瘧疾血檢技術(shù)培訓專家講座

全球基金瘧疾項目

鏡檢技術(shù)培訓（二）戶縣疾病預防控制中心年3月28日瘧疾血檢技術(shù)培訓第1頁瘧原蟲檢驗技術(shù)

采集血樣血片制作血片染色瘧原蟲鏡檢瘧疾血檢技術(shù)培訓第2頁采集血樣采血部位：耳垂或無名指，取血方法：通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指緊捏耳垂上方或無名指指尖，右手持消毒針快速刺入皮膚，不宜過深或過淺。然后用右手中指輕輕擠壓出血。厚血膜血量約一粒米大小,薄血膜血量為厚血膜二分之一或1/3。瘧疾血檢技術(shù)培訓第3頁厚血膜：用推片一角，取血一小滴（約4－4.5微升），置于平置載玻片上，由里向外一個方向旋轉(zhuǎn)，涂成直徑0.8~1厘米大小圓形厚血膜。薄血膜：以推片一端中部取血一小滴，使血滴與載玻片接觸，血液沿推片邊緣向兩側(cè)展開，將推片與載玻片保持300-450，均勻而快速適當?shù)赜昧ο蚯巴瞥缮嘈伪⊙ぁＱ谱鳎ㄒ唬┖裱け⊙く懠惭獧z技術(shù)培訓第4頁血片制作（二）標準瘧疾厚薄血膜片：把載玻片分成六等份，把厚血膜涂在從右到左第三格中央，薄血膜涂在第四格前緣至第六格中部，第一、二格備貼標簽編號用。厚、薄血膜間用蠟筆劃線分開厚血膜血量不宜過多或過少薄血膜平整,無皺折和空泡.顯微鏡下紅細胞單層排列瘧疾血檢技術(shù)培訓第5頁血片制作（三）不一樣血片涂布法：標準血片門診發(fā)燒病人血片居民普查血片瘧疾血檢技術(shù)培訓第6頁血片染色（一）染色方法:吉氏染色法瑞氏染色法

WHO推薦使用吉氏染色法瘧疾血檢技術(shù)培訓第7頁血片染色（二）吉氏原液配制：吉氏染粉(AzureBtype)１g甘油(純)

50ml甲醇

(純)

50ml把吉氏粉置于研缽中，加少許甘油充分研磨,

然后邊加邊磨，直至50ml甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后在研缽中加入少許甲醇清洗研缽，洗液倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，重復數(shù)次，直至甲醇用完。蓋好瓶蓋，充分搖勻，置于65℃溫箱中24小時，或室溫陰暗處1-2周后過濾，備用。整個染色液配制時間不能少于5個小時時間越長染色效果越好。瘧疾血檢技術(shù)培訓第8頁血片染色（三）吉氏染液配制：把吉氏原液用PH7.0±0.2緩沖液稀釋，百分比約為1:15～20，稀釋后方可用于厚薄血片染色。吸收原液時，不要晃動瓶子,以免沉淀物泛起影響染色效果.瘧疾血檢技術(shù)培訓第9頁血片染色（四）血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚血膜上滴加蒸餾水進行溶血，到血膜呈灰白色時，將水倒去，晾干后再用甲醇固定。注意：①薄血膜固定時，甲醇不可觸碰未溶血厚血膜。

②厚血膜溶血時，蒸餾水不可觸碰薄血膜。瘧疾血檢技術(shù)培訓第10頁血片染色（五）血片染色：1.吉氏染色法：把吉氏染液滴加于已固定厚、薄血膜上，室溫染色30分鐘，用緩沖液沖洗潔凈。血片晾干后鏡檢。2.快速吉氏染色法：取吉氏原液1ml，加緩沖液5ml，混勻后，滴加于厚、薄血膜上染色5分鐘，用緩沖液沖洗，晾干后鏡檢。瘧疾血檢技術(shù)培訓第11頁血片染色（六）3.成批血片染色：將已固定血片插入染色缸，加入吉氏染液浸沒血片，對厚、薄血膜同時染色30分鐘。注意：假如吉氏染液是從市場上購置成品試劑，請嚴格按照說明書操作。瘧疾血檢技術(shù)培訓第12頁血片染色（七）血片染色結(jié)果：染色質(zhì)量好血片：顯微鏡下核呈紅色，胞漿呈藍色，薄血膜平整，紅細胞單層排列。假如血片偏紅,說明染液偏酸性假如血片偏藍,說明染液偏堿性

