血液檢測方法的確認(血站技術(shù)操作規(guī)程)

10血液檢測方法確實認總則染病原學(xué)標志物檢測、血型血清學(xué)檢測和酶學(xué)檢測。方法學(xué)包括ELISA試驗。由于以上方法學(xué)原理的不同認的一些法規(guī)和指南測方法確認的原則和步驟文件和法規(guī)的要求。范圍后的系統(tǒng)在試驗室的適用性和牢靠性。需確認的對象包括：試驗室首次引入的檢測方法，照試驗室從未使用過的試劑、儀器等。試驗室首次將某工程引入現(xiàn)用檢測方法，如HBsAg工程由A儀器檢測改為由B儀器檢測。假設(shè)多臺儀器〔一樣品牌和型號〕檢測同一個工程，應(yīng)對每一臺儀器的性能進展確認比較。輸血相關(guān)感染標志物檢測方法確實認等定性方法確實認可參照本章節(jié)內(nèi)容。確認的一般要求試驗操作的培訓(xùn)理，規(guī)格，試驗步驟，局限性，質(zhì)量掌握和安康安全信息。生產(chǎn)商應(yīng)對操作者進展培訓(xùn)，確保操作人員正確操作。試劑的預(yù)備批試劑，不能由其他試劑所替代或試驗室自己配制。儀器的預(yù)備參數(shù)進展修正，以到達試劑盒要求的試驗狀態(tài)。質(zhì)量掌握如可能，多試驗方法比較過程中，應(yīng)承受一樣質(zhì)控物。一些定性試驗的質(zhì)控結(jié)果。對此可以承受統(tǒng)計過程掌握方法〔C，用量化數(shù)據(jù)程中，應(yīng)確保過程處于受控狀態(tài)，否則必需重試驗。保持記錄保存檢測全過程的數(shù)據(jù)和結(jié)果，包括檢測的速度和使用的適宜性等。重復(fù)性試驗生產(chǎn)商供給的陰性陽性比照試驗1020次檢測。1次陰性陽性比照不符合生產(chǎn)商要求。否則試驗室必需終止試驗，詢問試劑生產(chǎn)商，查找緣由，實行訂正措施。方法周密性試驗試驗程序：在定性試驗中，假設(shè)能夠產(chǎn)生量化試驗結(jié)果〔如A試驗，應(yīng)承受接近臨界值的標本，對周密度進展估量。建議承受S/CO為2～4的標本，不適宜承受低值的陰性標本和高值陽性標本，由于此類標本距打算水平點即臨界值〔cutoff〕的分析濃度相距較遠。15%20%以內(nèi)。靈敏度及特異性試驗到量化的差異結(jié)果，推斷是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。標本的選擇清盤或力量驗證〔PT〕的標本可用于本試驗。參考血清盤是指經(jīng)過已經(jīng)確立了真實的血清學(xué)狀態(tài)，可追溯至經(jīng)典方法或臨床診斷結(jié)果。疫性疾病、螺旋體疾病、白細胞抗體、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性骨髓瘤疾病的流行率和病原學(xué)因子抗原譜的分布。因此，使用參考血清盤、確實認結(jié)果。PTPT材料為識別時，這種干擾尤其明顯。標本的數(shù)量結(jié)果為計數(shù)資料的試驗〔如定性試驗，一般而言，在試驗誤差掌握30份。否則可能影響試驗的統(tǒng)計學(xué)成效。標本的保存鮮。如需凍存，血清或血漿應(yīng)保存在-20℃的條件下。試驗標本的保存狀態(tài)、凍融次數(shù)、使用次數(shù)和時間應(yīng)盡量全都，避開標本產(chǎn)生偏差。如需要方法比較試驗，應(yīng)在一樣時間進展，最大限度減小由于標本放置時間不同產(chǎn)生的結(jié)果差異。數(shù)據(jù)的收集和整理據(jù)組中保存原始結(jié)果。數(shù)據(jù)的分析單一檢測方法靈敏性和特異性估量異性很簡潔計算。表Ｂ－1為反映一個定性試驗檢測真實血清學(xué)狀態(tài)標本的結(jié)果的2×2四格表資料。通過這組數(shù)據(jù)可以計算被估量的靈敏度、特異性。診斷結(jié)果方法結(jié)果陽性陰性總計陽性ABA+B陰性CDC+D診斷結(jié)果方法結(jié)果陽性陰性總計陽性ABA+B陰性CDC+D總計A+CB+DN靈敏度和特異性＝100%〔A/(A+C)〕＝100%〔D/(B+D)〕95%置信區(qū)間可通過二項分布計算。兩方法靈敏度和特異性的比較異性。完全隨機設(shè)計時，可承受完全隨機設(shè)計x2檢驗。兩方法承受McNemarx2檢驗。兩方法承受一樣的標本，得到兩個相關(guān)的靈敏度和特異性，x2或承受準確概率法檢驗。3.3.5.3。工作特征曲線法〔ROC曲線法〕進展比較。該法是近年來公認的評ROC曲線下的面積，確定和參考方法的特性。鑒于此項內(nèi)容不在本規(guī)程要求的范圍，試驗室人員如需要了解更多信息，可以查找相關(guān)資料。檢測的結(jié)果可以集合成表B－2。假設(shè)兩方法承受的標本不同，則2的方式整理數(shù)據(jù)。方法結(jié)果總標本數(shù)真實診斷結(jié)果12方法結(jié)果總標本數(shù)真實診斷結(jié)果12陽性陰性陽性陽性a=a+a1 2a1a2陽性陰性b=b+b1 2b1b2陰性陽性c=c+c1 2c1c2陰性陰性d=d+d1 2d1d2總標本數(shù)總標本數(shù)Nn1n211兩方法靈敏度差異估量兩方法靈敏度估量111=100%[(a1

