與方法課件

第二章

動(dòng)物檢疫程序與方法1第一節(jié)動(dòng)物檢疫方式與程序

一、動(dòng)物檢疫方式（一）現(xiàn)場(chǎng)檢疫

1、現(xiàn)場(chǎng)檢疫的概念是指動(dòng)物在交易、待宰、待運(yùn)或運(yùn)輸前后以及到達(dá)口岸時(shí)，在現(xiàn)場(chǎng)集中進(jìn)行的檢疫方式?，F(xiàn)場(chǎng)檢疫方式適用于內(nèi)檢和外檢的各種動(dòng)物檢疫，是一種常用而且必要的檢疫方式。22、現(xiàn)場(chǎng)檢疫的內(nèi)容（1）驗(yàn)證查物

驗(yàn)證：有無檢疫證明、是否合法有效查物：核對(duì)被檢動(dòng)物的種類、品種、數(shù)量等。33、某些情況下的現(xiàn)場(chǎng)臨診檢疫內(nèi)容（1）疫情調(diào)查（2）病理剖檢

（3）實(shí)驗(yàn)室檢查

（4）消毒和病死動(dòng)物處理

5（二）隔離檢疫

1、隔離檢疫的概念

隔離檢疫是指將動(dòng)物放在一定條件的隔離場(chǎng)或隔離圈（列車箱、船艙）進(jìn)行的檢疫方式。主要用于出入境檢疫，準(zhǔn)備出境動(dòng)物的產(chǎn)地檢疫，動(dòng)物在運(yùn)輸前、后及過程中發(fā)現(xiàn)有或可疑有傳染病時(shí)的運(yùn)輸檢疫，種畜禽調(diào)運(yùn)前后的檢疫，建立健康畜群時(shí)的凈化檢疫。62、隔離檢疫的條件（1）相對(duì)偏僻

（2）有隔離設(shè)施

（3）有消毒和尸體處理設(shè)施

（4）其他條件

7（三）凈化檢疫

1、概念亦稱疫區(qū)檢疫，是指在國內(nèi)某地發(fā)生規(guī)定的檢疫對(duì)象流行時(shí)進(jìn)行的檢疫。2、意義

3、凈化檢疫的要求迅速確診、追查疫源、摸清分布、盡快控制。

9二、動(dòng)物檢疫程序

（一）國內(nèi)動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品檢疫的主要程序1、申報(bào)和出檢動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品在出售或調(diào)出離開產(chǎn)地前，貨主須向所在地動(dòng)物檢疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)提前報(bào)檢。動(dòng)物產(chǎn)品、供屠宰或育肥的動(dòng)物提前3天報(bào)檢；種用、乳用或役用動(dòng)物提前15天報(bào)檢。因生產(chǎn)特殊需要出售、調(diào)運(yùn)和攜帶動(dòng)物或動(dòng)物產(chǎn)品的隨報(bào)隨檢。102、現(xiàn)場(chǎng)檢疫動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)管機(jī)構(gòu)接到檢疫申報(bào)后，應(yīng)當(dāng)及時(shí)指派官方獸醫(yī)對(duì)動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品實(shí)施現(xiàn)場(chǎng)檢疫?！艾F(xiàn)場(chǎng)”包括動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)、集中地、屠宰場(chǎng)、動(dòng)物產(chǎn)品加工基地等。3、合格者出具檢疫證明，不合格者進(jìn)行銷毀或無害化處理。11第二節(jié)動(dòng)物檢疫的基本方法

常用的檢疫方法有流行病學(xué)調(diào)查、臨診檢查、病理學(xué)檢查、病原學(xué)檢查和免疫學(xué)檢查法等方法。這些方法并非在檢查每一種疫病時(shí)、每次診斷都要用上，而是根據(jù)不同的情況，應(yīng)用其中幾種方法。13

一、流行病學(xué)調(diào)查

1、流行病學(xué)的概念流行病學(xué)是研究動(dòng)物群體某種疫病的發(fā)生、發(fā)展以及消滅規(guī)律的科學(xué)，即研究動(dòng)物疫病流行過程的規(guī)律。142、流行病學(xué)調(diào)查分析的目的流行病學(xué)調(diào)查是要查明動(dòng)物疫病發(fā)生的原因、傳播條件、流行規(guī)律，并擬出有效的防制措施。流行病學(xué)分析是應(yīng)用流行病學(xué)調(diào)查材料，進(jìn)行加工整理，綜合分析，得出流行過程的客觀規(guī)律，并對(duì)預(yù)防撲滅措施做出正確的評(píng)價(jià)。流行病學(xué)分析從調(diào)查材料中找出規(guī)律，用以指導(dǎo)防疫實(shí)踐。15流行病學(xué)調(diào)查的步驟與內(nèi)容（1）擬訂流行病學(xué)調(diào)查表（2）實(shí)施調(diào)查（3）整理分析（4）得出結(jié)果（5）結(jié)論報(bào)告175流行病學(xué)調(diào)查分析中常用的頻率指標(biāo)（1）發(fā)病率是表示在動(dòng)物中一定時(shí)期內(nèi)某病的新病例發(fā)生的頻率。發(fā)病率能較完全的反映出疫病的流行情況，但還不能說明整個(gè)流行過程，因?yàn)槌Ｓ性S多動(dòng)物成隱性感染，而同時(shí)又是傳染源。

18(2）患病率（流行率、病例率、現(xiàn)患率）是指在某一指定時(shí)間內(nèi)動(dòng)物中存在某病病例數(shù)的比率。

19（4）死亡率

是指某病死亡數(shù)占某種動(dòng)物總頭數(shù)的百分比。它表示該病在動(dòng)物群中造成死亡的頻率，而不能說明病情發(fā)展特性，僅在發(fā)生死亡數(shù)很多的急性傳染病中，才能反映出流行的動(dòng)態(tài)。

21（5）致死率（病死率）是指某病死亡的動(dòng)物頭數(shù)占該病患病動(dòng)物總頭數(shù)的百分比。它能表示某病臨床上的嚴(yán)重程度，比死亡率更為精確地反映出疫病的流行過程。

22二、臨診檢疫技術(shù)

臨診檢查是診斷動(dòng)物疫病的最基本的方法，是利用人的感官或借助一些簡(jiǎn)單的器械，如體溫計(jì)、聽診器等直接對(duì)動(dòng)物外貌、體態(tài)、排泄物、體溫、脈搏、呼吸等進(jìn)行檢查。動(dòng)物臨診檢查應(yīng)用于產(chǎn)地、運(yùn)輸、屠宰等流通環(huán)節(jié)的動(dòng)物檢疫中，是動(dòng)物檢疫中最常用的方法。231群體檢查群體劃分：同一來源、同一批次、或同一圈舍的動(dòng)物化為一群。禽、兔、犬還可以按籠、舍劃分。運(yùn)輸檢驗(yàn)時(shí),可以按車、船、倉等批次進(jìn)行。

25群體檢查方法檢查方法靜態(tài)檢查動(dòng)態(tài)檢查飲食狀態(tài)檢查26群體檢查方法（3）飲食狀態(tài)檢查：檢查進(jìn)食、吞咽和反芻時(shí)的反應(yīng)狀態(tài)。注意有無少食、少飲、貪飲、異常采食、吞咽困難、嘔吐等情況。

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2、個(gè)體檢疫個(gè)體檢疫是指對(duì)群體檢疫中檢出的可疑病態(tài)動(dòng)物進(jìn)行系統(tǒng)的個(gè)體臨診檢查。其目的在于初步鑒定動(dòng)物是否患病、是否為檢疫對(duì)象，然后根據(jù)需要進(jìn)行必要的實(shí)驗(yàn)室檢疫。一般對(duì)在群體檢疫中無病的動(dòng)物也要按5%-20%抽樣做個(gè)體檢疫。若個(gè)體檢疫發(fā)現(xiàn)患病動(dòng)物，應(yīng)再抽檢10%；必要時(shí)，應(yīng)全部進(jìn)行個(gè)體復(fù)檢。30個(gè)體檢查方法方法分類看聽摸檢31個(gè)體檢查方法1.看：觀測(cè)外部表現(xiàn)，精神、行為、姿態(tài)、被毛；皮膚、口蹄、趾間有無腫脹、水皰、膿泡及潰瘍等；可視粘膜是否蒼白、潮紅、黃染，有無分泌物或炎性分泌物等。2.聽：直接聽動(dòng)物的叫、咳；聽診器聽心、肺、和胃腸蠕動(dòng)聲音。323.摸：脈搏，耳、皮溫度，淋巴結(jié)大小、形狀、硬度和有無腫脹，皮膚有無結(jié)節(jié)和出血點(diǎn)。4.檢：檢查“三數(shù)”，即體溫、脈搏、呼吸數(shù)?！叭龜?shù)”是動(dòng)物生命活動(dòng)的重要生理指數(shù)，其變化可提示許多疫病。要在充分休息和靜態(tài)下檢查。

