玉米小斑病抗性鑒定

玉米小斑病抗性鑒定第1頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六

玉米小斑病（Helminthosporiummaydis）是溫曖潮濕地區(qū)玉米產(chǎn)區(qū)廣泛發(fā)生的一種病害，也是我國玉米生產(chǎn)上的主要病害之一，流行年份往往造成嚴(yán)重?fù)p失。選育抗病自交系和雜交種，是防治小斑病最經(jīng)濟(jì)有效的措施。玉米從幼苗到成株均可發(fā)病，通常從下部葉片開始向上蔓延，先從葉面產(chǎn)生褐色小點，后擴(kuò)大成2~3mm的褐色病斑，病斑受葉脈限制，常常成不規(guī)則形。發(fā)病適溫為25~30℃

。二、內(nèi)容說明第2頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六第3頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六內(nèi)容說明(續(xù))

根據(jù)小斑病菌侵染特點的不同，可將小斑病菌劃分為O小種和T小種兩個生理小種。T小種對T型細(xì)胞質(zhì)有專化毒性，故育種上應(yīng)盡量避免使用有?；缘募?xì)胞質(zhì)類型。玉米對小斑病抗性表現(xiàn)亦有兩種，一是多基因控制，表現(xiàn)為病斑數(shù)量少，在保濕條件下，病斑形成的孢子少，孢子形成時間較長。二是由隱性單基因rhm控制，表現(xiàn)為小的褪綠病斑。鑒定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然誘發(fā)鑒定，大田誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定。但以人工接種鑒定較為可靠。

第4頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六第5頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六第6頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六（一）所需用品1、材料：供試玉米材料、玉米抗病和感病對照材料。玉米小斑病菌種，T小種的培養(yǎng)物；上一季感染O小種小斑病的玉米植株病葉。2、儀器用具：高壓滅菌鍋、超凈工作臺、酒精燈、接種環(huán)、恒溫箱、燒杯、漏斗、試管、紗布、玻璃棒、培養(yǎng)皿、顯微鏡、小噴霧器、保濕罩等。3、藥品試劑：75%酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、瓊脂、馬鈴薯等。三、所需用品和操作方法

第7頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六用具第8頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六（二）操作方法

1.苗期接種鑒定（1）菌種的培養(yǎng)①病原菌的分離選取新鮮病葉作為分離材料，在滅菌室內(nèi)進(jìn)行操作。先將病斑剪成4~5mm2大小，約30~40塊，然后分別將病組織小塊置于0.1%升汞溶液中消毒1min，立即取出，按無菌操作方法投入無菌水中清洗三次，每次2~3min。最后以無菌操作方法，將病斑組織按正方形四點排列，栽種在PDA平板培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯20g，葡萄糖10~20g，瓊脂17~20g，水100ml）上，置25~30℃

溫箱中培養(yǎng)約7天。

第9頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六第10頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六②菌種的純化

選取培養(yǎng)性狀典型的菌落，按無菌操作方法移植到斜面培養(yǎng)基上（每個典型菌落移3管），然后再放在25℃

恒溫下培養(yǎng)。待產(chǎn)生孢子后，選取菌落較一致的斜面1~2管，挑取一點，觀察孢子的形狀、分隔數(shù)、臍點特點。然后計測孢子大小。確認(rèn)純種后，再用斜面培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，讓其產(chǎn)生大量孢子后，置冰箱中保存待用。

第11頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六菌絲形態(tài)第12頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六（2）孢子懸浮液的制備

用少量無菌水倒入已產(chǎn)孢子的斜面培養(yǎng)基試管中，猛力搖動沖洗孢子。也可輔以接種環(huán)表層刮除。最后將所有沖洗孢子液集中在潔凈的三角瓶中。用紗布濾去菌絲及培養(yǎng)基，濾液用蒸餾水稀釋，調(diào)至在100倍顯微鏡下每個視野有5個孢子濃度的懸浮液待用。

第13頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六（3）接種病菌

接種小斑病的適宜時期是在玉米6個葉片左右。接種前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖，以促進(jìn)病菌孢子萌發(fā)。接種菌液量是每株1~2ml。用微型噴霧器均勻噴霧，噴后立即以塑料袋套盆保溫，置25℃左右溫度下保濕24小時。

第14頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六（4）病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn)

