獸醫(yī)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)

獸醫(yī)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)第1頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五本課程實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)一藥理實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)二

藥物的劑量與劑型對(duì)藥物效應(yīng)的影響實(shí)驗(yàn)三毛果蕓香堿與阿托品對(duì)瞳孔及對(duì)光反射的影響實(shí)驗(yàn)四藥物急性半數(shù)致死量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)五肝臟損傷對(duì)藥物作用的影響實(shí)驗(yàn)六藥物敏感性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)七磺胺類(lèi)藥物內(nèi)服給藥后的血中藥物濃度測(cè)定實(shí)驗(yàn)八

藥物對(duì)家兔的利尿作用的影響實(shí)驗(yàn)九有機(jī)磷酸酯類(lèi)中毒及解救第2頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)一藥理實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)目的掌握基本操作，鍛煉動(dòng)手、動(dòng)腦能力；更好地掌握藥理學(xué)基本理論知識(shí)；培養(yǎng)科學(xué)思維第3頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五基本要求實(shí)驗(yàn)前：預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容并復(fù)習(xí)相關(guān)理論知識(shí)；實(shí)驗(yàn)時(shí)實(shí)驗(yàn)器材要妥善保管；實(shí)驗(yàn)操作按步驟進(jìn)行，仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的現(xiàn)象，實(shí)事求是地做好記錄；注意節(jié)約實(shí)驗(yàn)藥品；維持良好的課堂紀(jì)律。

實(shí)驗(yàn)后各組同學(xué)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死，實(shí)驗(yàn)臺(tái)擦干凈，將實(shí)驗(yàn)方盤(pán)送回準(zhǔn)備室；值日生搞好實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生，將死亡動(dòng)物送至指定場(chǎng)所；書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。第4頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)題目目的原理材料：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，器材，藥品方法：用自己的語(yǔ)言簡(jiǎn)單扼要描述出來(lái)；結(jié)果：要求真實(shí)、清楚；討論：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較、分析；實(shí)驗(yàn)中有哪些不足之處；結(jié)果異?；蚴〉脑颍唤Y(jié)論：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行歸納總結(jié)，應(yīng)帶有提示性質(zhì)。第5頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本原則隨機(jī)原則使每一實(shí)驗(yàn)對(duì)象都有同等的機(jī)會(huì)抽到實(shí)驗(yàn)組或?qū)φ战M中，除處理因素外其他因素盡可能均衡一致，從而抵消非實(shí)驗(yàn)因素的影響。對(duì)照原則組間對(duì)照：陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照，同因素不同水平對(duì)照；自身前后對(duì)照重復(fù)原則第6頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物的選擇小白鼠：適用于需大量動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)，如某些藥物的篩選，半數(shù)致死量的測(cè)定。也較適用于避孕藥實(shí)驗(yàn)、抗炎鎮(zhèn)痛藥實(shí)驗(yàn)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥實(shí)驗(yàn)、抗腫瘤藥及抗衰老藥實(shí)驗(yàn)等。大白鼠：比較適用于抗炎藥物實(shí)驗(yàn)，血壓測(cè)定、利膽、利尿藥實(shí)驗(yàn)，也可用于進(jìn)行亞急性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)。第7頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物的選擇

豚鼠：因其對(duì)組胺敏感，并易于致敏，故常被選用于抗過(guò)敏藥、平喘藥和抗組胺藥的實(shí)驗(yàn)。也常用于離體心臟、心房、腸管實(shí)驗(yàn)。又因它對(duì)結(jié)核敏感，常用于抗結(jié)核病藥的實(shí)驗(yàn)。家兔：常用于觀察研究腦電生理作用，藥物對(duì)小腸的作用。由于家兔體溫變化敏感，也常用于體溫實(shí)驗(yàn)，用于熱原檢查。狗：狗是記錄血壓，呼吸最常用的大動(dòng)物。還可利用狗做成胃瘺、腸瘺，以觀察藥物對(duì)胃腸蠕動(dòng)和分泌的影響。在進(jìn)行慢性毒性實(shí)驗(yàn)時(shí)，也常采用狗。第8頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五動(dòng)物捉拿及固定方法小白鼠右手提起鼠尾,左手拇指和食指捏住雙耳及頭部皮膚，無(wú)名指、小指和掌心夾其背部皮膚及尾部,便可將小鼠完全固定。如圖1。單手捉持，用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、無(wú)名指和手掌壓住尾根部，再用騰出的拇指、食指及中指抓住鼠雙耳及頭部皮膚而固定。如圖2。圖2圖1第9頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五動(dòng)物捉拿及固定方法豚鼠