33幾種常見動(dòng)物指標(biāo)表畜禽

體溫（℃）呼吸（次/分）

脈搏（次/分）豬38.0-40.012-2060-80牛37.5-39.510-3040-80羊38.0-40.012-2070-80雞40.0-42.015-30120-140鴨41.0-43.016-28140-200鵝40.0-41.012-20120-16034（一）視診利用視覺或利用簡(jiǎn)單器械對(duì)患病動(dòng)物的狀態(tài)和病變進(jìn)行觀察的方法。1、肉眼視診視診時(shí)一般先不要靠近動(dòng)物，也不宜進(jìn)行保定，應(yīng)盡量使動(dòng)物取自然的姿態(tài)。檢查者應(yīng)先站在離動(dòng)物適當(dāng)距離處，首先觀察其全貌，然后由前往后、從左到右、邊走邊看，觀察動(dòng)物的頭、頸、胸、腹、脊柱、四肢；當(dāng)至正后方時(shí)，應(yīng)注意尾、肛門及會(huì)陰部，并對(duì)照觀察兩側(cè)胸、腹部是否有異常；最后再接近動(dòng)物，進(jìn)行細(xì)部檢查。352、器械視診借助器械觀察動(dòng)物自然孔腔內(nèi)的病理變化，如使用手電筒、鼻鏡、直腸鏡等各種照明、反射和內(nèi)腔視診器械。36檢查內(nèi)容A、精神狀態(tài)的檢查健康動(dòng)物兩眼有神，反應(yīng)敏捷，動(dòng)作靈活，行為正常；若有過度興奮或抑制，則表現(xiàn)中樞神經(jīng)機(jī)能紊亂。精神興奮的動(dòng)物，表現(xiàn)驚恐不安，狂躁不馴，甚至攻擊人畜，多見于侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疫病（如狂犬病、李氏桿菌病等）。37精神抑制的動(dòng)物，輕則沉郁，呆立不動(dòng)，反應(yīng)遲鈍；重則昏睡，只對(duì)強(qiáng)烈刺激才產(chǎn)生反應(yīng)；嚴(yán)重時(shí)昏迷，倒地躺臥，意識(shí)喪失，對(duì)強(qiáng)烈刺激也無反應(yīng)。見于各種熱性病或侵害神經(jīng)系統(tǒng)的疾病等。38B、營養(yǎng)狀況的檢查營養(yǎng)良好的動(dòng)物，肌肉豐滿，皮下脂肪豐富，輪廓豐圓，骨骼棱角不顯露，被毛有光澤，皮膚富有彈性；營養(yǎng)不良的動(dòng)物，則表現(xiàn)為消瘦，骨骼棱角顯露，被毛粗亂無光澤，皮膚缺乏彈性；多見于慢性消耗性疫?。ㄈ缃Y(jié)核病、肝片吸蟲病等）。39C、姿態(tài)與步樣的檢查健康動(dòng)物姿勢(shì)自然，動(dòng)作協(xié)調(diào)而靈活，步態(tài)穩(wěn)健。病態(tài)狀態(tài)下，有的動(dòng)物站立異常，如破傷風(fēng)患畜形似“木馬狀”；神經(jīng)型馬立克氏病病雞兩腿呈“劈叉”式姿勢(shì)；有的動(dòng)物強(qiáng)迫性躺臥，不能站立，如豬傳染性腦脊髓炎；40有的動(dòng)物站立不穩(wěn)，如雞新城疫病雞頭頸扭轉(zhuǎn)，站立不穩(wěn)甚至伏地旋轉(zhuǎn)；有的動(dòng)物盲目轉(zhuǎn)圈，如李氏桿菌??；有的則步態(tài)異常，左搖右擺，多是腦部受損所致；跛行，則由神經(jīng)系統(tǒng)受損或四肢病痛所致。4142D、被毛和皮膚的檢查健康動(dòng)物的被毛（羽毛）柔順而有光澤、不易脫落，皮膚顏色正常，無腫脹、潰爛、出血等?；疾?dòng)物的被毛和皮膚常發(fā)生不同的變化而提示某些疫病，在慢性消耗性疫?。ㄈ缃Y(jié)核病）或內(nèi)寄生蟲時(shí)，動(dòng)物往往被毛粗亂無光澤，脆而易斷、易脫毛；43患疥螨和濕疹的動(dòng)物，患部脫毛，伴有皮膚增厚、變硬、擦傷和啃咬傷；豬瘟病豬在四肢、腹部及全身各部皮膚有指壓不褪色的小點(diǎn)狀出血，而豬丹毒病豬則呈現(xiàn)指壓褪色的菱形或多角形紅斑。正常雞的冠、髯紅潤；若發(fā)白，則為貧血的表現(xiàn)；呈藍(lán)紫色，則為缺氧的表現(xiàn)（如雞新城疫病雞冠髯黑紫）。44E、反芻和呼吸的檢查主要檢查呼吸運(yùn)動(dòng)（包括呼吸頻率、類型、節(jié)律及呼吸強(qiáng)度），看有無呼吸數(shù)增多或減少、有無胸式呼吸或腹式呼吸、有無病理性呼吸節(jié)律及呼吸困難等。同時(shí)，檢查反芻動(dòng)物的反芻情況。

45F、可視黏膜的檢查包括眼結(jié)膜、口腔黏膜、鼻黏膜和陰道黏膜，黏膜具有豐富的微血管，根據(jù)其顏色的變化，可推斷血液循環(huán)狀態(tài)和血液成分的變化。臨診時(shí)主要檢查眼結(jié)膜。正常情況下，馬的黏膜顏色呈淡紅色；牛的黏膜顏色呈淡粉紅色（水牛的較深）；豬、羊的黏膜顏色呈粉紅色；犬的黏膜為淡紅色。46黏膜蒼白見于各型貧血和慢性消耗性疫病，如馬傳染性貧血；黏膜潮紅，表示毛細(xì)血管充血，除局部炎癥外，多為全身性血液循環(huán)障礙的表現(xiàn)；彌漫性潮紅見于各種熱性疫病和廣泛性炎癥；樹枝狀充血見于心機(jī)能不全的疫病等；黏膜發(fā)紺見于呼吸系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)障礙；黃染是血液中膽紅素含量增高所致，見于肝病、膽道阻塞及溶血性疾?。火つこ鲅?，見于有出血性素質(zhì)的疫病，如馬傳染性貧血、梨形蟲病等。47在檢查眼結(jié)膜的同時(shí)，檢查天然孔及分泌物等，眼角有大量分泌物是眼結(jié)膜分泌亢進(jìn)的表現(xiàn)，見于結(jié)膜炎、感冒、鉤端螺旋體病、牛惡性卡他熱等?？谇火つび兴捇驙€斑，可提示口蹄疫或豬傳染性水皰病；豬鼻盤干燥或干裂，應(yīng)注意有無熱性疫病；馬鼻黏膜的冰花樣瘢痕，則是馬鼻疽的特征病變。48G、排泄動(dòng)作及排泄物的檢查排泄情況能提示消化系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)的情況。排泄動(dòng)作異常包括排糞、排尿帶痛，努責(zé)，里急后重，失禁等。排泄物性狀異常包括糞便干硬（便秘）、腹瀉、顏色氣味異常等。49腹瀉見于侵害胃腸道的疫?。ㄈ缱胸i副傷寒），便秘見于各種熱性疫?。ㄈ缲i瘟）、慢性胃腸卡他等，里急后重是直腸炎的特征。糞尿的顏色性狀也能提示某些疫病，如仔豬白痢排白色糊狀稀糞，仔豬紅痢排紅色黏性稀便。50（二）觸診利用手觸及動(dòng)物的被檢組織和器官，借以發(fā)現(xiàn)其異常變化的方法。觸診按檢查的部位可分為：1、體表觸診通過觸診，檢查患病動(dòng)物體表狀態(tài)。如體表的溫、濕度，皮膚與皮下組織的厚度、彈性、硬度；淺在淋巴結(jié)或局部病變的位置、大小、形狀及硬度和疼痛反應(yīng)；骨骼、肌肉、關(guān)節(jié)的異常變化；表在動(dòng)脈的頻率、性狀及節(jié)律；心搏動(dòng)的強(qiáng)度、頻率及節(jié)律。512、深部觸診通過觸診，檢查動(dòng)物深部某些組織，感知其病理變化。本法主要用于檢查內(nèi)部器官。52（三）叩診叩診是對(duì)動(dòng)物體表的某一部位進(jìn)行叩擊，借其產(chǎn)生振動(dòng)音響的特征，間接地判定內(nèi)部器官病變的檢查方法。叩診主要用于檢查含氣器官的含氣量及病變的物理狀態(tài)，以及對(duì)心臟、肝臟、脾臟等實(shí)質(zhì)器官進(jìn)行叩診。由于器官的含氣量、硬度、彈性及叩擊力量的強(qiáng)弱等不同，其音響亦異。53（四）聽診利用耳或聽診器聽取內(nèi)臟器官活動(dòng)所發(fā)出的音響，以此判斷內(nèi)臟疾病的方法。用耳緊貼于動(dòng)物體表相應(yīng)部位的直接聽診法，現(xiàn)已很少應(yīng)用。常采用的方法是利用聽診器來聽取心音、肺呼吸音、腸蠕動(dòng)音等間接聽診法，檢查心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)的異?；蚣膊　?4（五）嗅診是利用嗅覺器官嗅聞排泄物、分泌物、呼出氣體及口腔的氣味，從而判斷疾病性質(zhì)的一種檢查方法。如犬瘟熱病獸發(fā)生漿液性和化膿性結(jié)膜炎、鼻炎，均具有特殊的惡臭味；水貂肺壞疽呼出氣體可嗅到一種臭味。奶牛酮?。籂€蘋果味有機(jī)磷農(nóng)藥中毒：呼出大蒜樣氣味55（六）體溫檢查體溫異常是確定疫病的性質(zhì)、程度和判斷預(yù)后的重要根據(jù)，是臨診檢疫必不可少的一項(xiàng)內(nèi)容。哺乳動(dòng)物測(cè)溫部位主要是直腸，鳥類也可測(cè)翼下溫度。由于大失血或在瀕死期，體溫常會(huì)降低。某些傳染病和急性炎癥的初期，癥狀未顯現(xiàn)之前，常有體溫升高的趨勢(shì)，測(cè)溫是早期檢查，發(fā)現(xiàn)傳染病的重要手段。56臨床上根據(jù)發(fā)熱的程度，可分為：體溫升高1℃，稱為微熱，見于鼻卡他、口腔炎、胃卡他等局限性炎癥和輕微的病程時(shí)。體溫升高2℃，稱為中熱，常見于消化道及呼吸道一般性炎癥和某些亞急性、慢性傳染病，如胃腸炎、支氣管炎、咽喉炎、慢性馬鼻疽、牛結(jié)核、布氏桿菌病等。57體溫升高3℃，稱為高熱。在豬瘟、牛瘟、豬肺疫、牛肺疫、流行性感冒、馬腺疫、大葉性肺炎、胸膜炎、腹膜炎等急性傳染病和廣泛性炎癥時(shí)可見。體溫升高3℃以上，稱為最高熱。提示某些嚴(yán)重的急性傳染病，如急性馬傳染性貧血、傳染性胸膜肺炎、豬丹毒、炭疽、膿毒敗血癥以及日射病與熱射病等。58在發(fā)病的過程中，根據(jù)其熱型特點(diǎn)，可分為：暫時(shí)熱：溫度比正常升高1∽1.5℃，并保持12h或1∽2d?；魺幔后w溫迅速或逐漸升高1∽2℃或更高，然后保持此溫度數(shù)日至7d或更長(zhǎng)，以后急速地或緩慢地下降。本熱型1d內(nèi)溫差不超過1℃，可見于急性馬傳染性貧血、傳染性胸膜肺炎、牛肺疫、胸膜肺炎、流行性感冒、大葉性肺炎、豬瘟、豬丹毒等。59間歇熱：有熱期或無熱期規(guī)則的交替出現(xiàn)。典型的間歇熱，可見于馬傳染性貧血、血孢子蟲病。弛張熱：每天早晚溫差1∽2℃，持續(xù)期從數(shù)天至數(shù)十天，可見于許多化膿性疾病及敗血癥、小葉性肺炎以及非典型經(jīng)過的某些傳染病（如腺疫等）。60（七）脈搏測(cè)定脈搏的測(cè)定方法：測(cè)定每一分鐘脈搏的次數(shù)，以次/分鐘表示。馬屬動(dòng)物，可檢頜外動(dòng)脈。牛，通常檢查尾動(dòng)脈。豬、羊、犬和貓，可在后肢股內(nèi)側(cè)的股動(dòng)脈處檢查。

