第九章細(xì)菌的生長繁殖與培養(yǎng)

第九章細(xì)菌的生長繁殖與培養(yǎng)第1頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一2023/4/15學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握細(xì)菌生長繁殖的條件、繁殖方式及速度；熟悉細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象及意義；熟悉細(xì)菌的代謝產(chǎn)物及意義。第2頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一細(xì)菌是一大類具有獨立生命活動的單細(xì)胞微生物，能從外界環(huán)境中攝取營養(yǎng)物質(zhì)，合成自身細(xì)胞成分并獲得能量，同時不斷排出廢物，完成新陳代謝，得以生長繁殖。細(xì)菌的生長繁殖與環(huán)境條件密切相關(guān)，條件適宜時，細(xì)菌的生長繁殖及代謝旺盛，改變條件時可使細(xì)菌生命活動受到抑制或使細(xì)菌死亡。前言第3頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一占細(xì)胞總重量80%蛋白質(zhì)、糖類、脂類、無機(jī)鹽等；15-20%肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、D型氨基酸、脂多糖二氨基庚二酸、吡啶二羧酸、2-酮基-3-脫氧辛酸水：固體成分：特有成分：第一節(jié)細(xì)菌的生長繁殖一、細(xì)菌的化學(xué)組成第4頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一（一）營養(yǎng)物質(zhì)水:參與營養(yǎng)的吸收與代謝。碳源:

co2、碳酸鹽、糖、脂肪氮源:

有機(jī)氮、無機(jī)氮、游離氮無機(jī)鹽:

K、Ca、Na、Mg、S、P、Fe等生長因子(growthfactor)：

某些細(xì)菌生長所必需而又不能自身合成，必須由外界提供的有機(jī)化合物。種類：B族維生素——硫胺素、核黃素、生物素、泛酸某些必須氨基酸、嘌呤、嘧啶、膽堿Ⅴ因子、Ⅹ因子二、細(xì)菌生長繁殖的條件第5頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一（二）酸堿度（三）溫度大多數(shù)病原菌：37℃（四）氣體

①O2：專性需氧菌：有氧條件，如結(jié)核分枝桿菌專性厭氧菌：無氧條件，如破傷風(fēng)梭菌

兼性厭氧菌：有氧或無氧，多數(shù)致病菌屬于此類

二、細(xì)菌生長繁殖的條件大多數(shù)病原菌：pH7.2～pH7.6霍亂弧菌:

pH8.4～pH9.2結(jié)核分枝桿菌:

pH6.5～pH6.8

第6頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一（一）細(xì)菌個體的生長繁殖方式：無性二分裂速度：20～30分鐘/代

三、細(xì)菌生長繁殖的規(guī)律第7頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一（二）細(xì)菌群體的生長繁殖細(xì)菌生長曲線小時細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)第8頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一遲緩期(lagphase)

最初培養(yǎng)1-4小時，菌體不分裂，但菌體增大、代謝活躍

對數(shù)期(logarithmicphase)

一般持續(xù)6-8小時?；罹鷶?shù)目呈對數(shù)直線上升。

細(xì)菌形態(tài)、染色、生理活性典型，對外界環(huán)境敏感

穩(wěn)定期(stationaryphase)

細(xì)菌繁殖數(shù)與死亡數(shù)接近。

細(xì)菌形態(tài)、染色、生理活性改變，產(chǎn)生外毒素、抗生素、芽孢

衰退期(declinephase)

死亡數(shù)超過活菌數(shù)。細(xì)菌變長、腫脹、畸形、自溶細(xì)菌生長曲線特點第9頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一四、細(xì)菌的代謝產(chǎn)物及意義（一）根據(jù)細(xì)菌具有不同的酶，對糖、蛋白質(zhì)分解能力及分解后產(chǎn)生的產(chǎn)物不同用生化方法來鑒定細(xì)菌稱：細(xì)菌的生化反應(yīng)第10頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一甲基紅試驗（methylredtest，MR）機(jī)理：大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌葡萄糖乳糖PH＜4.5PH＞5.4甲基紅指示劑呈紅色甲基紅指示劑呈桔黃色甲基紅試驗陽性甲基紅試驗陰性丙酮酸中性產(chǎn)物脫羧丙酮酸第11頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一