豚鼠性情溫和不咬人，用手握住軀干即可。家兔

可用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢(shì)。在進(jìn)行仰位手術(shù)操作時(shí)，可用繩帶將其四肢仰位捆綁在兔手術(shù)臺(tái)上。頭部用兔頭固定夾固定。第10頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五動(dòng)物的給藥方法小白鼠灌胃法（i.g.）：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，頸部伸直。右手持配有灌胃針頭的注射器，自口角插入口腔，再?gòu)纳嗝嫜厣想襁M(jìn)入食道。小鼠灌胃容量一般為0.1-0.3m1／10g。第11頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五動(dòng)物的給藥方法小白鼠

腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角將針頭從下腹部向頭端刺入腹腔。進(jìn)針部位不宜過(guò)高，刺入不宜太深，以免傷及內(nèi)臟。小鼠腹腔注射量一般為0.1-0.3ml／l0g。×√

肌肉注射（i.m.）：小鼠因肌肉較少，很少采用肌肉注射，若有需要可注射于股部肌肉，多選后腿上部外側(cè)，一處注射量不超過(guò)0.1mL。第12頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五動(dòng)物的給藥方法小白鼠

皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮膚處進(jìn)針即可。

靜脈注射(i.v.)：將小鼠置于特制的固定筒內(nèi)或倒置的大漏斗下，讓其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或?qū)⑹笪苍?0'C熱水中浸泡半分鐘使血管擴(kuò)張。左手拉尾端，右手持注射器將針頭刺入尾靜脈，推入藥液。第13頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五動(dòng)物的給藥方法家兔

灌胃：需兩人合作進(jìn)行。一人取坐位用兩腿夾持兔身，左手握家兔雙耳，右手抓住兩前肢。另一人將木制開(kāi)口器橫插家兔口內(nèi)，壓住舌頭并固定之。取8號(hào)導(dǎo)尿管從開(kāi)口器中部小孔插入食道。插管時(shí)如誤入氣管會(huì)出現(xiàn)動(dòng)物的掙扎和呼吸困難。也可將導(dǎo)尿管的外端浸入水中，如有氣泡吹出，表示插在氣管內(nèi)，此時(shí)應(yīng)拔管重插。當(dāng)判明導(dǎo)尿管在食道以?xún)?nèi)后，用注射器接通導(dǎo)尿管將藥液推入。第14頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五動(dòng)物的給藥方法家兔

皮下、肌肉、腹腔注射：給藥方法基本上同小鼠，唯針頭可稍大，給藥量可稍多。皮下與肌內(nèi)為0.5-1.0/mg，腹腔為1.0-5.0ml/mg

靜脈注射：將家兔置固定箱內(nèi)，撥去耳殼外緣的毛，選擇一條比較明顯的耳緣靜脈（兔耳外緣的血管為靜脈，中央的血管為動(dòng)脈，如圖），用酒精棉球涂擦皮膚，使血管顯露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指墊在兔耳注射處的下面，右手持注射器，將針頭從近耳尖處刺入，當(dāng)確認(rèn)針頭在血管中后，將藥液推入。第15頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)二

藥物的劑量與劑型對(duì)藥物效應(yīng)的影響

實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察不同劑型與劑量對(duì)藥物效應(yīng)的影響。實(shí)驗(yàn)材料

l.0ml注射器、針頭、小鼠灌胃針頭、燒杯、普通天平、3.5％硫酸鎂溶液（注射液和口服溶液）第16頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

觀察指標(biāo)

動(dòng)物活動(dòng)增加情況、呼吸急促、反射亢進(jìn)、震顫、驚厥及死亡時(shí)間、炭末推進(jìn)率等。實(shí)驗(yàn)方法取禁食12h的昆明種小鼠3只，稱(chēng)重，分別標(biāo)為對(duì)照組、灌胃組和腹腔注射組按以下給藥：