61（八）呼吸數(shù)測(cè)定宜在安靜狀態(tài)下測(cè)定。呼吸數(shù)測(cè)定的方法：測(cè)定動(dòng)物每分鐘的呼吸次數(shù)，以次/分鐘表示。一般可根據(jù)胸腹部的起伏動(dòng)作而測(cè)定，檢查者立于動(dòng)物的側(cè)方，注意觀察其腹肋部的起伏，一起一伏為一次呼吸。雞的呼吸數(shù)可觀察肛門下部的羽毛起伏動(dòng)作來測(cè)定。623、各種動(dòng)物檢疫的臨診檢查要點(diǎn)豬的臨診檢查要點(diǎn)

牛的臨診檢查要點(diǎn)

羊的臨診檢查要點(diǎn)

禽的臨診檢查要點(diǎn)

其他動(dòng)物的臨診檢查要點(diǎn)

63（1）豬的臨床檢疫要點(diǎn)（1）

主要是“三觀一檢”即：靜態(tài)觀察、動(dòng)態(tài)觀察、飲食觀察和剔除病豬個(gè)體的檢驗(yàn)。

64豬的臨床檢疫要點(diǎn)（2）群體檢查動(dòng)（動(dòng)態(tài)檢查）：自然活動(dòng)狀態(tài)，如起立、運(yùn)動(dòng)、排泄、精神等有無異常。靜（靜態(tài)檢查）：平靜時(shí)觀察站立、下臥、口鼻、呼吸等有無異常。食（采食狀態(tài)檢查）：觀察食欲、食態(tài)、食量等有無異常。65豬的臨床檢疫要點(diǎn)（3）系統(tǒng)檢查：有針對(duì)性地檢查幾種疾病，如豬丹毒、豬瘟、豬肺疫、支原體肺炎、副傷寒、流感、豬炭疽、豬傳染性水泡病、豬口蹄疫、豬萎縮性鼻炎、豬旋毛蟲病、豬囊尾蚴病等。病豬都有一致表現(xiàn)：倦怠、疲勞、嗜睡、怕冷、背毛混亂、皮下有出血點(diǎn)、眼結(jié)膜發(fā)炎、呼吸急促、排糞硬結(jié)或下痢等。66病健豬的區(qū)分（1）健康豬病

豬

精神狀態(tài)活潑沉郁、萎頓。休息狀態(tài)站立平穩(wěn)，來回走動(dòng)，拱地尋食，不斷發(fā)出“吭吭”聲，神態(tài)自若，見有人來，凝神而視，睡時(shí)多側(cè)臥，四肢舒展。獨(dú)立一隅，吻部觸地，全身顫抖，獨(dú)臥一處，體溫高時(shí)喜臥陰濕處或食槽內(nèi)，睡時(shí)多蜷縮或伏臥，或?qū)㈩^枕在別的豬的身上，有的呈犬坐姿勢(shì)67病健豬的區(qū)分（2）運(yùn)動(dòng)行走平穩(wěn)，步態(tài)矯健，兩眼前視，搖頭擺尾，反應(yīng)靈敏行動(dòng)遲緩，步態(tài)不穩(wěn)或不協(xié)調(diào)，遇到驚嚇反應(yīng)遲鈍叫聲宏亮尖細(xì)，嘶啞，咳嗽68病健豬的區(qū)分（3）呼吸平穩(wěn)自如，節(jié)奏均勻急促，喘息，呈腹式呼吸，身體震動(dòng)，有時(shí)張口，鼻翼扇動(dòng)。食欲吃食時(shí)爭(zhēng)先恐后，嘴直入槽底，大口吞食，鬢毛震動(dòng)，“喳喳”作響。立于槽外，或啜飲稀食，吃一、二口即自動(dòng)退槽，吃完后肷部塌陷。69病健豬的區(qū)分（4）皮膚柔軟有彈性，清潔光滑。粗糙，被毛臟亂眼明亮有神發(fā)紅，或有眼屎。鼻鼻盤濕潤，鼻孔清潔。鼻盤干燥，流涕或血，口流涎。70病健豬的區(qū)分（5）排泄物糞便粗圓，有光澤，尿量和色澤正常。糞便干或稀，有血或粘液，尿少而色粽黃。體溫38-40℃。38℃以下或40℃以上。71（2）牛的臨床檢疫要點(diǎn)（1）同樣分為：靜態(tài)、動(dòng)態(tài)、飲食和系統(tǒng)檢查四個(gè)方面。72牛的臨床檢疫要點(diǎn)（2）

靜態(tài)檢查健康牛

健康牛常呈膝臥姿勢(shì)，四肢彎曲，站立平穩(wěn)，鼻鏡濕潤，嘴角周圍干燥，被毛光亮，反芻正常有力，呼吸平穩(wěn)，排便正常。

病牛

病牛常橫臥，四肢伸展，頭頸低伸，弓背彎腰，眼睛有分泌物，鼻鏡干燥，被毛粗亂，反應(yīng)遲緩，呼吸困難、呻吟，糞便稀或干，或帶有血樣，肛門不潔凈。

73牛的臨床檢疫要點(diǎn)（3）

動(dòng)態(tài)：精神外貌和姿態(tài)、步樣

健康牛：精力充沛，走路平穩(wěn)，四肢有力，耳尾靈活，走路不掉隊(duì)。

病牛：精神沉郁或興奮，兩眼無神，曲背弓腰，四肢無力，耳尾不動(dòng)。

74牛的臨床檢疫要點(diǎn)（4）

飲食檢查爭(zhēng)搶飼料，咀嚼有力，采食時(shí)間長(zhǎng)。

病牛厭食或不吃，采食緩慢，采食時(shí)間短，不到大群中飲水。75牛的臨床檢疫要點(diǎn)（5）

系統(tǒng)檢查主要是詳細(xì)檢查可視粘膜、分泌物、體溫和脈搏變化。體溫是牛檢疫的重要項(xiàng)目，每頭牛都要測(cè)溫，若體溫升高，則隔離觀察一定時(shí)期。主要以口蹄疫、炭疽、牛肺疫、布魯氏菌病、結(jié)核病、副結(jié)核病、藍(lán)舌病、地方性白血病、牛傳染性鼻氣管炎、牛病毒性腹瀉-黏膜病、牛肝片吸蟲病、錐蟲病、泰勒蟲病為檢疫對(duì)象。

76（3）羊的臨床檢疫要點(diǎn)（1）靜態(tài)：吃飽后群體合臥，反芻，呼吸平穩(wěn)，被毛整潔，口和肛門周圍潔凈，反應(yīng)敏捷。病羊常獨(dú)臥一隅，鼻鏡干燥，呼吸緊迫、困難、磨牙、流淚等，精神不振。

77羊的臨床檢疫要點(diǎn)（2）動(dòng)態(tài)：精神活潑，走路平穩(wěn)，不掉隊(duì)。病羊沉郁或不安，步態(tài)不穩(wěn)，行走搖擺或跛行，前肢跪地或麻痹，離群掉隊(duì)。

78羊的臨床檢疫要點(diǎn)（3）飲食：飼喂、飲水互相爭(zhēng)搶，放牧動(dòng)作輕快，邊走邊吃。病羊食欲不振或停食，放牧吃草時(shí)跟在后面，不飲水更不爆食。

79羊的臨床檢疫要點(diǎn)（4）系統(tǒng)檢查：可視粘膜、淋巴結(jié)、分泌物、排泄物、皮膚、被毛、體溫等。主要以口蹄疫、炭疽、藍(lán)舌病、羊痘、羊螨病為檢疫對(duì)象。

80（4）禽的臨床檢疫要點(diǎn)（1）健康雞

：精神狀態(tài)活潑，行動(dòng)平穩(wěn)矯健，行走時(shí)探頭縮頸，兩翅緊收。毛光順緊貼，頭部整潔，眼明亮，冠和肉髯紅而有彈性。食后嗉囊飽滿。體溫40-42℃。81禽的臨床檢疫要點(diǎn)（2）病雞：精神沉郁、萎頓。行動(dòng)遲緩，步態(tài)僵硬踉蹌，彎頸拱背，翅尾下垂。羽毛粗亂蓬松，眼瞼腫脹，鼻流涕，口流涎，冠和肉髯腫大發(fā)紫或蒼白，口腔內(nèi)有黃色假膜或有酸臭味。

