微生物的生長繁殖和微生物計數(shù)方法

微生物的生長繁殖一、微生物生長繁殖

微生物生長是細胞物質(zhì)有規(guī)律地、不可逆增加，導(dǎo)致細胞體積擴大的生物學(xué)過程，這是個體生長的定義。繁殖是微生物生長到一定階段，由于細胞結(jié)構(gòu)的復(fù)制與重建并通過特定方式產(chǎn)生新的生命個體，即引起生命個體數(shù)量增加的生物學(xué)過程。可以看出微生物的生長與繁殖是兩個不同，但又相互聯(lián)系的概念。生長是一個逐步發(fā)生的量變過程，繁殖是一個產(chǎn)生新的生命個體的質(zhì)變過程。在高等生物里這兩個過程可以明顯分開，但在低等特別是在單細胞的生物里，由于個體微小，這兩個過程是緊密聯(lián)系很難劃分的過程。因此在討論微生物生長時，往往將這兩個過程放在一起討論，這樣微生物生長又可以定義為在一定時間和條件下細胞數(shù)量的增加，這是微生物群體生長的定義。

1、

細菌的個體生長

細菌的個體生長包括細胞結(jié)構(gòu)的復(fù)制與再生、細胞的分裂與控制，染色體DNA的復(fù)制和分離

細菌在個體生長過程中通過染色體DNA的復(fù)制，使其遺傳特性能保持高度的連續(xù)性和穩(wěn)定性。

細胞壁擴增：細胞壁是細胞外的一種“硬”性結(jié)構(gòu)。細菌在生長過程中，細胞壁只有通過擴增，才能使細胞體積擴大。

細菌的分裂：當細菌的各種結(jié)構(gòu)復(fù)制完成之后就進入分裂時期。此時在細菌長度的中間位置，通過細胞質(zhì)膜內(nèi)陷并伴隨新合成的膚聚糖插入，導(dǎo)致橫隔壁向心生長，最后在中心會合，完成一次分裂，將一個細菌分裂成兩個大小相等的子細菌。

2、

細菌的群體生長繁殖

除某些真菌外，我們?nèi)庋劭吹交蚪佑|到的微生物已不是單個，而是成千上萬個單個的微生物組成的群體。微生物接種是群體接種，接種后的生長是微生物群體繁殖生長。

細菌接種到均勻的液體培養(yǎng)基后，當細菌以二分裂法繁殖，分裂后的子細胞都具有生活能力。在不補充營養(yǎng)物質(zhì)或移去培養(yǎng)物，保持整個培養(yǎng)液體積不變條件下，以時間為橫坐標，以菌數(shù)為縱坐標，根據(jù)不同培養(yǎng)時間里細菌數(shù)量的變化，可以作出一條反映細菌在整個培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線，這種曲線稱為生長曲線(growth

cuwe)。一條典型的生長曲線至少可以分為遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期等四個生長時期。

①延遲期

lag

phase(停滯期、調(diào)整期）

表現(xiàn)：不立即繁殖，生長速率近于0，菌數(shù)幾乎不變，細胞形態(tài)變大。

特點：分裂遲緩，合成代謝活躍，體積增長快，對外界不良環(huán)境敏感。

原因：調(diào)整代謝，合成新的酶系和中間代謝產(chǎn)物以適應(yīng)新環(huán)境。

消除：增加接種量；采用最適菌齡接種；培養(yǎng)基成分（種子、發(fā)酵）

②對數(shù)期

log

phase

表現(xiàn)：代謝活性最強，幾何級數(shù)增加，代時最短，生長速率最大。

特點：細菌數(shù)目增加與原生質(zhì)總量增加，與菌液濁度增加呈正相關(guān)性。

代時（generation

time）：單個細胞完成一次分裂所需時間，亦即增加一代所需時間。

G=t1－t0/n

y=xo×2

n

n=lgy

-

lgx/lg2

導(dǎo)出

G

=

t1－t0

/3.3(lgy

-

lgx)

影響G因素：菌種、營養(yǎng)成分、營養(yǎng)物濃度（很低時影響）、培養(yǎng)溫度。

③穩(wěn)定期

stationary

phase(最高生長期、靜止期）

表現(xiàn)：新增殖細胞數(shù)與老細胞的死亡數(shù)幾乎相等，活菌數(shù)動態(tài)平衡。

特點：生長速率又趨于0，細胞總數(shù)最高。

原因：養(yǎng)分減少；有毒代謝物產(chǎn)生。

穩(wěn)定期細胞內(nèi)開始積累貯存物，此階段收獲菌體，也是發(fā)酵過程積累代謝產(chǎn)物的重要階段。

延長：補料，調(diào)pH、溫度等。此時，菌體總數(shù)量與所消耗的營養(yǎng)物之間存在一定關(guān)系，稱為產(chǎn)量常數(shù)（生長效率）。Y

=

X

-

X0

/C

其中X-穩(wěn)定期細胞干重/ml，

X0

-接種時干重/ml，C-限制性營養(yǎng)物濃度。

根據(jù)這一原理，可進行生物測定。

將未知混合物加到只缺乏特定限制性營養(yǎng)物的完全培養(yǎng)基中，測定培養(yǎng)基所能達到的生長量，就可以計算出原混合物中特定限制性營養(yǎng)物的濃度。

④衰亡期

decline

phase

表現(xiàn)：出現(xiàn)

"負生長

"，有些細胞開始自溶。

對于絲狀真菌，細胞數(shù)目不呈幾何級數(shù)增加，無對數(shù)生長期，一般有調(diào)整期，最高生長期，衰退期。

遲緩期(lag

phase)

細菌接種到新鮮培養(yǎng)基而處于一個新的生長環(huán)境，因此在一段時間里并不馬上分裂，細菌的數(shù)量維持恒定，或增加很少。此時胞內(nèi)的RNA、蛋白質(zhì)等物質(zhì)含量有所增加，相對地此時的細胞體積最大，說明細菌并不是處于完全靜止的狀態(tài)。產(chǎn)生遲緩期的原因，認為是微生物接種到一個新的環(huán)境，暫時缺乏足夠的能量和必需的生長因子，“種子”老化(即處于非對數(shù)生長期)或末充分活化，接種時造成的損傷等。

在工業(yè)發(fā)酵和科研中遲緩期會增加生產(chǎn)周期而產(chǎn)生不利的影響，但是遲緩期無疑也是必需的，因為細胞分裂之前，細胞各成分的復(fù)制與裝配等也需要時間，因此應(yīng)該采取一定的措施：①通過遺傳學(xué)方法改變種的遺傳特性使遲緩期縮短；②利用對數(shù)生長期的細胞作為“種子”；③盡量使接種前后所使用的培養(yǎng)基組成不要相差太大；④適當擴大接種量等方式縮短遲緩期，克服不良的影響。

②對數(shù)生長期(log

Phase)

又稱指數(shù)生長期(exponential

phase)。細菌經(jīng)過遲緩期進入對數(shù)生長期，并以最大的速率生長和分裂，導(dǎo)致細菌數(shù)量呈對數(shù)增加，而且細菌內(nèi)各成分按比例有規(guī)律地增加，很明顯，此時期內(nèi)的細菌生長是平衡生長。對數(shù)生長期細菌的代謝活性、酶活性高而穩(wěn)定，大小比較一致，生活力強，因而它廣泛地在生產(chǎn)上用作“種子”和在科研上作為理想的實驗材料。

③穩(wěn)定生長期(stationary

phase)

