蛋白質藥物生產(chǎn)工藝驗證

蛋白質藥物生產(chǎn)工藝驗證第一頁，共45頁。工藝驗證工藝驗證應當證明一個生產(chǎn)工藝按照規(guī)定的工藝參數(shù)能夠持續(xù)生產(chǎn)出符合預定用途和注冊要求的產(chǎn)品。（中國2010版GMP）收集并評估從工藝設計階段一直到商業(yè)化生產(chǎn)的數(shù)據(jù)，用這些數(shù)據(jù)確立科學證據(jù)，證明該工藝能夠始終如一的生產(chǎn)出優(yōu)質產(chǎn)品。（FDA2011工藝驗證指南）書面話的證據(jù)。證明工藝在所建立的參數(shù)范圍內(nèi)能有效和重復生產(chǎn)出符合預期標準和質量屬性的醫(yī)藥產(chǎn)品。（EU2001GMP）記錄在案的證據(jù)，證明工藝流程在確定的參數(shù)范圍內(nèi)運行，按照預先確定的規(guī)范和質量標準，可有效地、重復地生產(chǎn)中間體或原料藥。（蛋白質生產(chǎn)的工藝驗證）第二頁，共45頁。相關定義工藝驗證的先決條件工藝驗證驗證后工作文件材料第三頁，共45頁。相關定義AcceptanceCriteria:驗收準則為了使檢測結果被接受而制定的數(shù)值范圍。在隨后的驗證過程中，一個關鍵工藝參數(shù)超過了接受范圍都可能引起產(chǎn)品質量的質疑，導致研究調(diào)查的啟動。CharacterizationStudy:表征研究一個后期研究，評估工藝過程來增加工藝知識，檢測推薦的操作范圍及他們單獨作用和/或聯(lián)合作用的對目標蛋白質質量的影響。（評價研究，工藝合理性研究）第四頁，共45頁。ConformanceLots:一致性批量一個預先確定的生產(chǎn)批量，通常是三批，不僅代表被許可的工藝，也可評估產(chǎn)品的一致性。DrugSubstance/ActivePharmaceuticalIngredient（API）原料藥有效活性成分，與賦形劑（輔料）一起被制備成藥物產(chǎn)品。其組成成分為預期產(chǎn)品，產(chǎn)品相關物質，產(chǎn)品和工藝相關雜質。相關定義第五頁，共45頁。Contaminant:污染物任何不期望成為工藝的一部的，偶然或外部引入的材料（化學，生化的或是微生物）。一種不希望有的化學或微生物性質的雜質，在工業(yè)生產(chǎn)中被引入到原料，中間體或原料藥中的物質。Impurity:雜質原料藥或產(chǎn)品中不屬于目標產(chǎn)品、產(chǎn)品相關物質或輔料的任何組分。相關定義第六頁，共45頁。Parameters:參數(shù)OperationalParameter:操作參數(shù)一個輸入變量或制造工藝的某種條件，可以在工藝過程中直接被控制。典型地，物理或化學參數(shù)（溫度，處理時間、流速、沖洗體積、試劑濃度、緩沖液pH）CriticalOperationalParameter:關鍵操作參數(shù)Non-CriticalOperationalParameter:非關鍵操作參數(shù)KeyOperationalParameter:主要工藝參數(shù)Non-KeyOperationalParameter:非主要工藝參數(shù)PerformanceParameter:性能參數(shù)一種結果，不能夠被直接控制的，但可以作為一種指示，表明工藝流程按預期設定的方式進行。相關定義第七頁，共45頁。OperationalParameter:操作參數(shù)CriticalOperationalParameter:關鍵操作參數(shù)要求控制在特定的、較窄的操作范圍以保證產(chǎn)品的質量符合標準（說明書）。CriticalProcessParameter(“CPP”)Non-CriticalOperationalParameter:非關鍵操作參數(shù)超出關鍵操作參數(shù)定義范圍的所有工藝參數(shù)。