+b)/n]112=100%[(a111

+c)/n]兩方法靈敏度差異估量1 1 12=100%[(b－b)/n1 1 22兩方法特異性差異估量兩方法特異性估量22222222

+d)/n]2=100%[(b]2

+d)/n]兩方法特異性差異估量12=100%[(c2－b2)/n2]不同檢測方法檢測結(jié)果的統(tǒng)計分析通常承受配對設(shè)計四格表x2檢驗和Kappa檢驗評價兩個定性檢測方法性能的差異或全都性。假設(shè)標本的血清學(xué)狀態(tài)，或者已存在特設(shè)或隱含的金標準結(jié)果，x2McNemarx2檢驗評價兩方法結(jié)果的不全都性，Kappa檢驗評價兩方法結(jié)果的全都性。Kappa兩方法的符合性指標也能夠量化兩種檢測方法結(jié)果的全都程度。配對設(shè)計四格表x2檢驗rx2檢驗：對于隱含金2×2McNemarx2檢驗，推斷未考慮兩方法檢測結(jié)果全都的狀況。當n很大，兩方法全都率較高，McNemarx2檢驗具有統(tǒng)計學(xué)意義，但實際意義往往不大。通常適用于b+c≥40。bc22 1bcbc2留意當bc22

bc假設(shè)b+c＜25，應(yīng)承受準確概率法檢驗。Kappa檢驗：Kappa統(tǒng)計量是Cohen1960年提出的一種校正機遇之后衡量兩種檢測方法全都性的指標。Kappa〔常縮寫成K〕全不全都；K＝0K＝1，K＞0.75K在0.4～0.75之間，說明全都性良好；假設(shè)K＜0.4，說明全都性較差。KKappa

