生化儀的臨床應(yīng)用

生化儀的臨床應(yīng)用第1頁(yè)/共41頁(yè)2內(nèi)容了解生化分析儀的分類常用的分析方法生化儀的參數(shù)設(shè)置生化儀的校準(zhǔn)質(zhì)量控制使用常見(jiàn)問(wèn)題維護(hù)與保養(yǎng)第2頁(yè)/共41頁(yè)3生化分析儀的分類按反映裝置的結(jié)構(gòu)連續(xù)流動(dòng)式（空氣分段系統(tǒng)與非分段系統(tǒng)離心式分離式：目前最廣泛的應(yīng)用于臨床干化學(xué)法干片式按自動(dòng)化程度分全自動(dòng)與半自動(dòng)按檢測(cè)項(xiàng)目可分單通道與多通道按儀器的復(fù)雜程度可分小型、中型、大型第3頁(yè)/共41頁(yè)4連續(xù)流動(dòng)式【結(jié)構(gòu)】樣品盤(pán)、比例表、混合器、透析器【工作原理】通過(guò)電腦來(lái)控制比例泵，將樣本和實(shí)際注入到連續(xù)的管道系統(tǒng)中，在一定溫度下完成混合、去干擾、保溫、比色測(cè)定，經(jīng)信號(hào)放大、運(yùn)算處理最后顯示結(jié)果并打印【儀器特點(diǎn)】在檢測(cè)過(guò)程中，樣品與樣品之間需要用空氣進(jìn)行隔離，或是用空白試劑緩沖液/惰性液來(lái)隔離空氣分段系統(tǒng)：防止交叉污染非空氣分段系統(tǒng)試劑分段系統(tǒng)，每一次進(jìn)樣必須在前一樣品檢測(cè)完畢才能開(kāi)始，不能連續(xù)一次進(jìn)樣。第4頁(yè)/共41頁(yè)5離心式【結(jié)構(gòu)】加樣：樣品盤(pán)、吸樣臂、試劑臂和電子控制部分分析單元：離心轉(zhuǎn)盤(pán)、溫控器、光學(xué)系統(tǒng)、信息處理與顯示系統(tǒng)?！竟ぷ髟怼肯葘悠泛驮噭┓謩e置于轉(zhuǎn)盤(pán)相應(yīng)的凹槽內(nèi)，在離心力的作用下，樣品和試劑被甩到轉(zhuǎn)盤(pán)外的比色槽內(nèi)并相互混合繁盛反應(yīng)，一定時(shí)間后進(jìn)行比色?！緝x器特點(diǎn)】反應(yīng)器就是轉(zhuǎn)盤(pán)，整個(gè)分析過(guò)程的每一步驟幾乎同時(shí)完成，分析速度快，適合同一項(xiàng)目的批量檢測(cè)。第5頁(yè)/共41頁(yè)6分立式【結(jié)構(gòu)】

樣品處理系統(tǒng)：模仿人工操作，識(shí)別樣品與試劑加入到反應(yīng)器中，，有試劑盤(pán)，樣品架、加液器、和攪拌器等光學(xué)系統(tǒng)：光源、分光、比色、和信號(hào)揀流溫控系統(tǒng)：保持反應(yīng)體系的溫度恒定，有水浴、空氣浴和液相流動(dòng)恒溫系統(tǒng)清洗：吸、注、擦：吸走廢液-注入洗滌液或水、擦干杯內(nèi)壁計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)：識(shí)別樣品與試劑并完成樣品與試劑的加入與混合，最終處理計(jì)算數(shù)據(jù)并打印?！竟ぷ髟怼恳匀斯げ僮鞯墓ぷ髂Ｊ剑脵C(jī)械臂代替人工手臂的工作，按設(shè)定的程序完成各項(xiàng)操作【特點(diǎn)】樣品與試劑有固有的試劑或樣本反映盤(pán)，個(gè)項(xiàng)目在各自的反應(yīng)杯中獨(dú)立進(jìn)行。第6頁(yè)/共41頁(yè)7分離式模式圖第7頁(yè)/共41頁(yè)8干片式【儀器類型】反射光度法：對(duì)試紙條上反應(yīng)區(qū)通過(guò)反射光光度法進(jìn)行判別。膠片涂層分析：把試劑片置于多層涂膜的反應(yīng)片上進(jìn)行檢測(cè)，可檢測(cè)一個(gè)到幾十個(gè)項(xiàng)目項(xiàng)目袋式分析儀：將時(shí)間與樣本同時(shí)置于反應(yīng)袋中反映完畢將袋中物做成比色物質(zhì)來(lái)檢測(cè)【特點(diǎn)】液相反應(yīng)在固相載體上進(jìn)進(jìn)行，化學(xué)、光學(xué)、酶學(xué)、計(jì)算、于一身，操作簡(jiǎn)單檢測(cè)速度快，適于急診或床前檢測(cè)。