紅細(xì)胞血型檢測(cè)專家講座

第二章紅細(xì)胞血型檢測(cè)江西醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校11級(jí)檢驗(yàn)班01

李金輝1紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第1頁(yè)目錄第一節(jié)輸血前免疫學(xué)檢驗(yàn)第二節(jié)鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)酶處理試驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)第六節(jié)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)第七節(jié)吸收放散技術(shù)第八節(jié)凝集試驗(yàn)技術(shù)第九節(jié)紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)2紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第2頁(yè)學(xué)習(xí)要求：1.輸血前主要包含哪些內(nèi)容？2.受血標(biāo)本接收時(shí)注意事項(xiàng)有哪些？3.ABO血型和RhD血型判定時(shí)注意事項(xiàng)有哪些？4.交叉配血試驗(yàn)影響原因有哪些？5.抗球蛋白試驗(yàn)臨床應(yīng)用有哪些方面？6.紅細(xì)胞血型分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)主要有哪些？3紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第3頁(yè)第一節(jié)輸血前免疫學(xué)檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)：是輸入血液成份在受血者體內(nèi)發(fā)揮其有效作用.

在正常情況下，輸入紅細(xì)胞在受血者體內(nèi)不溶血，輸入血漿成份不破壞受血者紅細(xì)胞。主要程序：患者病史和標(biāo)本等檢驗(yàn)、查對(duì)及處理;ABO血型和RhD血型定型；紅細(xì)胞同種抗體篩查和堅(jiān)定；交叉配血試驗(yàn)；血小板輸注前抗體檢驗(yàn)和配合試驗(yàn)；不規(guī)則抗體篩選和判定；交叉配血結(jié)果匯報(bào)和發(fā)血等。4紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第4頁(yè)一、受血者標(biāo)本處理（一）標(biāo)本采集輸血除了需要到達(dá)預(yù)期治療效果外，必須確保輸血安全。血樣由臨床護(hù)士完成，因嚴(yán)格恪守一次只能為一位受血抽取標(biāo)本，標(biāo)本不得從輸液管或輸液側(cè)筋脈中抽取。（二）標(biāo)本接收

輸血科技師接收血樣標(biāo)本時(shí)，應(yīng)認(rèn)真查對(duì)受血者相關(guān)信息，盡可能了解受血者有沒(méi)有輸血史、藥品史、妊娠史等情況。假如有輸血史，這有必要深入了解最終一次輸血日期，若3個(gè)月內(nèi)輸過(guò)血，那么供血者紅細(xì)胞沒(méi)有完全代謝消失，可能依然存在于血液循環(huán)中，造成血型定型試驗(yàn)中出現(xiàn)混合凝集結(jié)果。5紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第5頁(yè)（三）標(biāo)本要求1.對(duì)輸血前檢驗(yàn)血液標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格要求能代表受血者當(dāng)前免疫學(xué)情況，標(biāo)本還需經(jīng)判定和標(biāo)識(shí)，確保其準(zhǔn)確無(wú)誤地來(lái)自受血者和供血者，應(yīng)和血液申請(qǐng)單上內(nèi)容一致。2.預(yù)防受血者血液標(biāo)本稀釋和（或）溶血，若采集過(guò)程中發(fā)生溶血?jiǎng)t不能使用。3.受血者配血試驗(yàn)正確血液標(biāo)本必須是輸血前3天采集。4.若受血者使用右旋糖酐、PVP等治療，應(yīng)注意洗滌被檢紅細(xì)胞。5.每次輸血后，受血者和供血者標(biāo)本必須保留于2~8℃最少7天。6紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第6頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型

（一）、原理

依據(jù)紅細(xì)胞膜表面上有沒(méi)有A抗原或B抗原，將血型分為A型、B型、AB型、O型4種。A型人血清中含有抗-B抗體，B型人血清中含有抗-A抗體，O型人血清中含有抗-A抗體和抗-B抗體，AB型人血清中不含ABO抗體。正定型：用抗-A及抗-B試劑與被檢紅細(xì)胞反應(yīng)，檢測(cè)紅細(xì)胞表面是否存在A抗原或B抗原。反定型：用標(biāo)準(zhǔn)A細(xì)胞及B細(xì)胞與被檢血清反應(yīng)，檢測(cè)血清中是否存在抗體。因?yàn)锳BO血型系統(tǒng)抗體多數(shù)為IgM類，在室溫鹽水介質(zhì)中就能出現(xiàn)顯著凝集反應(yīng)。7紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第7頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型8紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第8頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型

