血球計(jì)數(shù)板使用課件

血球計(jì)數(shù)板使用一、血球計(jì)數(shù)板的規(guī)格

人教版建議使用2mm×2mm×0.1mm方格蘇教版推薦使用1mm×1mm×0.1mm方格

計(jì)數(shù)室計(jì)數(shù)室兩種規(guī)格

1．16×25型的計(jì)數(shù)板將計(jì)數(shù)室放大，可見(jiàn)它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四個(gè)中方格（100個(gè)小方格）計(jì)數(shù)。

細(xì)胞個(gè)數(shù)／1mL＝100個(gè)小方格細(xì)胞總數(shù)/100

×400×10000×稀釋倍數(shù)

二、血球計(jì)數(shù)板的使用方法步驟

1．鏡檢計(jì)數(shù)室。在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)；2．加樣品。將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室上加蓋專(zhuān)用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，一次性充滿(mǎn)計(jì)數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，充入細(xì)胞懸液的量以不超過(guò)計(jì)數(shù)室臺(tái)面與蓋玻片之間的矩形邊緣為宜。多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去；3．計(jì)數(shù)。稍待片刻（約5min），待酵母菌細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)室底部后，將計(jì)數(shù)板放在載物臺(tái)的中央，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)室所在位置后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察、計(jì)數(shù)并記錄。三、血球計(jì)數(shù)板的使用注意事項(xiàng)1．每天定時(shí)取樣計(jì)數(shù)，記錄數(shù)據(jù)。2．從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾下，這樣使酵母菌分布均勻。3．如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過(guò)多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋以便于酵母菌的計(jì)數(shù)。

具體方法是：搖勻試管，取1mL酵母菌培養(yǎng)液，加入成倍的無(wú)菌水稀釋?zhuān)♂宯倍后，再用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，所得數(shù)值乘以稀釋倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有4—5個(gè)酵母細(xì)胞為宜。特別是在培養(yǎng)后期的樣液需要稀釋后計(jì)數(shù)。4．活酵母有芽殖現(xiàn)象，若芽體達(dá)到母細(xì)胞大小的一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)，若芽體小于母細(xì)胞一半時(shí)為1個(gè)酵母細(xì)胞。5．對(duì)于壓在方格界線上的酵母菌應(yīng)當(dāng)計(jì)數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的菌體數(shù)，一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理，另兩邊不計(jì)數(shù)。6．計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來(lái)計(jì)算，對(duì)每個(gè)樣品可計(jì)數(shù)三次，再取其平均值。計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)不時(shí)調(diào)節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的菌體。按公式計(jì)算每1ml（或10mL）菌液中所含的酵母菌個(gè)數(shù)。7．血球計(jì)數(shù)板的清潔

血球計(jì)數(shù)板使用后，用自來(lái)水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，或用95%的乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥。通過(guò)鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)清洗直到干凈為止。例題例1：用血球計(jì)數(shù)板對(duì)培養(yǎng)液中酵母菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，若計(jì)數(shù)室為1mm×1mm×0.1mm方格，由400個(gè)小方格組成，如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過(guò)多，難以計(jì)數(shù)，應(yīng)先

后再計(jì)數(shù)。若多次重復(fù)計(jì)數(shù)后，算得每個(gè)小方格中平均有5個(gè)酵母菌，則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有

個(gè)。稀釋

2×108

解析：根據(jù)公式：5×400×10000×10＝2×108

例3（2008江蘇高考31．）（4）在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，直接從靜置的培養(yǎng)瓶中取培養(yǎng)原液計(jì)數(shù)的做法是錯(cuò)誤的，正確的方法是_和

。（5）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計(jì)數(shù)板的做法是錯(cuò)誤的，正確的方法是

。搖勻培養(yǎng)液后再取樣

培養(yǎng)后期的樣液稀釋后再計(jì)數(shù)

浸泡和沖洗

例4：（2009福建高考1）下列對(duì)有關(guān)實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是()A.在觀察洋蔥細(xì)胞有絲分裂實(shí)驗(yàn)中，將已經(jīng)解離、漂洗、染色的根尖置于載玻片上，輕輕蓋上蓋玻片后即可鏡檢B.對(duì)酵母菌計(jì)數(shù)時(shí)，用吸管吸取培養(yǎng)液滴滿(mǎn)血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室及其四周邊緣，輕輕蓋上蓋玻片后即可鏡檢C.在葉綠體色素提取實(shí)驗(yàn)中，研磨綠葉時(shí)應(yīng)加一些有機(jī)溶劑，如無(wú)水乙醇等D.檢測(cè)試管中的梨汁是否有葡萄糖，可加入適量斐林試劑后，搖勻并觀察顏色變化C（3）血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室長(zhǎng)和寬各為1mm，深度為0.1mm，其中25×16型的血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)室以雙線等分成25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格。一般計(jì)數(shù)時(shí)選取的中方格位于計(jì)數(shù)室的

。下圖1表示的是其中一個(gè)中方格的情況，對(duì)該中方格中的酵母菌進(jìn)行計(jì)數(shù)的結(jié)果是

個(gè)。如果計(jì)數(shù)的幾個(gè)中方格中的細(xì)胞平均數(shù)為20個(gè)，則1mL培養(yǎng)液中酵母菌的總數(shù)為

個(gè)。四個(gè)角和中央的五個(gè)中方格

245×106

（4）某同學(xué)為探究溫度對(duì)酵母菌種群數(shù)量變化的影響，得到上圖2所示結(jié)果，由此并不能得出酵母菌的最適培養(yǎng)溫度為25℃。為了確定培養(yǎng)酵母菌的最適溫度，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路：

。在25℃左右再設(shè)計(jì)以上的溫度梯度

2.在生態(tài)學(xué)中，通常要從種群、群落、生態(tài)系統(tǒng)等三個(gè)層次開(kāi)展研究。⑴在“探究培養(yǎng)液中酵母菌數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化”實(shí)驗(yàn)中，用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行抽樣檢測(cè)。下圖是血球計(jì)數(shù)板放大圖，第一次抽樣檢測(cè)結(jié)果是4個(gè)中方格中共有40個(gè)酵母菌，則每毫升菌液中含