醫(yī)學(xué)標(biāo)書范文3

河南省科技攻關(guān)方案項目申請書姓名：JiangDongbao項目名稱：FGFR4表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制的爭辯單位：鄭州高校聯(lián)系電話：填報說明請依據(jù)自己的專業(yè)及爭辯方向，針對某具體臨床問題，結(jié)合所學(xué)習(xí)臨床科研方法的一種或幾種寫出一份科研設(shè)計。完成后，文件以個人姓名命名，發(fā)至：1736601711@?？己顺晒涝O(shè)計書優(yōu)略評定。截至日期2013年11月8日。一、項目的立項依據(jù)和意義（說明國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)進(jìn)展水平和趨勢等）結(jié)直腸癌（colorectalcancer，CRC）是起源于結(jié)直腸黏膜上皮的惡性腫瘤，是臨床最常見的惡性腫瘤之一。我國每年結(jié)直腸癌新發(fā)病例超過25萬，死亡病例約14萬，新發(fā)與死亡病例均占全世界同期結(jié)直腸癌病例的20%[1]。局部進(jìn)展期結(jié)直腸癌5年癌癥相關(guān)生存率為70%，而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的晚期結(jié)直腸癌5年生存率僅為12%，且生活質(zhì)量低。目前結(jié)直腸癌新掛念化療、掛念化療、姑息化療方案很多，如ECF、DCF、奧沙利鉑+氟尿嘧啶、順鉑+氟尿嘧啶等，但其最核心的藥物是氟尿嘧啶，在此基礎(chǔ)上聯(lián)合其他化療藥物。近年來，靶向藥物在結(jié)直腸癌治療領(lǐng)域的爭辯和應(yīng)用成為一大熱點(diǎn)，作用于EGFR的愛必妥、作用于VEGF的貝伐單抗、針對Her-2的赫賽汀等已進(jìn)入胃癌治療的臨床試驗(yàn)中。成纖維生長因子受體（FGFRs）是一個多基因家族,屬免疫球蛋白基因超家族成員,是分布在多種細(xì)胞上的膜蛋白，F(xiàn)GFR家族成員有FGFR1、FGFR2、FGFR3以及FGFR4。它們的特點(diǎn)是在胞膜外含有3個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域，一個疏水的跨膜結(jié)構(gòu)，胞漿內(nèi)含有兩個呈串聯(lián)結(jié)構(gòu)的酪氨酸激酶功能區(qū)。FGFR1～3在體內(nèi)是廣泛分布的,而FGFR4主要在發(fā)育早期大量表達(dá),而且主要分布在視網(wǎng)膜和腎臟。編碼FGFR4蛋白的FGFR4基因位于5號染色體，5q35.1-qter，基因編號為2264。FGFR4蛋白是一類具有自身磷酸化活性的跨膜酪氨酸激酶受體中的一種,在胚胎發(fā)育、組織修復(fù)和血管形成等進(jìn)程中起著格外重要的作用[2,3]。但FGFR4在惡性腫瘤中的爭辯相對較少，Pubmed檢索該分子在胃癌中的爭辯僅見幾篇報道，而且爭辯尚不深化。但有學(xué)者認(rèn)為，F(xiàn)GFR家族是在惡性腫瘤診治方面是一個新興的領(lǐng)域，有寬敞的應(yīng)用前景[4]。FGFR4在常見的惡性腫瘤如乳腺癌、胰腺癌、橫紋肌肉瘤及腎細(xì)胞癌中均呈高表達(dá)[5-7]。MeijerD等報道FGFR4表達(dá)是復(fù)發(fā)性乳腺癌患者的獨(dú)立的預(yù)后因素[8]；Milano等爭辯亦認(rèn)為FGFR4可以猜想三苯氧胺治療乳腺癌的療效[9]。Gowardhan等[10]爭辯報道，與良性增生相比，F(xiàn)GFR4在前列腺癌中的表達(dá)顯著上調(diào)；FGFR4的表達(dá)與Gleason評分相關(guān)；生存分析顯示，F(xiàn)GFR4過表達(dá)與較差的預(yù)后相關(guān)，無病生存期縮短。HoHK等對57對肝細(xì)胞肝癌組織及對應(yīng)的正常組織進(jìn)行realtimePCR定量檢測FGFR4在mRNA水平的表達(dá)，統(tǒng)計結(jié)果顯示，F(xiàn)GFR4的表達(dá)與患者的主要臨床病理資料無相關(guān)性，可能是由于樣本量較小[11]。