實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備

實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備第1頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六一、目的要求1.掌握培養(yǎng)基制備的原則；2.掌握培養(yǎng)基的制備方法。第2頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六二、實(shí)驗(yàn)原理1、培養(yǎng)基的概念？培養(yǎng)基是指由人工方法配合而成的營養(yǎng)基質(zhì)，專供微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和保存菌種用的混合營養(yǎng)物制品。第3頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六2、必須具備五個(gè)條件:含有細(xì)菌生長所需的物質(zhì)：如：水分、養(yǎng)分（氮源、碳源、礦物質(zhì)）等適宜的酸堿性：多數(shù)為pH7.2-7.6，有的為pH5.6-6.8。不含抑制細(xì)菌生長的物質(zhì)；均質(zhì)透明：便于觀察細(xì)菌生長性狀和引起培養(yǎng)基的變化，嚴(yán)格滅菌，保證無菌。配好立即高壓滅菌，并保證新鮮。第4頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六3、培養(yǎng)基的分類根據(jù)對(duì)培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否完全了解來區(qū)分：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來區(qū)分：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基根據(jù)培養(yǎng)基的用途來區(qū)分：增菌培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基第5頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六中國農(nóng)業(yè)出版社

陳天壽主編第6頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六一些物質(zhì)在培養(yǎng)基中的應(yīng)用原理1.細(xì)菌生長的基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)：N源：蛋白胨（peptone）、酵母浸出物牛肉浸膏C源無機(jī)鹽類水

第7頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六一些物質(zhì)在培養(yǎng)基中的應(yīng)用原理2.具有抑菌作用的物質(zhì)

抑制G-菌的：葡萄糖、亞硫酸鉍和煌綠抑制G+菌的：結(jié)晶紫、膽鹽

抑制腸道非致病菌的：膽鹽

第8頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六一些物質(zhì)在培養(yǎng)基中的應(yīng)用原理3.具有生化反應(yīng)作用的硫羥代乙酸鈉（硫乙醇酸鈉）、半胱氨酸、葡萄糖、肝塊、肉渣、還原鐵等還原劑生化反應(yīng)

第9頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六一些物質(zhì)在培養(yǎng)基中的應(yīng)用原理4.具有緩沖作用的

磷酸鹽碳酸鹽

第10頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六一些物質(zhì)在培養(yǎng)基中的應(yīng)用原理5.具有PH指示作用的中性紅指示液變色范圍pH6.8～8.0（紅→黃）孔雀綠指示液變色范圍pH0.0～2.0（黃→綠）；11.0～13.5(綠→無色)石蕊指示液變色范圍pH4.5～8.0（紅→藍(lán)）甲基紅指示液變色范圍pH4.2～6.3（紅→黃）剛果紅指示液變色范圍pH3.0～5.0（藍(lán)→紅）亮綠指示液變色范圍pH0.0～2.6（黃→綠）結(jié)晶紫指示液pH值0.15（黃）～0.32（綠），pH值1.0（綠）～1.5（藍(lán)），pH值2.0（藍(lán)）～3.0（紫）。溴甲酚紫指示液變色范圍pH5.2～6.8（黃→紫）溴麝香草酚藍(lán)指示液變色范圍pH6.0～7.6（黃→藍(lán)）第11頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六一些物質(zhì)在培養(yǎng)基中的應(yīng)用原理6.其它硫酸亞鐵色氨酸脲酶第12頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六培養(yǎng)特性（一）體外培養(yǎng)的要求