由于營養(yǎng)物質(zhì)消耗，代謝產(chǎn)物積累和pH等環(huán)境變化，逐步不適宜于細菌生長，導(dǎo)致生長速率降低直至零(即細菌分裂增加的數(shù)量等于細菌死亡數(shù)量)，結(jié)束對數(shù)生長期，進入穩(wěn)定生長期。穩(wěn)定生長期的活細菌數(shù)最高并維持穩(wěn)定。如果及時采取措施，補充營養(yǎng)物質(zhì)或取走代謝產(chǎn)物或改善培養(yǎng)條件，如對好氧菌進行通氣、攪拌或振蕩等可以延長穩(wěn)定生長期，獲得更多的菌體物質(zhì)或代謝產(chǎn)物。

④衰亡期(decline或death

phase)

營養(yǎng)物質(zhì)耗盡和有毒代謝產(chǎn)物的大量積累，細菌死亡速率逐步增加和活細菌逐步減少，標志進入衰亡期。該時期細菌代謝活性降低，細菌衰老并出現(xiàn)自溶。該時期死亡的細菌以對數(shù)方式增加，但在衰亡期的后期，由于部分細菌產(chǎn)生抗性也會使細菌死亡的速率降低。

此外，不同的微生物，甚至同一種微生物對不同物質(zhì)的利用能力是不同的。有的物質(zhì)可直接被利用(例如葡萄糖或NKf等)；有的需要經(jīng)過一定的適應(yīng)期后才能獲得利用能力(例如乳糖或N03—等)。前者通常稱為速效碳源(或氮源)，后者稱為遲效碳源(或氮源)。當培養(yǎng)基中同時含有這兩類碳源(或氮源)時，微生物在生長過程中會產(chǎn)生二次生長現(xiàn)象。

連續(xù)培養(yǎng)

連續(xù)培養(yǎng)(continous

culture

of

microorganisms)是在微生物的整個培養(yǎng)期間，通過一定的方式使微生物能以恒定的比生長速率生長并能持續(xù)生長下去的一種培養(yǎng)方法。根據(jù)生長曲線，營養(yǎng)物質(zhì)的消耗和代謝產(chǎn)物的積累是導(dǎo)致微生物生長停止的主要原因。因此在微生物培養(yǎng)過程中不斷的補充營養(yǎng)物質(zhì)和以同樣的速率移出培養(yǎng)物是實現(xiàn)微生物連續(xù)培養(yǎng)的基本原則。

二、

微生物生長的測定

微生物生長情況可以通過測定單位時間里微生物數(shù)量或生物量(biomass)的變化來評價。通過微生物生長的測定可以客觀地評價培養(yǎng)條件、營養(yǎng)物質(zhì)等對微生物生長的影響，或評價不同的抗菌物質(zhì)對微生物產(chǎn)生抑制(或殺死)作用的效果，或客觀地反映微生物生長的規(guī)律。因此微生物生長的測量在理論上和實踐上有著重要的意義。微生物生長的測定有計數(shù)、重量和生理指標等方法。

1、

計數(shù)法

此法通常用來測定樣品中所含細菌、孢子、酵母菌等單細胞微生物的數(shù)量。計數(shù)法又分為直接計數(shù)和間接計數(shù)兩類。

直接計數(shù)

這類方法是利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。此法的缺點不能區(qū)分死菌與活菌。計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定的面積l

mm2和高0.1mm的計數(shù)室，在1mm2的面積里又被刻劃成25個(或16個)中格，每個中格進—步劃分成16個(或25個)小格，但計數(shù)室都是由400個小格組成。

將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計算4-5個中格的細菌數(shù)，并求出每個小格所含細菌的平均數(shù)，再按下面公式求出每毫升樣品所含的細菌數(shù)。

每毫升原液所含細菌數(shù)＝每小格平均細菌數(shù)×400×l000×稀釋倍數(shù)

間接計數(shù)法

此法又稱活菌計數(shù)法，其原理是每個活細菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.2ml故人無菌平皿，再倒人適量的已熔化并冷至45℃左右的培養(yǎng)基，與菌液混勻，冷卻、待凝固后，放人適宜溫度的培養(yǎng)箱或溫室培養(yǎng)，長出菌落后，計數(shù)，按下面公式計算出原菌液的含菌數(shù)：

每毫升原菌液活菌數(shù)＝同一稀釋度三個以上重復(fù)平皿菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)×5

此法可因操作不熟練造成污染，或因培養(yǎng)基溫度過高損傷細胞等原因造成結(jié)果不穩(wěn)定。盡管如此，由于該方法能測出樣品中微量的菌數(shù)，仍是教學(xué)、科研和生產(chǎn)上常用的一種測定細菌數(shù)的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養(yǎng)體等。

除上述兩種常用的計數(shù)方法外，還有膜過濾法、比濁法。膜過濾法是當樣品中菌數(shù)很低時，可以將一定體積的潮水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經(jīng)處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積中)的細菌數(shù)；比濁法原理是在一定范圍內(nèi)，菌的懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以借助于分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度(optical

density，即O..D.)表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi)，否則不準確。微生物計數(shù)法，發(fā)展迅速，現(xiàn)有多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法。

2、

重量法

此法的原理是根據(jù)每個細胞有一定的重量而設(shè)計的。它可以用于單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定。將一定體積的樣品通過離心或過濾將菌體分離出來，經(jīng)洗滌，再離心后直接稱重，求出濕重，如果是絲狀體微生物，過濾后用濾紙吸去菌絲之間的自由水，再稱重求出濕重。不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品，可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內(nèi)，于105℃烘干至恒重，取出放人干燥器內(nèi)冷卻，再稱量，求出微生物干重。

如果要測定固體培養(yǎng)基上生長的放線菌或絲狀真菌，可先加熱至50℃，使瓊脂熔化，過濾得菌絲體，再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲，然后按上述方法求出菌絲體的濕重或干重。

除了干重、濕重反映細胞物質(zhì)重量外，還可以通過測定細胞中蛋白質(zhì)或DNA的含量反映細胞物質(zhì)的量。蛋白質(zhì)是細胞的主要成分，含量也比較穩(wěn)定，其中氮是蛋白質(zhì)的重要組成元素。從一定體積的樣品中分離出細胞，洗滌后，按凱氏定氮法測出總氮量。蛋白質(zhì)含氮量為16%，細菌中蛋白質(zhì)含量占細菌因形物的50%一80%，一般以65%為代表，有些細菌則只占13%一14%，這種變化是由菌齡和培養(yǎng)條件不同所產(chǎn)生的。因此總含氮量與蛋白質(zhì)總量之間的關(guān)系可按下列公式計算：

蛋白質(zhì)總量＝含氮量×6.25

細胞總量＝蛋白質(zhì)總量÷(50%～80%(或65%))≈蛋白質(zhì)總量×1.54

核酸DNA是微生物的重要遺傳物質(zhì)，每個細菌的DNA含量相當恒定，平均為8.4×10-5ng.因此從一定體積的細菌懸液中所含的細菌中提取DNA，求得DNA含量，再計算出這一定體積的細菌懸液所含的細菌總數(shù)。

3、

生理指標法

對于一些非真溶液的樣品，要測定微生物數(shù)量除了用活菌計數(shù)法外，還可以用生理指標測定法進行測定。生理指標包括微生物的呼吸強度、耗氧量、酶活性、生物熱等。這是根據(jù)微生物在生長過程中伴隨出現(xiàn)的這些指標，樣品中微生物數(shù)量多或生長旺盛，這些指標愈明顯，因此可以借助特定的儀器如瓦勃氏呼吸儀、微量量熱計等設(shè)備來測定相應(yīng)的指標。這類測定方法主要用于科學(xué)研究，分析微生物生理活性等。

