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乳酸脫氫酶及其輔酶的作用實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
1.掌握酶蛋白與輔酶的關(guān)系。2.掌握組織中酶蛋白及輔酶提取的方法。3.了解乳酸脫氫酶及同工酶的臨床意義。背景知識(shí)-酶的構(gòu)成1.單純酶(simpleenzyme):僅含有肽鏈的酶稱為單純酶2.綴合酶(conjugatedenzyme):由酶蛋白和輔助因子共同構(gòu)成的酶3.輔助因子(cofactor):分為輔酶和輔基綴合酶酶蛋白:決定反應(yīng)的特異性及催化機(jī)制輔助因子:決定反應(yīng)的性質(zhì)和反應(yīng)類型全酶輔酶或輔基轉(zhuǎn)移的基團(tuán)NAD+或NADP+氫原子和電子FMN或FAD氫原子和電子TPP醛基磷酸吡哆醛氨基輔酶A?;锼谻O2四氫葉酸一碳單位甲基鈷胺素/5'-脫氧腺苷鈷胺素甲基/相鄰碳原子上氫原子、烷基、羧基的互換背景知識(shí)-乳酸脫氫酶實(shí)驗(yàn)原理背景知識(shí)-乳酸脫氫酶
背景知識(shí)-乳酸脫氫酶同工酶(isozyme):催化相同的化學(xué)反應(yīng),但酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫學(xué)特點(diǎn)各不相同的一組酶。
背景知識(shí)-乳酸脫氫酶LDH同工酶紅細(xì)胞白細(xì)胞血清骨骼肌心肌肺腎肝脾LDH14312270731443210LDH2444934.70243444425LDH3123320.95335121140LDH41611.7160512720LDH5005.7790120565人體各組織器官LDH同工酶譜(活性%)
背景知識(shí)-乳酸脫氫酶
實(shí)驗(yàn)原理乳酸脫氫酶(Lactatedehydrogenase,LDH)
NADH+H+NAD+丙酮酸
COOHC=OCH3乳酸
COOHCHOHCH3kCN丙酮酸氰醇MBMBH2操作步驟-輔酶I溶液的制備
1/3大試管的肌肉勻漿沸水浴5min倒入研缽磨成細(xì)漿配平后離心3000rpm,5min收集上清轉(zhuǎn)入小試管輔酶Ⅰ操作步驟-乳酸脫氫酶蛋白提取法2小試管肌肉勻漿配平后離心3000rpm,8min收集上清置于一支大試管濾液即為酶蛋白提取液加半匙活性炭,充分混勻約3min操作步驟3.取三支試管,按下表加入試劑123乳酸脫氫酶蛋白提取液ml輔酶I提取液0.5%氰化鉀溶液5%乳酸鈉溶液(mL)0.01%亞甲蘭溶液蒸餾水1-10滴0.55滴11110滴0.55滴--110滴0.55滴1搖勻液體石蠟8滴8滴8滴酶蛋白輔酶I全酶14
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