1.ABO定型最適反應(yīng)溫度為4℃，但在室溫反應(yīng)良好，所以常規(guī)ABO定型試驗(yàn)僅在室溫進(jìn)行。(1)定型方法：正、反定型試管離心方法當(dāng)前仍被認(rèn)為是最可信賴ABO定型方法。1)定型試劑：有些ABO血型診療試劑是以人血清匯聚而制成，但必須具備以下條件：第一，高效價(jià)(1：128)IgM抗A或抗B。第二，具很好親和性并不含冷凝集素。第三，必需含有檢測(cè)A2，A2B血型能力。第四，血清必須經(jīng)過(guò)HIV，HCV，HBV等檢驗(yàn)或經(jīng)病毒滅活。另外一些ABO定型試劑是由來(lái)自培養(yǎng)細(xì)胞株單克隆抗體所制成。9紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第9頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型2)ABO亞型判定：ABO亞型判定通常使用以下試劑：抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AIA1紅細(xì)胞、A2紅細(xì)胞、B型紅細(xì)胞和O型紅細(xì)胞。有些工作者在定型試驗(yàn)中，常規(guī)地選擇應(yīng)用抗AB抗血清，以防止錯(cuò)誤地把弱反應(yīng)性A或B型紅細(xì)胞分類為O型。普通抗AB試劑對(duì)Ax型紅細(xì)胞可增加凝集反應(yīng)強(qiáng)度。10紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第10頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型(一)ABO定型試驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題：造成這種正反定型不一致原因主要有：1)技術(shù)和管理錯(cuò)誤：這是ABO定型中產(chǎn)生異常結(jié)果主要原因，包含：標(biāo)本或試劑搞錯(cuò)；器材不潔；試劑污染或失效；離心過(guò)分或不足；陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別；漏加試劑；結(jié)果統(tǒng)計(jì)或判斷錯(cuò)誤；細(xì)胞與血清間百分比不適當(dāng)。2)血清異常：血清蛋白引發(fā)緡錢(qián)狀形成，影響反定型結(jié)果。3)紅細(xì)胞致敏：受免疫球蛋白致敏紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)試劑中，可發(fā)生凝集。4)異?；蛐停篈BO亞型檢驗(yàn)中，A、B抗原可能為弱抗原，難以檢出。11紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第11頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型5)近期輸血：試驗(yàn)前曾輸入過(guò)其它ABO血型不一致血液，使血液標(biāo)本成為混合血型紅細(xì)胞懸液，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。6)嵌合體血型：這種血型者體內(nèi)有兩類血型紅細(xì)胞群體，定型時(shí)能夠出現(xiàn)“混合外觀凝集”現(xiàn)象。7)疾病原因造成抗原減弱：一些白血病患者和難治性貧血患者中，ABO血型系統(tǒng)抗原性可受到抑制，檢出困難。8)紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳或取得性表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。9)取得性B：因?yàn)楦锾m陰性桿菌作用，紅細(xì)胞可取得“類B”活性。12紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第12頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型10)血型特異性物質(zhì)過(guò)高：一些卵巢囊腫病例，血型物質(zhì)濃度很高，可中和抗A和抗B定型試劑，要得到正確正定型結(jié)果，必須洗滌紅細(xì)胞屢次。11)近期內(nèi)進(jìn)行大量血漿置換治療：因?yàn)槭褂么罅糠峭脱獫{作置換治療，標(biāo)本血清中含有所輸供體提供抗A或抗B抗體，造成反定型錯(cuò)誤。12)異常血漿蛋白：受檢者血漿中異常白蛋白、球蛋白百分比和高濃度纖維蛋白原等造成緡錢(qián)狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。13)不規(guī)則抗體存在：受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外不規(guī)則抗體，與試劑紅細(xì)胞上其它血型抗原系統(tǒng)抗原起反應(yīng)。13紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第13頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型14)低丙種球蛋白血癥：低丙種球蛋白血癥(丙種球蛋白量減低)病例，可能會(huì)因免疫球蛋白水平下降而使血清定型時(shí)不凝集或弱凝集反應(yīng)。15)藥品等原因：藥品、右旋糖醉及靜脈注射一些造影劑可引發(fā)紅細(xì)胞凝集或類似凝集。16)年紀(jì)原因：免疫系統(tǒng)還未健全嬰兒、由母親被動(dòng)取得抗體嬰兒，或抗體水平下降老人，試驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)異常結(jié)果。17)防腐劑原因：患者體內(nèi)可能含有對(duì)防腐劑中成份或?qū)鞈医橘|(zhì)抗體，造成ABO定型差錯(cuò)。14紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第14頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型（二）Rh(D)定型和定型試驗(yàn)中應(yīng)注意問(wèn)題：Rh定型主要判定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。Rh系統(tǒng)是最為復(fù)雜得多一個(gè)系統(tǒng)，包括臨床主要有D、C、c、E、e五個(gè)抗原，其中D抗原免疫原性最強(qiáng)，僅次于A或B抗原。Rh血型判定方法有：玻片法、試管法、微量板法、微柱凝膠法等，試管法最為經(jīng)典。當(dāng)前大部分醫(yī)院都使用微柱凝膠卡式血型判定，方法簡(jiǎn)便快捷，準(zhǔn)確度較高。15紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第15頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型16紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第16頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型(1)造成Rh血型判定可能出現(xiàn)假陽(yáng)性原因：1)受檢細(xì)胞已被免疫球蛋白致敏，或標(biāo)本血清中含有引發(fā)紅細(xì)胞凝集因子。2)受檢細(xì)胞與抗血清孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，含高蛋白定型試劑會(huì)引發(fā)緡錢(qián)狀形成。3)標(biāo)本抗凝不妥，受檢過(guò)程中出現(xiàn)凝血或小纖維蛋白凝塊，誤判為陽(yáng)性。4)定型血清中含有事先未被檢測(cè)其它特異性抗體，造成假陽(yáng)性定型結(jié)果。5)多凝集細(xì)胞造成定型假陽(yáng)性。6)判定用器材或抗血清被污染，造成假陽(yáng)性。17紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第17頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型(2)可能出現(xiàn)假陰性原因1)受檢細(xì)胞懸液濃度太高，與抗血清百分比失調(diào)。2)漏加或錯(cuò)加定型血清。3)定型血清使用方法錯(cuò)誤，沒(méi)有按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。4)離心后重懸細(xì)胞扣時(shí)，搖動(dòng)用力過(guò)分，搖散微弱凝集。5)抗血清保留不妥，造成失效。18紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第18頁(yè)二、受血者和供血者ABO和Rh定型(三)弱D型(Du型)血型及其判定：Du型抗原是RhO(D)弱抗原，這種抗原通常與大部分鹽水抗D試劑不產(chǎn)生直接凝集反應(yīng)，而與部分IgG抗D血型用間接抗球蛋白試驗(yàn)反應(yīng)陽(yáng)性。所以當(dāng)我們首次得到Rh陰性結(jié)果時(shí)，必須進(jìn)行作Rh陰性確認(rèn)試驗(yàn)，即用三種不一樣批號(hào)IgG抗D定型，假如全部陰性方可認(rèn)為該被檢者為Rh陰性，不然，只要有一批為陽(yáng)性，則可認(rèn)為是Du型。若D人群作為獻(xiàn)血者按照RhD陽(yáng)性對(duì)待，其血液只能給Rh陽(yáng)性受血者輸注；作為受血者按照RhD陰性對(duì)待，只能接收RhD陰性血液。19紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第19頁(yè)三、不規(guī)則抗體篩選和判定一、