82禽的臨床檢疫要點(diǎn)（3）個(gè)體檢查：重點(diǎn)是精神狀態(tài)、運(yùn)動(dòng)和姿勢(shì)、表被狀態(tài)（羽毛、冠髯、鼻、眼等）、嗉囊、飲欲、食欲、糞便等。一般不做體溫檢測(cè)。以雞新城疫、雛白痢、雞馬立克氏病、雞傳染性法氏囊病、禽霍亂、鴨瘟、小鵝瘟、雞球蟲病為主要檢疫對(duì)象。

83（5）其他動(dòng)物的臨診檢查要點(diǎn)①馬的臨診檢查要點(diǎn)A、靜態(tài)觀察。健馬：昂頭站立，機(jī)警敏捷，稍有音響，兩耳豎起，兩眼凝視；多站少臥，若臥地則屈肢，平靜似睡；被毛整潔光亮，皮膚無腫脹，鼻眼干凈，外陰無異常；糞便球形，中等濕度。病馬：睡臥不安，閉眼橫臥，起臥困難；站立不穩(wěn)，低頭耷耳，兩眼無神，姿態(tài)僵硬，精神委頓，對(duì)外界反應(yīng)遲鈍或無反應(yīng)；被毛粗亂無光，皮屑積聚，皮膚有局部腫脹，眼鼻流出黏性或膿性分泌物，外陰污穢；糞便干硬或拉稀，混有惡臭膿血；呼吸喘氣，噯氣。84B、動(dòng)態(tài)觀察健馬：行動(dòng)活潑，步伐輕快有力，昂首蹶尾，向群前擠；運(yùn)動(dòng)后，呼吸變化不大或很快恢復(fù)正常。病馬：行動(dòng)遲緩，四肢無力，步伐沉重，有時(shí)踉蹌，常落在群后面；運(yùn)動(dòng)后，呼吸明顯增快，甚至呼吸困難。85C、飲食觀察。健馬：放牧?xí)r爭(zhēng)向草場(chǎng)，舍飼給草料時(shí)兩眼注意力集中在飼養(yǎng)員身上，有時(shí)發(fā)出“咴咴”叫聲，食欲旺盛，咀嚼音響，飲水有吮力。病馬：對(duì)草料不理睬，對(duì)飼養(yǎng)員無反應(yīng)，或吃幾口即停食，或絕食，咀嚼、咽下困難，飲水不明顯。

86D、個(gè)體臨診檢查要點(diǎn)主要內(nèi)容是檢測(cè)體溫、精神狀態(tài)、姿態(tài)步樣、可視黏膜、分泌物性狀、被毛、體表淋巴結(jié)、排泄物、呼吸等。以炭疽、鼻疽、馬傳染性貧血、馬鼻腔肺炎為主要檢疫對(duì)象。

87②兔的臨診檢查要點(diǎn)兔的臨診檢疫以精神狀態(tài)、營養(yǎng)、可視黏膜、被毛、呼吸、食欲、四肢、耳、眼、鼻、肛門、糞便等為主要檢查內(nèi)容。88健兔：神態(tài)活潑，行動(dòng)敏捷；兩耳直立，兩眼圓瞪明亮，眼瞼濕潤，眼角干凈；被毛濃密，勻整清潔，潤澤有光；肛門干凈，糞球光滑；背肉豐厚。病兔：精神委頓，兩眼無神，被毛粗亂，偏頭垂耳；興奮不安，急躁亂跳；四肢麻痹，伏臥不起；行動(dòng)踉蹌，反應(yīng)遲鈍；眼有分泌物，呼吸困難，糞便稀軟，體弱消瘦，體溫升高。89③犬的臨診檢查要點(diǎn)健犬：站立時(shí)，顯得自然、挺立；撲食物或玩具時(shí)，顯得很輕靈；被毛完整有光澤，摸起來有潤滑和舒服感；眼睛明亮、有神，對(duì)外界事物反應(yīng)靈敏，眼睛滴溜溜轉(zhuǎn)，很有靈氣；無眼屎，不流淚；唇部為粉紅色，鼻子摸起來潮濕、潤滑，有發(fā)涼的感覺。90病犬：被毛粗亂無光澤，有的被毛明顯脫落；眼無神，目光呆滯，對(duì)外界事物反應(yīng)遲鈍或無反應(yīng)，或眼睛半睜半閉；眼睛周圍很臟，畏光、流淚；可視黏膜潮紅或發(fā)紺或黃染或蒼白；鼻子摸起來干燥，有溫?zé)岣?，精神沉郁，或狂?1④魚的臨診檢查要點(diǎn)檢查的重點(diǎn)是體表、鰓和內(nèi)臟。健魚：群居、群游性好，反應(yīng)靈敏，浮沉自如；發(fā)育勻稱，食欲正常；體表有該種魚的自然色澤，美觀發(fā)亮，富有彈性，不留指凹。體表黏液少而分布均勻，五色透明；鰓蓋清潔緊閉，質(zhì)地堅(jiān)硬，鰓內(nèi)潔凈，鰓板鮮紅并附有少量黏液；肛門圓形凹陷，白色或淡紅色，不突出，不破裂；鱗片有光澤，紋理清晰，被覆少量透明液，不易脫落；眼睛飽滿稍突出眼眶，眼球原位不易移動(dòng)，顏色正常不發(fā)紅，角膜透明富有彈性。92病魚：離群獨(dú)游或溜邊，急躁不安、跳出水面或打轉(zhuǎn)，浮沉困難；食欲不振，發(fā)育異常；失去健魚的正常體表特征，體色發(fā)黑或出血變紅；鰓蓋張開，鰓片發(fā)紺或變白，鰓絲末端腫大或腐爛，黏液增多并有不潔感。有時(shí)，可在體表或鰓內(nèi)等處發(fā)現(xiàn)寄生蟲。93三、動(dòng)物尸體病理解剖檢疫

外部檢查解剖學(xué)檢查內(nèi)部檢查方法分類

組織學(xué)檢查94（一）病理解剖學(xué)檢查法

1、外部檢查注意其營養(yǎng)狀況，皮毛、可視黏膜及天然孔情況。根據(jù)肌肉發(fā)育和皮下脂肪確定是否營養(yǎng)不良，檢查可視黏膜有無貧血、淤血、出血、黃疸、潰瘍等變化，檢查皮膚、蹄部有無外傷、水皰、水腫、出血、充血等變化。注意尸僵變化，死于破傷風(fēng)的動(dòng)物尸僵發(fā)生快而顯著，死于敗血癥的動(dòng)物尸僵不明顯。952、體內(nèi)檢查內(nèi)部檢查包括：剝皮和皮下組織各體腔剖開視檢內(nèi)臟的采出及檢查等。

96⑴剝皮及剝皮后的檢查具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值或保留意義的皮張，可按動(dòng)物種類不同，選用不同的剝皮方法進(jìn)行剝皮。無價(jià)值的皮張可不剝皮。在剝皮過程中，應(yīng)注意皮下有無水腫、出血、血液凝固情況，以及體表淋巴、皮下脂肪、肌肉、骨和關(guān)節(jié)情況。97傳染病時(shí)體表淋巴經(jīng)常腫大、充血、出血、皮下常有出血點(diǎn)、出血斑、血液凝固不良等變化。敗血癥可見肌肉上有瘀斑和瘀點(diǎn)。因傳染病侵襲，關(guān)節(jié)常出現(xiàn)各種炎癥和不同程度的腫脹。98（2）體腔的剖開打開胸、腹腔后，應(yīng)注意觀察腔內(nèi)有無氣體排出和氣味；腔內(nèi)體液的多少、顏色、透明度；有無漿液性、粘液性、化膿性、纖維素性、血性滲出物、血液和血塊等；漿膜面有無出血點(diǎn)或出血斑等。內(nèi)臟器官的摘出多采用分段的方法進(jìn)行。

99（3）內(nèi)臟器官的檢查內(nèi)臟器官的檢查程序一般是，先觀察外部形態(tài)特征、質(zhì)地變化，然后再切開臟器檢查內(nèi)部變化。100心臟：首先注意心包液數(shù)量及狀態(tài)，然后檢查心外膜和冠狀溝有無出血及心冠脂肪狀態(tài)，最后檢查心房、心室、心肌及心內(nèi)膜及其狀態(tài)。如巴氏桿菌病、結(jié)核病等傳染病多伴有心包炎，心包漿膜潮紅、混濁、粗糙、有多量漿液性或纖維素性滲出物積聚于心包腔中。101肺臟：首先觀察肺臟表面的色彩、性狀，表面是否有纖維素性或化膿性附著物，或塌陷的地方（無氣肺），再觸摸肺的各部，以查其有無結(jié)節(jié)或硬塊，必要時(shí)切下小塊肺臟作“浮沉試驗(yàn)”。102脾臟：首先觀察大小和顏色，以手觸摸其質(zhì)度，然后切開脾臟觀察脾髓、濾泡、小梁的狀態(tài)，敗血癥的脾臟常呈顯著腫大，且脾髓軟化。脾腫大時(shí)包膜緊張。邊緣鈍厚，切面膨隆，呈暗紅色或黑紅色，脾小梁和白髓不清，用刀背輕刮，可刮下大量血粥樣物。有些急性傳染病并不引起脾臟的明顯變化，如犬瘟熱、巴氏桿菌病，有些慢性傳染病，如水貂阿留申病、結(jié)核病常見脾臟明顯縮小。103肝臟：注意觀察大小、顏色、硬度等狀況。急性細(xì)菌性傳染病、某些病毒性傳染病，常出現(xiàn)肝體積腫大、實(shí)質(zhì)脆弱、顏色灰白混濁，或灰黃色等變性變化。多種動(dòng)物的沙門氏菌病、壞死桿菌病、李氏桿菌病，可出現(xiàn)肝臟有黃白色、灰白色、大小一定的壞死灶。104腎臟：先檢查脂肪囊是否有出血、被膜的緊張度剝離難易程度；被膜下有無出血、淤血、梗死、壞死等變化，然后切開檢查腎皮質(zhì)和髓質(zhì)、腎盂的變化。在一些急性傳染病中，腎可呈急性腎炎變化，腫脹、包膜緊張、皮質(zhì)增厚、有散在的出血點(diǎn)。而在一些慢性傳染病病例可見腎體積縮小，皮質(zhì)表面凹凸不平，呈栗粒大灰白色小結(jié)狀的慢性腎炎變化。