非關鍵操作參數(shù)可分為主要工藝參數(shù)和非主要工藝參數(shù)。相關定義第八頁，共45頁。OperationalParameter:操作參數(shù)KeyOperationalParameter:主要工藝參數(shù)需要小心的控制在很小的范圍內(nèi)，是保證工藝性能必不可少的參數(shù)。主要工藝參數(shù)不影響產(chǎn)品質量的關鍵屬性。如果超過可接受范圍可能會影響工藝流程（產(chǎn)量、持續(xù)時間），但不會影響產(chǎn)品質量。Non-KeyOperationalParameter:非主要工藝參數(shù)證明可以容易控制或具有很寬的可接受范圍的工藝參數(shù)。如果超過可接受范圍，非主要工藝參數(shù)可能一項藥品的質量或工藝性能。相關定義第九頁，共45頁。PerformanceParameter:性能參數(shù)性能參數(shù)或屬性參數(shù)是產(chǎn)品質量和工藝性能的內(nèi)指標。在這里指輸出性能，特別是指目標蛋白質的質量、品質。相關定義第十頁，共45頁。Documantation文件材料DevemlopmentReports研發(fā)報告ProcessCharacterrizationReport工藝特征報告ProcessValidationMasterPlan工藝驗證總體規(guī)劃ProcessValidationProtocol工藝驗證草案ProcessValidationProtocol工藝驗證報告相關定義第十一頁，共45頁。DevemlopmentReports研發(fā)報告記錄和描述工藝開發(fā)早期階段所做的工作。這些文件可以在差異性調(diào)查過程中最為一種參考，也可在特定的驗證和特性研究的設計過程中作為一種參考。ProcessCharacterrizationReport工藝特征報告一份包括工藝特性研究中單元操作，和/或所有操作的性能特征的研究結果的報告。該報告描述特性，操作參數(shù)（關鍵參數(shù)、主要和非主要參數(shù)）和參數(shù)的可接受范圍，驗證的驗收標準。相關定義第十二頁，共45頁。ProcessValidationMasterPlan工藝驗證總體規(guī)劃定義工藝驗證范圍和原理的文件，包括工藝驗證研究的執(zhí)行列表。ProcessValidationProtocol工藝驗證草案質量部門預先寫好的書面計劃，工藝驗證草案陳述驗證的管理方式，抽樣鑒別，化驗，特殊的驗收標準，生產(chǎn)設備和操作范圍。草案中表述的每一項研究取得的結果，應在相關的工藝驗證報告中進行評估。ProcessValidationProtocol工藝驗證報告質量單位通過總結特定的測試，對比實驗結果與草案驗收標準，發(fā)表研究過程中出現(xiàn)的差異，給出的審核報告。相關定義第十三頁，共45頁。InstallationQualification(IQ):安裝確認遵守經(jīng)過檢驗的設計、制造商推薦、和/或客戶要求來完成設備、系統(tǒng)的安裝或改進的文件確認。OperationalQualification(OQ):運行確認設備和系統(tǒng)的安裝或改進，在預期的操作范圍內(nèi)運行的文件確認。PerformanceQualification(PQ):性能確認確認文件，證明設備和配套輔助系統(tǒng)，安裝連接后，可以在批準的工藝方法和規(guī)范的基礎上有效的、再現(xiàn)的運行。相關定義第十四頁，共45頁。工藝驗證確保生產(chǎn)過程具有一致性、可控性、可重復性操作數(shù)據(jù)和生產(chǎn)結果可控（質量、收率），且在規(guī)定范圍內(nèi)保證產(chǎn)品質量生產(chǎn)的工藝、設備生產(chǎn)工藝已經(jīng)確定。且已形成了文件確定接受標準、限度范圍第十五頁，共45頁。