微生物的顯微直接計數(shù)法一、實驗?zāi)康?/p>

了解血球計數(shù)板的構(gòu)造、計數(shù)原理和計數(shù)方法，掌握顯微鏡下直接計數(shù)的技能。二、實驗原理

測定微生物細胞數(shù)量的方法很多，通常采用的有顯微直接計數(shù)法和平板計數(shù)法。

顯微計數(shù)法適用于各種含單細胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計數(shù)板，一般細菌則采用彼得羅夫·霍澤（PetrofHausser）細菌計數(shù)板。兩種計數(shù)板的原理和部件相同，只是細菌計數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計數(shù)板下部的細菌不易看清。

血球計數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數(shù)區(qū)（圖21-1），計數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計數(shù)區(qū)分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同特點，即計數(shù)區(qū)都由400個小方格組成。計數(shù)區(qū)邊長為1mm，則計數(shù)區(qū)的面積為lmm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計數(shù)區(qū)的高度為0.1mm，所以每個計數(shù)區(qū)的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。使用血球計數(shù)板計數(shù)時，先要測定每個小方格中微生物的數(shù)量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數(shù)量。已知：1mm3體積=10mm×10mm×10mm=1000mm3所以：1mm3體積應(yīng)含有小方格數(shù)為1000mm3/1/4000mm3=4×106個小方格，即系數(shù)K=4×106因此：每ml菌懸液中含有細胞數(shù)=每個小格中細胞平均數(shù)（N）×系數(shù)（K）×菌液稀釋倍數(shù)（d）三、實驗器材1．活材料：釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）斜面或培養(yǎng)液。2．器材：顯微鏡、血球計數(shù)板、蓋玻片（22mm×22mm）、吸水紙、計數(shù)器、滴管、擦鏡紙。四、實驗方法

1．視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋到10-2），以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。2．取潔凈的血球計數(shù)板一塊，在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。3．將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數(shù)區(qū)上，不要使計數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計數(shù)區(qū)深度的升高。然后加蓋蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡）。4．靜置片刻，將血球計數(shù)板置載物臺上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應(yīng)減弱光照的強度。5．計數(shù)時若計數(shù)區(qū)是由16個大方格組成，按對角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數(shù)。如果是25個大方格組成的計數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個大方格外，還需數(shù)中央l個大方格的菌數(shù)（即80個小格）。如菌體位于大方格的雙線上，計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。6．對于出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復(fù)計數(shù)2—3次（每次數(shù)值不應(yīng)相差過大，否則應(yīng)重新操作），求出每一個小格中細胞平均數(shù)（N），按公式計算出每ml（g）菌懸液所含酵母菌細胞數(shù)量。7．測數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干，放入盒內(nèi)保存。五、實驗作業(yè)：

將實驗結(jié)果填入下表中：

計數(shù)次數(shù)每個大方格菌數(shù)稀釋倍數(shù)試管斜面中的總菌數(shù)平均值12345

第一次

第二次

稀釋平板測數(shù)法一、實驗?zāi)康牧私庀♂屍桨逵嫈?shù)的原理，掌握涂抹平板培養(yǎng)法和混合平板培養(yǎng)法，認識細菌、放線菌、霉菌的菌落特征。二、實驗原理

稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。三、實驗器材

1．活材料：蘇云金芽孢桿菌（Bacillusthuringiensis）菌劑。2．培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（附錄三、1）3．器材：90ml無菌水、9ml無菌水、無菌平皿、lml無菌吸管、天平、稱樣瓶、記號筆、玻璃刮鏟等。四、實驗方法

1．樣品稀釋液的制備

準確稱取待測樣品l0g，放入裝有90ml無菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20min，使微生物細胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液；再用1ml無菌吸管，吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液（圖22-1）。圖22-1

平板計數(shù)法中樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養(yǎng)用稀釋平板計數(shù)時，待測菌稀釋度的選擇應(yīng)根據(jù)樣品確定。樣品中所含待測菌的數(shù)量多時，稀釋度應(yīng)高，反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數(shù)時，采用10-7、10-8、10-9稀釋度，測定土壤細菌數(shù)量時，采用10-4、10-5、10-6稀釋度，測定放線菌數(shù)量時，采用l0-3、10-4、10-5稀釋度，測定真菌數(shù)量時，采用10-2、10-3、10-4稀釋度。2．平板接種培養(yǎng)

平板接種培養(yǎng)有混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法。

（1）混合平板培養(yǎng)法

將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼，每一號碼設(shè)置三個重復(fù)，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。然后在9個平板中分別倒入已融化并冷卻至45—50℃的細菌培養(yǎng)基(圖22-2)，輕輕轉(zhuǎn)動平板，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷疑后倒置，適溫培養(yǎng)。至長出菌落后即可計數(shù)。（2）涂抹平板計數(shù)法

涂抹平板計數(shù)法與混合法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號，然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上（每個編號設(shè)三個重復(fù)）。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻（圖22-3），每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時，也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長出菌落后即可計數(shù)。五、實驗作業(yè)：

將實驗結(jié)果填入下表中稀釋度10-710-810-9菌落數(shù)123平均123

平均12

3

平均

1g樣品活菌數(shù)

計算結(jié)果時，常按下列標準從接種后的3個稀釋度中選擇一個合適的稀釋度，求出每克菌劑中的含菌數(shù)。

（1）同一稀釋度各個重復(fù)的菌數(shù)相差不太懸殊。

（2）細菌、放線菌、酵母菌以每皿30—300個菌落為宜，霉菌以每皿10—100個菌落為宜。選擇好計數(shù)的稀釋度后，即可統(tǒng)計在平板上長出的菌落數(shù)，統(tǒng)計結(jié)果按下式計算?；旌掀桨逵嫈?shù)法：每克樣品的菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)涂抹平板計效法：

每克樣品的菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)×10×稀釋倍數(shù)稀釋培養(yǎng)測數(shù)法（MPN）一、實驗?zāi)康耐ㄟ^對好氣性自生固氮菌的計數(shù)，了解稀釋培養(yǎng)計數(shù)（MPN）的原理和方法。二、實驗原理

最大或然數(shù)(mostprobablenumber，MPN)計數(shù)又稱稀釋培養(yǎng)計數(shù)，適用于測定在一個混雜的微生物群落中雖不占優(yōu)勢，但卻具有特殊生理功能的類群。其特點是利用待測微生物的特殊生理功能的選擇性來擺脫其他微生物類群的干擾，并通過該生理功能的表現(xiàn)來判斷該類群微生物的存在和豐度。本法特別適合于測定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纖維素分解、固氮、硫化和反硫化細菌等。見附表23-1）的數(shù)量和檢測污水、牛奶及其他食品中特殊微生物類群（如大腸菌群）的數(shù)量，缺點是只適于進行特殊生理類群的測定，結(jié)果也較粗放，只有在因某種原因不能使用平板計數(shù)時才采用。

MPN計數(shù)是將待測樣品作一系列稀釋，一直稀釋到將少量（如lm1）的稀釋液接種到新鮮培養(yǎng)基中沒有或極少出現(xiàn)生長繁殖。根據(jù)沒有生長的最低稀釋度與出現(xiàn)生長的最高稀釋度，采用“最大或然數(shù)”理論，可以計算出樣品單位體積中細菌數(shù)的近似值。具體地說，菌液經(jīng)多次10倍稀釋后，一定量菌液中細菌可以極少或無菌，然后每個稀釋度取3—5次重復(fù)接種于適宜的液體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)后，將有菌液生長的最后3個稀釋度（即臨界級數(shù)）中出現(xiàn)細菌生長的管數(shù)作為數(shù)量指標，由最大或然數(shù)表（見附錄九）上查出近似值，再乘以數(shù)量指標第一位數(shù)的稀釋倍數(shù)，即為原菌液中的含菌數(shù)。如某一細菌在稀釋法中的生長情況如下；