105胃腸：首先觀察胃腸的膨滿狀態(tài)，漿膜面的變化，然后觀察胃內(nèi)容物與粘膜面的變化，內(nèi)容物的觀察主要是觀察內(nèi)容物的量、稠度、氣味、色調(diào)、性質(zhì)、異物、寄生蟲等，粘膜的觀察要注意是否有腫脹、發(fā)炎、出血、潰瘍、肥厚、水腫等。106膀胱：主要檢查尿液積留情況及粘膜有無出血。膀胱粘膜和膀胱內(nèi)出血常見于炭疽、狂犬病、豬瘟、豬丹毒、馬流腦等傳染病。107淋巴結(jié)：當(dāng)發(fā)生傳染病時(shí)，多出現(xiàn)淋巴結(jié)炎，在檢查各器官系統(tǒng)的同時(shí)，要細(xì)心檢查相應(yīng)部位的淋巴結(jié)。敗血癥、急性經(jīng)過的傳染病時(shí)通常伴發(fā)全身性的急性淋巴結(jié)炎，表現(xiàn)為淋巴結(jié)腫大、被膜緊張、切面膨隆、濕潤多汁，呈灰紅色或淡紅色，有出血時(shí)，呈暗紅色或黑紅色，切面有凝血樣光澤。108慢性淋巴結(jié)炎：淋巴結(jié)體積增大，質(zhì)地變硬。若纖維增生時(shí)，淋巴結(jié)不腫大，有時(shí)可見縮小，表面不平，質(zhì)地硬實(shí)，切面呈灰白色，干燥，固有結(jié)構(gòu)不清。109（二）病理組織學(xué)檢查采取病料做組織切片，在顯微鏡下觀察其細(xì)微的病理變化，借以幫助診斷。典型病變部位連同健康組織一并采取（每塊長(zhǎng)寬1~1.5cm，厚0.4cm），沖去血污，置于固定液中送檢。固定液一般用10%福爾馬林溶液或95%乙醇。110（三）尸體的變化尸冷尸僵尸斑血液凝固尸體自溶與尸體腐敗

111四、病原學(xué)檢查1、病料的采取和保存（1）供微生物學(xué)檢驗(yàn)的病料根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查和臨診檢疫，對(duì)被檢動(dòng)物可能患有什么疫病做出初步診斷后，針對(duì)該疫病病原體可能存在的部位，采集最適宜的病料進(jìn)行檢查，才能比較容易地檢查出病原體，而不致漏檢。112病名主要臨床癥狀病料標(biāo)本種類狂犬病神經(jīng)興奮，具攻擊性、恐水、意識(shí)障礙、沉郁、局部或全身麻痹腦，特別是海馬角、腦脊髓液、唾液腺、唾液、鼻咽分泌物偽狂犬病發(fā)熱、奇癢、腦脊髓炎腦、扁桃體口蹄疫發(fā)熱，口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和潰爛，哺乳期仔獸易發(fā)嚴(yán)重心肌炎水泡皮或水泡液新城疫呼吸困難、下痢、神經(jīng)癥狀、黏膜和漿膜出血呼吸道分泌物、腦、脾等實(shí)質(zhì)器官113A、病料的采取應(yīng)于患病動(dòng)物死后立即采取，或于患病動(dòng)物臨死前撲殺后采取，盡量避免外界污染。采取所需病料時(shí)應(yīng)無菌操作，采后放在預(yù)先消毒好的容器內(nèi)。所采組織的種類，要根據(jù)診斷目的而定。114病料采集的方法:①液體材料

一般用滅菌棉拭子采取破潰的膿汁、胸水、鼻液、陰道分泌物和排泄物。未破的膿腫、胸水在皮膚表面消毒后，用無菌注射器抽取。115②內(nèi)臟組織應(yīng)在尸體解剖后立即采取。應(yīng)先用燒紅的器具燒烙表面，或用酒精火焰消毒，取深部小塊實(shí)驗(yàn)器官，放入無菌的器皿內(nèi)。要盡可能采取有病變及病變交界處的部位。116③胃腸及內(nèi)容物可將胃腸剪下，兩端扎好，送往實(shí)驗(yàn)室。糞便可用棉拭子采取，放入裝有生理鹽水或PBS的試管內(nèi)。117④血液無菌采取抗凝血，供病原培養(yǎng)、抗體檢測(cè)和血液檢查之用。體型較大的單蹄和偶蹄類動(dòng)物少量血樣可以從耳背靜脈采血；毛皮動(dòng)物小量采血可通過耳殼外側(cè)靜脈采??；鼠類可以通過尾尖、耳背靜脈、眼窩內(nèi)血管采血；兔可從耳背靜脈、頸靜脈、心臟等處采血；鳥類可從肘關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)的翅靜脈、跖部?jī)?nèi)靜脈或心臟采血。118⑤腦組織

按病理解剖方法開顱，將腦組織取出。取一部分放入10%福爾馬林溶液的瓶中，供組織學(xué)檢查；一部分放入50%甘油生理鹽水瓶中，供微生物學(xué)檢查，或者將頭部取下，用塑料口袋包好直接送檢。

119病料采集應(yīng)注意的事項(xiàng):采樣所用刀、剪要銳利，切割要迅速準(zhǔn)確，忌拉鋸式切割，并要防止擠壓病料，造成人為的變化。采集的每塊組織標(biāo)本應(yīng)包含有病變和其周圍較正常的組織，包含器官的重要組成部分。病料以2-3cm厚，4cm×5cm大小為宜。死后要立即采集病料，尤其夏季不應(yīng)超過4h。拖延過久，則組織變性、腐敗，影響檢驗(yàn)結(jié)果。取材時(shí)應(yīng)選擇癥狀和病變典型，有代表性的病例。120B、病料的保存病料應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，若延誤送檢時(shí)間，常會(huì)嚴(yán)重影響檢疫結(jié)果。根據(jù)病料的性狀及檢疫的要求不同，應(yīng)做暫時(shí)的冷藏、冷凍或其他處理。供細(xì)菌檢驗(yàn)及血清學(xué)檢驗(yàn)的樣品，應(yīng)放在裝有冰塊的保溫瓶?jī)?nèi)運(yùn)送，且必須在24h內(nèi)送到；121供病毒檢驗(yàn)的樣品，冷藏處理后須在數(shù)小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，超過數(shù)小時(shí)的應(yīng)做凍結(jié)處理（凍結(jié)方法：將樣品放入-30℃冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后再裝入有冰塊或干冰的冷藏瓶?jī)?nèi)運(yùn)送，也可將裝入樣品的容器放入保溫瓶?jī)?nèi)，再放入冰塊，然后按100g冰塊加入約35g食鹽，立即將保溫瓶瓶口蓋緊。瓶?jī)?nèi)溫度可控制在-20℃左右。24h內(nèi)不能送到實(shí)驗(yàn)室的，須在運(yùn)送過程中保持樣品溫度處于-20℃以下）122（2）寄生蟲檢查病料的采取和保存檢查寄生蟲的病料，應(yīng)在流行病學(xué)調(diào)查、臨床檢查的基礎(chǔ)上，按所懷疑的寄生蟲所寄生的部位來采取樣品，才能達(dá)到檢疫的目的。123A糞便樣品應(yīng)采取新排出的糞便或直接從直腸內(nèi)采得，以保持蟲體或蟲體節(jié)片及蟲卵的固有形態(tài)。根據(jù)檢查方法的不同，取樣量差別較大。例如，直接涂片檢查蟲卵時(shí)，只需用竹簽或牙簽取少量糞便即可；漂浮法、沉淀法和錦綸篩兜淘洗法，需取糞樣以冷藏不凍結(jié)狀態(tài)及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室檢查。124B皮屑樣品當(dāng)檢查動(dòng)物的螨病（如疥螨、癢螨）時(shí)，在患病皮膚與健康皮膚交界處，將刀刃與皮膚表面垂直，刮取皮屑，直到皮膚輕度出血，接取皮屑供檢驗(yàn)。125C血液樣品有些絲蟲（如犬惡絲蟲）的幼蟲及血液原蟲（如伊氏錐蟲、梨形蟲和住白細(xì)胞蟲）均可在動(dòng)物的血液中出現(xiàn)，這些病的確診就需依靠血液的檢查。不同的血液寄生蟲，在血液中出現(xiàn)的時(shí)機(jī)（白天或夜晚）及部位各不相同，所以要根據(jù)具體情況，取相應(yīng)時(shí)機(jī)和部位的血液制成血涂片，送實(shí)驗(yàn)室鏡檢。1262病原檢查法

（1）病原菌疫病的病原學(xué)檢查A、病原菌的形態(tài)學(xué)觀察顯微鏡下菌體的形態(tài)學(xué)觀察要點(diǎn)：通過染色、鏡檢，注意觀察菌體的形態(tài)、大小和排列規(guī)律，注意是否產(chǎn)生芽孢和芽孢的位置；注意染色反應(yīng)，有無莢膜等。菌落的形態(tài)學(xué)觀察要點(diǎn)：主要是通過分離培養(yǎng)，注意觀察菌落的大小，粗燥或光滑情況，隆起情況，透明情況和顏色；在半固體培養(yǎng)基接種線上的生長(zhǎng)情況；在特殊培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況等。127B病原菌的生化試驗(yàn)相近的菌種單憑形態(tài)學(xué)檢查不易區(qū)別，但是不同菌類的新陳代謝產(chǎn)物不同，可以檢查其代謝產(chǎn)物而區(qū)別開。因此，用生化反應(yīng)檢查細(xì)菌的代謝產(chǎn)物，是鑒別病原菌的重要方法之一。常用的生化反應(yīng)有糖發(fā)酵試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)、VP試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)、牛乳試驗(yàn)等。

