沉淀反應(yīng)優(yōu)秀公開課

指導(dǎo)教師：

實(shí)驗(yàn)二沉淀反應(yīng)（3學(xué)時(shí)）

血清學(xué)反應(yīng)凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)√中和反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)免疫學(xué)檢驗(yàn)主要內(nèi)容免疫細(xì)胞檢測(cè)TC√BC√N(yùn)KCMφ√、、、中性粒細(xì)胞√酶標(biāo)記技術(shù)√金標(biāo)記技術(shù)√熒光標(biāo)記技術(shù)同位素標(biāo)記技術(shù)其它技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)免疫比濁分析技術(shù)其它√抗原抗體的總體原理根據(jù)抗原抗體的反應(yīng)有特異性，可用已知抗原測(cè)定未知抗體；也可用已知抗體測(cè)定未知抗原?？乖贵w反應(yīng)特點(diǎn)

1.特異性2.可逆性3.可見性4.階段性血清學(xué)反應(yīng)條件

1.電解質(zhì)2.PH

3.溫度抗人血清

？對(duì)流免疫電泳雙向瓊脂擴(kuò)散示教：?jiǎn)蜗颦傊瑪U(kuò)散火箭免疫電泳免疫電泳環(huán)狀沉淀

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、目的

掌握對(duì)流免疫電泳與雙向瓊脂擴(kuò)散的操作步驟，結(jié)果觀察及實(shí)際應(yīng)用。并在此基礎(chǔ)上了解各類瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的特點(diǎn)。

二、原理1.總試驗(yàn)原理：沉淀反應(yīng)是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在一定條件下發(fā)生結(jié)合并出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。2.雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)原理：可溶性抗原與相應(yīng)抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴(kuò)散，當(dāng)擴(kuò)散到兩者濃度比例合適的部位相遇時(shí)，即出現(xiàn)乳白色的沉淀線。AgAb

雙向免疫瓊脂擴(kuò)散孔型○○○○

○

○○○

○

○○○○○三孔型雙孔型梅花孔型雙排孔型雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)不但可對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性鑒定和測(cè)定效價(jià)，還可對(duì)抗原或抗體進(jìn)行純度分析和同時(shí)對(duì)兩種不同來源的抗原或抗體進(jìn)行比較，分析其所含成分的異同。若在兩孔內(nèi)有兩對(duì)或兩對(duì)以上的抗原抗體系統(tǒng)，就能產(chǎn)生相應(yīng)數(shù)量的分離的沉淀線。因此，利用此法可進(jìn)行抗原或抗體的純度分析。

此外觀察兩個(gè)鄰近孔的抗原與抗體所形成的兩條線是交叉抑或相連，可用來判斷該兩抗原是否有共同成分。假如同樣的純抗原a放在兩個(gè)鄰近的孔中，對(duì)應(yīng)抗體放在中央孔中，兩條沉淀線在其相鄰的末端會(huì)互相連接和融合；若兩個(gè)不同的抗原a和b，則兩線互相交叉；若兩個(gè)抗原有部分相同成分a和ab，則兩線除有相連部分以外還有一伸出部分。

3.對(duì)流免疫電泳原理

抗原在PH8.6的緩沖液中帶負(fù)電荷，將

抗原置于陰極端，由陰極向陽極移動(dòng)；抗體因電滲作用而流向陰極。當(dāng)抗原抗體在兩孔間相遇時(shí)，在兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀線。特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、短時(shí)間出結(jié)果，敏感性高于雙擴(kuò)5-10倍。用途：抗原、抗體的測(cè)定

三、材料人血清（Ag）抗人血清(Ab)PH8.6巴比妥緩沖液生理鹽水瓊脂粉、玻片打孔器加樣器、電泳儀等。

四、方法2.配制瓊脂板:傾入3.5~4ml加熱瓊脂/片3.在瓊脂板上打孔：孔徑3㎜、抗原、抗體孔間

距5㎜，抗原孔間距2㎜。4.加樣：(見圖樣)5.電泳：將瓊脂板放入電泳槽、抗體端接陽極，

紗布做引橋，電流為3～4mA/㎝（玻片寬度）

電泳40—50min。

對(duì)流免疫電泳瓊脂板厚度3mm

四、方法1.配制1%瓊脂：稱取瓊脂0.5g+生理鹽水50ml雙向免疫擴(kuò)散加熱溶解

四、方法

2.制板：3.5-4.ml加熱瓊脂/片3.在瓊脂上打孔：4.加樣：中間加入抗原、周圍加稀釋的抗體5.放室溫24小時(shí)看結(jié)果雙向免疫擴(kuò)散AbAg1:21:41:81:161:321:64注意：佐劑抗原實(shí)驗(yàn)組采用此方法測(cè)定血清效價(jià)

加樣量要精確，不能逸出孔外，否則結(jié)果不好觀察；制板時(shí)，玻片要清潔，邊緣要整齊;孔距約5mm左右，太遠(yuǎn)看不到實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象。

五、結(jié)果

對(duì)流免疫電泳

雙向免疫擴(kuò)散

示教1單向免疫擴(kuò)散方法：用抗體制板、打孔、加樣、單向擴(kuò)散24小時(shí)看結(jié)果結(jié)果

火箭電泳抗原

示教3方法：抗體瓊脂板的制備、加樣、電泳。

—+結(jié)果