A：對(duì)照組：灌胃給生理鹽水0.2ml/10g；

B：灌胃組：灌胃給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g；

C：腹腔注射組：腹腔注射給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g。第17頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

給藥后注意觀察動(dòng)物的活動(dòng)情況，是否有肌肉松弛的表現(xiàn)。

15min后每只小鼠均灌胃給予5%炭末阿拉伯膠混懸液0.2ml。

炭末灌胃后15min，將小鼠脫臼處死，剖開(kāi)腹腔，取出胃腸道。剪去附著在腸管上的腸系膜,將腸管不加牽引地輕輕地平鋪在玻璃板上(玻璃板上滴少許鹽水)。以幽門(mén)為起點(diǎn),測(cè)量炭末在腸管內(nèi)的移動(dòng)距離和小腸(自幽門(mén)至回盲部)的全長(zhǎng),計(jì)算每只小鼠炭末的移動(dòng)距離占小腸全長(zhǎng)百分率，比較3組動(dòng)物的活動(dòng)狀況和胃腸炭末推進(jìn)率有何不同。第18頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表中

鼠號(hào)

體重(g)

藥物及劑量

給藥途徑

動(dòng)物反應(yīng)

炭末推進(jìn)率（%）ABC不同劑型對(duì)藥物效應(yīng)的影響第19頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

思考討論題

灌胃和腹腔注射給硫酸鎂的效應(yīng)有哪些不同？為什么？本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床用藥有何提示？

第20頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)三毛果蕓香堿與阿托品對(duì)瞳孔及對(duì)光反射的影響

目的了解毛果蕓香堿的副交感神經(jīng)節(jié)后擬膽堿作用和阿托品的對(duì)抗作用。材料兔子１只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%鹽酸腎上腺素注液,0.2%硝酸毛果蕓香堿注射液第21頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

方法取兔放于兔固定箱內(nèi)固定，避免陽(yáng)光直射眼睛，用毛剪剪去兔兩眼睫毛，然后用瞳孔量尺測(cè)量瞳孔大小，連續(xù)三次，取平均值。在兔左眼滴入０.2%毛果蕓香堿3滴，滴藥時(shí)用姆指和食指將下眼瞼提起,使成囊狀,再用中指壓住鼻淚管開(kāi)口處,防止藥液流入鼻淚管而不起作用，再用右手滴入藥液。15分鐘后再測(cè)量瞳孔大小，連續(xù)三次，取平均值，并進(jìn)行比較。滴入毛果蕓香堿20分鐘后，分別在兩眼滴入0.1%腎上腺素3滴，15分鐘后測(cè)量?jī)赏状笮。B續(xù)3次，取平均值并進(jìn)行比較。滴入腎上腺素15分鐘后，分別于兩眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分鐘后觀察兩眼瞳孔變化，并測(cè)量其大小，連續(xù)3次，并取平均值第22頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五項(xiàng)目正常毛果蕓香堿腎上腺素阿托品瞳孔大小左眼

右眼

記錄

討論題

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中如何說(shuō)明藥物的協(xié)同作用和拮抗作用？

第23頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)四

藥物急性半數(shù)致死量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)測(cè)定藥物的半數(shù)致死量的方法、步驟和計(jì)算過(guò)程，了解測(cè)定藥物半數(shù)致死量的意義。實(shí)驗(yàn)要求半數(shù)致死量（LD50）是衡量藥物毒性大小的重要標(biāo)志，LD50表示能使全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡半數(shù)的藥物劑量，是以動(dòng)物死亡或存活作為質(zhì)反應(yīng)標(biāo)志。LD50小說(shuō)明藥物的毒性大，LD50大表明藥物毒性小。第24頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)器材與藥物