概念：不規(guī)則抗體是指血清中抗-A、抗-B以外其它血型抗體，也稱意外抗體。不規(guī)則抗體包含同種抗體和本身抗體。本身抗體：受血者體內(nèi)產(chǎn)生抗體，針對(duì)自己本身紅細(xì)胞抗原。同種抗體：不只針對(duì)本身抗原，也會(huì)同種異型抗原發(fā)生反應(yīng)。

20紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第20頁(yè)三、不規(guī)則抗體篩選和判定二、不規(guī)則抗體篩查方法抗體篩選試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)是讓受檢血清與已知血型試劑紅細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞起反應(yīng)，以發(fā)覺(jué)在37℃中有反應(yīng)抗體1.鹽水介質(zhì)法：主要用于IgM類抗體篩查。優(yōu)點(diǎn)是：方法簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)單、成本低廉。缺點(diǎn)是：靈敏度低2.聚凝胺法優(yōu)點(diǎn)：與水鹽介質(zhì)法比靈敏度有所提升。3.抗球蛋白試驗(yàn)：缺點(diǎn)：操作繁瑣、工作量大、耗時(shí)等。4.酶法：能暴露隱蔽抗原，增強(qiáng)一些稀有抗原檢測(cè)。但可能會(huì)破壞有些抗原，影響檢測(cè)。當(dāng)前臨床是已不用。21紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第21頁(yè)三、不規(guī)則抗體篩選和判定5.微柱凝膠卡式檢測(cè)法三、不規(guī)則抗體判定抗體篩選試驗(yàn)用試劑篩選紅細(xì)胞，通常是2或3個(gè)人份O型紅細(xì)胞成為一套試劑，每套試劑篩選紅細(xì)胞中最少有以下常見(jiàn)抗原：D、C、E、c、e、M、N，條件不足試驗(yàn)室不一定具備Lua、V、Cw、Kpa、Jsa類抗原。一旦抗體被檢出，應(yīng)作抗體判定試驗(yàn)，以確定其特異性?？贵w判定試驗(yàn)包含以下主要內(nèi)容：(1)本身細(xì)胞檢驗(yàn)：觀察患者(受者)血清與患者(受者)本身細(xì)胞反應(yīng)情況，確定血清內(nèi)是否有本身抗體或本身抗體和同種抗體二者同時(shí)存在。 (2)普紅細(xì)胞：使用試劑細(xì)胞中譜細(xì)胞，應(yīng)用各種抗體檢驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)患者血清，確定其抗體特異性。22紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第22頁(yè)三、不規(guī)則抗體篩選和判定抗體判定試驗(yàn)結(jié)果解釋及處理：1.與譜細(xì)胞反應(yīng)顯著，確定為單一抗體或無(wú)法確定為單一抗體，應(yīng)加以判別。2.與譜細(xì)胞呈弱反應(yīng)，結(jié)果不明確（1）分析結(jié)果：①是否符合劑量效應(yīng)②譜細(xì)胞是否新鮮（2）改變?cè)囼?yàn)方法：①使用高靈敏度方法重復(fù)試驗(yàn)②添加試劑后重復(fù)試驗(yàn)③帶抗體增強(qiáng)后重復(fù)試驗(yàn)

23紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第23頁(yè)三、不規(guī)則抗體篩選和判定3.與全部譜細(xì)胞反應(yīng)，本身細(xì)胞陰性（1）強(qiáng)度不一致：可能存在混合抗體（2）強(qiáng)度一致：抗體可能為專于O細(xì)胞反應(yīng)抗體（如：抗-I、抗-H、抗-HI）可能針對(duì)高頻抗原抗體可能針對(duì)譜細(xì)胞抗體4.與全部譜細(xì)胞反應(yīng)，本身細(xì)胞陽(yáng)性（1）存在本身抗體（2）同種和本身抗體同時(shí)存在（3）冷凝集：在冷凝集素作用下存在凝集紅細(xì)胞24紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第24頁(yè)三、不規(guī)則抗體篩選和判定（4）假凝劑：在干擾因子作用下一可造成紅細(xì)胞假凝集（5）酶引發(fā)多凝集（6）補(bǔ)體影響6.與譜細(xì)胞不反應(yīng)，本身細(xì)胞陽(yáng)性可能是本身抗體或C?陽(yáng)性25紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第25頁(yè)三、不規(guī)則抗體篩選和判定四、抗體篩查和判定影響原因1.抗體篩查和判定細(xì)胞質(zhì)量

篩查細(xì)胞不包含低頻率抗原，不能檢出低頻率抗原。譜細(xì)胞：用于抗體判定試劑紅細(xì)胞。在選擇不規(guī)則抗體篩查或判定細(xì)胞時(shí)，應(yīng)符合當(dāng)?shù)貐^(qū)不規(guī)則抗體分布特點(diǎn)。2.試驗(yàn)方法法IgM抗體在4℃，凝集強(qiáng)度顯著大于室溫，37℃會(huì)有減弱3.抗體特異性抗體篩查試驗(yàn)為陰性，并不意味著被檢血清中一定沒(méi)有抗體篩查細(xì)胞漏檢ABO亞型抗體（如抗-A?）26紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第26頁(yè)三、不規(guī)則抗體篩選和判定五不規(guī)則抗體判定時(shí)遇見(jiàn)問(wèn)題1.不規(guī)則抗體篩查陰性，輸血后發(fā)覺(jué)溶血（1）交叉配血假陰性（2）抗球蛋白試驗(yàn)不規(guī)則抗體篩查假陰性試劑保留不妥洗滌不充分試驗(yàn)操作④紅細(xì)胞濃度過(guò)高造成凝集減弱或紅細(xì)胞濃度過(guò)低造成凝集不易被觀察到2.不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性，抗體特異性難以判定（1）抗體篩查假陽(yáng)性：①離心不妥②試管污染③硅膠管引發(fā)凝集（2）譜細(xì)胞單一：應(yīng)采取3個(gè)以上不一樣供給商譜細(xì)胞系，排查抗體特異性。

27紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第27頁(yè)四、交叉配血試驗(yàn)（一）要求和內(nèi)容交叉配血要求：主側(cè)配血要求：絕對(duì)不能夠有凝集或溶血現(xiàn)象。次測(cè)配血要求：供血者血清加受血者紅細(xì)胞在允許范圍內(nèi)，能夠有凝集現(xiàn)象，但不能夠有溶血。凝集不凝集28紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第28頁(yè)四、交叉配血試驗(yàn)交叉配血試驗(yàn)內(nèi)容患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)主側(cè)配血用患者血清與供者紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)次測(cè)配血供血者血清與患者紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)29紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第29頁(yè)四、交叉配血試驗(yàn)交叉配血目標(biāo)交叉配血試驗(yàn)是輸血前必要步驟，主要是檢驗(yàn)受血者血清中有沒(méi)有能破壞供血者紅細(xì)胞抗體。主要目標(biāo)是為了預(yù)防輸血后產(chǎn)生溶血性反應(yīng)。盡可能確保對(duì)人和一個(gè)病人來(lái)說(shuō)，輸了供血者血不會(huì)引發(fā)有害反應(yīng)，而且使紅細(xì)胞在輸注后能保持最長(zhǎng)存活時(shí)間。30紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第30頁(yè)四、交叉配血試驗(yàn)（二）結(jié)果解釋及處理1.抗體篩查陰性，交叉配血相容：絕大部分標(biāo)本抗體篩查陰性，交叉配血也是相容。2.抗體篩查陰性，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽(yáng)性（1）復(fù)查血型（2）主側(cè)凝集類B抗原（3）血清中可能含有一個(gè)ABO抗體，必要時(shí)能夠做ABO亞型判定31紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第31頁(yè)四、交叉配血試驗(yàn)3.抗體篩查試驗(yàn)陽(yáng)性，主側(cè)交叉配合試驗(yàn)陽(yáng)性（1）本身對(duì)照試驗(yàn)陰性：受血者體內(nèi)有同種不規(guī)則抗體。（2）本身對(duì)照試驗(yàn)陽(yáng)性：受血者血清內(nèi)可能有本身抗體或同時(shí)存在不規(guī)則抗體。（三）影響原因

