離子色譜在藥品檢驗中的應(yīng)用與展望演示文稿

離子色譜在藥品檢驗中的應(yīng)用與展望演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有49頁\編輯于星期四（優(yōu)選）離子色譜在藥品檢驗中的應(yīng)用與展望現(xiàn)在是2頁\一共有49頁\編輯于星期四20世紀40年代

20世紀60年代末

Novelionexchangechromatographicmethodusingconductimetricdetection------HamishSmall,et.al.Anal.Chem.,1975,47(11),1801-《中國藥典》2010年版二部附錄ⅤJ現(xiàn)在是3頁\一共有49頁\編輯于星期四內(nèi)容1.離子色譜的分離方式及機理2.流動相3.抑制器4.檢測器5.離子色譜在醫(yī)藥及藥檢領(lǐng)域的應(yīng)用現(xiàn)在是4頁\一共有49頁\編輯于星期四離子排斥色譜（HPIEC）：無機弱酸和有機酸、醇、醛、氨基酸和糖類的分離離子對色譜(MPIC)：分離金屬絡(luò)和物和表面活性陽離子/陰離子高效離子交換色譜（HPIC）：親水性陰、陽離子的分離分離的方式現(xiàn)在是5頁\一共有49頁\編輯于星期四現(xiàn)在是6頁\一共有49頁\編輯于星期四ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＨＣＯ３－Ｃｌ－ＳＯ４２－Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－TemporalcourseＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＨＣＯ３－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋離子交換分離過程現(xiàn)在是7頁\一共有49頁\編輯于星期四分離陰離子Column：IonPac

AG12A/AS12A

Eluent：2.7mMNa2CO30.3mMNaHCO3

Flowrate：1.2mL/minDetection：Conductivity(ASRSRecyclemode)

0246810121416Retentiontime(min)08mSF-NO3-SO42-Cl-NO2-Br-HPO42-現(xiàn)在是8頁\一共有49頁\編輯于星期四影響離子保留的因素離子色譜法中用分配系數(shù)（指在固定相和流動相中的濃度比）來描述離子的色譜保留行為，不同離子分配系數(shù)的差異是色譜分離的基礎(chǔ)。影響因素有流動相流速、分離柱長度、柱溫、固定相性質(zhì)、流動相的種類與濃度、流動相的pH等?，F(xiàn)在是9頁\一共有49頁\編輯于星期四離子排斥色譜法的分離假說Donnan排斥作用吸附

空間排阻現(xiàn)在是10頁\一共有49頁\編輯于星期四ＳＯ３－

Ｈ＋ＣＯＯ－

Ｈ＋ＳＯ３－ＳＯ３－

Ｈ＋ＳＯ３－Ｈ＋ＳＯ３－

Ｈ＋ＣＯＯ－

Ｈ＋ＣＯＯ－

Ｈ＋

Ｈ２Ｏ

Ｈ２Ｏ

Ｈ２Ｏ

Ｈ２Ｏ

Ｈ２Ｏ

Ｈ２ＯDonnanmembraneＨ＋

Ｃｌ－

２Ｈ＋（ＣＯＯ－）２（ＣＯＯＨ）２ＳＯ３－

Ｈ＋Ｈ＋

ＣＨ３ＣＯＯ－

ＣＨ３ＣＯＯＨ

固定相

流動相離子排斥分離機理現(xiàn)在是11頁\一共有49頁\編輯于星期四Column

： IonPac

ICEAS1

Eluent

： 0.4mMOctonesulfonicacidFlowrate

： 1.0mL/minSuppressor

：AMMS-ICEⅡRegeneratorliquid

：

5mMTBAOH／50mMH3BO3Detection

：Conductivity離子排斥法分離有機酸

20100保留時間(min)0μS5123451.甲酸 2.乙酸

3.丙酸

4.丁酸5.戊酸現(xiàn)在是12頁\一共有49頁\編輯于星期四離子對的分離機理1.生成離子對－待測離子與離子對試劑生成中性“離子對”分布于固定相與流動相之間，其分離類似傳統(tǒng)的反相分離2.動態(tài)離子交換－離子對試劑的疏水部分吸附于固定相形成動態(tài)的離子交換表面，其分離機理類似于離子交換。3.離子間相互作用－除包括以上兩種分離機理和固定相表面雙電層結(jié)構(gòu)的分離機理?，F(xiàn)在是13頁\一共有49頁\編輯于星期四Mobilephase

