高效液相色譜法測定槐花米提取物中蘆丁含量課件

高效液相色譜法測定槐花米提取物中蘆丁含量

王味思夏仲尼孫思源蔡瑜柴曉鵑陳萬威徐強蘆?。≧utinC27H30O16）豆科植物槐樹花蕾-槐米的主要有效成份具有維生素P樣作用，有助于保護和恢復毛細血管的彈性，調(diào)節(jié)毛細血管的滲透性，可作為高血壓和腦溢血的輔助治療已報道的蘆丁HPLC測定方法采用的流動相有多種，本次實驗的目的是針對這些不同的流動相進行考察，并對蘆丁樣品的含量進行測定。本實驗采用的槐米提取物來自浙江大學藥學院天然藥化實驗室本科生實驗產(chǎn)物中國藥典色譜條件固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱流動相：甲醇-1%冰醋酸溶液（32:68）檢測波長：257nm對照品溶液的制備精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品適量甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液文獻一色譜條件固定相：Nova-PakC18柱（150mm×4.6mm）流動相：甲醇-水（35:65）流速：1.0ml·min-1進樣量：10μl柱溫：30℃檢測波長：261nm樣品處理精密稱取本品適量70%乙醇20ml浸泡超聲提取離心取上清反復提取至提取液無色合并上清至100ml的容量瓶定容樣品測定適量提取液0.45μm濾膜過濾直接進樣外標法測定文獻二色譜條件固定相：Luna5μC18柱（150x4.6mm）流動相：甲醇-水-乙酸（45:53:2）進樣量：5μl柱溫：30℃檢測波長：355nm對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品5.4mg置于5ml容量瓶甲醇稀釋至刻度供試品溶液的制備精密稱取本品適量置于索氏提取器甲醇提取至無色提取液轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶甲醇稀釋至刻度供試品溶液制備精密稱取本品適量30ml甲醇浸泡超聲提取濾過適量甲醇洗殘渣2～3次洗液并入濾液甲醇定容至100ml搖勻即得樣品測定供試品溶液微孔濾膜(0.45μm)濾過直接進樣外標法測定項目文獻一文獻二文獻三固定相Nova-pakC18Luna5μC18SpherisorbODSC18柱流動相甲醇-水（35:65）甲醇-水-乙酸（45:53:2）甲醇-乙腈-冰醋酸-水（22:10:3:65）柱溫(℃)303045檢測波長(nm)261355257精密度(%)1.431.441.5重復性(%)1.073.41.63回收率(%)96.3298.299.5標準曲線的繪制對照品溶液分別配制成梯度溶液進樣測定峰面積以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，做標準曲線。樣品測定供試品溶液微孔濾膜過濾直接進樣外標法測定儀器精密度同一對照品溶液重復進樣6次測定其峰面積計算RSD討論蘆丁易溶于甲醇，在水中微溶，降低流動相中甲醇的含量將提高蘆丁的分離效果，但同時也將延長保留時間，實驗中需根據(jù)實際情況調(diào)節(jié)流動相配比以獲得良好的分離效果。蘆丁在水溶液中呈酸性，為防止其水解，藥典及許多文獻報道的流動相中都加入了無機酸，但含量較高的酸容易對分析柱造成損傷。文獻一的流動相中僅用了甲醇和水，也獲得了滿意的效果。而文獻方案三認為加入乙酸可有效防止脫尾，實驗中可根據(jù)實際情況決定是否加酸。蘆丁在204nm、257nm、355nm處有3個吸收峰，藥典中蘆丁的檢測波長為257nm，文獻二用了355nm作為檢測波長，也獲得了較好的檢測結果。另一