128C、血清學(xué)試驗(yàn)通過用血清學(xué)試驗(yàn)可進(jìn)行細(xì)菌屬內(nèi)分群和種內(nèi)分型。用于細(xì)菌鑒別的血清學(xué)方法有凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、毒素中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。

129（2）病毒性疫病的病原學(xué)檢查通常分為分離培養(yǎng)鑒定和血清學(xué)鑒定兩步進(jìn)行。A病毒的分離培養(yǎng)鑒定主要是在流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，有目的地采取病料針對(duì)性接種易感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、禽胚胎和易感組織細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)。130病毒理化性質(zhì)鑒定

病毒理化性質(zhì)的鑒定是鑒定病毒的重要指標(biāo)。有關(guān)的理化性質(zhì)主要有：病毒的核酸類型可采用加入脫氧核糖核酸抑制劑、用Dnase或RNase處理，或借助于生化技術(shù)以及染色方法，來觀察病毒感染細(xì)胞的相應(yīng)變化，確定病毒的核酸類型是DNA還是RNA。病毒顆粒的大小病毒的大小可以通過過濾和電子顯微鏡的方法來測(cè)定。131對(duì)脂溶劑的敏感性有些病毒顆粒外面包有類脂質(zhì)膜，它能被乙醚、氯仿等脂溶劑所破壞，使病毒失去感染性。而無外膜的病毒對(duì)乙醚處理有抵抗力。對(duì)酸的敏感性各種病毒對(duì)pH值變化的穩(wěn)定性有一定差異。一般將病毒對(duì)酸的敏感性作為病毒鑒定的一個(gè)重要指標(biāo)，如腸道病毒對(duì)酸有較強(qiáng)的抵抗力。132耐熱性試驗(yàn)胰蛋白酶敏感性試驗(yàn)分離病毒的凝血性質(zhì)和紅細(xì)胞吸附特性。133B、病毒的血清學(xué)鑒定在初步分離鑒定的基礎(chǔ)上，采用血清學(xué)試驗(yàn)方法鑒定病毒的種類。常用的血清學(xué)方法有中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫熒光抗體技術(shù)、免疫酶標(biāo)記和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物交叉保護(hù)試驗(yàn)等。

134（3）寄生蟲性疫病的病原學(xué)檢查①蠕蟲病的檢查方法

A蟲卵檢查法

寄生蟲卵形態(tài)檢查，常采取糞便，用直接涂片、浮集、沉淀等方法建立確診。寄生蟲卵計(jì)數(shù)可對(duì)寄生蟲的寄生量做一個(gè)大致判斷。135B、幼蟲檢查法C、寄生蟲蟲體的檢查法D、糞便培養(yǎng)

E、毛蚴孵化法

②原蟲病的檢查方法③螨病的檢查方法

136五、免疫學(xué)檢查

1、血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)抗原與相應(yīng)抗體在體外一定條件下發(fā)生反應(yīng)，這時(shí)反應(yīng)現(xiàn)象能用肉眼觀察或通過儀器檢測(cè)出來。因此，可利用抗原抗體已知的任何一方去檢測(cè)未知的另一方，以達(dá)到檢疫目的。1371）凝集反應(yīng)細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原，或吸附在紅細(xì)胞、乳膠顆粒性載體表面的可溶性抗原，與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時(shí)間，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊，稱為凝集試驗(yàn)。

138A、直接凝集反應(yīng)顆粒性抗原與凝集素直接結(jié)合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的試驗(yàn)。直接凝集反應(yīng)有玻片法和試管法。玻片法在潔凈的載玻片或玻璃板上進(jìn)行；試管法在潔凈的試管中進(jìn)行。139玻片法是一種定性試驗(yàn)方法。可用已知抗體來檢測(cè)未知抗原。若鑒定新分離的菌種時(shí)，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與其混勻。數(shù)分鐘后，如出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，為陽性反應(yīng)。該法簡(jiǎn)便快速。如沙門氏菌的鑒定、人類ABO血型血型的鑒定等多采用此法。140也可用已知的診斷抗原懸液，檢測(cè)待檢血清中是否存在相應(yīng)抗體。如布氏桿菌的玻板凝集反應(yīng)和雞白痢全血平板凝集試驗(yàn)。141A．平板凝集試驗(yàn)+平板凝集試驗(yàn)用抗原陰性血清無凝集現(xiàn)象+平板凝集試驗(yàn)用抗原陽性血清出現(xiàn)凝集現(xiàn)象142試管凝集法

是一種定量試驗(yàn)的經(jīng)典方法多用已知抗原來檢測(cè)血清中有無相應(yīng)抗體及其含量。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。143操作時(shí)，將待檢血清用生理鹽水連續(xù)成倍稀釋，然后加入等量抗原，最高稀釋度仍有凝集現(xiàn)象者，為血清的效價(jià)，也稱滴度，以表示血清中抗體的相對(duì)含量。通常以能與一定量的抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集（++）的血清最高稀釋度為血清凝集效價(jià)。144145146147148B、間接凝集反應(yīng)先將可溶性抗原（或抗體）吸附在與免疫無關(guān)的載體顆粒（紅細(xì)胞、乳膠等）表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應(yīng)。149150由于載體顆粒增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積，當(dāng)顆粒上的抗原與微量抗體結(jié)合后，就足以出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)，敏感性比直接凝集反應(yīng)高得多。本試驗(yàn)具有較高的敏感性，一般要比直接凝集反應(yīng)高2-8倍，但特異性較差。151間接凝集反應(yīng)若以紅細(xì)胞（多用綿羊紅細(xì)胞）做載體，稱為間接血凝反應(yīng)；若以乳膠做載體，稱為乳膠凝集反應(yīng)。152間接凝集反應(yīng)若用已知抗原吸附在載體上鑒定抗體，稱為正向間接凝集反應(yīng)；若用已知抗體吸附在載體上來鑒定抗原，稱為反向間接凝集試驗(yàn)。反向間接凝集試驗(yàn)主要用于豬傳染性水皰病與豬口蹄疫檢測(cè)。

153（正向）間接凝集反應(yīng)原理示意圖154（反向）間接凝集反應(yīng)原理示意圖

155C、血凝和血凝抑制試驗(yàn)?zāi)承┎《灸苓x擇性凝集某些動(dòng)物的紅細(xì)胞，這種凝集紅細(xì)胞的現(xiàn)象稱為血凝（HA）。在病毒懸液中加入特異性抗體作用一定時(shí)間，再加入紅細(xì)胞時(shí)，紅細(xì)胞的凝集被抑制（不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象），稱為紅細(xì)胞凝集抑制反應(yīng)（HI）。156HI試驗(yàn)在生產(chǎn)實(shí)踐中的用途：抗體的檢測(cè)與監(jiān)測(cè)，即用已知病毒測(cè)抗體。新分離的血凝性病毒的鑒定，即用已知抗體測(cè)病毒。157HA和HI廣泛應(yīng)用在雞新城疫、禽流感、雞減蛋綜合征等疫病的診斷檢測(cè)中。試驗(yàn)常在V型96孔微量反應(yīng)板上進(jìn)行。158HI試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)原理（圖示）

GO抗體與病毒對(duì)應(yīng)抗體與病毒不對(duì)應(yīng)vvvvRBCRBC紅細(xì)胞凝集（血凝現(xiàn)象）紅細(xì)胞不凝集（血凝抑制現(xiàn)象）抗體（抗原與抗體的結(jié)合具有很強(qiáng)的特異性）RBCvvvvvRBCRBCRBCRBCRBCRBCvRBCRBCRBC血凝性病毒血凝素RBC有其受體的紅細(xì)胞血凝素的受體++159間接凝集抑制反應(yīng)原理示意圖

A：標(biāo)本中含抗原B：標(biāo)本中不含抗原160方法與步驟（以新城疫抗體效價(jià)的測(cè)定為例）

HI試驗(yàn)用的抗原是定量的四單位病毒，所以在做HI試驗(yàn)前要先配制出四單位病毒。（一）4單位病毒的配制：先做病毒的血凝試驗(yàn)，測(cè)出病毒的血凝價(jià)，然后推算出４Ｖ的稀釋度，把病毒稀釋，就得到了４Ｖ。（二）HI試驗(yàn)的操作步驟：結(jié)果判定(讀出血凝抑制價(jià))

161孔號(hào)123456789101112加生理鹽水待檢血清的倍比稀釋血清稀釋倍數(shù)新城疫4V

505050505050505050505050

50505050505050505050－－

棄50

212223242526272829210

病毒對(duì)照鹽水對(duì)照

5050505050505050505050

－振蕩1min，室溫（18℃～20℃）下作用20min，或置37℃溫箱中作用5～10min1%雞RBC懸液505050505050505050505050振蕩15～30s，置37℃溫箱中作用15～30min觀察結(jié)果HI試驗(yàn)的操作步驟四種試劑：生理鹽水雞被檢血清新城疫的4單位病毒1％雞紅細(xì)胞懸液(吸頭專用)病毒血凝抑制試驗(yàn)操作步驟單位:μl162血凝抑制效價(jià)：能完全抑制紅細(xì)胞凝集的血清最大稀釋倍數(shù)稱該血清的血凝抑制滴度或血清的血凝抑制效價(jià)。

完全抑制不完全抑制不抑制

病毒對(duì)照鹽水對(duì)照結(jié)果判定水平觀看

傾斜觀看新城疫4V

50505050505050

5050

5050－

稀釋倍數(shù)血清21

22

23242526272829210

病毒對(duì)照鹽水對(duì)照結(jié)果舉例－－－－－－±

±＋＋＋－163Back1642）沉淀反應(yīng)可溶性抗原（如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、組織浸出液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的白色沉淀，稱為沉淀試驗(yàn)。

165液體內(nèi)沉淀試驗(yàn)

1）環(huán)狀沉淀試驗(yàn)

2）絮狀沉淀試驗(yàn)?zāi)z內(nèi)沉淀試驗(yàn)

3）單向擴(kuò)散試驗(yàn)

4）雙向擴(kuò)散試驗(yàn)免疫電泳技術(shù)