Streit等[12]通過免疫組化技術(shù)對137例惡性黑色素瘤組織標(biāo)本進(jìn)行FGFR4蛋白水平表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，F(xiàn)GFR4在惡性黑色素瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)率為45%，F(xiàn)GFR4的表達(dá)與腫瘤臨床分期、微潰瘍形成、原發(fā)灶的數(shù)目、總生存期及無病生存期均有明顯相關(guān)性，作者認(rèn)為FGFR4蛋白的表達(dá)可作為惡性黑色素瘤進(jìn)展的潛在指標(biāo)。自2002年，Bange等[13]發(fā)覺了FGFR4Gly388Arg這一胚系多態(tài)性后，該SNP現(xiàn)已成為了一個爭辯的熱點(diǎn)。該SNP是位于FGFR4第9外顯子388密碼子上，堿基G轉(zhuǎn)變?yōu)锳，導(dǎo)致了FGFR4的氨基酸序列發(fā)生了變化，即388位氨基酸由甘氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榫彼?，該位點(diǎn)位于FGFR4的高度保守序列中。據(jù)報道，F(xiàn)GFR4Arg388基因型并不影響腫瘤的發(fā)生過程，由于在乳腺癌患者及正常對比中，該SNP在兩組中的分布比例大致相同，F(xiàn)GFR4Arg388基因型均占50%左右。但在淋巴結(jié)陽性的乳腺癌患者中，F(xiàn)GFR4Arg388基因型與更短的無病生存期和總生存期有關(guān)[14]。有報道顯示，攜帶有Arg388等位基因的肺癌患者腫瘤發(fā)病年齡更早，差的臨床分期的比例更高，生存期更短，所以FGFR4Gly388Arg可能猜想肺癌的預(yù)后[15]。這些發(fā)覺強(qiáng)調(diào)了該SNP位點(diǎn)具有臨床意義，這一推斷已在頭頸部癌、前列腺癌、肺癌等惡性腫瘤中得以證明[3,16-18]。當(dāng)然也有一些文獻(xiàn)認(rèn)為該SNP無預(yù)后價值。近來，一項隨機(jī)的II期試驗(yàn)爭辯中，257例T2-4/N0-2/M0原發(fā)性乳腺癌患者接受了阿霉素和環(huán)磷酰胺（AC）或阿霉素和培美曲唑（AP），序貫多西他賽（Doc）作為新掛念化療，多因素分析顯示，F(xiàn)GFR4Arg388是AC-Doc作為乳腺癌患者新掛念治療方案病理性完全緩解的獨(dú)立預(yù)后因素[19]。Sugiyama等發(fā)覺了MT1-MMP/FGFR4這個復(fù)合物，其中FGFR4R388等位基因可通過削減溶酶體對MT1-MMP的降解而增加對膠原蛋白的侵襲；通過siRNA下調(diào)MT1-MMP或FGFR4-R388均可阻擋細(xì)胞侵襲和生長[20]。近來一項meta分析顯示，F(xiàn)GFR4Gly388Arg多態(tài)性與前列腺癌的進(jìn)展相關(guān)，可作為前列腺癌的進(jìn)展的一個分子標(biāo)記[21]。在目前發(fā)覺的20余種成纖維生長因子（FGF）中，能與FGFR4結(jié)合的生長因子有FGF1,2,4,6,8,9,16,17,18和19。其中只有FGF19僅對FGFR4特異性結(jié)合[22]。且無論有無β-Klotho存在，F(xiàn)GF19均可與FGFR4結(jié)合而引起后續(xù)的生物學(xué)效應(yīng)[23]。FGFR4的激活是FGF19促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)肝癌形成的機(jī)制[24]FGFR4在在結(jié)直腸癌中的爭辯甚少，故而本課題重點(diǎn)探討了FGFR4的表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞株的生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制。本爭辯為了解FGFR4對結(jié)直腸癌細(xì)胞株生物學(xué)特性的影響，進(jìn)行了體外功能試驗(yàn)，通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)下調(diào)FGFR4的表達(dá)，然后進(jìn)行了一系列功能試驗(yàn)，包括增殖試驗(yàn)、克隆試驗(yàn)、侵襲試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期的變化，westernblot檢測凋亡及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白在干擾前后的變化，初步探討FGFR4影響結(jié)直腸癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的機(jī)制。