①離子干擾②溫度③操作不規(guī)范④離心不妥32紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第32頁(yè)第二節(jié)鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)慣用于血型判定、血清中IgM類抗體篩查和判定、鹽水介質(zhì)交叉配血等。

基本方法1.平板法用于ABO血型和RhD抗原定型特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速，但易污染環(huán)境。2.試管法為定型試驗(yàn)方法，也可于半定量試驗(yàn)。是輸血前檢驗(yàn)最慣用試驗(yàn)方法。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速、易學(xué)，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。3.微孔板法為定性試驗(yàn)方法。33紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第33頁(yè)第二節(jié)鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)鹽水介質(zhì)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性34紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第34頁(yè)第二節(jié)鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)35紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第35頁(yè)第三節(jié)酶處理試驗(yàn)技術(shù)原理：在酶作用下切斷帶有負(fù)電荷羧基基團(tuán)唾液酸，降低Zeta電位，縮短紅細(xì)胞之間距離。增強(qiáng)IgG抗體對(duì)紅細(xì)胞凝集。慣用正確酶：菠蘿酶，無(wú)花果酶，木瓜酶36紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第36頁(yè)第三節(jié)酶處理試驗(yàn)技術(shù)酶介質(zhì)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)主次側(cè)均加酶酶上海市血液中心血37紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第37頁(yè)第三節(jié)酶處理試驗(yàn)技術(shù)37℃水浴30分鐘37℃離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性38紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第38頁(yè)第三節(jié)酶處理試驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷（1）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管凝集，被檢管凝集為陽(yáng)性，不出現(xiàn)凝集判定為陰性。（2）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，試驗(yàn)失敗分析原因，重新試驗(yàn)。39紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第39頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)一、基本原理抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）主要用于檢測(cè)血清中不完全抗體如：IgG、IgA和（或）補(bǔ)體如：C3、C4。在鹽水介質(zhì)中，不完全抗體只能致敏紅細(xì)胞，而不能使紅細(xì)胞出現(xiàn)可見(jiàn)凝集反應(yīng)，加入抗球蛋白試劑后，抗球蛋白分子Fab片段與紅細(xì)胞表面受體結(jié)合，而產(chǎn)生紅細(xì)胞凝集，所以采取此方法能夠檢測(cè)出血清中是否存在不完全抗體。40紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第40頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)抗球蛋白試驗(yàn)原理圖41紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第41頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)

二、分類及應(yīng)用

抗球蛋白試驗(yàn)直接間接致敏紅細(xì)胞不完全抗體、補(bǔ)體血清中不完全抗體應(yīng)用HDN診療、AIHADE診療、藥品誘發(fā)型溶血病診療交叉配血及血型判定、器官移植、等42紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第42頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)抗球蛋白配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)37℃37℃水浴30分鐘三洗

43紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第43頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)抗球蛋白方法配血方法加抗球蛋白抗球蛋白試劑上海市血液中心血離心看結(jié)果陽(yáng)性陰性44紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第44頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)

三、結(jié)果判斷直接抗球蛋白試驗(yàn)：（1）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管凝集，判定為陽(yáng)性。（2）陽(yáng)性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管不凝集，須做陰性確認(rèn)后判定結(jié)果。（3）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，結(jié)果不可信不能發(fā)出匯報(bào)，分析原因后重做試驗(yàn)。45紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第45頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)間接抗球蛋白試驗(yàn)：（1）陽(yáng)性對(duì)照管展現(xiàn)凝集反應(yīng)，陰性對(duì)照管不展現(xiàn)凝集反應(yīng)，被檢管展現(xiàn)凝集反應(yīng)為陽(yáng)性結(jié)果，表示被檢者血清中含有抗體。（2）陽(yáng)性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管出現(xiàn)凝集，試驗(yàn)失敗，分析原因重做試驗(yàn)。46紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第46頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)

