生物選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

生物選修一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)第1頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（一）微生物結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單，個(gè)體多數(shù)十分微小，通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到。如：病毒、細(xì)菌、放線菌、真菌等。（二）培養(yǎng)基人工配置的供微生物生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。第2頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六按成分不同劃分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基化學(xué)成分不恒定的天然有機(jī)物牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基。用于工業(yè)生產(chǎn)化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基高氏1號(hào)培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基。用于分類和鑒定分類第3頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六按物理狀態(tài)不同劃分固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為1.5%-2.0%瓊脂含量一般為0.2%-0.7%不加任何凝固劑半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基常用來(lái)進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及噬菌體效價(jià)滴定大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用方面的研究第4頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六按用途不同劃分基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）用來(lái)將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來(lái)的培養(yǎng)基用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基微生物產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，與培養(yǎng)基中的特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定的化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng)第5頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基分類（按物理形態(tài)分）（1）液體培養(yǎng)基（2）固體培養(yǎng)基常用的固體培養(yǎng)基：瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。①②第6頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。第7頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。不同的細(xì)菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。第8頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)（1）水（2）碳源提供碳元素的物質(zhì):第9頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)（1）水（2）碳源二氧化碳、碳酸鹽等無(wú)機(jī)物提供碳元素的物質(zhì):糖類（主要）、蛋白質(zhì)、脂肪酸等有機(jī)物第10頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)（1）水（2）碳源提供氮元素的物質(zhì):（3）氮源第11頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)（1）水（2）碳源氮?dú)?、氨氣、氨鹽、硝酸鹽等無(wú)機(jī)物提供氮元素的物質(zhì):（3）氮源蛋白胨、牛肉膏等有機(jī)物第12頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)（1）水（2）碳源（3）氮源（4）無(wú)機(jī)鹽第13頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至1000mL碳源、磷酸鹽和維生素氮源和維生素?zé)o機(jī)鹽氫元素、氧元素第14頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件（1）pH值如：培養(yǎng)霉菌需酸性、培養(yǎng)細(xì)菌需中性或微堿性第15頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件（1）pH值如：培養(yǎng)霉菌需酸性、培養(yǎng)細(xì)菌需中性或微堿性（2）特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)…?如：培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加維生素生長(zhǎng)因子第16頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件（1）pH值（2）特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)…?（3）氧氣的含量第17頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（二）培養(yǎng)基培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件（1）pH值（2）特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)…?（3）氧氣的含量如：培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供無(wú)氧的條件第18頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六培養(yǎng)基配置原則目的明確營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)理化條件適宜經(jīng)濟(jì)節(jié)約根據(jù)不同的微生物的營(yíng)養(yǎng)要求配制針對(duì)強(qiáng)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和代謝產(chǎn)物的形成和積累如：pH第19頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（三）無(wú)菌技術(shù)1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：防止外來(lái)雜菌的入侵2.無(wú)菌技術(shù)包括的四大方面參看教材15頁(yè)第20頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（三）無(wú)菌技術(shù)3.消毒與滅菌（1）消毒概念使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物。第21頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（三）無(wú)菌技術(shù)3.消毒與滅菌（1）消毒方法a.

煮沸消毒法b.巴氏消毒法：如牛奶的消毒c.化學(xué)藥劑消毒：酒精、氯氣、石碳酸、煤酚皂溶液等d.紫外線消毒第22頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（三）無(wú)菌技術(shù)3.消毒與滅菌（2）滅菌概念使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。第23頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一基礎(chǔ)知識(shí)（三）無(wú)菌技術(shù)3.消毒與滅菌（2）滅菌概念使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。方法a.灼燒滅菌

第24頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六方法a.灼燒滅菌

第25頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六方法a.灼燒滅菌

微生物的接種工具（接種環(huán)、接種針）或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒第26頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六方法a.灼燒滅菌

b.干熱滅菌

160－170℃

；1－2h能耐高溫的需要保持干燥的物品（玻璃器皿）第27頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六方法a.灼燒滅菌

b.干熱滅菌

c.高壓蒸汽滅菌

100kPa121℃15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌第28頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六消毒滅菌概念指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法灼燒消毒法、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌適用對(duì)象操作空間、液體、雙手等接種環(huán)、接種針、玻璃器皿，培養(yǎng)基等第29頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六思考：①無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？

第30頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六思考：①無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？

無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。第31頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六思考：②消毒和滅菌有何不同？消毒滅菌條件作用范圍第32頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六思考：②消毒和滅菌有何不同？消毒滅菌條件作用范圍溫和物體表面或內(nèi)部一部分，不包括芽孢和孢子強(qiáng)烈物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子第33頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六思考：③為什么消毒牛奶要用巴氏消毒法?營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞第34頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六思考：④請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿玻棒、試管、燒瓶和吸管實(shí)驗(yàn)操作者的雙手第35頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六思考：④請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿滅菌

玻棒、試管、燒瓶和吸管消毒實(shí)驗(yàn)操作者的雙手消毒第36頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板第37頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板①溶化時(shí)為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中，減少誤差。計(jì)算第38頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板②加瓊脂的目的是什么?計(jì)算第39頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板②加瓊脂的目的是什么?作為凝固劑計(jì)算第40頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板③在滅菌前,用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？計(jì)算第41頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板③在滅菌前,用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？在滅菌時(shí)能避免水蒸汽凝結(jié)時(shí)浸濕棉塞，在取出培養(yǎng)基錐形瓶時(shí)也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。計(jì)算第42頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板④培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？計(jì)算第43頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板④培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？不能，因?yàn)榕囵B(yǎng)皿要保持干燥，應(yīng)該用干熱滅菌。計(jì)算第44頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六倒平板第45頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六討論可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。第46頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六討論可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。第47頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六討論平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。第48頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六討論平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。第49頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板計(jì)算（二）純化大腸桿菌第50頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱量溶化滅菌倒平板接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法計(jì)算（二）純化大腸桿菌第51頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六1.平板劃線法第52頁(yè)，共60頁(yè)，2023年，2月20日，星期六討論1.操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第