注射器，乙酰甲喹試驗(yàn)方法預(yù)備試驗(yàn)取雛雞20只，以5只為1組，分成4組。分別灌服不同劑量的藥物，連續(xù)觀察24h，出現(xiàn)中毒癥狀并記錄死亡數(shù)。找出引起0%及100%死亡率劑量的所在范圍。預(yù)試驗(yàn)組中給予雛雞500mg/Kg劑量5只雛雞全部死亡，而給予100mg/Kg劑量組的5只雛雞全部存活。通過(guò)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果按照下面公式算出劑量間的等比值（1：r）

r≈0.7第25頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五式中N為分組組數(shù)，Dm是估計(jì)100%死亡的致死量，Dn是估計(jì)0%死亡的致死量，r為比值。計(jì)算各組劑量：第一組500mg/kg第二組350mg/kg第三組245mg/kg第四組171.5mg/kg第五組120.05mg/kg第六組空白對(duì)照組

第26頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五正式試驗(yàn)一個(gè)班分兩大組，每大組用50只雛雞（50-60g）進(jìn)行急性L(fǎng)D50測(cè)定。每大組將雛雞50只分為5組，每組10只，按上述計(jì)算的劑量口服灌服給藥，每只給1mL?？瞻捉M不給藥。實(shí)驗(yàn)記錄組別劑量mg/kg動(dòng)物數(shù)死亡數(shù)死亡率P存活率q第一組第二組第三組第四組第五組第六組第27頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五計(jì)算1.LD50的計(jì)算按綜合計(jì)算法公式計(jì)算2．計(jì)算logLD50的標(biāo)準(zhǔn)誤S3.計(jì)算95%置信區(qū)界（FL）上述公式中：Xm為最大死亡率組劑量對(duì)數(shù)；i為組距（相鄰兩組劑量比值的對(duì)數(shù)）；∑P為各組死亡率總和（用小數(shù)表示）；X50為logLD50；Xi相鄰對(duì)數(shù)劑量差。第28頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五如果試驗(yàn)結(jié)果最高死亡率在80～100%之間，最低死亡率在20～0%之間，可用下列公式求得校正值：

LD50=log-1[Xm-i(∑p-(3-Pm-Pn)/4]式中：Pm—最高死亡量組Pn—最低死亡量組第29頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)五

肝臟損傷對(duì)藥物作用的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過(guò)實(shí)驗(yàn)，觀察肝損傷后對(duì)藥物作用的影響。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

肝臟是藥物代謝的主要器官，而藥物的代謝主要靠酶的催化。在肝細(xì)胞內(nèi)有專(zhuān)門(mén)催化藥物等外源性化學(xué)物質(zhì)代謝的微粒體酶，簡(jiǎn)稱(chēng)藥酶。四氯化碳是一種對(duì)肝細(xì)胞有嚴(yán)重毒害作用的化學(xué)物質(zhì)，可引起中毒性肝炎，使肝臟對(duì)藥物的代謝能力降低。本實(shí)驗(yàn)用四氯化碳損害小白鼠的肝臟，使肝藥酶活性受到抑制，從而減緩對(duì)硫噴妥鈉的代謝，使麻醉時(shí)間延長(zhǎng)。第30頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備儀器：注射器，針頭，天平，鼠籠。藥物：四氯化碳、硫噴妥鈉實(shí)驗(yàn)內(nèi)容給健康小白鼠注射四氯化碳（0.1mL/10g)，造成肝損傷，后用0.3%硫噴妥鈉注射(0.15mL/10g)，與健康小白鼠對(duì)照，比較它們麻醉出現(xiàn)及維持的時(shí)間的不同；解剖所有小白鼠，分別觀察它們肝和腎的病理變化，并與健康小白鼠比較。第31頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)記錄