稀釋度

lO-3

10-4

10-5

lO-6

10-7

10-8

重復(fù)數(shù)

5

5

5

5

5

5

出現(xiàn)生長的管數(shù)

5

5

5

4

1

0

根據(jù)以上結(jié)果，在接種lO-3—10-5稀釋液的試管中5個重復(fù)都有生長，在接種lO-6稀釋液的試管中有4個重復(fù)生長，在接種10-7稀釋液的試管中只有1個生長，而接種10-8稀釋液的試管全無生長。由此可得出其數(shù)量指標為“541”，查最大或然數(shù)表得近似值17，然后乘以第一位數(shù)的稀釋倍數(shù)（10-5的稀釋倍數(shù)為100000）。那么，1ml原菌液中的活菌數(shù)＝17×100000=17×105。即每毫升原菌液含活菌數(shù)為l700000個。在確定數(shù)量指標時，不管重復(fù)次數(shù)如何，都是3位數(shù)字，第一位數(shù)字必須是所有試管都生長微生物的某一稀釋度的培養(yǎng)試管，后兩位數(shù)字依次為以下兩個稀釋度的生長管數(shù)，如果再往下的稀釋仍有生長管數(shù)，則可將此數(shù)加到前面相鄰的第三位數(shù)上即可。如某一微生物生理群稀釋培養(yǎng)記錄為：

稀釋度

lO-1

10-2

10-3

lO-4

10-5

10-6

重復(fù)數(shù)

4

4

4

4

4

4

出現(xiàn)生長的管數(shù)

4

4

3

2

1

0

以上情況，可將最后一個數(shù)字加到前一個數(shù)字上，即數(shù)量指標為“433”，查表得近似值為30，則每毫升原菌液中含活菌30×102個。按照重復(fù)次數(shù)的不同，最大或然數(shù)表又分為三管最大或然數(shù)表、四管最大或然數(shù)表和五管最大或然數(shù)表。

應(yīng)用MPN計數(shù)，應(yīng)注意兩點，一是菌液稀釋度的選擇要合適，其原則是最低稀釋度的所有重復(fù)都應(yīng)有菌生長，而最高稀釋度的所有重復(fù)無菌生長。對土壤樣品而言，分析每個生理群的微生物需5—7個連續(xù)稀釋液分別接種，微生物類群不同，其起始稀釋度不同(見附表1)；二是每個接種稀釋度必須有重復(fù)，重復(fù)次數(shù)可根據(jù)需要和條件而定，一般2—5個重復(fù)，個別也有采用2個重復(fù)的，但重復(fù)次數(shù)越多，誤差就會越小，相對地說結(jié)果就會越正確。不同的重復(fù)次數(shù)應(yīng)按其相應(yīng)的最大或然數(shù)表計算結(jié)果。若要求出土樣中每克干土所含的活菌數(shù)，則要將前述兩例中所得的每毫升菌數(shù)除以干土在土樣中所占的質(zhì)量分數(shù)（烘干后的土樣質(zhì)量／原始土樣的質(zhì)量）。計算式為：

三、實驗器材

1.土壤樣品：肥沃菜園土2.培養(yǎng)基：阿須貝（Ashby）無氮培養(yǎng)液(附錄三、15)22管(每管裝5ml，加1cm×4.5cm濾紙l條)3.器材：90ml無菌水（裝入250ml三角瓶中，并裝有15—20個玻璃珠）、9ml無菌水、lml刻度無菌吸管、試管架、記號筆。四、實驗方法

1．稱取10克土樣，放入90ml無菌水中，振蕩20min，讓菌充分分散，然后按十倍稀釋法將供試土樣制成10-1—10-6的土壤稀釋液。2．將22支裝有Ashby無氮培養(yǎng)液的試管按縱4橫5的方陣排列于試管架上，第一縱列的4支試管上標以10-2，第二縱列的4支試管上標以10-3……第五縱列的4支管上際以10-6（即采用5個稀釋度，4個重復(fù)），另外2支試管留作對照。3．用lml無菌吸管按無菌操作要求吸取10-6的土壤稀釋液各lml放入編號10-6的4支試管中，再吸取10-5稀釋液各lml放入編號10-5的4支試管中，同法吸取10-4、10-3、10-2稀釋液各lml放入各自對應(yīng)編號的試管中。對照管不加稀釋液。4．將所有試管置28—30℃培養(yǎng)7天后觀察結(jié)果。5．精確稱取3份10克稀釋用土，放入稱量瓶中，置105-110℃烘2h后放入干燥器中，至恒重后稱重，然后計算干土在土樣中所占的質(zhì)量份數(shù)。五、實驗作業(yè)：

培養(yǎng)7天后，取出試管，檢查實驗結(jié)果。

凡有固氮菌生長的試管，則培養(yǎng)液與濾紙接觸處有黑褐色或粘液狀菌膜，即為陽性，否則為陰性。對照管應(yīng)為陰性。依次檢查每管生長情況，將結(jié)果填入下表，計算每克干土所含的活菌數(shù)。土壤稀釋度10-210-310-410-510-6重復(fù)次數(shù)44444固氮菌生長管數(shù)

數(shù)量指標

干土的質(zhì)量分數(shù)

菌數(shù)近視值

每克干土固氮菌數(shù)個/克干土

附表23-1幾種主要微生物生理群MPN計數(shù)法一覽表微生物生理群培養(yǎng)基常用稀釋度常用重復(fù)次數(shù)培養(yǎng)時間(天)主要檢查方法氨化細菌蛋白胨氨化培養(yǎng)基0-6—10-947根據(jù)培養(yǎng)液加奈氏試劑后是否出現(xiàn)棕色或褐色，確定是否產(chǎn)生氨。亞硝酸細菌銨鹽培養(yǎng)基0-2—10-7314根據(jù)培養(yǎng)液加格利斯試劑Ⅰ及Ⅱ的反應(yīng)，出現(xiàn)絳紅色證明有NO-2生成；或在培養(yǎng)中加鋅碘淀粉試劑及體積比值為20%的H2SO4，若出現(xiàn)藍色，證明有NO-3生成。硝酸細菌亞硝酸鹽培養(yǎng)基0-2—10-6314根據(jù)培養(yǎng)液加入濃硫酸及二苯胺試劑后，是否出現(xiàn)藍色，確定是否有NO-3生成。反硝化細菌反硝化細菌培養(yǎng)基0-4—10-8314根據(jù)杜氏小管有無氣體，確定有無N2生成；利用格利斯試劑Ⅰ及Ⅱ和二苯胺試劑、濃硫酸檢測有無NO-2生成及有無NH3存在，判斷反硝化作用進行情況。好氣性自生固氮菌阿須貝無氮培養(yǎng)基0-2—10-637-14根據(jù)培養(yǎng)液表面與濾紙接觸處有無褐色或粘液狀菌膜生成，判斷有無好氣性自生固氮菌生長。好氣性纖維素分解菌赫奇遜噬纖維培養(yǎng)基0-1—10-5314根據(jù)各試管中濾紙條上有無黃色或桔黃色菌斑出現(xiàn)及濾紙斷裂狀況，確定有無好氣性纖維素分解細菌的生長。厭氣性纖維素分解菌嫌氣性纖維素分解細菌培養(yǎng)基0-1—10-5314-21根據(jù)各試管中濾紙條上有無穿洞、破裂、完全分解情況，確定有無嫌氣性纖維素分解細菌的生長。硫化細菌硫化細菌培養(yǎng)基0-2—10-8321-23在每管培養(yǎng)液中加入10g/L的BaCL2溶液2滴，如有白色沉淀出現(xiàn)，則證明有硫化菌活動。反硫化細菌斯塔克反硫化細菌培養(yǎng)基0-2—10-7321-30根據(jù)培養(yǎng)液試管底部、管壁有無黑色沉淀出現(xiàn)，判斷有無反硫化細菌活動。