TBAOH／ACN／H2OSampleY+X-

Ｈ２Ｏ

Ｈ２Ｏ固定相

TBA+OH-

Y+X-

Y+X-

(TBA+X-)

(TBA+X-)

(TBA+X-)

(TBA+X-)

TBA+OH-

ACN

ACN

ACN

ACN

ACN

ACN

ACN

TBA+OH-

TBA+OH-

疏水相

親水相離子對分離機理

Y+

OH-現(xiàn)在是14頁\一共有49頁\編輯于星期四

Column: IonPacNS1、NG1Eluent: 2mMTBAOH, 24%～48%CANgradient in10minFlowrate: 1.0mL/min Detection: Conductivity(suppressortype)

（ASRSMPICMode）

Regenerator:10mNH2SO4 1.Methanesulfonicacid5.0μg/mL(ppm) 2.1-Propanesulfonicacid8.6 3.1-Butanesulfonicacid

8.7 4.1-Hexanesulfonicacid8.8 5.1-Heptanesulfonicacid8.9 6.1-Octanesulfonicacid8.9 7.1-Decanesulfonicacid9.10Retentiontime(min)12168μS0.0416234578.0反相離子對分離測定現(xiàn)在是15頁\一共有49頁\編輯于星期四離子色譜固定相—分離的核心

抓住基礎(chǔ)

注重積累

關(guān)注發(fā)展現(xiàn)在是16頁\一共有49頁\編輯于星期四離子色譜流動相選擇的條件有一定的洗脫能力；化學(xué)、物理性質(zhì)穩(wěn)定；與被測離子有一定的性質(zhì)差異；對檢測器響應(yīng)值盡可能小現(xiàn)在是17頁\一共有49頁\編輯于星期四離子色譜使用的水與試劑純度盡可能高高純水：電阻率≧17MΩ、0.22μm濾膜過濾 ：流動相脫氣（在線氦氣脫氣或超聲、減壓過濾離線脫氣）冷凍方式脫氣？？試劑：盡可能使用優(yōu)級純：配標準的試劑應(yīng)預(yù)先干燥現(xiàn)在是18頁\一共有49頁\編輯于星期四抑制型陰離子色譜的典型流動相四硼酸鈉(Na2B4O7)硼酸 (H3BO3)氫氧根 (NaOH)碳酸氫根(NaHCO3)碳酸根 (Na2CO3)

通常，作為流動相使用的化合物在水溶液中的pH大于8時為陰離子，pH在5-8之間為中性分子，其陰離子對固定相親合力.與待測離子相近，這類化合物可作陰離子分析的流動相。

流動相強度現(xiàn)在是19頁\一共有49頁\編輯于星期四陽離子交換流動相的選擇流動相有足夠的電離，以提供陽離子的脫離；多價陽離子有更大的洗脫能力；洗脫離子半徑越大，洗脫能力越強；與被測離子有足夠大的電導(dǎo)差異；對抑制電導(dǎo)法，抑制后流動相背景電導(dǎo)足夠小流動相的背景較小較理想；酸或?qū)?yīng)的弱堿對于有機胺類，加入有機改進劑，會減少保留時間并且改善峰形現(xiàn)在是20頁\一共有49頁\編輯于星期四陽離子交換所用的流動相鹽酸硝酸硫酸甲磺酸吡啶－2,6－二羧酸現(xiàn)在是21頁\一共有49頁\編輯于星期四離子排斥色譜常用流動相主要作用:改變?nèi)芤旱膒H值,控制有機酸的離解最簡單的是去離子水，對有機酸的分析，常用礦物酸，如HCl，H2SO4，HNO3等。Ag+型陽離子交換劑作抑制器填料:HCl若用直接UV檢測:H2SO4現(xiàn)在是22頁\一共有49頁\編輯于星期四混合流動相流動相中添加有機溶劑（疏水性離子的吸附、分配）強流動相＋弱流動相（淋洗強度的準確調(diào)節(jié)）流動相中有目的地添加特殊試劑（如：酒石酸＋冠醚，用于鉀鈉分離）調(diào)節(jié)流動相強度和極性現(xiàn)在是23頁\一共有49頁\編輯于星期四色譜柱、流動相的溫度流動相的濃度與組成流動相的流速流動相中的雜質(zhì)影響色譜分析的各種條件現(xiàn)在是24頁\一共有49頁\編輯于星期四

