PCR專(zhuān)題講座課件

PolymeraseChainReaction聚合酶鏈反應(yīng)PCR定義

是一種模擬天然DNA復(fù)制過(guò)程,由引物介導(dǎo)、耐熱DNA聚合酶催化，在體外擴(kuò)增特異DNA片段的一種快速而有效的方法。歷史沿革1958Enrmberry分離出DNA多聚酶1976Chien分離出熱穩(wěn)定性多聚酶1985Mullis發(fā)明多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)1988復(fù)旦大學(xué)研制出FD多聚酶1989分子年P(guān)CR爆炸年

基本原理一、生化原理1、變性作用2、復(fù)性作用二、操作原理擴(kuò)增材料一、儀器1、臺(tái)式高速微量離心機(jī)2、PCR熱循環(huán)儀3、微量塑料離心管4、微量加樣器5、電泳儀、電泳槽6、紫外分析儀二、模板DNA擴(kuò)增體系一、引物二、TaqDNA聚合酶三、標(biāo)準(zhǔn)PCR緩沖液四、底物五、模板核酸操作步驟一、建立擴(kuò)增體系二、模板提取三、上機(jī)擴(kuò)增四、檢測(cè)五、報(bào)告臨床應(yīng)用泌尿系列一、淋病雙球菌NG二、沙眼衣原體CT三、解脲支原體UU四、人乳頭瘤病毒HPV五、單純皰疹病毒HSV六、梅毒螺旋體TP七、金黃色葡萄球菌SAU優(yōu)生優(yōu)育一、人類(lèi)巨細(xì)胞病毒HCMV二、弓形蟲(chóng)TOX三、單純皰疹病毒HSV四、風(fēng)疹病毒RV五、α—地中海貧血a–THA肝炎系列一、甲型肝炎HAV二、乙型肝炎HBV三、丙型肝炎HCV四、戊型肝炎HEV雙鏈DNA分子單鏈DNA分子變性復(fù)性NG由淋病雙球菌引起的泌尿生殖器黏膜化膿性炎癥，普通培養(yǎng)基不易生長(zhǎng)，鏡檢漏檢率高。檢測(cè)范圍：臨床可疑患者、孕婦檢查、體檢等取材：尿道子宮頸拭子血液心包液腦脊液CT不僅引起眼部感染，而且是性傳播疾病的主要病原體，感染常無(wú)特異癥狀。取材：尿道宮頸內(nèi)膜眼分泌物拭子UU又叫解脲脲原體，常在臨床上誤為淋病，長(zhǎng)期治療效果不佳。取材：收集宮頸口（女性）棉拭或尿道口（男性）分泌物及前列腺液。HSV檢測(cè)范圍：可疑對(duì)象流行病調(diào)查病原體分型指導(dǎo)用藥孕婦常規(guī)檢查取材：角膜拭子口腔拭子宮頸拭子TB檢測(cè)范圍：早期診斷鑒別診斷流行病學(xué)調(diào)查隨訪取材：痰腹水腦脊液支氣管灌洗液膿液尿活檢組織MP檢測(cè)范圍：對(duì)支原體肺炎、原發(fā)性典型性肺炎的確診取材：收集患者的咽拭子、痰或肺泡灌洗液送檢。TOX標(biāo)本收集：收集腦脊液、羊水、腦組織、宮頸、陰道、外陰、陰莖分泌物等。弓形蟲(chóng)可寄生在哺乳類(lèi)、兩棲類(lèi)、魚(yú)類(lèi)、爬行類(lèi)的任何有核組織細(xì)胞中，選擇性不強(qiáng)。RV標(biāo)本收集：采集患者、孕婦血液或胎兒羊水、宮頸分泌物、痰液、咽拭子等。只對(duì)人致病。預(yù)防重點(diǎn)是育齡婦女。腫瘤1、鼻咽癌EBV2、幽門(mén)螺旋桿菌HP傷寒桿菌其他1、腺病毒Adv2、柯薩奇病毒Cox3、輪狀病毒ROV4、狂犬病毒RT5、細(xì)小DNA病毒B196、霍亂弧菌VCH熒光定量技術(shù)

1996年由美國(guó)AppliedBiosystems公司推出采用先進(jìn)的Taqman熒光探針技術(shù)，比常規(guī)多了一個(gè)寡聚核苷酸探針，Taq酶分子在鏈延長(zhǎng)過(guò)程中可以通過(guò)自身的5，--3，核酸外切酶降解與模板結(jié)合的特異性熒光探針。技術(shù)特點(diǎn)一、污染最少二、靈敏度更高三、可準(zhǔn)確定量四、特異性增強(qiáng)五、定量范圍寬六、操作簡(jiǎn)便七、安全臨床