病原學(xué)檢測法

病原學(xué)檢測法第1頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第一篇微生物學(xué)基礎(chǔ)第8章微生物感染的病原學(xué)檢查法LaboratoryDiagnosis第2頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一教學(xué)大綱掌握內(nèi)容細(xì)菌細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查程序直接涂片鏡檢、分離培養(yǎng)和鑒定、生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)病原菌抗原成分、核酸及其他成分的檢測方法血清學(xué)診斷原則及常用的方法病毒病毒分離鑒定方法及病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中的增殖的指標(biāo)病毒數(shù)量與感染性的測定（TCID50、PFU的原理、應(yīng)用）病毒成份的檢測（抗原、核酸檢測）病毒抗體檢測常用方法的原理及應(yīng)用、雙份血清診斷意義熟悉內(nèi)容標(biāo)本的采集與送檢原則革蘭染色和抗酸染色的原理細(xì)菌藥敏試驗(yàn)真菌感染的微生物學(xué)檢查法了解內(nèi)容組織培養(yǎng)；聚合酶鏈反應(yīng)、蛋白印跡技術(shù)的原理和應(yīng)用第3頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一OutlineLaboratorydiagnosisforbacterialinfectionsMorphological--microscopicMolecularSerologicalLaboratorydiagnosisforviralinfectionsMorphological--electronmicroscopicIsolationMolecular:nucleicacidsandproteinsSerologicalLaboratorydiagnosisforfungalinfectionsMorphological--microscopicIsolation第4頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第5頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一AssaysMorphologicalassaysLightorelectronmicroscopiesIsolationanddifferentiationSerologicalassaysAntigen-antibodyassaysMolecularassaysMicroorganism’sgene(DNA&RNA)第6頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一PrinciplesforSpecimenCollectionSterilemanipulation,avoidcontaminationObtainaspecimen

fromtheinfectedsiteaccordingtothediseasephasebeforeadministratingantibioticsDoubleseraforantibodydetections,acuteandrecoveryphaseeachPositiveifthetiterofthelaterspecimenisabove4XtothefirstspecimenTransport,andstorecorrectlyassoonaspossibleStoreat-4oCformostbacterialspecimens,butkeepwarmforNeisseriameningitidisandNeisseriagonorrhoeaeStoreat-4oC~-70oCforviralspecimens第7頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一LaboratoryDiagnosisforBacterialInfections

Morphological

ProteinandNucleicacids

Antibody第8頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一BacteriologicalDiagnosisIdentifyingtheorganismMorphologicalIsolation&cultureBiochemicalreactionSerologicalassaysPathogenesis&antibioticssusceptibilityAnimalexperimentVirulencetestantibioticssusceptibility第9頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一MorphologicalNon-stainedmicroscopicobservationDark-fieldmicroscopyObservingthemovementoflivebacteriaStainedmicroscopicobservationsGramstainAcid-faststainFluorescencestain第10頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第11頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第12頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第13頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第14頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第15頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第16頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一Isolation&Culture:ColonySizeShapeColorSurfacefeaturesSmooth-RoughTransparencyHemolysis第17頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一BiochemicalReactions

SugarFermentationH2STestCitrateutilization第18頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一SerologicalAssaysDetectionantibodyinthepatient’sserumAcurrentinfectionshouldbeIgMpositiveA4-foldorgreaterriseonantibodytiterbetweentheacuteserumsampleandtheconvalescentserumsampleMajordrawbacksAsingleIgGantibodytiterisdifficulttointerpretbecauseitisunclearwhetheritrepresentsacurrentorapreviousinfectiontheconvalescentsampleisusuallytaken10-14daysaftertheacutesample.Bythistime,thepatienthasoftenrecoveredandthediagnosisbecomesaretrospectiveoneSomeexceptionsIncertaindiseases,asingletiterofsufficientmagnitudecanbeusedaspresumptiveevidenceofacurrentinfection第19頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一AnimalexperimentAnimals

Mouse

GuineaPig

RabbitDogMonkeyInoculationroutesIntradermalSubcutaneousIntraperitoneal

Intravenous

Intracranial/intracerebralIntraspinalIntranasalLavage第20頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一VirulenceTestMedianlethaldose,LD50Medianinfectivedose,ID50ElekPlateDiphtherotoxinCorynebacteriumdiphtheriae