PPa e1Pe實際觀看全都數(shù)Pa 總觀看例數(shù)期望全都數(shù)Pe 總觀看例數(shù)PP1P/N1P2a a eKUKSK兩種檢測方法結(jié)果的符合性估量符合性進展估量。21陽性陰性總計陽性aba+b陰性總計ca+cdb+dc+d3.3.5.3.4符合性＝100%[(a+d)/n]ALT檢測方法確實認以下內(nèi)容適用于ALT速率法確認。其它定量檢測方法確認可參照本規(guī)程。確認的一般要求試驗操作的培訓(xùn)理，規(guī)格，試驗步驟，局限性，質(zhì)量掌握和安康安全信息。生產(chǎn)商應(yīng)對操作者進展培訓(xùn)，確保操作人員正確操作被確認系統(tǒng)。試劑的預(yù)備應(yīng)選擇國家批準生產(chǎn)的ALT診斷試劑。嚴格遵從生產(chǎn)商的說明書進行操作。對于正在進展確認的試劑，全部組份應(yīng)來源于同一批試劑，不能由其他試劑所替代或試驗室自己配制。儀器的預(yù)備能與試劑盒說明書的要求有差異，可以征得試劑生產(chǎn)商幫助和同意，狀態(tài)。質(zhì)量掌握應(yīng)建立有效的質(zhì)量掌握程序。選擇質(zhì)量、來源穩(wěn)定，無基質(zhì)效應(yīng)的質(zhì)控品作為室內(nèi)質(zhì)控物。確認試驗承受的標本不能等同于質(zhì)控品使用。應(yīng)確保試驗過程處于受控狀態(tài)，否則必需重試驗。保持試驗記錄保存檢測全過程的數(shù)據(jù)和結(jié)果，包括檢測的速度和使用的適宜性等。正確度的估量正確度估量最常用的方法：方法比較試驗：承受的檢測方法和參與過力量驗證的檢測方法或公認的參考方法，同時檢測一批不同ALT濃度的標本。通過結(jié)果的差異了解系統(tǒng)引入后的偏倚是否在允許誤差范圍內(nèi)。通常將〔y〔x該試驗也稱為方法學(xué)比較試驗。成績可以證明的檢測方法檢測結(jié)果的準確性。以下為方法比較試驗的設(shè)計和數(shù)據(jù)分析過程。標本的選擇標本數(shù)量：試驗標本數(shù)至少40份，更多的標本量可以使試驗結(jié)果更加牢靠。每份標本應(yīng)有足以完成雙份測定的量。假設(shè)不夠，可以將分析物濃度接近的兩份標本混合使用。50％試驗標本的分11析物濃度不在參考范圍內(nèi)。試驗程序511234567828、7、6、5、4、3、2、12小時內(nèi)完成。數(shù)據(jù)分析初步推斷：剔除有明顯人為誤差的結(jié)果。內(nèi)部質(zhì)控失控時，必需重檢測。離群點的剔除：設(shè)參考方法測定結(jié)果為x值，第一次測定值為x1x2y值，第一次測定值為y1，其次次測定值為y2。= x x ；△= x x ；△= y yi i1 i2 i i1 i2計算x

xi；n

yy in計算4x，4y以4x和4y為離群限值，假設(shè)沒有超出，連續(xù)方法間配對結(jié)果離群點檢驗；否則連續(xù)相對差異檢驗，進展如下最終推斷計算x”i

xixi

i

yiyi計算x”

x” in

y” in4x”4y為推斷離群點限值方法間配對結(jié)果離群點的去除12。2n E2ijE i j2n124E2個，應(yīng)補充試驗數(shù)據(jù)。初步推斷線性回歸狀況x－y散點圖以參考方法全部結(jié)果為xy以參考方法每個標本兩次檢測結(jié)果的均值為x兩次檢測結(jié)果的均值為y值，繪制散點圖。比較兩圖有無明顯差異。如無明顯差異，說明方法比較試驗的隨機誤差比照較結(jié)果影響不大。x均值〔x－y〕均值差散點圖以參考方法每個標本兩次檢測的均值為x〔x－y〕為y值，繪制散點圖。觀看均值差隨x值增大的變化。假設(shè)點的分布表現(xiàn)出肯定的趨勢，預(yù)示著兩方法之間系統(tǒng)誤差的存在。標本分析物濃度分布檢驗試驗點的離散度和對應(yīng)分析物濃度分布的寬度都會影響r值的大小。一般假設(shè)≥0.9720.95x線性回歸計算每份標本用兩個方法進展兩次測定。將參考方法的x1和比較方法的y1對應(yīng)，參考方法的x2和比較方法的y2對應(yīng)，組成成對數(shù)據(jù)。采用全部成對數(shù)據(jù)進展直線回歸。得回歸方程