第8頁(yè)/共41頁(yè)9性能評(píng)價(jià)【自動(dòng)化程度：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)模來(lái)制定【分析效率】根據(jù)工作量及樣本的多少來(lái)確定選擇儀器的反應(yīng)速度?！緫?yīng)用范圍】根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目來(lái)選擇【準(zhǔn)確度與精密度】越高越好【試劑的開(kāi)放程度】開(kāi)放程度越高靈活性越大，但是系統(tǒng)的穩(wěn)定性稍差第9頁(yè)/共41頁(yè)10常用的分析方法終點(diǎn)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法比濁法均相酶免疫分析第10頁(yè)/共41頁(yè)11終點(diǎn)法單點(diǎn)檢測(cè)：使用一種或是兩種試劑，檢測(cè)反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)時(shí)的吸光度如-ALB、TP等兩點(diǎn)法：又稱固定時(shí)間法，使用雙試劑或単試劑，如苦味酸測(cè)肌酐雙波長(zhǎng)的作用：消除背景干擾第11頁(yè)/共41頁(yè)12連續(xù)監(jiān)測(cè)法1.一步法：酶的檢測(cè)底物就是所檢測(cè)的物質(zhì)

EaEi2.酶偶聯(lián)反應(yīng)：s1+s2——p1+p2——p3+p4Ea：輔酶Ei：指示酶第12頁(yè)/共41頁(yè)13比濁法檢測(cè)物質(zhì)對(duì)光的散射或透射強(qiáng)度，測(cè)定的是濁度而非比色，可用于終點(diǎn)分析，也可用于動(dòng)態(tài)分析?；瘜W(xué)比濁：血清中K、Na離子的檢測(cè)免疫比濁：透射比濁/散射比濁，透射比濁采用終點(diǎn)法，自動(dòng)生化儀最常用，一般用作特定蛋白的檢測(cè)，如：載脂蛋白、急時(shí)相蛋白、藥物，而散射比濁用的儀器是特制的。第13頁(yè)/共41頁(yè)14全自動(dòng)生化儀參數(shù)樣品與試劑量的設(shè)置檢測(cè)方法波長(zhǎng)溫度分析時(shí)間校正方法第14頁(yè)/共41頁(yè)15樣品與試劑的量與方法【樣品與試劑量】以手工法按比例縮減根據(jù)儀器的特性確定加樣量范圍，最小反應(yīng)體積等情況自行設(shè)計(jì)

考慮到檢測(cè)的靈敏度與線性范圍，試劑與樣本量需要的多少是衡量一臺(tái)儀器品質(zhì)的重要指標(biāo)【檢測(cè)方法】

根據(jù)所做的項(xiàng)目及儀器的方法來(lái)設(shè)定終點(diǎn)法、動(dòng)力學(xué)法（上升或下降）第15頁(yè)/共41頁(yè)16波長(zhǎng)吸收曲線的低谷是空白波長(zhǎng)，吸光度大而且平的波長(zhǎng)為分析波長(zhǎng)；若使用光柵或單色光器，光路采用后分光，波長(zhǎng)更準(zhǔn)確。單波長(zhǎng)：測(cè)定體系中含有一種組分或待測(cè)組分的吸收波長(zhǎng)與其他共存的物質(zhì)的吸收波長(zhǎng)無(wú)重疊，有幾個(gè)吸收峰的物質(zhì)一般選擇最大吸收峰或是吸收峰處吸光度隨波長(zhǎng)變化較小的的波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)：干擾物的光吸收會(huì)出現(xiàn)光散射或是非特異性光吸收主波長(zhǎng)：待測(cè)物特定的吸收波長(zhǎng)副波長(zhǎng)：干擾物在主波長(zhǎng)的吸收與副波長(zhǎng)的吸光率越接近越好如：己糖激酶法檢測(cè)GLU，為了消除Hb的干擾選擇340/380nm第16頁(yè)/共41頁(yè)17溫度與分析時(shí)間【分析溫度】