四、注意事項(xiàng)（一）直接抗球蛋白試驗(yàn)1.抗球蛋白血清應(yīng)按說(shuō)明書(shū)使用最適稀釋度，防止出現(xiàn)前帶現(xiàn)象而誤判為陰性。2.結(jié)果判讀時(shí)應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)拖拉，細(xì)胞扣搖散后，如肉眼未見(jiàn)凝集，應(yīng)將反應(yīng)物涂于玻片上，在在顯微鏡下觀察確認(rèn)陰性。3.被檢標(biāo)本需用EDTA抗凝，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性；標(biāo)本不宜久置，預(yù)防紅細(xì)胞上已致敏抗體游離到血漿中，造成假陰性或陽(yáng)性程度降低。4.紅細(xì)胞表面存在蛋白質(zhì)就會(huì)與抗球蛋白結(jié)合。所以受檢紅細(xì)胞一定要充分洗滌，除去血清蛋白，防止假陰性產(chǎn)生。5.如需深入分析體內(nèi)致敏紅細(xì)胞免疫球蛋白類型，能夠分別以抗IgG、抗C3單價(jià)抗球蛋白血清進(jìn)行試驗(yàn)。47紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第47頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)（二）間接抗球蛋白試驗(yàn)1.紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中不宜中途停頓，每次加生理鹽水前要是紅細(xì)胞完全懸浮；洗滌過(guò)程中預(yù)防交叉污染；應(yīng)充分洗滌，防止殘留抗體部分中和抗球蛋白試劑而產(chǎn)生假陰性。2.振搖試管不宜用力過(guò)大，防止將渙散紅細(xì)胞凝塊搖散，使強(qiáng)陽(yáng)性結(jié)果誤判為弱陽(yáng)性結(jié)果，弱陽(yáng)性結(jié)果誤判為陰性，對(duì)于弱陽(yáng)性結(jié)果觀察細(xì)胞扣是否出現(xiàn)缺口來(lái)判讀。3.離心后應(yīng)馬上看結(jié)果，不宜久置。4.致敏時(shí)間：30-60分鐘，不超出90分鐘

48紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第48頁(yè)第四節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)

三、抗球蛋白試驗(yàn)影響原因一、親和力親和力常數(shù)越高，抗原抗體反應(yīng)致敏階段抗體水平越高二、孵育時(shí)間和溫度37℃孵育30-60分鐘三、離子強(qiáng)度在單純離子強(qiáng)度溶液中，可增強(qiáng)抗體結(jié)合作用，孵育時(shí)間將縮短到15～30分鐘四、抗原、抗體百分比2滴血清對(duì)1滴2％～5％紅細(xì)胞懸液五、洗滌應(yīng)盡可能去除上清液，降低未結(jié)合免球蛋白。六、體外補(bǔ)體致敏七、紅細(xì)胞本身凝集49紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第49頁(yè)第五節(jié)聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)聚凝胺試驗(yàn)技術(shù)是一個(gè)快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)紅細(xì)胞不完全抗體方法，可用來(lái)檢測(cè)IgG抗體，但I(xiàn)gG抗體抗-K抗體除外。一、試驗(yàn)原理

凝聚胺（polymatching）法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液離子強(qiáng)度，降低紅細(xì)胞周?chē)?yáng)離子云，促進(jìn)血清（漿）中抗體與紅細(xì)胞對(duì)應(yīng)抗原結(jié)合，再加入帶亞電荷高價(jià)陽(yáng)離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，縮短細(xì)胞間距，形成可逆非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引發(fā)非特異性聚集，會(huì)因電荷中和而分散，而由抗體介導(dǎo)特異性凝集則不會(huì)分散50紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第50頁(yè)第五節(jié)聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)室溫放置1分鐘主次側(cè)均加聚凝胺Polybrene上海市血液中心血51紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第51頁(yè)第五節(jié)聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)聚凝胺(Polybrene)配血方法離心聚凝胺引發(fā)紅細(xì)胞非特異性凝集重懸液上海市血液中心血主次側(cè)均加重懸液看結(jié)果陽(yáng)性陰性52紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第52頁(yè)第五節(jié)聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)二、應(yīng)用范圍血型判定、抗體篩查及交叉配血試驗(yàn)三、特點(diǎn)靈敏、速度快、準(zhǔn)確、操作要求高。四、注意事項(xiàng)1.不能用含有枸櫞酸鈉和肝素抗凝標(biāo)本2.用聚凝胺試驗(yàn)技術(shù)交叉配血，出現(xiàn)不配合時(shí)，要用抗球蛋白試驗(yàn)重做，結(jié)果不一致時(shí)，以抗球蛋白試驗(yàn)為主。3.聚凝胺只能是正常紅細(xì)胞發(fā)生凝集，對(duì)缺乏唾液酸細(xì)胞（如：T細(xì)胞及B細(xì)胞）無(wú)作用。53紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第53頁(yè)第六節(jié)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)一、試驗(yàn)原理