ybxa

。抱負狀態(tài)下yx

b＝1a＝0b≠1a≠0，說明兩方法間存在系統(tǒng)誤Y方法引入后相對于X方法在臨床打算水平濃度c處的系統(tǒng)誤差。SEb)xca可承受標準r≥0.975或r2≥0.95。醫(yī)學(xué)打算水平處方法引入的系統(tǒng)誤差小于CLIA’881/2。周密度的估量(s和變異系數(shù)。周密度的好壞通常承受不周密度表示，不周密度通常以CV表達。應(yīng)在明確標本的來源、濃度、試驗周期的前提下，確定檢測方法的不周密度。標本的選擇標本分析物濃度范圍：鑒于血站血液檢測試驗室檢測對象為安康的獻血人群，可承受中、低兩個ALT濃度的標本進展周密度試驗。標本的基質(zhì)應(yīng)近似于人源標本。標本的保存：周密度試驗需要在假設(shè)干天內(nèi)完成，對于冰凍保存的標本和凍干復(fù)溶標本，應(yīng)嚴格掌握操作手法均一、復(fù)溶時間、加液的準確性、混勻的力度等，力求試驗標本的穩(wěn)定、均一。試驗程序?qū)γ總€水平的標本分別做批內(nèi)和天間的重復(fù)測定。周密度試驗與常規(guī)標本檢測同時進展，不行替代試驗的質(zhì)量掌握過程。批內(nèi)試驗：將試驗標本插入常規(guī)檢測標本一同檢測。一批內(nèi)20次。對應(yīng)質(zhì)控結(jié)果為受控狀態(tài)。批間試驗：每天對試驗標本做1次檢測，連做20天。每天對應(yīng)質(zhì)控結(jié)果為受控狀態(tài)。數(shù)據(jù)分析標準差計算批內(nèi)和天間標準差均可承受以下公式計算xxxn1變異系數(shù)計算批內(nèi)和天間變異系數(shù)均可承受以下公式計算CV%s×100x可承受標準參照Westgard和Ceroblewski等提出高效檢驗對周密度要求的觀點，CLIA1/3。對于ALT試驗，CLIAT±20%ALTCV5%，批間不周密CV6.7%。檢測可報告范圍檢測可報告范圍確認試驗通常承受配制包含不同分析物濃度的系列變量進展線性回歸?；貧w直線應(yīng)當為過原點，斜率為1的直線。直線所達的限值即為結(jié)果的檢測范圍。標本的選擇5L，4L+1H，3L+2，2L+3，1L+4H，5H的比例配制混合，形成系列血清。試驗程序4次。數(shù)據(jù)分析剔除特別點：剔除明顯特別的檢測結(jié)果，并補充數(shù)據(jù)。計算預(yù)期值：計算低值和高值標本的結(jié)果均值。依據(jù)稀釋關(guān)系，計算每個標本的分析物理論濃度，即為預(yù)期值。預(yù)期值－實測值的線性回歸：每個標本有4個重復(fù)試驗的實測值。每個實測值與其預(yù)期值相對應(yīng)，形成成對數(shù)據(jù)。以x表示預(yù)期ybxaybxaybxa初步推斷：抱負狀態(tài)下 ybxa中很難到達。因此假設(shè)b在1.00±0.03a近于0，則可直接推斷該方法可報告范圍在試驗涉及濃度范圍內(nèi)。假設(shè)b不接近1a較大，應(yīng)具體分析高濃度還是低濃度的預(yù)期值和實測值存在較大偏倚?？梢陨崛ツ辰M數(shù)據(jù)，重進展回歸計算。假設(shè)縮小范圍后，b和a能夠滿足要求，即說明縮小的濃度范圍即是實際的檢測范圍?？梢酝ㄟ^以下統(tǒng)計假設(shè)檢驗進展推斷。0 a0t檢驗H：a=0；H：a≠0；0 ((yy)n22s y.x11nx2(xx)2sa計算t

sy.xaa0

，n2a sa0 b1t檢驗H：b=1；H：b≠1；0 ((yy)n22s xxx2計算sb計算t

s /y.xbb1

，n2b sb正常值參考范圍確認201個結(jié)果不在試劑盒供給的參考范圍內(nèi)。ABORhD抗原檢測方法確實認以下內(nèi)容適用于獻血者血型血清學(xué)方法確認。確認的一般要求試驗操作的培訓(xùn)理，規(guī)格，試驗步驟，局限性，質(zhì)量掌握和安康安全信息。生產(chǎn)商應(yīng)對操作者進展培訓(xùn)，確保操作人員正確操作。試劑的預(yù)備〔即使另一種試劑為同一廠家生產(chǎn)或試驗室自己配制。試驗室對試劑自行修改，如稀釋試劑，應(yīng)取得生產(chǎn)商的認可，由于任何修改可以導(dǎo)致對試劑的質(zhì)量保證失效，并產(chǎn)生相關(guān)責(zé)任。儀器的預(yù)備作參數(shù)進展修正，以到達試劑盒要求的試驗狀態(tài)。質(zhì)量掌握體的質(zhì)控物反響正確，否則必需重試驗。保持試驗記錄保存檢測全過程的數(shù)據(jù)和結(jié)果，包括檢測的速度和使用的適宜性等。平行確認試驗法進展比較，確認方法的常規(guī)使用狀態(tài)，時間最短1周，操作程序和結(jié)果應(yīng)文件化。應(yīng)定期進展關(guān)鍵標本〔弱抗原或弱抗體標本〕重復(fù)試驗，確認方法的穩(wěn)定性和耐用性。確認