利用分解代謝的產(chǎn)物和能量，合成新的物質(zhì)合成產(chǎn)物毒素和侵襲性酶熱原質(zhì)色素抗生素細(xì)菌素維生素

（二）合成代謝產(chǎn)物及醫(yī)學(xué)意義（重點）第12頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一毒素和侵襲性酶主要的致病物質(zhì)，包括外毒素、內(nèi)毒素、侵襲性酶熱原質(zhì)

細(xì)菌合成的，使機(jī)體發(fā)熱的物質(zhì)耐高溫，需蒸餾、吸附才可去除（二）合成代謝產(chǎn)物及醫(yī)學(xué)意義（重點）色素兩種：脂溶性、水溶性鑒定細(xì)菌，如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌第13頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一抗生素某些細(xì)菌、真菌、放線菌產(chǎn)生的能抑制和殺滅其它他微生物和腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)。如青霉素、鏈霉素等。功能：抗菌譜廣，廣泛用于治療細(xì)菌感染性疾病和腫瘤。維生素

營養(yǎng)機(jī)體，可供人體吸收利用。如大腸埃希菌合成的維生素B，K，供人體吸收利用。（二）合成代謝產(chǎn)物及醫(yī)學(xué)意義（重點）第14頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一第二節(jié)細(xì)菌的人工培養(yǎng)一、培養(yǎng)基(culturemedium)人工配制適合于細(xì)菌生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)“滅菌”第15頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一按照物理狀態(tài)分類：液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基2-3%瓊脂0.3-0.5%瓊脂第16頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一二、細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象（一）細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象（重點）沉淀生長混濁生長菌膜生長（大多數(shù)）（鏈狀菌）（專性需氧菌）第17頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一（二）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象菌落(colony)：細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上出現(xiàn)由單個細(xì)菌生長繁殖形成的肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)意義：鑒別細(xì)菌、分離細(xì)菌菌苔(mossy)：多個菌落融合形成的細(xì)菌集團(tuán)第18頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一三、人工培養(yǎng)細(xì)菌的實際意義1.感染性疾病的診斷和防治標(biāo)本增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)純培養(yǎng)生化鑒定顯微鏡觀察染色初步診斷確定診斷診斷第19頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一標(biāo)本青慶紅鏈紅青鏈慶密聚劃線接種培養(yǎng)藥浸紙片最敏感藥物治療第20頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一2.細(xì)菌的鑒定與研究例如：嗜肺軍團(tuán)菌3.生物制品的制備結(jié)核桿菌（有毒）培養(yǎng)基（膽汁、甘油、馬鈴薯）卡介苗（BCG）接種13年230代第21頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一第十章細(xì)菌的分布與消毒滅菌劉瀟病原生物與免疫學(xué)高職高專護(hù)理第22頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握正常菌群、條件致病菌及菌群失調(diào)、消毒、滅菌、無菌操作的概念；掌握常見的消毒、滅菌、無菌操作的方法；了解細(xì)菌的分布及防護(hù)原則。第23頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一

針頭上的細(xì)菌模式圖抹布和砧板上的細(xì)菌模式圖細(xì)菌種類多，繁殖快，適應(yīng)環(huán)境的能力強(qiáng)，是自然界中分布最廣泛的一群微小生物。了解細(xì)菌的分布對醫(yī)學(xué)生加強(qiáng)無菌觀念，嚴(yán)格無菌操作，預(yù)防醫(yī)院感染等具有重要意義。