高考語文試卷一、語言文字運用（15分）1．在下面一段話的空缺處依次填入詞語，最恰當?shù)囊唤M是（3分）提到桃花源，許多人會聯(lián)想到瓦爾登湖。真實的瓦爾登湖，早已成為▲的觀光勝地，梭羅的小木屋前也經(jīng)常聚集著▲的游客，不復(fù)有隱居之地的氣息。然而虛構(gòu)的桃花源一直就在我們的心中，哪怕▲在人潮洶涌的現(xiàn)代城市，也可以獲得心靈的寧靜。A．名聞遐邇聞風而至雜居 B．名噪一時聞風而至棲居C．名噪一時紛至沓來雜居 D．名聞遐邇紛至沓來棲居2．在下面一段文字橫線處填入語句，銜接最恰當?shù)囊豁検牵?分）在南方，芭蕉栽植容易，幾乎四季常青?！劣谠掠辰队?、雪壓殘葉，那更是詩人畫家所向往的了。①它覆蓋面積大，吸收熱量大，葉子濕度大。②古人在走廊或書房邊種上芭蕉，稱為蕉廊、蕉房，饒有詩意。③因此蕉陰之下，是最舒適的小坐閑談之處。④在旁邊配上幾竿竹，點上一塊石，真像一幅元人的小景。⑤在夏日是清涼世界，在秋天是分綠上窗。⑥小雨乍到，點滴醒人；斜陽初過，青翠照眼。A．①③②④⑥⑤ B．①④②③⑥⑤C．②①④③⑤⑥ D．②③④①⑤⑥3．下列詩句與“憫農(nóng)館”里展示的勞動場景，對應(yīng)全部正確的一項是（3分）①笑歌聲里輕雷動，一夜連枷響到明②種密移疏綠毯平，行間清淺縠紋生③分疇翠浪走云陣，刺水綠針抽稻芽④陰陰阡陌桑麻暗，軋軋房櫳機杼鳴A．①織布②插秧③車水④打稻 B．①織布②車水③插秧④打稻C．①打稻②插秧③車水④織布D．①打稻②車水③插秧④織布4．閱讀下圖，對VR（即“虛擬現(xiàn)實”）技術(shù)的解說不正確的是一項是（3分）A．VR技術(shù)能提供三個維度的體驗：知覺體驗、行為體驗和精神體驗。 B．現(xiàn)有的VR技術(shù)在精神體驗上發(fā)展較快，而在知覺體驗上發(fā)展較慢。C．VR技術(shù)的未來方向是知覺體驗、行為體驗和精神體驗的均衡發(fā)展。D．期許的VR體驗將極大提高行為體驗的自由度和精神體驗的滿意度。二、文言文閱讀（20分）閱讀下面的文言文，完成5—8題。臨川湯先生傳鄒迪光先生名顯祖，字義仍，別號若士。豫章之臨川人。生而穎異不群。體玉立，眉目朗秀。見者嘖嘖曰：“湯氏寧馨兒?！蔽鍤q能屬對。試之即應(yīng)，又試之又應(yīng)，立課數(shù)對無難色。十三歲，就督學(xué)公試，補邑弟子員。每試必雄其曹偶。庚午舉于鄉(xiāng)，年猶弱冠耳。見者益復(fù)嘖嘖曰：“此兒汗血，可致千里，非僅僅蹀躞康莊也者?！倍〕髸?，江陵公①屬其私人啖以巍甲而不應(yīng)。曰：“吾不敢從處女子失身也?！惫m一老孝廉乎，而名益鵲起，海內(nèi)之人益以得望見湯先生為幸。至癸未舉進士，而江陵物故矣。諸所為附薰炙者，骎且澌沒矣。公乃自嘆曰：“假令予以依附起，不以依附敗乎？”而時相蒲州、蘇州兩公，其子皆中進士，皆公同門友也。意欲要之入幕，酬以館選，而公率不應(yīng)，亦如其所以拒江陵時者。以樂留都山川，乞得南太常博士。至則閉門距躍，絕不懷半刺津上。擲書萬卷，作蠹魚其中。每至丙夜，聲瑯瑯不輟。家人笑之：“老博士何以書為？”曰：“吾讀吾書，不問博士與不博士也。”尋以博士轉(zhuǎn)南祠部郎。部雖無所事事，而公奉職毖慎，謂兩政府進私人而塞言者路，抗疏論之，謫粵之徐聞尉。居久之，轉(zhuǎn)遂昌令。又以礦稅事多所蹠戾②，計偕之日，便向吏部堂告歸。雖主爵留之，典選留之，御史大夫留之，而公浩然長往，神武之冠竟不可挽矣。居家，中丞惠文，郡國守令以下，干旄往往充斥巷左，而多不延接。即有時事，非公憤不及齒頰。人勸之請托，曰：“吾不能以面皮口舌博錢刀，為所不知后人計?！敝复采蠒局骸坝写瞬回氁??！惫跁鵁o所不讀，而尤攻《文選》一書，到掩卷而誦，不訛只字。于詩若文無所不比擬，而尤精西京六朝青蓮少陵氏。公又以其緒余為傳奇，若《紫簫》、《還魂》諸劇，實駕元人而上。每譜一曲，令小史當歌，而自為之和，聲振寥廓。識者謂神仙中人云。公與予約游具區(qū)靈巖虎丘諸山川，而不能辦三月糧，逡巡中輟。然不自言貧，人亦不盡知公貧。公非自信其心者耶？予雖為之執(zhí)鞭，所忻慕焉。（選自《湯顯祖詩文集》附錄，有刪節(jié)）[注]①江陵公：指時相張居正，其為江陵人。②蹠戾：乖舛，謬誤。5．對下列加點詞的解釋，不正確的一項是（3分）A．每試必雄其曹偶 雄：稱雄B．酬以館選 酬：應(yīng)酬C．以樂留都山川 樂：喜愛D．為所不知后人計 計：考慮6．下列對原文有關(guān)內(nèi)容的概括和分析，不正確的一項是（3分）A．湯顯祖持身端潔，拒絕了時相張居正的利誘，海內(nèi)士人都以結(jié)識他為榮幸。B．因為上書批評當權(quán)者徇私情、塞言路，湯顯祖被貶官至廣東，做了徐聞尉。C．湯顯祖辭官回家后，當?shù)毓賳T爭相與他交往，而湯顯祖不為私事開口求人。D．湯顯祖與鄒迪光相約三月份到江南一帶游玩，但沒準備好糧食，因而作罷。7．把文中畫線的句子翻譯成現(xiàn)代漢語。（10分）（1）見者益復(fù)嘖嘖曰：“此兒汗血，可致千里，非僅僅蹀躞康莊也者?！保?）然不自言貧，人亦不盡知公貧。公非自信其心者耶？予雖為之執(zhí)鞭，所忻慕焉。8．請簡要概括湯顯祖讀書為文的特點。（4分）三、古詩詞鑒賞（11分）閱讀下面這首唐詩，完成9—10題。學(xué)諸進士作精衛(wèi)銜石填海韓愈鳥有償冤者，終年抱寸誠?？阢暽绞?，心望海波平。渺渺功難見，區(qū)區(qū)命已輕。人皆譏造次，我獨賞專精。豈計休無日，惟應(yīng)盡此生。何慚刺客傳，不著報讎名。9．本讀前六句是怎樣運用對比手法勾勒精衛(wèi)形象的？請簡要分析。(6分)10．詩歌后六句表達了作者什么樣的人生態(tài)度？（5分）四、名句名篇默寫（8分）11．補寫出下列名句名篇中的空缺部分。（1）名余曰正則兮，__________________。（屈原《離騷》）（2）__________________，善假于物也。（荀子《勸學(xué)》）（3）艱難苦恨繁霜鬢，__________________。（杜甫《登高》）（4）樹林陰翳，__________________，游人去而禽鳥樂也。