2020細(xì)胞信息與調(diào)控習(xí)題

名詞解釋1、Receptor：受體，指能夠識別并與相應(yīng)的配體分子結(jié)合，激活配體，并將信號傳遞給下一個(gè)信號分子的生物大分子。2、Calcium-inducedcalciumrelease（CICR）:鈣觸發(fā)鈣釋放，由少量Ca2+內(nèi)流引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+庫釋放大量Ca2+的過程，稱為鈣觸發(fā)鈣釋放。3、Receptortyrosinekinases（RTK）:受體酪氨酸激酶，是細(xì)胞膜表面一類重要的酶聯(lián)受體，為單次跨膜蛋白，與配體結(jié)合后以二聚體形式發(fā)揮作用，可以磷酸化其自身以及細(xì)胞質(zhì)底物的酪氨酸殘基。它主要參與細(xì)胞生長和分化的控制。4、Proteinphosphorylation:蛋白磷酸化，蛋白質(zhì)磷酸化是指由蛋白激酶催化的，將ATP或GTP位的磷酯基轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)氨基酸殘基上的過程。5、Proteindephosphorylation:蛋白去磷酸化，蛋白磷酸化的逆過程，由蛋白磷酸酯酶催化。6、G-protein：G蛋白，是G蛋白偶聯(lián)受體聯(lián)系細(xì)胞信號通路的關(guān)鍵膜蛋白，由Ga、G^G‘三個(gè)亞基構(gòu)成；Ga是主要功能亞單位，具有GTP酶活性，能與GDP或GTP結(jié)合，另外兩個(gè)亞單位（8、Y）以功能復(fù)合體的形式發(fā)揮作用。G蛋白可根據(jù)與其結(jié)合的鳥甘酸的不同而改變分子構(gòu)象，在失活狀態(tài)與激活狀態(tài)之間相互變換，起到分子開關(guān)的作用。7、Deathreceptor：死亡受體，是一類跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族，其共同特點(diǎn)是具有富含半胱氨酸的胞外結(jié)構(gòu)域和同源的胞漿序列一一死亡結(jié)構(gòu)域（DD）,它們與相應(yīng)的配體結(jié)合后，可以通過一系列的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，將凋亡信號向細(xì)胞內(nèi)部傳遞，最終引起caspase蛋白酶家族的活化，使細(xì)胞發(fā)生凋亡。典型的死亡受體有CD95/Fas/Apo-1受體、TNF受體、TRAIL受體等。8、Bcl-2family：Bcl-2家族，是在細(xì)胞凋亡中具有重要作用的一類蛋白質(zhì)，主要可分為兩大類：促凋亡蛋白（Bax、Bak、Bok等）和抗凋亡蛋白（Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w等）Bcl-2家族成員在其多肽鏈中含有1-4個(gè)與Bcl-2同源的結(jié)構(gòu)域（BH1-4）,其中BH4為抗凋亡蛋白所特有，BH3與促進(jìn)凋亡相關(guān)。Bcl-2家族蛋白主要在線粒體膜上發(fā)揮作用。9、TUNELdetectionofapoptosis:末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)。脫氧核糖核甘酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法，細(xì)胞凋亡中，染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的3’-OH末端。在脫氧核糖核甘酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下，將脫氧核糖核甘酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'OH-末端，可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測。10、Excitotoxicity：興奮性毒性，在某些病理?xiàng)l件下、能量障礙時(shí)（大腦處于缺血缺氧狀態(tài)），ATP耗竭，Na+-K+-ATP酶活性下降及重?cái)z取受阻，使細(xì)胞間谷氨酸量劇增。過量谷氨酸會導(dǎo)^MDA受體過度激活，Ca2+內(nèi)流增加，致使神經(jīng)元內(nèi)鈣超載。鈣超載可觸發(fā)一系列下游促死亡信號事件，如鈣蛋白酶激活、活性氧生成、線粒體損傷等，致使細(xì)胞壞死或凋亡，即為興奮性毒性。11、Cholinergicanti-inflammatorypathway:膽堿能抗炎通路，是調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的一種神經(jīng)生理機(jī)制，通過刺激外周迷走神經(jīng)引起ACh釋放，隨后ACh與巨噬細(xì)胞和其他分泌細(xì)胞因子細(xì)胞上有a7亞單位的N型ACh的受體(a7nAChR)結(jié)合，通過細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來抑制促炎因子的生成和釋放，最終抑制局部或全身的炎癥反應(yīng)，防止組織損傷。12、Tolllikereceptors：Toll樣受體，是一類跨膜受體，在固有免疫識別微生物和觸發(fā)抗感染免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。能通過識別微生物表面病原體相關(guān)分子模式啟動宿主抗微生物固有免疫反應(yīng)，以清除病原體。13、Patternrecognitionreceptor:模式識別受體，單核/巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等固有免疫細(xì)胞表面或胞內(nèi)器室膜上表達(dá)的直接識別微生物或衰亡細(xì)胞所特有的多糖或其他模式分子的受體。14>Immunodeficiencydisease(IDD):免疫缺陷病，免疫系統(tǒng)先天發(fā)育不全或后天損害而使免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化、增殖和代謝異常并導(dǎo)致免疫功能障礙所出現(xiàn)的臨床綜合征。15、Inflammasome:炎癥小體，近年來發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞內(nèi)多蛋白復(fù)合物，包括NOD樣受體、ASC蛋白和活化形式的Caspase-1。功能：水解pro-ILTB、pro-ILT8和pro-IL-33,使它們轉(zhuǎn)化成成熟形式并分泌。16、Autophagy:自噬，是真核生物進(jìn)化過程中高度保守一類降解途徑，通過形成雙層膜的自噬體，將蛋白質(zhì)等生物大分子或細(xì)胞器(線粒體等)回收至溶酶體將其降解為氨基酸、單糖等小分子，實(shí)現(xiàn)循環(huán)再利用。17、Heatshockproteins:熱休克蛋白，又稱應(yīng)激蛋白，是機(jī)體細(xì)胞在一些應(yīng)激源(如高溫、缺氧、重金屬中毒、氧化應(yīng)激、感染、饑餓、創(chuàng)傷、代謝毒物等)的誘導(dǎo)下，使HSP基因被激活、高效表達(dá)的一組在進(jìn)化上高度保守的蛋白質(zhì)。18.Molecularchaperone:分子伴侶，有些蛋白質(zhì)被合成以后，自己不能獨(dú)立形成自由能最低的立體結(jié)構(gòu)，需要一類蛋白質(zhì)的幫助，這類參與蛋白質(zhì)折疊的蛋白質(zhì)稱為分子伴侶。組裝結(jié)束后與其分離，不構(gòu)成這些蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)執(zhí)行功能時(shí)的組份。19、Endoplasmicreticulumstress:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，因?yàn)楦鞣N原因，如缺氧、氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過度負(fù)荷、病毒感染、藥物和毒素等擾亂內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)未折疊蛋白或錯(cuò)誤折疊蛋白積聚或細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)失衡的現(xiàn)象，是多種細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)的共同通路。