驗證的條件工藝開發(fā)工藝開發(fā)基本過程工藝說明工藝特性鑒定細胞株和表達構建特性鑒定產(chǎn)品包材表面提取風險評估設備和儀器第十六頁，共45頁。工藝驗證的條件工藝開發(fā)基本過程分子選擇宿主細胞選擇細胞培養(yǎng)/發(fā)酵工藝開發(fā)捕獲工藝開發(fā)純化工藝開發(fā)過濾系統(tǒng)的鑒別和開發(fā)制劑工藝研究和產(chǎn)品介紹分析方法開發(fā)藥代動力學/毒理學研究工藝放大工藝特性第十七頁，共45頁。工藝說明工藝說明記錄生產(chǎn)工藝流程，是主控文件的一部分。它詳細記錄了工藝的每一個步驟，列舉工藝操作和與每一步相關的參數(shù)指標。清晰的闡明每一個步驟（例如：表達，DNA降解、或緩沖液更換）的目的，所以可以準確的評估該步驟的性能。工藝驗證的條件第十八頁，共45頁。工藝特性工藝特性由一系列記錄在案的實驗室研究組成，在實驗室研究中操作參數(shù)被有目的的改變，以確定其對產(chǎn)品質量屬性和工藝性能的影響。操作參數(shù)是可以直接控制的工藝輸入。性能參數(shù)是被監(jiān)控以確?；蜃C實可接受的工藝性能的工藝輸出。在工藝特性研究的初始階段，要確定每一步操作的關鍵和主要工藝參數(shù)。在工藝特征報告中，要列舉關鍵和主要工藝參數(shù)，以及確定他們的基礎：可接受范圍，確定該范圍的依據(jù)；其他從研究中得到的相關信息。工藝驗證的條件第十九頁，共45頁。第二十頁，共45頁。決定該參數(shù)被定義為關鍵/主要或非主要工藝參數(shù)的是操作范圍相關的可接受限度。操作范圍非常接近可接受限度，當發(fā)生非常小的波動時，產(chǎn)品質量和工藝將會出現(xiàn)問題?？山邮芟拗葡鄬τ诓僮鞣秶欠浅挼摹５诙豁?，共45頁。細胞系和表達載體的構建生物技術藥物大多是來源于細胞的，而細胞具有影響工藝生產(chǎn)一致性和產(chǎn)品質量的潛能。一旦細胞系或遺傳結構不穩(wěn)定，可能導致雜質的變化（宿主蛋白、核酸）。對起始細胞株的充分研究，是理解和控制工藝生產(chǎn)的結果的必要前提。工藝驗證的條件第二十二頁，共45頁。產(chǎn)品接觸表面溶出物生產(chǎn)過程中，與產(chǎn)品接觸到表面可能能會有溶出物到產(chǎn)品當中影響產(chǎn)品質量。現(xiàn)在所使用的都是一些低溶出的材料,但是也要考慮到有溶出的風險。對于這些，可以根據(jù)與產(chǎn)品接觸表面積、接觸時間、溫度、產(chǎn)品與材料的親和性等，進行風險評估，來確定所用材料的安全性?；瘜W兼容性也需要進行風險評估。工藝驗證的條件第二十三頁，共45頁。風險評估風險評估可以確認工藝的有效性，可以確認工藝參數(shù)，并將其分類。產(chǎn)品質量的風險評估要檢驗那些對藥物的安全性、質量純度有影響的單元操作病毒去除

溶劑處理，病毒過濾生物負載和內(nèi)毒素過濾糖基化分布細胞構建和發(fā)酵條件產(chǎn)品純度層析純化、過濾產(chǎn)品接觸材料的兼容性和溶出產(chǎn)品的同質性混合工藝驗證的條件第二十四頁，共45頁。儀器和設備設備、設施要在工藝驗證之前進行確認。包括安裝確認、運行確認、性能確認。設備確認——確定設備的功能和設計要求設備確認材料——說明書、工廠驗收測試和現(xiàn)場檢測執(zhí)行方案的一部分。審查設備操控能力、生產(chǎn)力和安全性。評估組件的兼容性、耐久性。在工藝驗證的同時要進行清潔驗證，要求在工藝驗證之前要確定清潔產(chǎn)品接觸面和工藝加工助劑（填料）表面的清潔試劑。建立定期檢修、儀器校準、變更控制的相關程序工藝驗證的條件第二十五頁，共45頁。工藝驗證工藝驗證選擇性工藝驗證研究第二十六頁，共45頁。工藝驗證工藝驗證的選擇性前瞻性工藝驗證：指新產(chǎn)品獲得許可之前、或采用變更后的生產(chǎn)工藝（可影響產(chǎn)品質量的工藝變更）生產(chǎn)許可產(chǎn)品之前完成的驗證。前瞻性驗證是生物技術產(chǎn)業(yè)最常用的驗證方法。