（歐陽修《醉翁亭記》）（5）__________________，抱明月而長終。（蘇軾《赤壁賦》）（6）浩蕩離愁白日斜，__________________。（龔自珍《己亥雜詩》）（7）道之以德，__________________，有恥且格。（《論語·為政》）（8）蓋文章，經(jīng)國之大業(yè)，__________________。（曹丕《典論·論文》）五、現(xiàn)代文閱讀（一）（15分）閱讀下面的作品，完成12~14題。表妹林斤瀾矮凳橋街背后是溪灘，那灘上鋪滿了大的碎石，開闊到叫人覺著是不毛之地。幸好有一條溪，時寬時窄，自由自在穿過石頭灘，帶來水草野樹，帶來生命的歡喜。灘上走過來兩個女人，一前一后，前邊的挎著個竹籃子，簡直有搖籃般大，里面是衣服，很有點分量，一路拱著腰身，支撐著籃底。后邊的女人空著兩手，幾次伸手前來幫忙，前邊的不讓。前邊的女人看來四十往里，后邊的四十以外。前邊的女人不走現(xiàn)成的小路，從石頭灘上斜插過去，走到一個石頭圈起來的水潭邊，把竹籃里的東西一下子控在水里，全身輕松了，透出來一口長氣，望著后邊的。后邊的走不慣石頭灘，盯著腳下，挑著下腳的地方。前邊的說：“這里比屋里清靜，出來走走，說說話……再呢，我要把這些東西洗出來，也就不客氣了?！闭f著就蹲下來，抓過一團按在早鋪平好了的石板上，拿起棒槌捶打起來，真是擦把汗的工夫也節(jié)約了?？雌饋砗筮叺氖强腿?，轉(zhuǎn)著身于看這個新鮮的地方，有一句沒一句地應(yīng)著：“水倒是清的，碧清的……樹也陰涼……石頭要是走慣了，也好走……”“不好走，一到下雨天你走走看，只怕?lián)鷶嗔四_筋。哪有你們城里的馬路好走?！薄跋掠晏煲蚕匆路?”“一下天呢，二十天呢。就是三十天不洗也不行。嗐，現(xiàn)在一天是一天的事情，真是日日清，月月結(jié)。”客人隨即稱贊：“你真能干，三表妹，沒想到你有這么大本事，天天洗這么多?！敝魅宋⑽⑿χ?，手里捶捶打打，嘴里喜喜歡歡的：事情多著呢。只有晚上吃頓熱的，別的兩頓都是馬馬虎虎。本來還要帶子，現(xiàn)在托給人家。不過洗完衣服，還要踏縫紉機?！笨腿似鋵嵤莻€做活的能手，又做飯又帶孩子又洗衣服這樣的日子都過過?，F(xiàn)在做客人看著人家做活，兩只手就不知道放在哪里好。把左手搭在樹杈上，右手背在背后，都要用點力才在那里閑得住。不覺感慨起來：“也難為你，也虧得是你，想想你在家里的時候，比我還自在呢?！敝魅朔畔掳糸?，兩手一刻不停地揉搓起來：“做做也就習(xí)慣了。不過，真的，做慣了空起兩只手來，反倒沒有地方好放。鄉(xiāng)下地方，又沒有什么好玩的，不比城里?！笨腿诵睦镉行┟埽蛯W(xué)點見過世面的派頭，給人家看，也壓壓自己的煩惱：“說的是，”右手更加用力貼在后腰上，“空著兩只手不也沒地方放嘛。城里好玩是好玩，誰還成天地玩呢。城里住長久了，一下鄉(xiāng)，空氣真就好，這個新鮮空氣，千金難買?！眴慰淇諝?，好比一個姑娘沒有什么好夸的，單夸她的頭發(fā)。主人插嘴問道：“你那里工資好好吧？”提起工資，客人是有優(yōu)越感的，卻偏偏埋怨道：“餓不死吃不飽就是了，連獎金帶零碎也有七八十塊?！薄澳鞘亲龆嘧錾僬諛幽醚?！”“還吃著大鍋飯。”“不做不做也拿六七十吧？”“鐵飯碗！”客人差不多叫出來，她得意。主人不住手地揉搓，也微微笑著?？腿说勾蚱稹氨Р黄健眮恚骸澳愫闷?，要是我，氣也氣死了，做多做少什么也不拿?！薄按蟊斫?，我們也搞承包了。我們家庭婦女洗衣店，給旅店洗床單，給工廠洗工作服都洗不過來。”“那一個月能拿多少呢？”客人問得急點。主人不忙正面回答，笑道：“還要苦干個把月，洗衣機買是買來了，還沒有安裝。等安裝好了，有時間多踏點縫紉機，還可以翻一番呢！”“翻一番是多少？”客人急得不知道轉(zhuǎn)彎。主人停止揉搓，去抓棒槌，這功夫，伸了伸兩個手指頭?？腿说哪X筋飛快轉(zhuǎn)動：這兩個手指頭當然不會是二十，那么是二百……聽著都嚇得心跳，那頂哪一級干部了？廠長？……回過頭來說道：“還是你們不封頂好，多勞多得嘛?！薄安贿^也不保底呀，不要打算懶懶散散混日子?！笨腿藘刹綋溥^來，蹲下來抓過一堆衣服，主人不讓，客人已經(jīng)揉搓起來了，一邊說：“懶懶散散，兩只手一懶，骨頭都要散……鄉(xiāng)下地方比城里好，空氣第一新鮮，水也碧清……三表妹，等你大侄女中學(xué)一畢業(yè)，叫她頂替我上班，我就退下來……我到鄉(xiāng)下來享幾年福，你看怎么樣？”（選自《十月》1984年第6期，有刪改）12．下列對小說相關(guān)內(nèi)容和藝術(shù)特色的賞析，不正確的一項是？A．小說開頭的景物描寫，以自由流動的溪水所帶來的“水草野樹”以級“生命的歡喜”，暗示著農(nóng)村的新氣象。B．小說中“一路拱著腰身”等動作描寫，以及“真是日日清，月月結(jié)”等語言描寫，為下文表妹承包洗衣服這件事做了鋪墊。C．表姐兩次提到鄉(xiāng)下空氣“新鮮”，第一次是出于客套，第二次提到時，表姐對農(nóng)村的好已有了更多體會。D．表妹說的“不要打算懶懶散散混日子”，既表達了自己對生活的態(tài)度，也流露出對自己得不到休息的些許不滿。13．請簡要分析表姐這一人物形象。（6分）14．小說刻畫了兩個人物，作者以“表妹”為題，表達了哪些思想感情？（6分）六、現(xiàn)代文閱讀（二）（12分）閱讀下面的作品，完成15~17題。書家和善書者沈尹默“古之善書者，往往不知筆法?！鼻叭耸沁@樣說過。就寫字的初期來說，這句話，是可以理解的，正同音韻一樣，四聲清濁，是不能為晉宋以前的文人所熟悉的，他們作文，只求口吻調(diào)利而已。筆法不是某一個人憑空創(chuàng)造出來的，而是由寫字的人們逐漸地在寫字的點畫過程中，發(fā)現(xiàn)了它，因而很好地去認真利用它，彼此傳授，成為一定必守的規(guī)律。由此可知，書家和非書家的區(qū)別，在初期是不會有的。寫字發(fā)展到相當興盛之后（尤其到唐代），愛好寫字的人們，一天比一天多了起來，就產(chǎn)生出一批好奇立異、相信自己、不大愿意守法的人，各人使用各人的手法，各人創(chuàng)立各人所愿意的規(guī)則。