病毒感染的檢查方法與防治原則模板

病毒感染的檢查方法與防治原則模板第1頁/共45頁病毒感染的檢查方法

與防治原則

第25章

第2頁/共45頁第一節(jié)病毒感染的檢查第3頁/共45頁病毒感染的檢查檢測內容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)第4頁/共45頁一、標本的采集與送檢原則基本與細菌相似，但應注意：

1.標本用“雙抗”或兩性霉素B處理

2.低溫保存，盡快送檢

3.血清學診斷采雙份血清第5頁/共45頁二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)

細胞培養(yǎng)（cell

culture）

雞胚接種（egginoculation）

動物接種（animalinoculation）第6頁/共45頁二、病毒的分離與鑒定一般程序：標本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細胞培養(yǎng)指標陽性指標陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標陰性病毒陰性第7頁/共45頁（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細胞培養(yǎng)

單層細胞培養(yǎng)（monolayercellculture）

分類懸浮細胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）原代細胞（primarycell）細胞種類二倍體細胞（diploidcell）傳代細胞系（continuouscellline）第8頁/共45頁病毒的細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶單層細胞第9頁/共45頁1.細胞培養(yǎng)(1)原代和次代細胞培養(yǎng)組織

組織塊

分散的單個細胞單層細胞

剪碎

培養(yǎng)基(原代細胞)單層細胞(次代細胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶

第10頁/共45頁特點：①對多種病毒敏感②生長能力有限,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒1.細胞培養(yǎng)(1)原代和次代細胞培養(yǎng)第11頁/共45頁(2)二倍體細胞培養(yǎng)

體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數目，可用于病毒分離和疫苗生產。特點：①對多種病毒敏感

②不帶異種蛋白(人源性)

③不帶病毒，無致瘤潛能

④可傳50代左右1.細胞培養(yǎng)第12頁/共45頁(3)傳代細胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感性高

②繁殖能力高，傳代時間長

③有致癌危險，不能用于疫苗生產1.細胞培養(yǎng)第13頁/共45頁2.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經病毒

第14頁/共45頁第15頁/共45頁2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復雜第16頁/共45頁第17頁/共45頁3.動物接種

應用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng)

動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點：結果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內常帶有潛伏病毒第18頁/共45頁1．病毒增殖鑒定

(1)細胞病變效應（cytopathiceffect,

CPE）

①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數病毒）；

②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

第19頁/共45頁第20頁/共45頁①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)第21頁/共45頁麻疹病毒感染細胞呼吸道合胞病毒感染細胞②形成多核巨細胞或稱融合細胞(1)細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)第22頁/共45頁③形成包涵體(inclusionbody)(1)細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)第23頁/共45頁腮腺炎病毒感染細胞(2)紅細胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細胞表面HA受體第24頁/共45頁(3)干擾現象（interference）風疹病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細胞風疹病毒？?？刹《綜PE(-)—風疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—風疹病毒(-)?？刹《?+)第25頁/共45頁(4)細胞代謝改變

細胞代謝變慢

pH變化減慢第26頁/共45頁2.病毒形態(tài)學鑒定電子顯微鏡：設備、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大第27頁/共45頁3.病毒血清學鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

第28頁/共45頁(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴散試驗(gelimmuno-

diffusion

test)

——多種病毒鑒定3.病毒血清學鑒定第29頁/共45頁4.病毒分子生物學鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴增核酸雜交基因芯片基因測序第30頁/共45頁（三）病毒數量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗

（plaqueformationtest）

3.50％組織細胞感染量

（50％tissueculture

infectiousdose,

TCID50）感染性病毒量第31頁/共45頁(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學鑒定血清學鑒定基因測序和生物對比第32頁/共45頁三、病毒感染的血清學診斷應用：①采取標本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進行血清流行病學調查等第33頁/共45頁1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應用：人群免疫情況的調查臨床診斷少用第34頁/共45頁2.補體結合試驗

（complementfixationtest）

用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人血清中相應的補體抗體

特點：特異性低，抗體出現早，消失快

應用：近期感染指標。第35頁/共45頁四、病毒感染的快速診斷數小時內出結果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）第36頁/共45頁（一）形態(tài)學檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學顯微鏡檢查

包涵體第37頁/共45頁（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標記技術2.病毒核酸檢測核酸擴增技術核酸雜交技術基因芯片技術

基因測序第38頁/共45頁（三）早期抗體檢測可診斷急性感染

特異性IgM抗體：孕婦感染風疹病毒

EBV早期抗原抗體

EAV核心抗原抗體

早期抗原的抗體

EAV衣殼抗原抗體第39頁/共45頁第二節(jié)病毒感染的特異性預防微生物及其代謝產物生物制品動物免疫血清（biologicalproducts）

免疫細胞細胞因子

防治和診斷感染性疾病第40頁/共45頁滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主動免疫常用生物制品第41頁/共45頁二、人工被動免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙種球蛋白

細胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細胞

——LAK細胞

第42頁/共45頁第三節(jié)病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