5）免疫電泳

6）對(duì)流免疫電泳

166A、環(huán)狀沉淀反應(yīng)反應(yīng)在小試管中進(jìn)行，當(dāng)沉淀素血清與沉淀原發(fā)生特異性反應(yīng)時(shí)，在兩液面接觸出現(xiàn)致密、清晰明顯的白環(huán)，即環(huán)狀沉淀反應(yīng)陽性。方法評(píng)價(jià)：

敏感度較低、簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用、只能定性不能定量、缺乏多對(duì)分辨力。常用于炭疽的診斷和皮張?zhí)烤覚z疫。167AbAg環(huán)狀沉淀示意圖沉淀管內(nèi)徑1.5～2mm1～5min出現(xiàn)沉淀環(huán)為陽性30min不出現(xiàn)沉淀環(huán)為陰性操作步驟168原理

B雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

將可溶性抗原和抗體置于瓊脂凝膠板的對(duì)應(yīng)孔中，兩者各自在凝膠中向四周自由擴(kuò)散，當(dāng)抗原與抗體相遇，在比例合適時(shí)形成沉淀線。操作步驟

(doublegeldiffusiontest)應(yīng)用：1.檢測(cè)未知Ag或Ab2.Ag性質(zhì)分析3.Ab效價(jià)滴定4.Ag或Ab純度鑒定169平板法170操作步驟:在半固體瓊脂凝集板上按備好的圖形打孔，一般由一個(gè)中心孔和6個(gè)周邊孔組成一組，中心孔徑4-5mm，周邊孔徑3mm。中心孔滴加已知抗原懸液，周圍孔滴加標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和被檢血清。各孔應(yīng)編號(hào)，當(dāng)抗原抗體向外自由擴(kuò)散而發(fā)生特異性反應(yīng)時(shí)，在相遇處形成一條或數(shù)條白色沉淀線，即瓊擴(kuò)試驗(yàn)結(jié)果陽性。171梅花孔結(jié)果172瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)是馬傳染性貧血病、雞馬立克氏病、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性喉氣管炎及雞傳染性法氏囊病常用的診斷方法。173

2.抗原性質(zhì)分析2表示標(biāo)準(zhǔn)Ag1表示待檢Ag待檢Ag與標(biāo)準(zhǔn)抗原完全吻合；待檢Ag中含有與標(biāo)準(zhǔn)Ag相同的Ag；還有另外的Ag與Ab相對(duì)應(yīng)；待檢Ag有與Ab相對(duì)應(yīng)的Ag，但與標(biāo)準(zhǔn)Ag不同；待檢Ag與標(biāo)準(zhǔn)Ag性質(zhì)相同；但含量較低；

抗原性質(zhì)分析174

1.周圍6個(gè)孔放不同稀釋度的相應(yīng)Ab。

2.以出現(xiàn)沉淀線的血清最高稀釋倍數(shù)為該抗體的效價(jià)。

3.可進(jìn)行任意稀釋。

抗體效價(jià)滴定175對(duì)流免疫電泳(CIEP)

抗原與抗體在直流電場(chǎng)的作用下在瓊脂凝膠中發(fā)生互逆方向的移動(dòng)或擴(kuò)散，二者相遇時(shí)可發(fā)生特異性的結(jié)合，形成肉眼可見的沉淀線。大多數(shù)蛋白質(zhì)抗原物質(zhì)在堿性溶液中帶負(fù)電荷，電泳時(shí)從負(fù)極向正極移動(dòng)，而抗體帶有微弱的負(fù)電荷，分子量較大，電泳過程中向負(fù)極泳動(dòng)。操作步驟(counterimmunoelectrophoresis)概念

方法評(píng)價(jià)：

簡(jiǎn)便、快速、敏感度較雙擴(kuò)高、分辨力較雙擴(kuò)低。176

示意圖1773）標(biāo)記抗體技術(shù)雖然抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng)是特異性的，但在抗原、抗體分子小，或抗原、抗體含量低的時(shí)候，抗原、抗體結(jié)合后所形成的復(fù)合物卻不可見，給疫病檢測(cè)帶來困難。而有些物質(zhì)如酶、熒光素、放射性核素、化學(xué)發(fā)光劑等，即便在微量或超微量時(shí)也能用特殊的方法將其檢測(cè)出來。178根據(jù)抗原抗體結(jié)合的特異性和標(biāo)記分子的敏感性而建立的診斷檢測(cè)技術(shù)，稱為標(biāo)記抗體技術(shù)。免疫學(xué)檢測(cè)中的標(biāo)記技術(shù)主要包括酶標(biāo)記抗體技術(shù)、熒光標(biāo)記抗體技術(shù)和膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)等。179A、熒光抗體技術(shù)將抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，用此熒光抗體作染色劑，對(duì)待檢標(biāo)本進(jìn)行染色，當(dāng)標(biāo)本中的抗原物質(zhì)與熒光抗體特異性結(jié)合時(shí)，熒光素在熒光顯微鏡的紫外光或藍(lán)光照射下，發(fā)射出肉眼可見的熒光，從而顯示抗原的存在及所在的部位。直接免疫熒光試驗(yàn)：僅能用于抗原的檢測(cè)。間接免疫熒光試驗(yàn)：可以檢測(cè)抗原又可檢測(cè)抗體。180B、免疫酶技術(shù)是把抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)與酶的高效催化作用原理有機(jī)地結(jié)合起來，即把具有催化活性的酶類通過化學(xué)的方法和抗體(或抗原)結(jié)合起來成為酶標(biāo)記物。這種酶標(biāo)記物同時(shí)具有免疫學(xué)反應(yīng)性和化學(xué)反應(yīng)性，將其與待測(cè)的抗原或抗體結(jié)合，通過酶的活性降解底物呈現(xiàn)出顏色反應(yīng)從而顯示出該免疫學(xué)反應(yīng)的存在。酶的活性與底物以及與顯色反應(yīng)呈一定的比例關(guān)系。顯色越深，說明酶降解底物量越大，與酶標(biāo)抗體(抗原)相檢測(cè)對(duì)應(yīng)的抗原(或抗體)量也就越多。181分類182ELISA將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。

183ELISA基本原理：

（1）抗原或抗體能物理性地吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性；

（2）抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；

（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的。

184ELISA類型

ELISA可用于檢測(cè)抗體，也可用于檢測(cè)抗原。根據(jù)檢測(cè)目的和操作步驟的不同，通常有三種類型的檢測(cè)方法。1．間接法此法是檢測(cè)抗體最常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測(cè)血清(抗體)與之結(jié)合，洗滌后，加酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測(cè)定。其原理見圖。185酶標(biāo)抗體固相抗原待測(cè)抗體EEE圖ELISA間接法示意圖1862．雙抗體夾心法此法常用于檢測(cè)抗原。將已知抗體吸附于固相載體，加入待測(cè)標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合，溫育后洗滌，加入酶標(biāo)抗體及底物溶液進(jìn)行測(cè)定。見圖

酶標(biāo)抗體固相抗體待測(cè)抗原EEE圖雙抗體夾心法檢測(cè)抗原1873．競(jìng)爭(zhēng)法此法可用于抗原及半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體上，加入待測(cè)抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原，使二者競(jìng)爭(zhēng)地與固相抗體結(jié)合，經(jīng)過洗滌分離，最后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。見圖188EEE酶標(biāo)抗原待測(cè)抗原E底物E顯色反應(yīng)固相抗體EEE酶標(biāo)抗原底物顯色反應(yīng)EEEEEE圖競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原示意圖固相抗體189補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)一、原理

CFT是根據(jù)任何抗原抗體復(fù)合物可激活、固定補(bǔ)體的特性，用一定量的補(bǔ)體與致敏紅細(xì)胞來檢測(cè)抗原、抗體間有無特異性結(jié)合的一類實(shí)驗(yàn)。

1、參與本實(shí)驗(yàn)的成分包括①已知抗原（或抗體）②待檢抗體（或抗原）③SRBC④SRBC相應(yīng)的溶血素⑤補(bǔ)體190（Ag+Ab）+補(bǔ)體雙方不相對(duì)應(yīng)（或缺少一方）形不成IC

不能激活并固定補(bǔ)體

加入SRBC和溶血素

出現(xiàn)溶血雙方相對(duì)應(yīng)形成IC

激活并固定補(bǔ)體

加入SRBC和溶血素

不出現(xiàn)溶血

補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)191中和試驗(yàn)

原理：特異的抗病毒免疫血清（中和抗體）和病毒作用后，使病毒失去感染易感動(dòng)物、雞胚、細(xì)胞的能力。一種病毒只能被相應(yīng)的免疫血清所中和。192中和試驗(yàn)的應(yīng)用病毒株的種型鑒定測(cè)定血清抗體效價(jià)分析病毒的抗原性193根據(jù)稀釋成分不同可分為：固定病毒用量與等量一系列倍比稀釋的血清進(jìn)行中和試驗(yàn)，以血清中和抗體滴度表示；（血清中和試驗(yàn)）固定血清用量與等量一系列對(duì)數(shù)稀釋的病毒進(jìn)行中和試驗(yàn)，以中和指數(shù)表示。（病毒中和試驗(yàn)）194例1NDV9～11d雞胚24～48h雞胚死亡NDV+抗血清9～11d雞胚雞胚不死亡195例2口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡

196變態(tài)反應(yīng)法

某些疫病在傳染過程中引起以細(xì)胞免疫為主的Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)，這種變態(tài)反應(yīng)是由病原體或代謝產(chǎn)物在傳染過程中作為變應(yīng)原而引起，具有很高的特異性和敏感性。197因此，常用變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行動(dòng)物疫病的檢疫，例如細(xì)菌性疫病中的結(jié)核病、鼻疽、布魯氏菌病，病毒性疫病中的皰疹病毒病，真菌性疫病中的流行性淋巴管炎，寄生蟲病中的日本血吸蟲病等。198六、動(dòng)物檢疫檢驗(yàn)的現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)

單克隆抗體技術(shù)

核酸探針技術(shù)