1.InternationalAgencyforResearchOnCancer.WorldHealthOrganization.GLOBOCAN2012:EstimatedCancerIncidence,MortalityandPrevalenceWorldwidein2012[EB/OL][2014-12-5].2.EswarakumarVP,LaxI,SchlessingerJ.Cellularsignalingbyfibroblastgrowthfactorreceptors.CytokineGrowthFactorRev2005;16:139–49.3.WangJ,StocktonDW,IttmannM.Thefibroblastgrowthfactorreceptor-4Arg388alleleisassociatedwithprostatecancerinitiationandprogression.ClinCancerRes2004;10:6169–78.4.KatohM.GeneticalterationsofFGFreceptors:anemergingfieldinclinicalcancerdiagnosticsandtherapeutics.\o"Expertreviewofanticancertherapy."ExpertRevAnticancerTher2010;10:1375-9.5.JacquemierJ,AdelaideJ,ParcP,etal.ExpressionoftheFGFR1geneinhumanbreastcarcinomacells.IntJCancer1994;59:373-86.LeungHY,GullickWJ,LemoineNR.Expressionandfunctionalactivityoffibroblastgrowthfactorsandtheirreceptorsinhumanpancreaticcancer.IntJCancer1994;59:667-75.7.TakahashiA,SasakiH,KimSJ,etal.Identificationofreceptorgenesinrenalcellcarcinomaassociatedwithangiogenesisbydifferentialhybridizationtechnique.BiochemBiophysResCommun1999;257:855-9.8.MeijerD,SieuwertsAM,LookMP,etal.Fibroblastgrowthfactorreceptor4predictsfailureontamoxifentherapyinpatientswithrecurrentbreastcancer.\o"Endocrine-relatedcancer."EndocrRelatCancer.2008;15:101-11.9.MilanoA,DalLagoL,SotiriouC,etal.Whatcliniciansneedtoknowaboutantioestrogenresistanceinbreastcancertherapy.EuropeanJournalofCancer2006;42:2692–705.10.GowardhanB,DouglasDA,MathersME,etal.Evaluationofthefibroblastgrowthfactorsystemasapotentialtargetfortherapyinhumanprostatecancer.\o"Britishjournalofcancer."BrJCancer.2005;92:320-7.11.HoHK,PokS,StreitS,etal.Fibroblastgrowthfactorreceptor4regulatesproliferation,anti-apoptosisandalpha-fetoproteinsecretionduringhepatocellularcarcinomaprogressionandrepresentsapotentialtargetfortherapeuticintervention.JHepatol.2009;50:118-27.12.StreitS,MestelDS,SchmidtM,FGFR4Arg388allelecorrelateswithtumourthicknessandFGFR4proteinexpressionwithsurvivalofmelanomapatients.