二、簡答20.簡述細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本方式。答：1.通過信號分子作用來完成信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。⑴內(nèi)分泌:是指分泌的激素先進(jìn)入毛細(xì)血管，再經(jīng)腺體靜脈進(jìn)入體循環(huán)，如促卵泡激素釋放激素。⑵旁分泌:產(chǎn)生的激素不進(jìn)入血液循環(huán)，作用于周圍細(xì)胞、組織而發(fā)揮作用，如胃腸道激素、細(xì)胞因子、免疫因子等。⑶自分泌:腺體、細(xì)胞或組織分泌的激素反饋?zhàn)饔糜谙袤w、細(xì)胞或組織自身，細(xì)胞自我調(diào)節(jié)的主要方式。.相鄰細(xì)胞間直接接觸，通過與細(xì)胞間膜受體相互識別結(jié)合。如精子和卵細(xì)胞之間的識別和結(jié)合。.相鄰細(xì)胞間形成通道使細(xì)胞相互溝通，通過攜帶信息的物質(zhì)來交流信息。如高等植物細(xì)胞之間通過胞間連絲相互連接，進(jìn)行細(xì)胞間的信息交流。ReceptorTransducerAmpillliier劭通鐘皿p南帛”遍CHANGESIMC^TCISKEL.FTCiNHET盤?？赗eceptorTransducerAmpillliier劭通鐘皿p南帛”遍CHANGESIMC^TCISKEL.FTCiNHET盤?？赨匚R?GULATIQNof應(yīng)臟ION：THERFACTORSDIVERGENCETD

MULTliPLETARBETS3.Response信號分子：第一信號分子：腎上腺素、組織胺等第二信號分子：Ca2+,DG,Cer,IP3,cAMP,cGMP第三信號分子：CreB.蛋白激酶和蛋白磷酸酶的基本類型。答：蛋白激酶：一、按底物分類：一類是催化酸穩(wěn)定的磷酸化，即催化蛋白質(zhì)絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)羥基或酪氨酸(Tyr)酚羥基磷酸化，形成PO鍵的蛋白激酶(PO激酶)如絲氨酸蛋白激酶(Ser-PK)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)；另一類是催化堿穩(wěn)定的磷酸化，即催化蛋白質(zhì)堿性氨基酸如賴氨酸(Lys)、組氨酸(His)和精氨