一價離子快速洗脫

二價離子較慢洗脫

溫度增加02468101214202530354045Temp.℃）Retentiontime(min)F-Cl-NO2-Br-NO3-HPO42-SO42-色譜柱、流動相的溫度現(xiàn)在是25頁\一共有49頁\編輯于星期四流動相濃度vs.保留時間0481216208mM9mM10mM11mM12mM13mM濃度（ＭＳＡ）Retentiontime(min)Na+NH4+K+Mg2+Ca2+現(xiàn)在是26頁\一共有49頁\編輯于星期四流動相的組成vs.保留時間04812162000.110.220.33Comp.ratio(NaHCO3/Na2CO3)Retentiontime(min)F-Cl-NO2-Br-NO3-HPO42-SO42-現(xiàn)在是27頁\一共有49頁\編輯于星期四100μS0%ACN20%ACN50%ACN12345671234567010Retentiontime(min)12,34567101000μSμS 1. F- 2. Cl- 3. NO2- 4. Br- 5. NO3- 6. HPO42- 7. SO42-

流動相中有機溶劑的影響ExAS4A-SCcolumn現(xiàn)在是28頁\一共有49頁\編輯于星期四流動相的流速

VS.面積0200040006000800010000120000.511.52Flowrate（mL/min）AreaF-Cl-NO2-Br-NO3-HPO42-SO42-流速增加各組份的峰面積減少現(xiàn)在是29頁\一共有49頁\編輯于星期四流動相中雜質(zhì)的影響正常流動相流動相被Cl沾污-15uSCl-:0.5μg/ml背景電導(dǎo)：13μS0.005.0010.00-42uSRetentiontime(min)背景電導(dǎo)：56μS現(xiàn)在是30頁\一共有49頁\編輯于星期四流動相

泵色譜柱檢測器

泵液分離

檢測

記錄F-NO3-SO42-Cl-NO2-Br-HPO42-進樣閥抑制器檢測池進樣離子色譜的基本流程圖現(xiàn)在是31頁\一共有49頁\編輯于星期四廢液NaFNaClNaNO3Na2HPO4Na2SO4BackGround：Na2CO3/NaHCO3

(700μS)～～RetentiontimeConductivityHFHClHNO3H3PO4H2SO4RetentiontimeBackGround：H2CO3(15μS)Conductivity抑制器的作用流動相四元梯度泵保護柱離子色譜柱抑制器電導(dǎo)檢測器現(xiàn)在是32頁\一共有49頁\編輯于星期四

安裝在電導(dǎo)池之前提高待測離子的電導(dǎo)率：

提高靈敏度Na+,

Cl-

H+,

Cl-

降低背景電導(dǎo)(流動相):