凝膠含有分子篩效應(yīng)和親和效應(yīng)，在微柱凝膠介質(zhì)中紅細(xì)胞抗原與對(duì)應(yīng)抗體結(jié)合，利用凝膠空間位阻經(jīng)低速離心，凝集紅細(xì)胞懸浮在凝膠上層，而未和抗體結(jié)合紅細(xì)胞則沉于凝膠底部（管底尖部）。54紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第54頁(yè)第六節(jié)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)一、微柱凝膠試驗(yàn)原理

將紅細(xì)胞和抗血清加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察凝集紅細(xì)胞，被阻擋在小柱中凝膠上部或中央，證實(shí)發(fā)生凝集反應(yīng)，判斷凝集反應(yīng)陽(yáng)性,游離紅細(xì)胞，被擠過(guò)裝有過(guò)濾介質(zhì)小柱，而抵達(dá)小柱底部，證實(shí)未發(fā)生凝集判斷陰性.

操作及結(jié)果判定55紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第55頁(yè)第六節(jié)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)二、應(yīng)用1.抗球蛋白試驗(yàn)直接抗球蛋白試驗(yàn)和間接抗球蛋白試驗(yàn)。2.ABO血型判定可做單純粹定型，也可同時(shí)做正反定型。3.其它血型系統(tǒng)檢測(cè)如Rh其它抗原（CcEe）定型三、特征及優(yōu)點(diǎn)1.簡(jiǎn)便2.準(zhǔn)確結(jié)果清楚明確，可重復(fù)性強(qiáng)。3.敏感4.結(jié)果保留時(shí)間長(zhǎng)5.標(biāo)本用量少6.標(biāo)準(zhǔn)化7.安全56紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第56頁(yè)第六節(jié)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)四、微柱凝集試驗(yàn)中可能存在問(wèn)題1.抗凝劑不足或不含抗凝劑血漿標(biāo)本常出現(xiàn)假陽(yáng)性。2.試驗(yàn)室溫度較低時(shí)，易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。3.抗原、抗體過(guò)少、過(guò)弱；抗原、抗體百分比不妥時(shí)易出現(xiàn)假陰性。4.離心力過(guò)大時(shí)，輕易使弱陽(yáng)性成為陰性格局。5.溶血反應(yīng)：①反應(yīng)液是低滲溶液②溫度過(guò)冷或過(guò)熱③紅細(xì)胞或抗體被污染

④其它可使紅細(xì)胞破壞理化原因57紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第57頁(yè)第六節(jié)微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)五、不足與發(fā)展前景微柱凝集抗人球蛋白試驗(yàn)及微柱膠免疫檢測(cè)技術(shù)本質(zhì)是血凝試驗(yàn)，這理論上位制備抗原抗體包被紅細(xì)胞為指示紅細(xì)胞，以間接血凝試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)紅細(xì)胞抗原抗體以外其它血液紅細(xì)胞、中路標(biāo)志、病原微生物，以及人體中其它可溶性抗體，如對(duì)藥品抗體、本身抗體檢測(cè)等提供了比傳統(tǒng)血凝檢驗(yàn)更為敏感、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單易行方法。微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)獎(jiǎng)在臨床各個(gè)領(lǐng)域有更為遼闊發(fā)展。58紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第58頁(yè)第七節(jié)吸收放射試驗(yàn)一、概念1.吸收試驗(yàn):抗原與抗體結(jié)合是特異性，所以含有抗體活性血清加入對(duì)應(yīng)抗原后，抗體活性下降或消失，這種作用稱為吸收試驗(yàn)。2.放散試驗(yàn)是抗原與抗體結(jié)合是可逆，在物理?xiàng)l件改變時(shí)，抗體又會(huì)從抗原抗體復(fù)合物上分離下來(lái)，將抗體由抗原抗體復(fù)合物上分離下來(lái)試驗(yàn)稱為放散試驗(yàn)59紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第59頁(yè)第七節(jié)吸收放射試驗(yàn)（一）相關(guān)概念抗體可與對(duì)應(yīng)抗原在適當(dāng)條件下可發(fā)生凝集或致敏，這種結(jié)合是可逆，如改變一些試驗(yàn)條件，抗體可從紅細(xì)胞解離下來(lái)，然后檢測(cè)解離下來(lái)抗體。這種試驗(yàn)稱為吸收放散試驗(yàn)?！浔旧砜贵w