\o"Britishjournalofcancer."BrJCancer.2006;94:1879-86.13.BangeJ,PrechtlD,CheburkinY,etal.CancerprogressionandtumorcellmotilityareassociatedwiththeFGFR4Arg(388)allele.CancerRes2002;62:840-47.14.ThussbasC,NahrigJ,StreitS,etal.FGFR4Arg388alleleisassociatedwithresistancetoadjuvanttherapyinprimarybreastcancer.\o"Journalofclinicaloncology:officialjournaloftheAmericanSocietyofClinicalOncology."JClinOncol2006;24:3747-55.15.SpinolaM,LeoniV,PignatielloC,etal.FunctionalFGFR4Gly388Argpolymorphismpredictsprognosisinlungadenocarcinomapatients.JClinOncol2005;23:7307-11.16.MaZ,TsuchiyaN,YuasaT,etal.Polymorphismsoffibroblastgrowthfactorreceptor4haveassociationwiththedevelopmentofprostatecancerandbenignprostatichyperplasiaandtheprogressionofprostatecancerinaJapanesepopulation.IntJCancer2008;123:2574-9.17.FalvellaFS,FrullantiE,GalvanA,etal.FGFR4Gly388Argpolymorphismmayaffecttheclinicalstageofpatientswithlungcancerbymodulatingthetranscriptionalprofileofnormallung.IntJCancer2009;124:2880-5.18.TanumaJ,IzumoT,HiranoM,etal.FGFR4polymorphism,TP53mutation,andtheircombinationsareprognosticfactorsfororalsquamouscellcarcinoma.OncolRep2010;23:739-44.19.MarméF,WerftW,BennerA，etal.FGFR4Arg388genotypeisassociatedwithpathologicalcompleteresponsetoneoadjuvantchemotherapyforprimarybreastcancer.AnnOncol2010;21:1636-42.20.SugiyamaN,VarjosaloM,MellerP,etal.Fibroblastgrowthfactorreceptor4regulatestumorinvasionbycouplingfibroblastgrowthfactorsignalingtoextracellularmatrixdegradation.\o"Cancerresearch."CancerRes.2010;70:7851-61.21.XuB,TongN,ChenSQ,etal.FGFR4Gly388Argpolymorphismcontributestoprostatecancerdevelopmentandprogression:Ameta-analysisof2618casesand2305controls.\o"BMCcancer."BMCCancer2011;1:84.22.XieMH,HolcombI,DeuelB,DowdP,HuangA,VagtsA,FosterJ,LiangJ,BrushJ,GuQ,HillanK,GoddardA,etal.FGF-19,anovelfibroblastgrowthfactorwithuniquespecificityforFGFR4.Cytokine1999;11:729–35.23.Wu