一般設(shè)定在體溫（370C)【分析時(shí)間】1終點(diǎn)法：一般是選擇開(kāi)始的時(shí)間（即選擇實(shí)際與樣本的混合瞬間，這樣可以除去實(shí)際與樣本的空白）結(jié)束時(shí)間一般以反應(yīng)達(dá)終點(diǎn)時(shí)的時(shí)間來(lái)計(jì)算ΔA=A2-A1A2：終末吸光度A1：初始吸光度2.動(dòng)態(tài)分析時(shí)間：選定讀數(shù)的起始點(diǎn)。也就是說(shuō)延遲時(shí)間按后開(kāi)始，結(jié)束時(shí)間一定要在線性反應(yīng)期內(nèi)。計(jì)算按下公式：ΔA/min=(A末-A始)/(T末-T始)第17頁(yè)/共41頁(yè)18分析儀的校準(zhǔn)儀器校準(zhǔn)：波長(zhǎng)、溫度、加樣量、空白吸光度（一般由廠家來(lái)完成）項(xiàng)目校準(zhǔn)：是常規(guī)工作進(jìn)行的，也就是我們所說(shuō)的調(diào)標(biāo)?；|(zhì)效應(yīng)：樣本校準(zhǔn)物處于相同的條件下進(jìn)行校準(zhǔn)物的選擇：應(yīng)該溯源的國(guó)際或國(guó)家的參考方法附：不允許用定值質(zhì)控品代替校準(zhǔn)物質(zhì)。第18頁(yè)/共41頁(yè)19分析儀的校準(zhǔn)【校準(zhǔn)頻率】系統(tǒng)校準(zhǔn)：若是封閉系統(tǒng)則校準(zhǔn)周期可以長(zhǎng)一些，若是開(kāi)放系統(tǒng)校準(zhǔn)頻率應(yīng)該高一點(diǎn)。更換試劑或是批號(hào)不同時(shí)應(yīng)該校準(zhǔn)后再用。室內(nèi)質(zhì)量控制出現(xiàn)異常波動(dòng)或偏移好時(shí)，此項(xiàng)目應(yīng)該重新校正。儀器更換部件或是大修過(guò)以后所有項(xiàng)目均應(yīng)該矯正一次。第19頁(yè)/共41頁(yè)20分析儀的校準(zhǔn)【校準(zhǔn)方法】校準(zhǔn)物的選擇：1.兩點(diǎn)法校準(zhǔn)：多數(shù)非酶類的檢測(cè)使用兩點(diǎn)校準(zhǔn)，其曲線應(yīng)該是過(guò)原點(diǎn)的一條直線。2.多點(diǎn)校準(zhǔn):應(yīng)用一定梯度的校準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)，多數(shù)是免疫透射比濁檢測(cè)使用，由于其線性較差，所以選擇多點(diǎn)校準(zhǔn)。3.因數(shù)校準(zhǔn)：酶類檢測(cè)應(yīng)用較多，近年來(lái)推出的酶類標(biāo)準(zhǔn)品也可以采用兩點(diǎn)校準(zhǔn)。第20頁(yè)/共41頁(yè)21質(zhì)量控制準(zhǔn)備：人員培訓(xùn)、建立sop文件、做好儀器的檢定與校準(zhǔn)。選擇質(zhì)控品：一般選擇兩個(gè)水平的含量，其中之一要有一個(gè)正常水平的，另一個(gè)可以是臨床水平或是超臨床水平的。測(cè)定頻率質(zhì)控規(guī)則的選擇畫(huà)質(zhì)控圖失控結(jié)果的分析與處理第21頁(yè)/共41頁(yè)22質(zhì)控品的選擇與準(zhǔn)備與待檢樣品的性質(zhì)相同或是相似均勻恒定，最少使用半年瓶間變異應(yīng)該小于分析系統(tǒng)的變異可采用商品的，也可使用實(shí)驗(yàn)室自制其濃度與含量應(yīng)該可以反映臨床意義的范圍不能作為校準(zhǔn)物使用第22頁(yè)/共41頁(yè)23質(zhì)控品的檢測(cè)頻率在每一個(gè)項(xiàng)目的分析批次內(nèi)必須做一次質(zhì)控檢測(cè)儀器或試劑廠家應(yīng)該對(duì)質(zhì)控項(xiàng)目的檢測(cè)頻率作出相應(yīng)的指導(dǎo)用戶可以根據(jù)不同的情況增加或減少頻率第23頁(yè)/共41頁(yè)24質(zhì)量控制規(guī)則通過(guò)檢查質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)作出有效的判斷指控界限的使用一般是均值與不同倍數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差。