EnterotoxinenterotoxigenicE.coli第21頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一AntibioticSusceptibilityTestMethod第22頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一MIC&MBCMinimumInhibitoryConcentration，MICMinimumBactericidalConcentration，MBCBactericidaldrugsusuallyhaveanMBCequalorverysimilartotheMICBacteriostaticdrugsusuallyhaveanMBCsignificantlyhigherthantheMIC第23頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第24頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一BacterialProteins,DNA&RNAAntigens(Proteins)KnownantibodiesAgglutination,coagulation,precipitation,ELISA,Immunofluorescence,radioimmunoassayDNA&RNAPCRNucleicacidhybridization第25頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一DetectionofBacterialAntigensPrecipitationtestCoagglutinationtestImmunoflorecence,IFMcAbtechnique第26頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第27頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第28頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第29頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一BacterialDNA&RNAPCRDNAprobe&hybridizationDNAhybridization(southernblot)PlasmidfingerprintanalysisRestrictmultimorphologicanalysis第30頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第31頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第32頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一PCR第33頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第34頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一GeneChip/microarray第35頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一DiagnosisStrategyforBacterialInfection第36頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一LaboratoryDiagnosisforViralInfection

MorphologicalIsolation&CultureProtein&NucleicacidsSerological第37頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一MorphologicalElectronmicroscopy,EMImmunoelectronmicroscopy,IEMLightMicroscopyInclusionbodyNegribody第38頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第39頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一IsolationandCultureAnimalinoculationChickeneggculture:9~14daysTissuecultureOrgancultureTissuecultureCellculture第40頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一Cellculture第41頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第42頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一TypeofCulturedCellsPrimarycellculturePassage2-3generationsDiploidcellculture2-foldchromosomes,Passage50~100generations,safe,canbeusedforvaccinemanufactureContinuouscelllinecultureMutantdiploidcells,mostlytumorcells,easytopassageandmaintainNotsensitiveasdiploidcells,mayhaveendogenousviruses,cannotbeusedforvaccinemanufacture第43頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一IndicationsofViralPropagationCytopathiceffect,CPEHemadsorptionHemagglutinationViralinterferenceNeutralizationtest,NT第44頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一CytopathicEffect,CPE第45頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一ViralQuantityDeterminationTCID5050%tissuecultureinfectiousdoseDeterminetheinfectivityoftheexaminedvirusesPFUPlaqueformationpfu/mlPrecisely

quantitatethenumberofthelivingviralparticles第46頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第47頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一Plaque第48頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一Differencesbetweenviralparticle(VP),plaqueformationunit(PFU)Viralparticles(VPs)

representthetotalnumberofviralparticles(liveanddeadcombined).Duetovariationsinviruspreparationstheratiooflive/deadvariessignificantlyandtherefore,VPdoesnotreflecttheamountofactivevirusinthepreparationPFU(plaqueformationunit)

representsthenumberofinfectiousorliveviruses.ItreflectstheamountofworkingvirusesinthepreparationFormostviruspreps,theVP/PFUratiois20:1to50:1Whichonebetterreflectstheamountofactivevirusused?UsingVP(viralparticles)astheunitwillresultinsignificantvariationsintheamountofactuallivevirusesused,andusingIFUorPFUastheviralunitwillgivemoreconsistentoutcomes.第49頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一病毒的數(shù)量與感染性測定蝕斑測定：準(zhǔn)確滴定病毒感染性的方法蝕斑（Plaque）每個(gè)蝕斑是由一個(gè)有感染性病毒顆粒形成，稱為蝕斑形成單位（Plaqueformingunit，PFU）。病毒的感染量用PFU/ml表示50%感染量（ID50）或50%組織細(xì)胞感染量（TCID50）不能準(zhǔn)確地測定感染性病毒顆粒的數(shù)量第50頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一ProteinsandNucleicAcidsProteins(antigens)Fluoresece-labeled,enzyme-labeled(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)andradio-labeledanitbodiesViralDNAorRNAGenechipDNAchip/cDNAMicroarray第51頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一Virus-specificAntibodiesNeutralizationtest,NTHemagglutinationinhibitiontest,HIComplementfixation,CFELISAWesternblot第52頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第53頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一ELISAforHIVantibody

MicroplateELISAforHIVantibody:colouredwellsindicatereactivity第54頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一第55頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一DiagnosisStrategyforViralInfection第56頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一RapidDiagnosisforViralInfectionMorphologicalEM&IEM,occasionallyLightMicroscopy:inclusionbodyViralantigensImmunofluorescenceRadioimmunoassaysELISASpecificantibodies:IgMNucleicacids:PCR第57頁，共62頁，2023年，2月20日，星期一LaboratoryDiagnosisforFungalinfect