吉氏染色血片外觀瘧疾血檢技術(shù)培訓第13頁血片染色（八）血片制作與染色注意事項：１、載玻片必須清潔無油污；２、固定薄血膜時，甲醇不要觸碰到厚血膜；３、厚血膜在染色之前先用清水滴加在上面進行溶血，以防厚血膜染色后顏色發(fā)黑，影響鏡檢；４、血片充分干燥后方可染色，預防沖洗染液時厚血膜脫落。5、未染色血膜放置時間夏天不宜超出48小時，冬天不宜超出72小時，不然厚血膜會自然固定，影響鏡檢。瘧疾血檢技術(shù)培訓第14頁瘧原蟲鏡檢（一）

厚血膜

薄血膜

優(yōu)點血量多，面積小，原蟲較為集中。原蟲檢出率高血量少，面積大，干燥快紅細胞完整，原蟲形態(tài)極少變形。用于觀察原蟲形態(tài)與判別蟲種。缺點原蟲在干燥過程中皺縮，紅細胞消失，原蟲變形較大，原蟲判定困難血量比厚血膜少許多，但面積是厚血膜8-10倍。檢驗費時，原蟲檢出率較低用途用于瘧疾病人檢驗蟲種、蟲期判定及初學者教學標本瘧原蟲厚、薄血膜鏡檢優(yōu)缺點瘧疾血檢技術(shù)培訓第15頁顯微鏡下厚血膜讀片次序瘧原蟲鏡檢（二）讀片次序：顯微鏡鏡下按由上而下、之字形次序讀片瘧疾血檢技術(shù)培訓第16頁瘧原蟲鏡檢（三）鏡檢瘧原蟲結(jié)果判斷：陰性血片：①檢驗全部厚血膜視野未查見瘧原蟲；②最少檢驗100個厚血膜視野未查見瘧原蟲（臨床病人）。陽性血片：檢出各期瘧原蟲（環(huán)狀體、裂殖體、配子體）。混合感染：在一個血膜上有2種以上瘧原蟲感染稱為混合感染，較常見是間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲混合。鏡檢判斷P.v+P.f混合感染：必須是看到P.v各期原蟲和P.f配子體。瘧疾血檢技術(shù)培訓第17頁間日瘧和惡性瘧判定關(guān)鍵點瘧原蟲鏡檢（四）瘧疾血檢技術(shù)培訓第18頁瘧原蟲鏡檢（五）瘧原蟲形態(tài)特征：間日瘧（P.vivax）判定關(guān)鍵點紅細胞通常漲大薛氏點顯著成熟環(huán)狀體粗大滋養(yǎng)體胞漿有阿米巴樣偽足血片中可見各期原蟲形態(tài)成熟裂殖體約含12-24個裂殖子

瘧疾血檢技術(shù)培訓第19頁瘧原蟲鏡檢（六）瘧原蟲形態(tài)特征：惡性瘧（P.falciparum）判定關(guān)鍵點：紅細胞不漲大小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體）纖細,常有多重感染，環(huán)狀體內(nèi)可有2個核

環(huán)狀體可貼在紅細胞邊緣

血片中沒有其它發(fā)育期大滋養(yǎng)體配子體呈新月形或臘腸形成熟裂殖體約含16-32個裂殖子可出現(xiàn)茂氏點瘧疾血檢技術(shù)培訓第20頁鏡檢示教以下血片采自現(xiàn)癥病例瘧原蟲鏡檢（七）瘧疾血檢技術(shù)培訓第21頁瘧疾血檢技術(shù)培訓第22頁瘧疾血檢技術(shù)培訓第23頁間日瘧環(huán)狀體瘧疾血檢技術(shù)培訓第24頁2.Intermittentfever;arrivedfromIndia2monthsago.間日瘧滋養(yǎng)體瘧疾血檢技術(shù)培訓第25頁3.HistoryofroundtheworldsafariincludingS.America,AsiaandAfrica.Generalmalaise.惡性瘧雄配子體瘧疾血檢技術(shù)培訓第26頁4.Unspecifiedoverseastravel.Presentedwithtemperature38.4C三日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓第27頁5.MalerecentlyreturnedtoAustraliaafterbackpackingthroughAsia.Historyofflulikesymptoms.白細胞瘧疾血檢技術(shù)培訓第28頁6."NewAustralian"previouslyfromMalaysia.Intermittenttemperaturesandheadaches.白細胞瘧疾血檢技術(shù)培訓第29頁7.Achesandpains,withfever.?GlandularFever,?malaria.間日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓第30頁惡性瘧環(huán)狀體瘧疾血檢技術(shù)培訓第31頁18.RecenttriptoSouthernIndia-headachesandvaguelyunwell.間日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓第32頁19.PatienthasbeenholidayingintheDominicanRepublic,nowfeverish.惡性瘧雄配子體瘧疾血檢技術(shù)培訓第33頁21.AmemberoftheUNforcesinEastTimor.Presentedwithhightemperature.惡性瘧雌雄配子體瘧疾血檢技術(shù)培訓第34頁間日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓第35頁惡性瘧雌配子體瘧疾血檢技術(shù)培訓第36頁間日瘧裂殖體瘧疾血檢技術(shù)培訓第37頁血檢質(zhì)量考評