X,

Ge

H,

Lemon

B,

et

al.

Selective

activation

of

FGFR4

by

an

FGF19

variant

does

not

improve

glucose

metabolism

in

ob/ob

mice.

Proceedings

of

the

National

24.XinleWu，HongfeiGe，BryanLemon,etal.FGF19-inducedHepatocyteProliferationIsMediatedthroughFGFR4Activation.Journalofbiologicalchemistry2010;285:5165-70.二、項目創(chuàng)新點(diǎn)、主要爭辯開發(fā)內(nèi)容及目標(biāo)（實(shí)施方案、技術(shù)關(guān)鍵、技術(shù)路線和技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)等）1.實(shí)施方案（1）設(shè)計4個FGFR4RNAi靶點(diǎn)構(gòu)建到慢病毒載體，進(jìn)而小量包裝秤病毒顆粒。然后感染SW620和HCT116結(jié)直腸癌，通過定量PCR和Westernblot法檢測FGFR4在mRNA和蛋白水平的表達(dá)，篩選出干擾效果最佳的siRNA，進(jìn)行大量包裝，形成FGFR4siRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株，F(xiàn)GFR4持續(xù)低表達(dá)；構(gòu)建FGFR4過表達(dá)慢病毒載體，進(jìn)而包裝成病毒顆粒,然后感染結(jié)直腸癌細(xì)胞株，形成FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株，F(xiàn)GFR4持續(xù)高表達(dá)，以備后續(xù)功能試驗(yàn)。2.對FGFR4siRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株和FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株，分別以各自未行處理的細(xì)胞株作為對比，進(jìn)行一系列的體外功能試驗(yàn)，以評價FGFR4的上調(diào)和下調(diào)對結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，包括增殖試驗(yàn)、克隆試驗(yàn)、侵襲試驗(yàn)、凋亡試驗(yàn)及細(xì)胞周期的變化；同時在分子水平進(jìn)行Westernblot檢測，以顯示不同處理后，細(xì)胞增殖、侵襲、凋亡及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，如MMP-2、p27、CyclinD1及Bcl-xl等。3.分別將FGFR4siRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株、FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株和相應(yīng)的未處理的結(jié)直腸癌細(xì)胞株皮下注射至裸小鼠（nu/nu）背部,構(gòu)建成裸小鼠結(jié)直腸癌模型。接種6-8周后，觀測不同處理組成瘤體積、大小等增殖指標(biāo)的變化；對裸小鼠結(jié)直腸癌組織行免疫組化檢測，以了解不同處理組腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性相關(guān)分子表達(dá)的變化。2．爭辯方法和爭辯手段：1.標(biāo)原來源：結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116、SW620、DLD1、SW116、LS47等均購自上海中科院細(xì)胞所或ATCC，按說明書培育，利用DMEM培育基、Gibico美洲胎牛血清、100IU/ml青霉素及100ug/ml鏈霉素等培育細(xì)胞。BALB/c（nu-nu）裸小鼠擬購自科學(xué)院上海藥物爭辯所，合格證編號：滬動合證字122號；日齡：28-32天；體重16-20；飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境中。用于FGFR4RNAi和過表達(dá)試驗(yàn)的慢病毒載體擬購自上?；鶆P公司。2．利用軟件設(shè)計3-4個FGFR4RNAi靶點(diǎn)，構(gòu)建到慢病毒載體上，進(jìn)而包裝成病毒顆粒，然后感染FGFR4高表達(dá)的結(jié)直腸癌細(xì)胞株，經(jīng)RT-PCR和Westernblot驗(yàn)證干擾效率，制備成FGFR4RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。同樣，運(yùn)用慢病毒載體構(gòu)建FGFR4過表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株。3.利用流式細(xì)胞儀、CCK-8及侵襲小室等對FGFR4RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)株和FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株進(jìn)行體外功能試驗(yàn)，包括增殖試驗(yàn)、克隆試驗(yàn)、侵襲試驗(yàn)、凋亡試驗(yàn)及細(xì)胞周期的變化；同時在分子水平進(jìn)行Westernblot檢測結(jié)直腸癌生物特性相關(guān)分子表達(dá)的變化。4．將FGFR4RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)株、FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株及相應(yīng)的未感染細(xì)胞株分別皮下注射入裸小鼠背部，構(gòu)建成裸鼠結(jié)直腸癌模型，進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。觀測成瘤體積等細(xì)胞增殖指標(biāo)，利用免疫組化技術(shù)檢測FGFR4不同表達(dá)的裸鼠結(jié)直腸癌模型相關(guān)分子表達(dá)的變化。