PCR技術(shù)

免疫印跡技術(shù)

限制性核酸內(nèi)切酶圖譜分析

核酸序列分析

限制性核酸片段多態(tài)性分析

199A、單克隆抗體技術(shù)

一個(gè)病原體存在著許多性質(zhì)不同的抗原，在同一抗原上，有可能存在許多性質(zhì)不同的屬、種、群、型特異性抗原，采用雜交瘤技術(shù)，可以識(shí)別不同抗原或抗原決定簇的單抗，從而可以對(duì)感染性疾病和寄生蟲病進(jìn)行快速準(zhǔn)確的診斷，同時(shí)，可用于調(diào)查疫病流行情況、流行毒株或蟲體的分離鑒定，為疫病的診斷和防制提供資料。200

免疫動(dòng)物培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞

收集致敏的B淋巴細(xì)胞收集骨髓瘤細(xì)胞

細(xì)胞融合

HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞

檢測(cè)篩選陽性細(xì)胞

克隆化培養(yǎng)（反復(fù)3-5次）

獲得穩(wěn)定分泌McAb的雜交瘤細(xì)胞株

McAb的制備（雜交瘤培養(yǎng)上清或誘生腹水）

McAb純化及鑒定

單克隆抗體技術(shù)201B、PCR技術(shù)即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其原理是在模板DNA、引物和四種脫氧單核苷酸存在的條件下，依賴于耐高溫的DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。PCR以欲擴(kuò)增的DNA作為模板，以與模板正鏈和負(fù)鏈末端互補(bǔ)的兩種寡核苷酸作為引物，經(jīng)過模板DNA變性、模板引物特異性結(jié)合，并在DNA聚合酶作用下發(fā)生引物鏈延伸反應(yīng)來合成新的模板DNA。202模板DNA變性、引物結(jié)合（退火）、引物延伸合成DNA這三步構(gòu)成一個(gè)PCR循環(huán)。每一循環(huán)的DNA產(chǎn)物經(jīng)變性又成為下一個(gè)循環(huán)的模板DNA。203PCR原理示意圖204PCR產(chǎn)物凝膠電泳檢測(cè)205（1）快速檢測(cè)病毒性疫病的病原用PCR技術(shù)檢測(cè)的動(dòng)物病毒性疫病的病原有藍(lán)舌病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹瀉病毒、牛白血病病毒、馬鼻肺炎病毒、惡性卡他熱病毒、偽狂犬病病毒、狂犬病病毒、非洲豬瘟病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞傳染性喉氣管炎病毒、馬傳染性肺炎病毒、馬立克氏病毒、牛冠狀病毒、輪狀病毒、水貂阿留申病病毒、山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒、梅迪/維斯納病毒、豬細(xì)小病毒、魚傳染性造血器官壞死病病毒等。

206（2）快速檢測(cè)其他疫病病原體致病性大腸桿菌毒素基因、牛胎兒彎曲桿菌、牛分支桿菌、炭疽桿菌芽孢、鉤端螺旋體、牛巴貝斯蟲和弓形蟲等。

207C、免疫印跡技術(shù)免疫印跡或免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)（immunoblotting或Westernblot）是在Southern（1975）創(chuàng)建的DNA印跡術(shù)（Southernblotting）基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型免疫生化技術(shù)。208其原理是應(yīng)用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）將蛋白質(zhì)樣品分離后，通過轉(zhuǎn)移電泳或直接印漬方式原位轉(zhuǎn)印至固相介質(zhì)上，并保持其原有的物質(zhì)類型和生物學(xué)活性不變，然后應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行特異性檢測(cè)。由于此項(xiàng)技術(shù)具有SDS的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高度特異性和敏感性，方法簡(jiǎn)便易行，標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存和便于比較等優(yōu)點(diǎn)。209用免疫印跡技術(shù)可定性、定量地檢測(cè)出待檢樣品中含量很低的特定病原體的抗原成分。對(duì)于一些能感染細(xì)胞而細(xì)胞病變不易觀察的病原體的檢測(cè)也很有用。

210211212七、動(dòng)物檢疫處理方法（一）檢疫處理原則除害。通過物理、化學(xué)和其他方法殺滅有害生物，包括熏蒸、消毒、高溫、低溫輻照等方式處理。撲滅。對(duì)檢疫不合格的動(dòng)物，依照法規(guī)，用不放血的方式宰殺，消滅傳染源。銷毀。以化學(xué)處理、焚燒、深埋或其他有效方法，徹底消滅病原體及其載體。213退回。對(duì)尚未卸離運(yùn)輸工具的不合格檢疫動(dòng)物、產(chǎn)品，可用原運(yùn)輸工具退回輸出國；對(duì)已卸離運(yùn)輸工具的不合格檢疫物，在不擴(kuò)大傳染的前提下，由原進(jìn)出口岸檢疫機(jī)構(gòu)監(jiān)督退回輸出國。截留。對(duì)旅客攜帶的檢疫物，經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)檢疫認(rèn)為需要除害或銷毀的，簽發(fā)《出入境人員攜帶物留驗(yàn)/處理憑證》。封存。對(duì)需要進(jìn)行檢疫處理的檢疫物，應(yīng)及時(shí)予以封存，防止疫情擴(kuò)散。214（二）入境動(dòng)物檢疫處理

1、現(xiàn)場(chǎng)檢疫處理（1）對(duì)死亡的動(dòng)物應(yīng)及時(shí)移送指定地點(diǎn)做病理解剖檢驗(yàn)，并采樣送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，死亡動(dòng)物尸體轉(zhuǎn)運(yùn)到指定地點(diǎn)進(jìn)行無害化處理并出具證明進(jìn)行索賠或其他處理。（2）對(duì)有臨床癥狀的動(dòng)物，若超過半數(shù)動(dòng)物死亡，則禁止卸離運(yùn)輸工具，全群退回并上報(bào)國家出入境檢驗(yàn)檢疫局。215（3）動(dòng)物鋪墊材料、剩余飼料和排泄物等，由貨主及其代理人在檢疫人員的監(jiān)督下，做除害處理，如熏蒸、消毒、高溫處理等。（4）對(duì)入境動(dòng)物做群體臨診觀察，發(fā)現(xiàn)疑似感染傳染病動(dòng)物時(shí)，在貨主或者押運(yùn)人員的配合下查明情況，立即處理。2162、隔離檢疫和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的檢疫處理（1）發(fā)現(xiàn)入境動(dòng)物有一類傳染病、寄生蟲病，按規(guī)定做全群退回或全群撲殺、銷毀處理。（2）發(fā)現(xiàn)二類傳染病或寄生蟲病，對(duì)患病動(dòng)物做退回或撲殺、銷毀處理，同群其他動(dòng)物放行至指定地點(diǎn)繼續(xù)觀察，由當(dāng)?shù)貦z驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)或獸醫(yī)部門負(fù)責(zé)監(jiān)管。（3）對(duì)經(jīng)檢疫合格的入境動(dòng)物，由口岸檢疫檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)在隔離期滿之日簽發(fā)有關(guān)單證（入境貨物檢疫檢驗(yàn)證明）予以放行。217（4）檢出的規(guī)定檢疫項(xiàng)目以外的、對(duì)畜牧業(yè)有嚴(yán)重危害的其他傳染病或寄生蟲病的動(dòng)物，由國家質(zhì)檢總局根據(jù)其危害程度做出檢疫處理決定。（5）對(duì)旅客攜帶的伴侶動(dòng)物，不能交驗(yàn)輸出國（或地區(qū)）官方出具的檢疫證書和狂犬病免疫證書或超出規(guī)定限量的，做暫時(shí)扣留處理。218（三）出境動(dòng)物檢疫處理根據(jù)輸入國的檢疫衛(wèi)生要求或雙邊議定書或貿(mào)易合同中的檢疫要求，經(jīng)檢疫檢驗(yàn)不合格的動(dòng)物不準(zhǔn)出境，根據(jù)具體情況做出退回原產(chǎn)地或者撲殺銷毀處理，發(fā)現(xiàn)重大疫情要及時(shí)上報(bào)國家質(zhì)檢總局并向當(dāng)?shù)丶霸a(chǎn)地畜牧獸醫(yī)部門通報(bào)，及時(shí)采取措施，撲滅疫情。219（四）國內(nèi)動(dòng)物檢疫的處理

1、合格動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品的處理方法經(jīng)檢疫確定無檢疫對(duì)象的動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品屬于合格的動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品，由動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)出具檢疫證明，動(dòng)物產(chǎn)品同時(shí)加蓋驗(yàn)訖標(biāo)志。2201）合格動(dòng)物A、縣境內(nèi)交易遷移的動(dòng)物，出具《動(dòng)物產(chǎn)地檢疫合格證明》。B、運(yùn)出縣境的動(dòng)物，出具《出縣境動(dòng)物檢疫合格證明》。2212）合格動(dòng)物產(chǎn)品A、縣境內(nèi)交易遷移的動(dòng)物產(chǎn)品，出具《動(dòng)物產(chǎn)品檢疫合格證明》。B、運(yùn)出縣境的動(dòng)物產(chǎn)品，出具《出縣境動(dòng)物產(chǎn)品檢疫合格證明》。C、驗(yàn)訖標(biāo)志。剝皮肉類（如馬肉、牛肉、羊肉、豬肉等），在其胴體或分割體上加蓋方形針碼檢疫印章；帶皮肉類，加蓋滾筒式驗(yàn)訖印章；白條禽（雞、鴨、鵝）和剝皮兔等，在其后腿（肢）上部加蓋圓形針碼檢疫印章。2222、不合格動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品的處理方法經(jīng)檢疫確定患有檢疫對(duì)象的動(dòng)物、疑似動(dòng)物及染疫動(dòng)物產(chǎn)品為不合格動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品，應(yīng)做防疫消毒和其他無害化處理；無法做無害化處理的，應(yīng)予以銷毀。223若發(fā)現(xiàn)動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品未按規(guī)定進(jìn)行免疫、檢疫或檢疫證明過期的，應(yīng)進(jìn)行