減少噪音Na+,

HCO3-

H2CO3Na+,

OH-

H2O抑制器現(xiàn)在是33頁\一共有49頁\編輯于星期四檢測器檢測方法原理應(yīng)用范圍電導(dǎo)法電導(dǎo)陰、陽離子和有機酸安培法直流安培檢測器測量電活性分子在工作電極表面氧化或還原反應(yīng)時所產(chǎn)生電流變化的檢測器碘離子、亞硫酸根、氰化物、硫化物、酚類、兒茶酚胺類積分安培檢測器伯胺、仲胺、叔胺、硫化物、硫醇、氨基酸脈沖安培檢測器伯胺、仲胺、叔胺、醇、乙二醇、醛、糖類紫外/可見光檢測紫外/可見光吸收亞硝酸根離子、硝酸根離子及其他具有強紫外吸收成分的測定，柱后衍生常用于分離分析過渡金屬離子和鑭系金屬等熒光（結(jié)合柱后衍生）激發(fā)和發(fā)射銨、氨基酸現(xiàn)在是34頁\一共有49頁\編輯于星期四樣品處理過濾樣品中除去顆粒物用0.45μm或0.22μm濾膜用高純水沖洗濾膜，以減少沾污稀釋待測物濃度較高時，應(yīng)預(yù)先稀釋.降低干擾物的濃度.去除干擾物預(yù)處理柱，超濾固相萃取?液相萃取?離心?鹽析在線柱處理現(xiàn)在是35頁\一共有49頁\編輯于星期四在藥檢領(lǐng)域的應(yīng)用《中國藥典》2010年版新增品種糖類分析氨基酸分析現(xiàn)在是36頁\一共有49頁\編輯于星期四新增品種帕米磷酸二鈉氯膦酸二鈉現(xiàn)在是37頁\一共有49頁\編輯于星期四帕米磷酸二鈉

PamidronateDisodium

(PamidronateDisodiumPentahydrate)現(xiàn)在是38頁\一共有49頁\編輯于星期四帕米磷酸二鈉《中國藥典》2010年版USP32(原料和注射用)BP2008(原料)EP6.0(原料)有關(guān)物質(zhì)無高效液相色譜法陰離子交換樹脂(色譜柱),以0.0188%甲酸溶液,80g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.5為流動相,折光檢測器高效液相色譜法陰離子交換樹脂(色譜柱),以0.02%甲酸溶液,80g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.5為流動相,折光檢測器高效液相色譜法陰離子交換樹脂(色譜柱),以0.02%甲酸溶液,80g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.5為流動相,折光檢測器含量離子色譜法陰離子交換色譜柱，以3mmol/L草酸為流動相，流速1.2ml/min,電導(dǎo)檢測器高效液相色譜法陰離子交換樹脂(色譜柱),以0.0188%甲酸溶液,80g/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至3.5為流動相,折光檢測器電位滴定法電位滴定法現(xiàn)在是39頁\一共有49頁\編輯于星期四氯膦酸二鈉

ClodronateDisodium

(ClodronateDisodiumTetrahydrate)現(xiàn)在是40頁\一共有49頁\編輯于星期四氯膦酸二鈉WS1-（X-061）2002Z《中國藥典》2010年版EP(原料)有關(guān)物質(zhì)無離子色譜法陰離子交換色譜柱,以水為流動相A,以0.1mol/L氫氧化鉀溶液為流動相B,梯度洗脫電導(dǎo)檢測器離子色譜法陰離子交換色譜柱,以0.21g/L氫氧化鈉溶液為流動相A,以4.2g/L氫氧化鈉溶液為流動相B,梯度洗脫電導(dǎo)檢測器含量電位滴定法離子色譜法陰離子交換色譜柱，以45mmol/L氫氧化鉀為流動相，流速1.2ml/min,抑制型電導(dǎo)檢測器電位滴定法現(xiàn)在是41頁\一共有49頁\編輯于星期四糖類分析的原理在強堿溶液中呈離子化狀態(tài)糖具有電化學(xué)活性現(xiàn)在是42頁\一共有49頁\編輯于星期四RocklinRD,PohlCA.JLiquidChromatoger

1987,388:46現(xiàn)在是43頁\一共有49頁\編輯于星期四六種單糖標準溶液的離子色譜圖1、鼠李糖2、阿拉伯糖3、半乳糖4、葡萄糖5、木糖6、果糖現(xiàn)在是44頁\一共有49頁\編輯于星期四氨基酸分析1樣品不需衍生化處理，可直接分析；2靈敏度高，最小檢測濃度可達ppb級（μg/L）。常見的氨基酸如下：丙胺酸、精氨酸、天冬酰胺酸、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、甘氨酸、異亮氨酸、亮氨基酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