：理論上講凡是37℃與本身紅細(xì)胞不反應(yīng)，而只有在低于37℃環(huán)境下才能和本身紅細(xì)胞反應(yīng)抗體均可稱為冷本身抗體。實(shí)際上，冷本身抗體大多數(shù)只能在很低溫度下(比如4℃)與本身細(xì)胞反應(yīng)?！鶞乇旧砜贵w：溫本身抗體是指在37℃條件下能和本身紅細(xì)胞反應(yīng)抗體。當(dāng)患者血清中含有溫本身抗體時(shí)，患者普通都有些貧血或溶血癥狀。溫本身抗體可分為兩類:大多數(shù)情況下為lgG類溫本身抗體，極少數(shù)情況下也會(huì)存在IgM性質(zhì)溫本身抗體。60紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第60頁(yè)第七節(jié)吸收放射試驗(yàn)（二）吸收試驗(yàn)冷抗體在4℃反應(yīng)最強(qiáng)，通慣用冷吸收技術(shù)（本身抗體用本身紅細(xì)胞吸收；同種抗體用對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞吸收）。IgM抗體通常在4℃條件下比22℃或37℃更輕易吸收，且輕易完全吸收。IgG抗體通常在37℃吸收效果最好，但難以完全吸收。1.冷抗體吸收試驗(yàn)應(yīng)用范圍：①本身冷抗體吸收②其它冷抗體吸收2.溫抗體吸收試驗(yàn)應(yīng)用范圍：①本身冷抗體吸收②其它冷抗體吸收61紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第61頁(yè)第七節(jié)吸收放射試驗(yàn)（三）放散試驗(yàn)放散試驗(yàn)是把結(jié)合到紅細(xì)胞膜上抗體解離下來(lái)，用于其它目標(biāo)。經(jīng)過(guò)放散試驗(yàn)得到含有或不含有抗體溶液稱為放散液?！派⒛繕?biāo)：得到紅細(xì)胞上致敏抗體或沒(méi)有抗體吸附紅細(xì)胞，前者得到是本身抗體，用于本身吸收；后者得到是紅細(xì)胞，用于血型判定和交叉配血?！派⒎椒ǎ簾岱派⒓夹g(shù)、乙醚放散技術(shù)、磷酸氯喹放散技術(shù)、凍融放散技術(shù)、檸檬酸放散技術(shù)、二甲苯放散技術(shù)等。62紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第62頁(yè)第七節(jié)吸收放射試驗(yàn)1.熱放散技術(shù)§應(yīng)用范圍ABO抗體放散（新生兒溶血病試驗(yàn)）§注意事項(xiàng)溫度過(guò)高，抗體可能變性；溫度過(guò)低，輕易使

抗體從紅細(xì)胞上解離不完全2.乙醚放散技術(shù)§乙醚為有機(jī)溶劑，能夠破壞紅細(xì)胞膜，解離IgG抗體，該方法制備放散液，抗體回收率高?！爝m用范圍主要用于紅細(xì)胞上各種IgG抗體擴(kuò)散。3.磷酸氯喹放散技術(shù)§主要用于得到?jīng)]有任何抗體附著紅細(xì)胞。此方法不能將補(bǔ)體從紅細(xì)胞膜上解離下來(lái)。63紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第63頁(yè)第七節(jié)吸收放射試驗(yàn)4.凍融放散技術(shù)§適用范圍ABO抗體放散，如新生兒溶血病相關(guān)檢測(cè)試驗(yàn)。5.檸檬酸放散技術(shù)§適用范圍用于解離紅細(xì)胞膜上致敏IgG抗體對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行抗原判定，但Kell系統(tǒng)判定除外?！熳⒁馐马?xiàng)該方法可破壞Kell系統(tǒng)抗原，尤其是K抗原，所以本方法放散后細(xì)胞不能進(jìn)行Kll系統(tǒng)定型試驗(yàn)。64紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第64頁(yè)第七節(jié)吸收放射試驗(yàn)（四）吸收放散試驗(yàn)應(yīng)用☆證實(shí)存在于紅細(xì)胞上若抗原☆分離、判定混合液體☆除去血清中不需要抗體☆濃縮低效價(jià)抗體☆核實(shí)抗體特異性☆利用吸收放散技術(shù)判定引發(fā)新生溶血病和免疫性輸血反應(yīng)抗體☆研究判別免疫性溶血性貧血抗體65紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第65頁(yè)第八節(jié)凝集抑制試驗(yàn)

一、概述：

抗體能與有對(duì)應(yīng)抗原紅細(xì)胞發(fā)生特異性凝集，體液中可溶性抗原物質(zhì)能與該抗體發(fā)生特異中和，抑制了抗體凝集紅細(xì)胞作用。用這種可溶性物質(zhì)來(lái)抑制抗體與紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，稱為凝集抑制試驗(yàn)。慣用于ABH或Lewis分泌狀態(tài)檢驗(yàn)，幫助ABO亞型確實(shí)認(rèn)以及特殊情況下（紅細(xì)胞標(biāo)本完全溶血）ABO血型判定。66紅細(xì)胞血型檢測(cè)紅細(xì)胞血型檢測(cè)第66頁(yè)第八節(jié)凝集抑制試驗(yàn)二、抑制物處理及抗體標(biāo)化☆搜集液體唾液標(biāo)本作為抑制物，煮沸使酶