凡是人為的規(guī)則，它本身與實際必然不能十分相切合，因而它是空洞的、缺少生命力的，因而也就不會具有普遍的、永久的活動性，因而也就不可能使人人都滿意地沿用著它而發(fā)生效力。在這里，自然而然地便有書家和非書家的分別了。有天分、有休養(yǎng)的人們，往往依他自己的手法，也可能寫出一筆可看的字，但是詳細監(jiān)察一下它的點畫，有時與筆法偶然暗合，有時則不然，尤其是不能各種皆工。既是這樣，我們自然無法以書家看待他們，至多只能稱之為善書者。講到書家，那就得精通八法，無論是端楷，或者是行草，他的點畫使轉(zhuǎn)，處處皆須合法，不能四號茍且從事，你只要看一看二王、歐、虞、褚、顏諸家遺留下來的成績，就可以明白的。如果拿書和畫來相比著看，書家的書，就好比精通六法的畫師的畫；善書者的書，就好比文人的寫意畫，也有它的風致可愛處，但不能學(xué)，只能參觀，以博其趣。其實這也是寫字發(fā)展過程中，不可避免的現(xiàn)象。六朝及唐人寫經(jīng)，風格雖不甚高，但是點畫不失法度，它自成為一種經(jīng)生體，比之后代善書者的字體，要嚴謹?shù)枚?。宋代的蘇東坡，大家都承認他是個書家，但他因天分過高，放任不羈，執(zhí)筆單鉤，已為當時所非議。他自己曾經(jīng)說過：“我書意造本無法?！秉S山谷也嘗說他“往往有意到筆不到處”。就這一點來看，他又是一個道地的不拘拘于法度的善書的典型人物，因而成為后來學(xué)書人不須要講究筆法的借口。我們要知道，沒有過人的天分，就想從東坡的意造入手，那是毫無成就可期的。我嘗看見東坡畫的枯樹竹石橫幅，十分外行，但極有天趣，米元章在后邊題了一首詩，頗有相互發(fā)揮之妙。這為文人大開了一個方便之門，也因此把守法度的好習(xí)慣破壞無遺。自元以來，書畫都江河日下，到了明清兩代，可看的書畫就越來越少了。一個人一味地從心所欲做事，本來是一事無成的。但是若能做到從心所欲不逾矩（自然不是意造的矩）的程度，那卻是最高的進境。寫字的人，也需要做到這樣。（有刪改）15．根據(jù)原文內(nèi)容，下列說法不正確的一項是（3分）A．善書而不知筆法，這一現(xiàn)象出現(xiàn)在寫字初期，當時筆法還未被充分發(fā)現(xiàn)和利用。B．唐代愛好寫字的人漸多，有一批人好奇立異，自創(chuàng)規(guī)則，經(jīng)生體就是這么產(chǎn)生的。C．二王、歐、虞、褚、顏諸家都是嚴格遵守筆法的典型，他們都屬于書家的行列。D．元明清三代，書畫創(chuàng)作每況愈下，優(yōu)秀作品越來越少，與守法度的習(xí)慣被破壞有關(guān)。16．下列關(guān)于原文內(nèi)容的理解和分析，不正確的一項是（3分）A．在寫字過程中，那些與實際不能完全切合的人為的規(guī)則，不具有普遍的永久的活動性，因而不能稱之為筆法。B．書與畫相似，書家之書正如畫師之畫，謹嚴而不失法度，而善書者之書正如文人的寫意，別有風致。C．蘇東坡天分高，修養(yǎng)深，意造的書畫自有天然之趣，但率先破法，放任不羈，成為后世不守法度的借口。D．一味從心所欲做事是不可取的，但寫字的人如能做到“從心所欲不逾矩”，卻能達到最高的境界。17．書家和善書者的區(qū)別體現(xiàn)在哪些方面？請簡要概括。（6分）七、現(xiàn)代文閱讀（三）（12分）閱讀下面的作品，完成18~20題。天津的開合橋茅以升開合橋就是可開可合的橋，合時橋上走車，開時橋下行船，一開一合，水陸兩便，是一種很經(jīng)濟的橋梁結(jié)構(gòu)。但在我國，這種橋造得很少，直到現(xiàn)在，幾乎全國的開合橋都集中在天津，這不能不算是天津的一種“特產(chǎn)”。南運河上有金華橋，于牙河上有西河橋，海河上有全鋼橋、全湯橋、解放橋。這些都是開合橋。為什么天津有這樣多的開合橋呢？對陸上交通說，過河有橋，當然是再好沒有了。但是河上要行船，有了橋，不但航道受限制，而且船有一定高度，如果橋的高度不變，水漲船高，就可能過不了橋。要保證船能過橋，就要在橋下預(yù)留一個最小限度的空間高度，雖在大水時期，仍然能讓最高的船通行無阻。這個最小限度的空間高度，名為“凈空”，要等于河上航行的船的可能最大高度。根據(jù)河流在洪水時期的水位，加上凈空，就定出橋面高出兩岸的高度。如果河水漲落差距特別大，如同天津的河流一樣，那么，這橋面的高度就很驚人了。橋面一高，就要在橋面和地面之間造一座有坡度的“引橋”，引橋不僅增加了橋梁的造價，而且對兩旁的房屋建筑非常不利。這在城市規(guī)劃上成了不易解決的問題。這便是水陸文通之同的一個矛盾。為了陸上交通，就要有正橋過河，而正橋就妨礙了水上交通；為了水上交通，就要有兩岸的引橋，而引橋又妨礙了陸上交通，因為上引橋的車輛有的是要繞道而行的，而引橋兩旁的房屋也是不易相互往來的。在都市里，除非長度有限，影響不大的以外，引橋總是一種障礙物，應(yīng)當設(shè)法消除。開合橋就是消除引橋的一種橋梁結(jié)構(gòu)。天津開河橋多，就是這個原因。開合橋的種類很多，一種是“平旋橋”，把兩孔橋聯(lián)在一起，在兩孔之間的橋墩上，安裝機器，使這兩孔橋圍繞這橋墩在水面上旋轉(zhuǎn)九十度，與橋的原來位置垂直，讓出兩孔航道，上下無阻地好過船。一種“升降橋”，在一孔橋的兩邊橋墩上，各立塔架，安裝機器，使這一孔橋能在塔架間升降，就像電梯一樣，橋孔升高時，下面就可以過船了。一種是“吊旋橋”，把一孔橋分為兩葉，每葉以橋墩支座為中心，用機器轉(zhuǎn)動，使其臨空一頭，逐漸吊起，高離水面，這樣兩葉同時展開，就可讓出中間通道，以便行船。一是“推移橋”把一孔橋用機器沿著水平面拖動，好像拉抽屜是一樣，以使讓出河道行船。開合橋橋面不必高出地面，不用引橋，但開時不能走車，合時不能通船，水陸交通不可同時進行。特別是，橋在開合的過程中，既非全開，又非全合，于是在這一段時間里，水陸都不能通行，這在運輸繁忙的都市，如何能容許呢？因此，在橋梁史上，開合橋雖曾風行一時，但在近數(shù)十年來，就日益減少了。那么，開合橋怎樣才能更好地服務(wù)呢？