3.技術(shù)路線見圖一有效靶點(diǎn)大量包裝有效靶點(diǎn)大量包裝設(shè)計4個FGFR4基因RNAi靶點(diǎn)構(gòu)建到慢病毒載體載體小量包裝慢病毒顆粒感染HCT116、SW620結(jié)直腸癌細(xì)胞株FGFR4mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)干擾效率滿足FGFR4基因過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建過表達(dá)載體小量包裝慢病毒顆粒感染結(jié)直腸癌細(xì)胞株FGFR4mRNA和蛋白的表達(dá)qPCR和WesternBlotFGFR4過表達(dá)滿足基因功能爭辯成瘤的體積、大小等增值指標(biāo)的評價腫瘤組織MMP-2、p27、CyclinD1、BCL-xl表達(dá)的變化MMP-2、p27、CyclinD1、BCL-xl表達(dá)的變化增值、侵襲、凋亡、細(xì)胞周期變化等試驗(yàn)InvivoInvitro裸鼠結(jié)直腸癌模型的構(gòu)建圖一4.技術(shù)關(guān)鍵本課題關(guān)鍵技術(shù)在于FGFR4RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及FGFR4RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌細(xì)胞株的建立；FGFR4過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及FGFR4過表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株的建立；FGFR4不同表達(dá)的裸小鼠結(jié)直腸癌模型的構(gòu)建；一系列體外功能試驗(yàn)、體內(nèi)功能試驗(yàn)及相關(guān)分子檢測，探討FGFR4在結(jié)直腸癌發(fā)生進(jìn)展中的作用三、實(shí)施本項目已具備的條件（說明已具備的試驗(yàn)手段、技術(shù)力氣、前期科研基礎(chǔ)狀況）（1）本課題申請人可獨(dú)立進(jìn)行的試驗(yàn)操作主要包括：新穎標(biāo)本DNA和RNA的抽提和測定；RT-PCR及realtimePCR的操作和結(jié)果分析；免疫組化技術(shù)的操作和結(jié)果分析；細(xì)胞培育技術(shù)；蛋白抽提、濃度測定、westernblot檢測靶分子蛋白表達(dá)及結(jié)果分析；siRNA瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)及轉(zhuǎn)染效率測定；CCK-8法檢測細(xì)胞增殖試驗(yàn)。流式細(xì)胞術(shù)的檢測，細(xì)胞免疫熒光技術(shù)在試驗(yàn)室老師幫忙下完成。（2).慢病毒構(gòu)建RNAi載體及過表達(dá)載體，是一些格外成熟的技術(shù)，F(xiàn)GFR4RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)株和FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株的建立可請上海吉凱公司幫忙完成，而該公司為專業(yè)從事介導(dǎo)靶分子上調(diào)和下調(diào)病毒載體的制備和包裝，已和前期爭辯所在試驗(yàn)室有過多次成功合作先例；而構(gòu)建裸小鼠腫瘤模型亦是一項常用的爭辯技術(shù)，可請相關(guān)老師指導(dǎo)完成。（3）本課題在葉延偉老師的帶領(lǐng)下進(jìn)行，葉老師在復(fù)旦高校附屬腫瘤醫(yī)院攻讀腫瘤學(xué)博士學(xué)位，期間在復(fù)旦高校試驗(yàn)爭辯中心進(jìn)行了為期1年的博士課題試驗(yàn)部分的爭辯，獨(dú)立完成了一系列試驗(yàn)操作，試驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)發(fā)表。碩博連讀期間以第一作者發(fā)表SCI論著5篇，最高IF為5.131分，累計IF達(dá)18分，分別發(fā)表于Cancer、Cancerletters、Annalsofsurgicaloncology、Journalofsurgicaloncology、digestivesurgery；此外，以共同作者發(fā)表國內(nèi)外論著10余篇。鄭州高校附屬第一醫(yī)院重點(diǎn)試驗(yàn)室韓超老師賜予試驗(yàn)技術(shù)方面的掛念，韓老師是鄭州高校的在職博士，試驗(yàn)技術(shù)精湛，閱歷豐富。（4）.鄭州高校第一附屬醫(yī)院重點(diǎn)試驗(yàn)室試驗(yàn)設(shè)備齊全，各個試驗(yàn)領(lǐng)域均有專業(yè)試驗(yàn)指導(dǎo)員，為該爭辯順當(dāng)實(shí)施供應(yīng)了很好的平臺。四、項目的預(yù)期經(jīng)濟(jì)、社會和環(huán)境效益FGFR4在結(jié)直腸癌中的爭辯很少，而且不夠深化。本課題利用慢病毒載體構(gòu)建FGFR4RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌細(xì)胞株和FGFR4過表達(dá)細(xì)胞株，分別下調(diào)和上調(diào)FGFR4分子的表達(dá)，進(jìn)行一系列的體內(nèi)和體外功能試驗(yàn)，從而更全面、多角度地闡述FGFR4在結(jié)直腸癌發(fā)生進(jìn)展中的作用，為結(jié)直腸癌新的治療靶點(diǎn)的篩選供應(yīng)一些依據(jù)，目前國內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見相關(guān)報道。五、項目實(shí)施的方案進(jìn)度1.2016年1月-2016年6月：1）結(jié)直腸癌細(xì)胞株的培育,包括HCT116、SW620及其他常見結(jié)直腸癌細(xì)胞株；篩選出FGFR4高表達(dá)和低表達(dá)結(jié)直腸癌細(xì)胞株。2）FGFR4RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與包裝,結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW620、HCT116的感染,qPCR和w