高效液相色譜柱能效的測定

實驗者合作者一、實驗?zāi)康牧私飧咝б合嗌V儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理學習高效液相色譜儀的使用學習、掌握液相色譜柱柱效測定方法二、基本原理高效液相色譜法是以液體作為流動相的一種色譜分析法，它亦是根據(jù)不同組分在流動相和固定相之間的分配系數(shù)的差異來對混合物進行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數(shù)的公式同樣適合于高效液相色譜，即：n=5.54=16式中：n=5.54=16yi/2為色譜峰的半峰寬度Y為色譜峰的峰底寬度速率理論及范弟姆特方程式對于研究影響高效液相色譜柱效的各種因素，同樣具有指導(dǎo)意義：H=A+B/u+Cu然而由于組分在液體中的擴散系數(shù)很小，縱向擴散項(B/u)對色譜峰擴展的影響實際上可以忽略，而傳質(zhì)阻力項(Cu)則成為影響柱效的主要因素，可見要提高液相色譜的柱效能，提高柱內(nèi)填料裝填的均勻性和減小粒度，以加快傳質(zhì)速率是非常重要的。目前所使用的固定相，通常為5?10回的微粒，而裝填技術(shù)的優(yōu)劣亦將直接影響色譜柱的分離效能。除上述影響柱效的一些因素外，對于液相色譜還應(yīng)考慮到一些柱外展寬的因素，其中包括進樣器的死體積和進樣技術(shù)等所引致的柱前展寬，以及由柱后聯(lián)接管、檢測器流通池體積所引致的柱后展寬。三、儀器和試劑儀器1：KLC321型高效液相色譜儀（紫外檢測器）儀器2：Agilent1200高效液相色譜儀（紫外檢測器）50pl微量進樣器試劑：，甲酯，乙酯，甲酯，丁酯，四種物質(zhì)的混合液，純水，去離子水，重蒸水。四、實驗條件色譜柱1長15cm，內(nèi)徑4.6mm，裝填10m的C-18烷基鍵合固定相流動相甲醇:水（83:17）；流量0.5mL?min-1和1mL-min-1紫外光度檢測器波長254nm，靈敏度0.08進樣量3pL五、實驗步驟根據(jù)實驗條件和實驗錄像指導(dǎo)，按KLC321儀器操作步驟將儀器調(diào)節(jié)至進樣狀態(tài)，待儀器流路及電路系統(tǒng)達到平衡，色譜工作站之“采樣系統(tǒng)”基線平直時，即可進樣。用10pL的微量注射器向色譜系統(tǒng)進10pL的空氣。找出空氣在色譜系統(tǒng)中的保留時間。吸取3pl甲酯，乙酯，丙酯，丁酯的混合溶液進樣，并用色譜工作站記錄色譜數(shù)據(jù)，同時記錄色譜數(shù)據(jù)文件名。用微量注射器吸取四種混合物中的任意一個純組分的乙醚溶液進樣。以確定分離組分的大致位置。用色譜工作站之“數(shù)據(jù)處理”系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)文件并記錄所需數(shù)據(jù)。六、數(shù)據(jù)記錄及處理記錄實驗條件。色譜柱1長15cm，內(nèi)徑4.6mm，裝填10m的C-18烷基鍵合固定相流動相甲醇:水(83:17)；流量0.5mL?min-1和1mL-min-1紫外光度檢測器波長254nm，靈敏度0.08進樣量3pL測量物中各組分及純物質(zhì)丙酯保留時間tR和相應(yīng)色譜峰的峰寬Y。

樣品編號組分序列保留時間tR組分的峰寬Y理論塔板數(shù)混合物組分一3.6550.547714組分二4.0380.4601233組分三4.6850.955385組分四5.6781.457243純物質(zhì)丙酯4.