前言第24頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一一、細(xì)菌在自然界中的分布1.土壤中的細(xì)菌土壤是細(xì)菌生存的天然場所（因為土壤中有水分、營養(yǎng)物質(zhì)、空氣、一定的PH環(huán)境和溫度）。自然界中，以土壤的含菌量（種類）最多，土壤素有“天然培養(yǎng)基”之稱。土壤中的細(xì)菌多數(shù)為非病原菌，它們在自然界的物質(zhì)循環(huán)中起著重要的作用，是動植物與人類生存的必要條件之一。第一節(jié)細(xì)菌的分布第25頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一使人致病的主要為球菌和芽胞桿菌，如炭疽桿菌、破傷風(fēng)桿菌、氣性壞疽可長期存活。所以，當(dāng)人體創(chuàng)傷處污染泥土?xí)r，要嚴(yán)防破傷風(fēng)和氣性壞疽感染。土壤中的病原菌從哪里來？土壤中僅有少數(shù)病原菌，它們來自人和動物體（糞、尿、痰、尸體等），多數(shù)病菌在土壤中很能容易死亡。第26頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一2.水中的細(xì)菌土壤、空氣、動植物尸體、人和動物的排瀉物、工業(yè)及生活污水。通過水體傳播的病原微生物主要有沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、霍亂弧菌等?？梢鹣到y(tǒng)傳染病，甚至爆發(fā)流行。因此，做好水的衛(wèi)生學(xué)檢查對預(yù)防疾病至關(guān)重要。一、細(xì)菌在自然界中的分布第27頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一3.空氣中的細(xì)菌空氣中缺乏營養(yǎng)物質(zhì)與水分，且受日光照射，細(xì)菌不易繁殖。但由于人群和各種動物的呼吸道及口腔中的細(xì)菌可隨唾液、飛沫散布到空氣中，極易造成疾病的傳播。細(xì)菌可隨塵埃漂浮在空氣中，尤其在人口密集的公共場所或醫(yī)院，空氣中細(xì)菌種類和數(shù)量顯著增多。一、細(xì)菌在自然界中的分布第28頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一常見的病原菌如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、鏈球菌、結(jié)核分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及腦膜炎奈瑟菌等，可引起傷口或呼吸道感染?？諝庵械姆侵虏【?，?？稍斐缮镏破?、藥物制劑及培養(yǎng)基的污染。因此，醫(yī)院的手術(shù)室、病房、制劑室、實驗室等要經(jīng)常進(jìn)行空氣消毒，并嚴(yán)格按照有關(guān)制度和無菌技術(shù)進(jìn)行醫(yī)療操作，以防止疾病的傳播及醫(yī)院感染。你知道嗎？第29頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一正常人體的體表以及與外界相通的腔道（如口腔、鼻咽腔、腸道、泌尿生殖道等黏膜）表面存在著一定數(shù)量和不同種類的細(xì)菌，這些通常對人體無害甚至有益的細(xì)菌，稱為正常菌群（normalflora）。二、人體正常菌群及分布（一）正常菌群第30頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一生物拮抗作用：即對病原菌的拮抗作用，如大腸菌素可抑制痢疾桿菌生長；唾液鏈球菌產(chǎn)生的H2O2抑制腦膜炎球菌生長。

營養(yǎng)作用：大腸桿菌及乳鏈球菌能合成VitB1、B12、泛酸、葉酸及VitC、K等，供機(jī)體利用；雙岐桿菌產(chǎn)酸造成酸性環(huán)境可促進(jìn)對VitD、Ca、Fe的吸收。免疫作用：微生物具有免疫原性、促分裂和佐劑的作用，可剌激機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育和成熟。正常菌群的生理意義第31頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一正常菌群與人體間的平衡狀態(tài)，在某種特定條件下被打破，使原來不致病的正常菌群也能引起疾病，這些能引起疾病的微生物稱為條件致病菌或機(jī)會致病菌。

