植物染色體的孚爾根染色法

植物染色體的孚爾根染色法第1頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六一、實驗原理第2頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六孚爾根（Feulgen）染色法是鑒別細胞核中DNA的組織化學(xué)方法,其原理與希夫試劑的化學(xué)性質(zhì)有關(guān)。希夫試劑是由堿性品紅與亞硫酸氫鈉和鹽酸作用而生成的,為無色透明的溶液,它遇醛類物質(zhì)即呈紫紅色,故可用于鑒定醛基的存在。DNA分子結(jié)構(gòu)中本身無醛基,但在60oC1M鹽酸的水解作用下,部分地打斷DNA分子中脫氧核糖與嘌呤間的糖苷鍵,使嘌呤堿基脫落,并在脫氧核糖的第一個碳原子上釋放出活性醛基,該基團遇希夫試劑即呈紫紅色。在細胞內(nèi)只有DNA才具有這種反應(yīng),故可定性地鑒定細胞核內(nèi)DNA的存在。這一染色方法是Feulgen和Rossenbeck于1924年首先發(fā)現(xiàn)和確定的,故稱孚爾根染色法。第3頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六二、實驗?zāi)康脑谑煜せ鹧娓稍锓ㄖ破幕A(chǔ)上,掌握弗爾根染色法,并觀察有絲分裂的各個時期第4頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六三、材料、方法、器具、藥品小麥根尖希夫試劑，45%醋酸，Carnoy’s固定液堿性品紅、偏重亞硫酸鈉、活性炭、1M鹽酸鑷子載玻片蓋玻片顯微鏡青霉素瓶子恒溫水浴鍋第5頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六四、實驗步驟第6頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六希夫試劑的配制將0.5g堿性品紅徐徐加入煮沸的100ml蒸餾水中,用玻璃棒攪拌,使之充分溶解,待溶液冷卻至58C左右,過濾于棕色瓶中。當(dāng)濾液冷卻至26C時,再加入10ml的1M鹽酸和0.5g亞硫酸氫鈉或偏重亞硫酸鈉(鉀),搖動,溶解后密封于棕色瓶中,置于黑暗低溫處。次日檢查溶液顏色,須呈無色透明或淡茶色才可使用。若稍呈紅色可加入0.5g活性炭連續(xù)搖動,在4C下靜置過夜,然后過濾脫色。第7頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六染色過程取固定好的根尖,用水洗2-3分鐘,放入室溫條件下的1NHCl處理根尖材料2-3分鐘。將根尖換入60℃預(yù)熱的HCl,置于恒溫水浴中,在600.5℃的條件下水解8-10分鐘。吸出熱HCl,換入室溫1NHCl再處理1-2分鐘,然后水洗2-3次。吸凈水分,加入Schiff試劑,蓋上蓋子,在黑暗條件下染色30分鐘,也可過夜。用水漂洗,去掉細胞中殘存的一些有色的品紅分子。取根尖置載玻片上,用鑷子夾碎后,加一滴45醋酸,然后蓋上蓋片。壓片、觀察。第8頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六玉米染色體核型圖(2n=20),Feulgen染色第9頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六玉米染色體核型圖(2n=20+2B)第10頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六玉米染色體核型圖(2n=20+4B)/mnl/79/18rosado.htm第11頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六Rye,Secalecereale,2n=2x=14+2B(standardB),metaphaseIpairingwith5IIring+2IIrod+1Brod,FEULGENstaininghttp://www.desicca.de/Rye%20gene%20map/Other_genes/B_chromosome/b_chromosome.html第12頁，共14頁，2023年，2月20日，星期六http://equitationpassion.free.fr/determinisme_genetique_des_