肝臟損傷對(duì)藥物作用的影響

鼠號(hào)體重（g）硫噴妥鈉劑量（mL）注射時(shí)間麻醉開(kāi)始時(shí)間麻醉維持時(shí)間健康鼠肝損鼠注意事項(xiàng)“麻醉開(kāi)始時(shí)間“為小鼠從腹腔注射硫噴妥鈉溶液后至翻正反射消失時(shí)間；“麻醉消失時(shí)間”為從翻正反射消失至翻正反射恢復(fù)的時(shí)間。第32頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)六藥物敏感性實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)內(nèi)容藥物敏感實(shí)驗(yàn)——紙片法定量藥敏實(shí)驗(yàn)——試管二倍稀釋法學(xué)習(xí)要求掌握兩種藥物敏感實(shí)驗(yàn)的原理、方法及注意事項(xiàng)。第33頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五抗菌藥物敏感性試驗(yàn)（AST，簡(jiǎn)稱(chēng)藥敏試驗(yàn)）：用于測(cè)試抗菌藥物在體外對(duì)病原微生物有無(wú)抑制作用。常用最低抑菌濃度（MIC）表示，即體外能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度。通常根據(jù)MIC結(jié)合常用劑量時(shí)體內(nèi)該藥所能達(dá)到的血藥濃度，劃定細(xì)菌對(duì)各種抗生素敏感或耐藥的界限，給出S（敏感）、I（中介）、R（耐藥）等定性的結(jié)果，方便臨床用藥。檢測(cè)病原菌對(duì)各種抗生素的敏感性，指導(dǎo)臨床合理用藥。用于流行病學(xué)調(diào)查及院內(nèi)感染的監(jiān)控，控制和預(yù)防耐藥菌株的流行。為經(jīng)驗(yàn)用藥提供參考依據(jù)。方法：擴(kuò)散法（紙片法）、稀釋法（有瓊脂稀釋法和液體稀釋法）第34頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五藥敏紙片的人工制作定性濾紙用打孔器打成直徑6mm的圓片，每100片放入一小瓶中，160℃干熱滅菌1---2小時(shí)，或用高壓滅菌（6.8kg30min）后在60℃條件下烘干。（此應(yīng)提前做好）抗菌藥物的濃度（指有效藥物濃度）

青霉素200U/ml其它抗菌藥物1000ug/ml

磺胺類(lèi)藥物10mg/ml中草藥制劑1g/ml

慶大霉素4萬(wàn)單位/ml，稀釋為1000單位/ml。（臨床上可按照藥品使用說(shuō)明書(shū)，如上面標(biāo)明5克本品可拌50千克飼料，其換算方法為l克本品可拌10千克飼料，也就是1克本品拌l0000克飼料，相當(dāng)于藥品濃度為l克本品加l0000毫升蒸餾水。）第35頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五用無(wú)菌操作法將欲測(cè)的抗菌藥物溶液1ml，加入100片紙片中，置冰箱內(nèi)1—2小時(shí)，用下列方法烘干：培養(yǎng)皿烘干法：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37℃的溫箱內(nèi)保持2--3小時(shí)即可干燥，或放在無(wú)菌室內(nèi)過(guò)夜干燥。將制好的各種藥物紙片裝入無(wú)菌小瓶中，置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。并用?biāo)準(zhǔn)敏感菌株做敏感性實(shí)驗(yàn)，記錄抑菌環(huán)的直徑。干燥的藥敏紙片可保存6個(gè)月。使用前用標(biāo)準(zhǔn)的敏感菌株做藥物敏感實(shí)驗(yàn)，若抑菌環(huán)比原來(lái)小，則表明該紙片已失效。第36頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五紙片法每組約7-8個(gè)平皿（每人1個(gè)），每個(gè)平皿約20毫升瓊脂培養(yǎng)基，即約200ml。按照每組500毫升瓊脂培養(yǎng)基、100毫升肉湯培養(yǎng)基準(zhǔn)備。每平皿約4張紙片，每班約240張以上。將瓊脂培養(yǎng)基熔融后，每個(gè)平皿倒入約20毫升，晾干后，用玻棒蘸含菌棉球（玻棒、棉球均事先消毒）涂抹均勻后晾干。用鑷子夾紙片，每個(gè)平皿貼4張紙片，要使紙片全部緊貼培養(yǎng)基。為保證均勻，可于平皿背部劃出貼紙片點(diǎn)。36攝氏度培養(yǎng)過(guò)夜。測(cè)量寬度。第37頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五試管稀釋法每組2排試管，每排10支。共80支。將慶大霉素用肉湯稀釋液成64微克/毫升。每班20毫升即可。挑選10支無(wú)菌試管編號(hào)1—10。無(wú)菌加入1.0毫升肉湯至第2到10管內(nèi)。將64微克/毫升慶大霉素液體，分別加1.0毫升至第1、2管，將第2管混合后取1.0毫升至第3管，依次至第9管，再?gòu)牡?管取1.0毫升丟去，第10管不加抗生素作陽(yáng)性對(duì)照。第38頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五試管稀釋法另準(zhǔn)備肉湯管不加抗生素、細(xì)菌作陰性對(duì)照。第1—10管分別加入已增菌6小時(shí)的細(xì)菌濃度約為105-106cfu/ml菌液1.0毫升（細(xì)菌菌齡為16-18小時(shí)，McFarlandNo0.5管細(xì)菌濃度1.5×108cfu/ml，然后用用肉湯1：200稀釋?zhuān)?。培養(yǎng)和結(jié)果判讀：35℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，肉眼觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。陽(yáng)性可見(jiàn)混濁生長(zhǎng)，陰性可見(jiàn)澄清。最終各試管慶大霉素濃度：321684210.50.250微克/毫升第39頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)七磺胺類(lèi)藥物內(nèi)服給藥后的血中藥物濃度測(cè)定