試驗室條件血檢工作要求考評標準瘧疾血檢技術(shù)培訓第38頁試驗室條件人員：各單位最少有1名專職或兼職經(jīng)過瘧原蟲檢驗技術(shù)培訓人員。熟悉瘧疾血片制作，瘧原蟲鏡下特征，能負擔瘧疾血檢工作。環(huán)境：試驗室相對獨立，可做瘧疾血檢。設備：顯微鏡、玻片、玻片架、玻片合、染色缸。試劑：吉氏染液、甲醇、二甲苯、鏡油。瘧疾血檢技術(shù)培訓第39頁血檢工作要求制訂《瘧原蟲鏡檢試驗室管理制度》、《瘧原蟲鏡檢操作規(guī)程》對血檢對象進行認真登記，填寫《瘧原蟲鏡檢記錄表》，按接樣次序編號。編號：醫(yī)院名稱代碼＋序號。保留鏡檢過全部血片，以備上級抽樣復查，經(jīng)上一級機構(gòu)同意后方可清洗。陽性血片須專員管理。血液標本有潛在生物危害，在試驗室血檢工作、標本保留中應嚴格恪守《試驗室生物安全通用要求》。瘧疾血檢技術(shù)培訓第40頁縣（市/區(qū)）全球基金瘧疾項目發(fā)燒病人瘧原蟲血檢記錄表血檢單位：、序號姓名年紀性別居住地址外出史及地點職業(yè)發(fā)病日期體溫（oC)臨床初診血檢日期血檢方法血檢結(jié)果檢驗人署名血樣編號鏡檢RDT陰性PfPvPmPo混合1234累計瘧疾血檢技術(shù)培訓第41頁瘧原蟲血檢考評標準(1)項目檢驗內(nèi)容質(zhì)量標準考評分值好分值中分值差分值血片制作厚血膜(25分）血量（5分）4～5цl5略多或略少3過多或過少1位置（5分）玻片右1/35稍偏右4偏右過多3直徑（5分）0.8～1.0cm50.7～0.8或1.0～1.2cm3<0.7或>1.2cm1外觀(10分)圓形厚膜均勻,邊緣整齊10圓形稍不均不整齊8厚薄不勻影響著色5薄血膜(25分）血量（5分）1～1.5цl5略多或略少3過多或過少1位置（5分）直徑（5分）外觀(10分）玻片1/2～1/3處5稍偏右或偏左4偏右或偏左過多32.5～2.0cm5稍大或稍小3過多或過少1舌狀厚薄均勻10舌狀稍不均5厚薄不勻呈波浪型3考評標準瘧疾血檢技術(shù)培訓第42頁瘧原蟲血檢考評標準（2）項目檢驗內(nèi)容質(zhì)量標準考評分值好分值中分值差分值血片染色質(zhì)量(15分)外觀（5分）藍紫色5深藍色3紅色或灰白色2鏡下(10分)白細胞、瘧原蟲胞漿藍色，核紅色10染色過深，原蟲胞漿與核均呈深藍色8染色過淺，胞漿藍色不易顯見，核淡紅5血片清潔度(10分)外觀（5分）光潔無油灰5稍有油污2油灰粘連2鏡下（5分）無沉渣5稍有沉渣2沉渣多或有雜菌2瘧疾血檢技術(shù)培訓第43頁瘧原蟲血檢考評標準（3）項目檢驗內(nèi)容使用標準扣分標準考評分值顯微鏡使用（25分）使用前（10分）顯微鏡潔凈，有綢布遮蓋，接物鏡不與聚光器對接顯微鏡稍有灰（-2分），無綢布遮蓋