應(yīng)當說，有幾種改進的可能：一是將橋身減輕，改用新材料，使它容易開動；二是強化橋上的機器，提高效率，大大縮減開橋合橋的時間；三是利用電子儀器，使橋的開合自動化，以期達到每次開橋時間不超過3分鐘，如同十字道口的錯車時間一樣。這些都不是幻想，也許在不久的將來就會實現(xiàn)。（有刪改）18．下列對文中“引橋”的理解，不正確的一項（3分）A．引橋是建造在河的兩岸有一定坡度的橋，其作用是引導(dǎo)車輛駛上正橋。B．在設(shè)計引橋時，需要綜合考慮空間高度、橋梁造價、城市規(guī)劃等因素。C．引橋方便了水上交通，但會妨礙陸上交通，因為上引橋的車輛必須繞道。D．在都市里，長度過長、影響太大的引橋是一種障礙物，應(yīng)該設(shè)法消除。19．下列對原文內(nèi)容的概括和分析，不正確的一項是（3分）A．開合橋成為天津的“特產(chǎn)”，與天津河流水位漲落差距特別大密切相關(guān)。B．建橋時，正橋橋面高出兩岸的高度等于河流平時的水位加上橋的凈空。C．除平旋橋之外，升降橋、吊旋橋、推移橋這三種都屬于一孔橋。D．改進開合橋的關(guān)鍵是盡可能縮減橋的開合時間，提高通行效率。20．請結(jié)合全文，概括開合橋的優(yōu)缺點。（6分）八、作文（70分）21．根據(jù)以下材料，選取角度，自擬題目，寫一篇不少于800字的文章；除詩歌外，文體自選。物各有性，水至淡，鹽得味。水加水還是水，鹽加鹽還是鹽。酸甜苦辣咸，五味調(diào)和，共存相生，百味紛呈。物如此，事猶是，人亦然。語文Ⅱ（附加題）一、閱讀材料，完成22～24題。（10分）題自書杜拾遺詩后徐渭余讀書臥龍山之巔，每于風雨晦暝時，輒呼杜甫。嗟乎，唐以詩賦取士，如李杜者不得舉進士；元以曲取士，而迄今嘖嘖于人口如王實甫者，終不得進士之舉。然青蓮以清平調(diào)三絕寵遇明皇實甫見知于花拖而榮耀當世彼拾遺者一見而輒阻僅博得早朝詩幾首而已余俱悲歌慷慨苦不勝述。為錄其詩三首，見吾兩人之遇，異世同軌。誰謂古今人不相及哉！22．用斜線“/”給上面文言文中的劃線部分斷句。（限5處）（5分）23．王實甫的雜劇代表作為《▲》，期中男女主人公是▲、▲。（3分）24．根據(jù)材料，概括文中古今人“相及”的內(nèi)涵。（2分）二、名著閱讀題。（15分）25．下列有關(guān)名著的說明，不正確的兩項是（5分）（選擇兩項且全答對得5分，選擇兩項只答對一項得2分，其余情況得0分）A．《三國演義》中，張飛在長板橋上睜圓環(huán)眼厲聲大喝，嚇退曹兵，然后迅速拆斷橋梁，以阻追兵，可見張飛十分勇猛，有很有智謀。B．《家》中，許倩如倡導(dǎo)女子剪發(fā)，帶頭剪掉自己的辮子，還以梅的遭遇來激發(fā)琴拒絕包辦婚姻，鼓勵琴做一個跟著時代走的新女性。C．《狂人日記》中，狂人說將來的社會“容不得吃人的人”，最后喊出“救救孩子”，作者借此表達了對社會變革的強烈渴望。D．《歐也妮·葛朗臺》中，夏爾在父親破產(chǎn)自殺后，不愿拖累心上人安奈特而寫了分手信給她，這一良善之舉讓偷看信件的歐也妮發(fā)誓要永遠愛他。F．《老人與海》中，圣地亞哥經(jīng)過生死搏斗最終將大馬林魚殘骸拖回港口，有游客把它當成了鯊魚骨，這一誤會讓小說結(jié)尾更意味深長。26．簡答題（10分）（1）《紅樓夢》“壽怡紅群芳開夜宴，死金丹獨艷理親喪”一回中，群芳行令，寶釵搖得牡丹簽，上云“任是無情也動人”。請結(jié)合小說概括寶釵的“動人”之處。（6分）（2）《茶館》第三幕，在得知來到茶館的“老得不像樣子了”的人是秦仲義時，王利發(fā)對他說：“正想去告訴您一聲，這兒要大改良！”這里的“大改良”指的是什么？這句話表達了王利發(fā)什么樣的情感？（4分）三、材料概括分析題（15分）閱讀材料，完成27—29題。去故宮參觀時，會看到許多監(jiān)控探頭，這屬于現(xiàn)代高科技警報系統(tǒng)。從前有沒有安全警報系統(tǒng)呢？在古代，進入紫禁城須憑腰牌與合符，上面刻有允許入內(nèi)人員的身份信息，守衛(wèi)會當場檢查。一旦發(fā)現(xiàn)危險，附近白塔山上的信炮手接到放炮令牌，立即朝天開炮，衛(wèi)士們就會迅速集合。如果有人越過了外圍防御系統(tǒng)，還有一種特殊的警報裝置——石別拉。這種石別拉，材料比較簡單，利用故宮大量使用的欄板的望柱頭改造而成。望柱也稱為欄桿柱，是中國古道橋梁欄板和欄板之間的短柱，分柱身和柱頭兩部分。有的柱頭是蓮花瓣形狀，上面有二十四道紋路，象征二十四節(jié)氣。普通的蓮瓣望柱頭，本是一塊瓷實的石頭，加工成石別拉時，把望柱頭里面挖空了，就像一個空心葫蘆。這種石別柱幾乎覆蓋了整個紫禁城。需要報警時，侍衛(wèi)將三寸長的“小銅角”（一種牛角狀的喇叭）插入石孔內(nèi)，使勁吹向，通過石別拉的放大，聲音飛快傳遍四周。如果有外敵從午門入侵，午門守衛(wèi)會敲響闕亭里面的警鐘，鐘聲會傳至太和門廣場，其后各處石別拉會先后吹向，一分鐘內(nèi)，紫禁城所有位置的守衛(wèi)都能聽到警報聲。這些望柱頭形狀和紋飾未受到改變，在紫禁城內(nèi)起到了很好的裝飾作用，而通過對望柱頭開孔，制成報警器，又發(fā)揮了實用功能。歷經(jīng)數(shù)百年滄桑，有的石別拉洞口已被雜物堵上，有的在修繕過程中被新的石材替換了，盡管現(xiàn)在能夠通過文獻考證了解它的工作原理，但已沒人能夠把它吹響了。27．古代紫禁城的安全警報系統(tǒng)由哪些部分構(gòu)成？（4分）28．石別拉這種警報裝置有什么特殊之處？（6分）29．如今石別拉不再發(fā)揮警報功能的原因有哪些？（5分）2021年普通高等學(xué)校招生全國統(tǒng)一考試語文（江蘇卷）參考答案一、語言文字運用（12分）1．D2．A3．C4．B二、文言文閱讀（20分）5．B6．D7．（l）見到他的人越發(fā)嘖嘖稱贊道：“這個年輕人（好比）是汗血寶馬，能日行千里，不是那種只能在大路上小步行走的馬?！保?）但他自己不說窮，別人也不都知道他窮。湯公不正是信從自己內(nèi)心的人嗎？我即使為他執(zhí)鞭駕車，也是樂意和向往的。8．讀書不為功名，樂此不疲；于書無所不讀，尤精《文選》；詩文