目的了解磺胺嘧啶非血管內(nèi)一次給藥后血藥濃度隨時(shí)間變化的規(guī)律。原理已知磺胺嘧啶等磺胺類(lèi)藥物在酸性環(huán)境下其苯環(huán)上的氨基（—NH2）將被離子化而生成銨類(lèi)化合物（—NH3+）。后者與亞硝酸鈉反應(yīng)可發(fā)生重氮化反應(yīng)進(jìn)而生成重氮鹽（—N＝N+—）。該化合物在堿性條件下可與麝香草酚生成橙黃色化合物。在525nm波長(zhǎng)下比色，其光密度與磺胺嘧啶的濃度成正比。第40頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五根據(jù)上述原理,在給受試家兔一次靜脈注射一定劑量的磺胺嘧啶后,于不同時(shí)間點(diǎn)采集其靜脈血樣,采用比色法對(duì)各樣品中磺胺嘧啶的血藥濃度進(jìn)行定量分析,并以血藥濃度對(duì)相應(yīng)時(shí)間作圖,從而獲得磺胺嘧啶的靜脈給藥后的藥時(shí)曲。

第41頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五動(dòng)物3kg左右家兔一只藥品20％磺胺嘧啶（sulfadiazine，SD）、7.5％三氯醋酸、0.1％SD標(biāo)準(zhǔn)液、0.5％亞硝酸鈉、0.5％麝香草酚（用20％NaOH配制）、1000u/mL肝素生理鹽水、3％戊巴比妥鈉、蒸餾水。器材721分光光度計(jì)、離心機(jī)、磅秤、手術(shù)器械、動(dòng)脈夾、尼龍插管（或玻璃插管、硅膠管）、兔手術(shù)臺(tái)、注射器（5mL）及針頭、移液器（0.01～1mL）、吸頭、試管、離心管、試管架、玻璃記號(hào)筆、藥棉、紗布、計(jì)算機(jī)。第42頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五方法與步驟血中藥物濃度測(cè)定麻醉：全麻或局麻均可。取兔一只（實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)不禁水），記錄體重和性別，耳緣靜脈注射3％戊巴比妥鈉0.8～1.0mL/kg麻醉，仰位固定于兔手術(shù)臺(tái)上。手術(shù)：頸部手術(shù)區(qū)剪毛，切皮約6cm左右，鈍性分離皮下組織和肌肉，氣管插管，分離出頸總動(dòng)脈約2～3cm左右，在其下穿兩根細(xì)線(xiàn)，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，保留近心端。耳緣靜脈注射1000u/mL肝素1mL/kg。插管：用動(dòng)脈夾夾住動(dòng)脈近心端，再于兩線(xiàn)中間的一段動(dòng)脈上剪一“V”型切口，插入尼龍管，用線(xiàn)結(jié)扎牢固，以備取血用。第43頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五方法與步驟血中藥物濃度測(cè)定取血：打開(kāi)動(dòng)脈夾放取空白血樣0.4mL，分別放入1號(hào)管（空白管）和2號(hào)管（標(biāo)準(zhǔn)管）各0.2mL搖勻靜置。而后腹腔注射20％SD1.5mL/kg，分別于注射后5、15、30、45、75、120、180、240、300分鐘時(shí)由動(dòng)脈取血0.2mL加到含有7.5％三氯醋酸2.7mL的試管中搖勻。標(biāo)準(zhǔn)管加入0.1％SD標(biāo)準(zhǔn)液0.1mL，其余各管加蒸餾水0.1mL搖勻。顯色：將上述各管離心5分鐘（1500-2000轉(zhuǎn)/分），取上清液1.5mL，加0.5％亞硝酸鈉0.5mL，搖勻后，再加入0.5％麝香草酚1mL后溶液為橙色。測(cè)定：于分光光度計(jì)在525nm波長(zhǎng)下測(cè)定各樣品管的光密度值。計(jì)算血中藥物濃度：根據(jù)同一種溶液濃度與光密度成正比的原理，可用空白血標(biāo)準(zhǔn)管濃度及其光密度值求算出樣品管的磺胺藥物濃度。第44頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)果與處理將所得數(shù)據(jù)用計(jì)算機(jī)軟件繪制藥物的藥時(shí)曲線(xiàn)。注意事項(xiàng)每次取血前要先將插管中的殘血放掉。每吸取一個(gè)血樣時(shí)，必須更換吸量管，若只用一支吸量管時(shí)必須將其中的殘液用生理鹽水沖凈。將血樣加到三氯醋酸試管中應(yīng)立即搖勻，否則易出現(xiàn)血凝塊。第45頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)八