如：2倍內(nèi)認(rèn)可，1-3倍超控.3倍外失控第24頁(yè)/共41頁(yè)25標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控圖第25頁(yè)/共41頁(yè)26失控的處理與分析通過(guò)原始數(shù)據(jù)初步估計(jì)失控的原因?qū)唧w的檢測(cè)過(guò)程做回顧分析通過(guò)有選擇性的復(fù)查進(jìn)一步判斷失控的原因并找出處理的辦法第26頁(yè)/共41頁(yè)27全自動(dòng)生化分析儀使用過(guò)程中常見(jiàn)的問(wèn)題攜帶和交叉污染多數(shù)一起存在的問(wèn)題常規(guī)工作中容易被忽視引起不確定性的因素比較多第27頁(yè)/共41頁(yè)28攜帶和交叉污染產(chǎn)生的原因公有化：一臺(tái)儀器檢測(cè)多個(gè)項(xiàng)目共有一個(gè)探針、樣品針、攪拌器和管道隨著生化儀處理能力的提高一臺(tái)儀器上所做的項(xiàng)目與方法學(xué)也很多使用不當(dāng)：操作人員使用生化儀或進(jìn)行的保養(yǎng)時(shí)方法不當(dāng)，導(dǎo)致儀器及管道污染。儀器老化：使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，部件老化沖洗站功能下降清洗液使用不當(dāng)檢測(cè)項(xiàng)目排列不合理：由于試劑組成成分會(huì)影響千貨檢測(cè)項(xiàng)目的結(jié)果。第28頁(yè)/共41頁(yè)29攜帶污染的檢測(cè)與計(jì)算●●●△△△●●●△△△●●●△△△●●●△△△○○○●●●高值水平△△△生理鹽水○○○1:1000稀釋的樣本共檢測(cè)29次鹽水的均值為A，稀釋后樣本為B交叉污染率=（A/B*1000）*100%判斷標(biāo)準(zhǔn)，∠0.3%為正常第29頁(yè)/共41頁(yè)30攜帶和污染常見(jiàn)的組合IALT(IFCC)\AST(IFCC)試劑中含有高活力的LDH成分，對(duì)LDH的檢測(cè)可能帶來(lái)干擾ALP(IFCC)\CK(NAC)CK-MB(NAC)CO2(PEPC)AMY(EPS)等試劑中含有Mg2+，對(duì)Mg2+的檢測(cè)帶來(lái)影響第30頁(yè)/共41頁(yè)31攜帶和污染常見(jiàn)的組合II磷酸鹽緩沖液可能對(duì)CHECHOGLUUAHBDH帶來(lái)污染CK試劑中含有GLU的成分，若是下一測(cè)試是glu就會(huì)有影響膽固醇試劑中含膽酸鹽，會(huì)對(duì)總膽汁酸的檢測(cè)帶來(lái)影響淀粉酶試劑含有鈣離子會(huì)影響離子鈣的檢測(cè)第31頁(yè)/共41頁(yè)32攜帶和污染常見(jiàn)的組合III釩氧化法檢測(cè)膽紅素不能排在富有堿性試劑測(cè)定的項(xiàng)目之后，如：ALBALPCaMgCr等過(guò)氧化物酶反應(yīng)系統(tǒng)的測(cè)定項(xiàng)目不要排在一起，，因?yàn)榛赥rinder反應(yīng)的高含量測(cè)定項(xiàng)目和低含量的測(cè)定項(xiàng)目之間有交叉污染。第32頁(yè)/共41頁(yè)33解決方案正確的安裝操作規(guī)程維護(hù)和保養(yǎng)儀器，并定期評(píng)估熟知各種試劑的組成成分正確排列順序把容易受到干擾的排在最前面規(guī)定解決方法：如變換試劑位、選擇特殊的清洗劑，則加洗滌次數(shù)。第33頁(yè)/共41頁(yè)34常用的排列順序ALTASTALPGGTCHETPALBTBilDBilUACRCKCK-MBHBDHLDHGLUTGCHOHDLapoA1apoBAMYCO2PCaMg2+CL第34頁(yè)/共41頁(yè)35保養(yǎng)日、周、月、季、年。第35頁(yè)/共41頁(yè)36硬件設(shè)施純水機(jī)Ups電源外接電腦廢液排放管道實(shí)驗(yàn)室環(huán)境：溫度、濕度最重要，要有每天的工作記錄第36頁(yè)/共41頁(yè)37日維護(hù)室內(nèi)環(huán)境因素要符合儀器要求正常開(kāi)關(guān)機(jī)日常清洗儀器及管道檢測(cè)試劑量表面清理