營養(yǎng)、溫度、PH、氣體、培養(yǎng)時(shí)間（二）培養(yǎng)性狀1.液體培養(yǎng)基需氧菌：菌膜

兼性厭氧菌：均勻渾濁厭氧菌：沉淀2.固體培養(yǎng)基菌落特點(diǎn):大小、顏色、邊緣、濕潤程度3.色素脂溶性：菌體有顏色（如金黃色葡萄球菌）水溶性：菌體和培養(yǎng)基都有顏色（如綠膿桿菌）第13頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存同一種培養(yǎng)基的配方在不同文獻(xiàn)中常存在某些差別。因此應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。第14頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄:包括名稱、配方及其來源、pH值、消毒的溫度和時(shí)間、制備的日期和制備者等，以防發(fā)生混亂。第15頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存必須精確稱取，并注意防止錯(cuò)亂。可將配方置于傍側(cè)，每稱好一種成分即在配方上做出記號(hào),最后還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。第16頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存可先用溫水加熱并隨時(shí)攪動(dòng)、以防焦化。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化，直至煮沸。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。第17頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存經(jīng)加熱煮沸，培養(yǎng)基各成分完全溶解,待冷卻接近室溫時(shí),應(yīng)進(jìn)行pH的調(diào)正。第18頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存培養(yǎng)基必須均質(zhì)透明。通常采用過濾以達(dá)到此項(xiàng)要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法。第19頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量一般超過容器裝盛量的2/3。第20頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存一般采用高壓蒸汽滅菌方法（121℃，15min）。某些畏熱成分，如糖類、血清等，一般以過濾方法除菌，以后再用無菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。第21頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存滅菌以后，應(yīng)仔細(xì)檢查，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常等、均應(yīng)挑出棄去。將全部培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長，即棄去。用已知菌株接種部分培養(yǎng)基,培養(yǎng)24~48h。如無菌生長或生長不良，應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去。第22頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六4、培養(yǎng)基制備的基本方法培養(yǎng)基配方的選定培養(yǎng)基的制備記錄培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基pH的調(diào)正培養(yǎng)基的過濾培養(yǎng)基的分裝培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試培養(yǎng)基的保存

應(yīng)存放于冷暗處，最好放于普通冰箱內(nèi)；平板培養(yǎng)基不宜超過3天；必須附有明顯標(biāo)簽。第23頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六三、實(shí)驗(yàn)材料量杯（1000mL和500mL各1個(gè)）、玻璃棒、漏斗、三角瓶、試管、玻璃瓶（500mL）等；pH試紙、紗布、脫脂棉、濾紙、包裝紙、扎線等；牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、磷酸氫二鉀、瓊脂、葡萄糖、牛肉渣、蠟塊、蒸餾水、lmo1/LNaOH溶液和1mo1/LHCl溶液等。第24頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容普通肉湯的制備：

（1）常用配方:牛肉浸膏 3-5g蛋白胨 10g氯化鈉 5g磷酸氫二鉀 0.5g蒸餾水 1000mL第25頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容普通肉湯的制備：

（2）配制方法:取水600~700mL，加熱；按照配方稱取各物品加入水中，邊加熱邊攪拌，快沸時(shí)注意不要溢出，沸騰后停止加熱；冷卻至室溫；用pH試紙測(cè)定pH并調(diào)至7.2-7.6。若pH>7.6，則用0.1mo1/LHCl調(diào)低;若pH<7.2，則用0.1mol/LNaOH調(diào)高.調(diào)好pH值后，補(bǔ)足水量至1000mL，再測(cè)pH值。第26頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容厭氧肉湯的制備：

配制方法:取制備好的普通肉湯5mL，裝于試管中，加入牛肉渣、蠟塊少許即可。第27頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容普通瓊脂的制備：

普通肉湯1000mL瓊脂 20g取普通肉湯400mL于500mL瓶中;加入優(yōu)質(zhì)瓊脂8g;蓋好瓶塞，并用紗布扎口。配方:配制方法:瓊脂的凝膠化溫度一般在35℃～40℃,而凝膠熔點(diǎn)應(yīng)在75℃～85℃常見凝固劑有瓊脂、明膠、無機(jī)硅膠等第28頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容高壓滅菌

將所有要高壓的物品整齊的擺放在高壓滅菌鍋內(nèi)；蓋好壓力蓋，關(guān)閉放氣孔，接通電源；壓力達(dá)到0.05MPa時(shí)，關(guān)閉電源緩慢放氣至壓力為0，接通電源；再重復(fù)放氣1次；維持121℃,15-20min操作方法:第29頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六六、思考題制備細(xì)菌培養(yǎng)基的要求？制備培養(yǎng)基制作的一般步驟？在你制作的培養(yǎng)基中接種細(xì)菌，細(xì)菌不能生長，分析其原因。第30頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六演示內(nèi)容血培養(yǎng)基制備?？鼓獰o菌的采集；澆注平板。要領(lǐng)：疊澆、鋪滿但要??；斜面的制作：高度1/5，斜面1/2；半固體：1/3（0.3-0.5%）液體：1/4TSI:底層厚厭氧培養(yǎng)基的制備及原理。第31頁，共32頁，2023年，2月20日，星期六1.取水500mL，加熱；2.按照配方稱取各物品加入水中，邊加熱邊攪拌，快沸時(shí)注意不要溢出，沸騰后停止加熱；冷卻至室溫；牛肉浸膏 3.75g蛋白胨 7.5g氯化鈉 3.75g磷酸氫二鉀0.375