并行性工藝驗證：與產(chǎn)品生產(chǎn)同時進行的驗證活動，主要是收集、整理在線生產(chǎn)數(shù)據(jù)。回顧性工藝驗證：通過審查相關歷史和生產(chǎn)記錄檢測的數(shù)據(jù)，驗證已經(jīng)獲得批準的生產(chǎn)工藝具有足夠的穩(wěn)定性。第二十七頁，共45頁。工藝驗證研究工藝驗證中要求的實驗項目包括：病毒清除雜質清除工藝一致性工藝中間體穩(wěn)定性工藝溶液穩(wěn)定性藥物活性成分灌封、凍干、解凍、保存混合（產(chǎn)品和工藝溶液）層析介質和再生過濾膜使用周期驗證工藝驗證第二十八頁，共45頁。病毒清除：蛋白質藥物的原料都是生物制品，可能會帶入不同的病毒，導致污染。做法參考ICHQ5AViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigin在一期臨床試驗之前要完成病毒清除驗證工藝驗證第二十九頁，共45頁。雜質清除：雜質清除的評估在實驗室規(guī)模，檢驗一致性批次的產(chǎn)品，對那些影響產(chǎn)品安全性和預期生物活性的雜質的去除，要有一致性文件證明。工藝相關雜質：細胞底物衍生雜質HCP、DNA、細胞培養(yǎng)衍生雜質誘導劑、培養(yǎng)基下游產(chǎn)物衍生雜質酶、無機鹽、溶劑產(chǎn)品相關雜質：截短型

修飾型異構體、氧化產(chǎn)物、糖基化

聚集物工藝驗證第三十頁，共45頁。污染物的清除也要進行評估：包括內(nèi)毒素、生物負荷、病毒。雜質清除結果的評估包括雜質水平與設定標準的對比和清除過程的一致性。盡管蛋白質藥物生產(chǎn)過程不一定是無菌的，微生物（真菌、細菌）的控制驗證也同樣需要。工藝驗證第三十一頁，共45頁。工藝一致性工藝的一致性是一種證明、證明工藝的性能和控制符合預期的發(fā)展，證明生產(chǎn)設備、儀器、程序重復地生產(chǎn)出符合說明書和產(chǎn)品質量標準的原料藥。一致性的性能參數(shù)：質量、產(chǎn)量一致性批量：連續(xù)不斷的三批如果不是工藝本身的原因導致工藝不能連續(xù)生產(chǎn)，在驗證報告中要說明并討論。工藝驗證第三十二頁，共45頁。工藝中間體穩(wěn)定性中間體的生化穩(wěn)定性，可以通過生產(chǎn)規(guī)模、實驗室規(guī)?；騼烧呦嘟Y合的方式來驗證。生產(chǎn)規(guī)模方法與生產(chǎn)進度相沖突實驗室規(guī)模研究確定中間體的holdingtimes中間體的生物負荷和內(nèi)毒素要確認，過高的生物負荷可影響產(chǎn)品的質量或引入未知的污染工藝驗證第三十三頁，共45頁。工藝溶液穩(wěn)定性

細胞培養(yǎng)基、稀釋緩沖液、病毒失活溶液、色譜緩沖液生物負荷、內(nèi)毒素、化學穩(wěn)定性參數(shù)：生物負荷、內(nèi)毒素、pH、電導、holdingtime前瞻性驗證：每種溶液分三處保存同步驗證無菌保存：容器的無菌確認、溶液穩(wěn)定性工藝驗證第三十四頁，共45頁。藥物活性成分的灌封、凍結、解凍、保存產(chǎn)品保存過程中要控制的關鍵參數(shù)：產(chǎn)品濃度緩沖液濃度無菌濾器的泄露（即使沒有要求無菌）冷藏溫度（冷藏）冷凍速度（冷藏）解凍溫度（冷藏）解凍速度（冷藏）容器/封蓋系統(tǒng)型號和尺寸工藝驗證第三十五頁，共45頁?；旌涎芯繉Ξa(chǎn)品的影響的因素：混合時間（最小15min最大時間—氧化、降解）設備的轉速（10-14rpm）溫度（20-27℃）混合研究要求一定的時間間隔取樣、檢測，繪制相對混合時間的結果圖。參數(shù)：密度、電導、透明度不同濃度的溶液混合，要混合器在不同的位置進行取樣。工藝驗證第三十六頁，共45頁。層析介質和可重復使用薄膜壽命驗證驗證方法：小規(guī)模驗證、全面驗證、前瞻性驗證、并行性驗證小規(guī)模特性研究評估、確定操作參數(shù)和性能屬性清潔