藥物對(duì)家兔的利尿作用的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康母鶕?jù)尿液的多少，了解幾種利尿藥的利尿作用實(shí)驗(yàn)原理尿液的生成過(guò)程受多種因素的影響。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)改變某些影響腎小球?yàn)V過(guò)或腎小管、集合管重吸收的因素，觀察對(duì)尿液的影響。第46頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備器材：兔手術(shù)臺(tái)，哺乳動(dòng)物手術(shù)器械一套，膀胱套管，記滴器，培養(yǎng)皿。藥物：20%烏拉坦，生理鹽水，抗利尿素，50%葡萄糖，20%明膠，速尿。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

兔的麻醉用20%烏拉坦溶液（1g/Kg)沿耳緣靜脈注射麻醉后，將兔仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，剪下腹部的毛。第47頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

尿液收集方法從恥骨聯(lián)合向上沿正中線(xiàn)作約4cm長(zhǎng)的皮膚切口，再沿腹白線(xiàn)剪開(kāi)腹壁及腹膜，將膀胱翻至體外（勿使腸管外泄，以免血壓下降）。在膀胱底部找到兩側(cè)輸尿管，認(rèn)清兩側(cè)輸尿管在膀胱的開(kāi)口部分。小心地在兩側(cè)輸尿管下方穿一棉線(xiàn)，將膀胱上翻，結(jié)扎尿道。再在膀胱頂部血管較少的地方做一荷包縫合，中心作一小切口，插入膀胱插管或塑料管，插管口需對(duì)準(zhǔn)兩輸尿管出口，收縮縫線(xiàn)結(jié)扎固定，導(dǎo)管的另一端連至計(jì)數(shù)器。輕輕將膀胱連同膀胱導(dǎo)管送入腹腔，腹部切口處用止血鉗輕輕夾住，并用溫生理鹽水紗布覆蓋手術(shù)部位。第48頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五觀察項(xiàng)目記錄正常的尿量。靜脈注射10mL/kg生理鹽水，觀察尿量變化，同記錄3分鐘并于2~3分后開(kāi)始下一步實(shí)驗(yàn)。靜脈注射抗利尿素2單位，觀察尿量變化。靜脈快速注射50%葡萄糖（4mL/kg），觀察尿量變化。靜脈注射預(yù)先加熱的37℃明膠10~15mL，觀察尿量變化靜脈注射速尿0.5mL，觀察尿量變化。靜脈注射1：10000鹽酸腎上腺素0.2~0.3mL，觀察尿量變化。第49頁(yè)，共55頁(yè)，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)記錄

記錄用藥前后家兔的泌尿量項(xiàng)目

正常

生理鹽水

抗利尿激素

50%葡萄糖

明膠速尿腎上腺素尿量(滴/min)第50頁(yè)，共55頁(yè)，2023