（二）條件致病菌二、人體正常菌群及分布第32頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一①機(jī)體免疫機(jī)能低下：如大面積燒傷，過度疲勞，受涼，長期患消耗性疾病。②正常菌群寄居部位發(fā)生變遷：如外傷，手術(shù)，留置導(dǎo)尿管等使大腸桿菌進(jìn)入腹腔、泌尿道或血液等。③不適當(dāng)?shù)目咕厮幬镏委煂?dǎo)致菌群失調(diào)：如長期或濫用抗菌素治療。條件致病菌致病的特定條件第33頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一菌群失調(diào)：指機(jī)體、菌群、環(huán)境三者之間的動態(tài)平衡發(fā)生改變，導(dǎo)至體內(nèi)正常菌群中各種細(xì)菌的數(shù)量和比例發(fā)生大幅度的變化，生態(tài)體系表現(xiàn)出的不平衡狀態(tài)。菌群失調(diào)癥：指嚴(yán)重的菌群失調(diào)使機(jī)體發(fā)生功能紊亂表現(xiàn)出明顯臨床癥狀者。菌群失調(diào)癥又叫菌群交替癥（二次感染）。菌群失調(diào)經(jīng)常發(fā)生而菌群失調(diào)癥則少見?；级馗腥镜臋C(jī)體抵抗力很弱，細(xì)菌對抗菌素藥物不敏感，治療難度大，應(yīng)嚴(yán)加預(yù)防，避免發(fā)生。菌群失調(diào)及菌群失調(diào)癥第34頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一

消毒（disinfection）：殺死物體上病原微生物的方法，但不一定殺死細(xì)菌芽胞。滅菌（sterilization）：殺死物體上包括芽胞在內(nèi)的所有病原性和非病原性微生物的方法。防腐（antisepsis）：防止或抑制細(xì)菌生長繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。

無菌（asepsis）：不含活菌的意思。防止微生物進(jìn)入機(jī)體或物體的操作方法，稱為無菌操作或無菌技術(shù)。進(jìn)行微生物實驗、外科手術(shù)及醫(yī)療技術(shù)操作等過程，均需進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。

第二節(jié)消毒滅菌第35頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一

熱力滅菌法分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。在同一溫度下，后者效力比前者為大，這是因為：（1）濕熱的穿透力比干熱大；

（2）濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固；（3）濕熱的蒸汽有潛熱存在。水由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時釋放出的潛熱，可迅速提高被滅菌物體的溫度。一、物理消毒滅菌法（重點）（一）熱力滅菌法第36頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一1、濕熱滅菌法高壓蒸氣滅菌法：一種最常用、最有效的滅菌方法。利用密閉的容器加熱產(chǎn)生的蒸汽滅菌，通常103.4kPa（1.05kg/cm2）的蒸汽壓力下，容器內(nèi)溫度可達(dá)121.3℃，維持15～30分鐘，即可達(dá)到滅菌的目的。凡耐高溫、耐潮濕的物品，如手術(shù)器械、敷料和一般培養(yǎng)基等，均可用此法滅菌。煮沸法：水溫100℃經(jīng)5分鐘可殺死細(xì)菌繁殖體，常用于食具、刀剪、注射器等的消毒，細(xì)菌芽胞需煮沸1～2小時才被殺滅。水中加入2%碳酸氫鈉，可使沸點達(dá)105℃，既可促進(jìn)殺滅芽胞，又能防止金屬器械生銹。（一）熱力滅菌法第37頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一第38頁，共42頁，2023年，2月20日，星期一流通蒸氣法：利用蒸籠或阿諾蒸鍋進(jìn)行消毒。流通蒸汽法溫度不超過100℃，經(jīng)15～30分鐘可殺死細(xì)菌繁殖體；把流通蒸汽加熱的物品放置37℃溫箱過夜，促使芽胞發(fā)育成繁殖體，次日再經(jīng)流通蒸汽加熱，如此重復(fù)3次，可達(dá)到滅菌的目的，稱為間歇滅菌法，常用于不耐高溫的材料如培養(yǎng)基的滅菌。巴氏消毒法：用較低溫度殺滅液體中病原菌或特定微生物，而不影響其營養(yǎng)成分及香味的消毒法，常用于牛奶、酒類的消毒。1、濕熱滅菌法（一）熱力滅菌法