接種后7~10天即可進(jìn)行病情鑒定。鑒定應(yīng)在同一天內(nèi)完成。鑒定項目和標(biāo)準(zhǔn)如下：①發(fā)病程度以葉片為單位進(jìn)行鑒定。根據(jù)病斑占葉片面積的百分率，記載每片葉的感病程度。發(fā)病程度分為9級（表1）。鑒定接種部位的葉片，每株4片葉，每個供試材料10株共40片。以整株為單位，根據(jù)整株的發(fā)病情況，分為7個等級（表2）。而后，以葉片為單位，計算病葉率和病情指數(shù)。第15頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六病情計算公式

第16頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六表1玉米小斑病葉片發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn)

等

級病斑占葉片面積（%）012345678012—56—1011—2021—3031—5051—70>700級1級2級3級4級5級6級7級8級第17頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六表2玉米小斑病整株發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn)

級別全株葉片病斑占總?cè)~面積（%）

0全株葉片無病0.5植株下部葉片有零星病斑（占葉片面積10%以下）1植株下部葉片有少量病斑（占葉片面積11%~25%）2植株下部葉片有中量病斑（占葉片面積26%~50%）3植株下部葉片有多量病斑（占葉片面積51%以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，中上部葉片有中量病斑（占葉面積26%~50%），上部葉片有少量病斑（占葉面積10~25%）4植株下部葉片基本枯死，中部葉片有多量病斑（占葉面積50%以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，上部葉片有中量病斑（占葉面積26~50%）。5全株基本枯死。0.5級1級2級3級4級5級0級第18頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn)（續(xù)）②病斑長度隨機(jī)測量40個獨立的病斑，每株4個，以mm為單位。③抗病性的反應(yīng)型病斑反應(yīng)型分為三級，分級標(biāo)準(zhǔn)見表3。第19頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六表3玉米小斑病抗性反應(yīng)型分級標(biāo)準(zhǔn)

病斑型病斑癥狀壞死型

病斑中央的壞死部分為黃褐色，周圍有深色的邊緣，病斑周圍和兩端沒有暗綠色的浸潤區(qū)。萎蔫型病斑中央的壞死部分為灰褐色至近似灰白色，沒有深色邊緣，在壞死斑周圍或兩端有綠色的浸潤區(qū)，在高溫、潮濕、光照弱的條件下浸潤區(qū)擴(kuò)展快，并且葉片迅速呈暗綠色，萎蔫死亡。褪綠病斑型病斑小，病斑中央為白色壞死，沒有綠色邊緣，病斑周圍有褪綠暈圈。

壞死型萎蔫型褪綠病斑型第20頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六2.成株期接種鑒定

①接種：抽雄前將粉碎的頭一年病葉撒入心葉喇叭口，接種應(yīng)在下午或傍晚濕度較大時進(jìn)行。天氣干燥時，接種后可在每株心葉噴水。②病情鑒定和分級標(biāo)準(zhǔn)：抽絲后15天左右進(jìn)行病情鑒定，鑒定應(yīng)在同一天內(nèi)完成。發(fā)病程度以整株為單位，分7個等級。分級標(biāo)準(zhǔn)見表2。一般用于苗期和成株期抗病性鑒定。整株調(diào)查中，植株上、中、下葉片的劃分，以第一果穗上下兩片葉為中部葉，其下為下部葉，其上為上部葉。第21頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六表2玉米小斑病整株發(fā)病程度分級標(biāo)準(zhǔn)

級別全株葉片病斑占總?cè)~面積（%）

0全株葉片無病0.5植株下部葉片有零星病斑（占葉片面積10%以下）1植株下部葉片有少量病斑（占葉片面積11%~25%）2植株下部葉片有中量病斑（占葉片面積26%~50%）3植株下部葉片有多量病斑（占葉片面積51%以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，中上部葉片有中量病斑（占葉面積26%~50%），上部葉片有少量病斑（占葉面積10~25%）4植株下部葉片基本枯死，中部葉片有多量病斑（占葉面積50%以上），出現(xiàn)大片枯死現(xiàn)象，上部葉片有中量病斑（占葉面積26~50%）。5全株基本枯死。0.5級1級2級3級4級5級0級第22頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六③病株率和病情指數(shù)計算

病株率和病情指數(shù)計算方法是以整株為單位進(jìn)行。

第23頁，共25頁，2023年，2月20日，星期六1、玉米小斑病發(fā)病的適宜條件是什么？2、玉米小斑病的典型特征為何？3、玉米小斑病鑒定的基本環(huán)節(jié)有哪些？4、玉米小斑病接種