酸（Arg）殘基磷酸化，形成PN鍵的蛋白激酶（PN激酶）.二、按功能分類：按功能分類familyexamplesdomainfrGCPKAjcPKBir(AJ^II)按功能分類familyexamplesdomainfrGCPKAjcPKBir(AJ^II)cPKcuS通資”rpH一…二二二笛a(bǔ)aCAMKCRlmcdu&iKhawCaMK1CtC1CaseinCKlaCvEln?ijei^<inc*rTl,MAPK.OSK.CDKfkahinimaERK1CbCi'CfiKlG￥CTKLtyr&snioTQFfl-RIBRafIRAK4 ? 二十圉卜-W&Tr^HZ-J3S ?一?.￡?.?ag￡09■?l37Eslnrriil-pMKK3?-Pfli —.闞….上■族3ahtiicailyiyiiiiijfvrMWdomainanchitectureoffspre&enlattivemembersoftheproielnkinasefamily三、按激活方式分類:常見蛋白激酶分類（按激活方式）宅稱調(diào)節(jié)因子戶KA］蛋白讖ISA）SAMEPKG（受白激戰(zhàn)G）cGMP恬使依就型PKC（蛋白漱蚓C）Ca2+,磷脂蛋白激物CsiZWS”依賴型雯白激悔Ca2+,艷羽素絢蘇量酸血紅素依賴型蛋白激曲加紅市雷白激酹承鏈RNA俄顆型蛋白激酣dsRNA酪蛋白激酶非信使依賴型殂蛋白激酹蛋白懸迪糖原合成函讖牌視紫紅質(zhì)蛋白繳談鵬婕墨白裝函受體型蛋白海的EGF受體董BS陵晶素受體激酸RDGF愛悻激酶苴他菩種細(xì)胞因子非受體里蛋白激降JAK.FAK.Src,T*c等上海TPK蛋白磷酸酶:1）絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶：主要包括：PP-1,PP-2A,PP-2B和PP-2C四類。2）酪氨酸磷酸酶：主要有胞內(nèi)型和跨膜受體型。3）絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸磷酸酶：.磷酸酯酶CDC25潛在靶位有哪些?

答:雙特異性磷酸酯酶CDC25潛在靶位PnsbtranslatinnEnzymeactivityTranscriptionc-MycHIF-laP53dE2FrranslutionC1F4AChklSC/丁仆Protein-proteininteractionCDKxyclinsEnzymeactivityTranscriptionc-MycHIF-laP53dE2FrranslutionC1F4AChklSC/丁仆Protein-proteininteractionCDKxyclinsASKlSteroidreceptorsSubcellularlocalizationNuclearxyloplasmicCentrosome.以吉非替尼（易瑞沙）為例，分析EGFR-TKI類藥物的抗腫瘤信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，并簡述一種耐藥機(jī)制。答：EGFR：屬于受體酪氨酸激酶（RTK），單次跨膜，與配體結(jié)合后形成二聚體，可激活胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的酪氨酸激酶活性。1）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程：（RTK-Ras-MAPK通路被抑制）吉非替尼屬于EGFR-TKI，競爭性結(jié)合EGFR并抑制其活性；無活性的EGFR不能結(jié)合接頭蛋白GRB2和鳥甘酸交換因子Sos；Ras無法被Sos激活，Ras-Raf-MEK-MAPK信號通路被抑制；相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（如SRF、TCF）無法被MAPK活化；與細(xì)胞生長、增殖、分化有關(guān)的基因（如c-fos）不能表達(dá)；抑制腫瘤生長增殖。2）耐藥機(jī)制:吉非替尼屬于靶向治療藥物，靶向治療耐藥機(jī)制包括一一藥物結(jié)合位點(diǎn)突變或缺失；藥物吸收減少外排增加；胞內(nèi)代償信號通路的激活；促生存信號激活；癌細(xì)胞的DNA修復(fù)增加等。24.目前發(fā)現(xiàn)在腫瘤發(fā)生時(shí)有三類受體能夠激活JAK-STAT3信號通路，持續(xù)活化的JAK-STAT3為上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞提供了增殖優(yōu)勢，包括形成轉(zhuǎn)移前腫瘤微環(huán)境（促癌炎癥反應(yīng)）。根據(jù)你了解的知識，簡單介紹JAK-STAT3信號的激活過程，對上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞的影響及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。答：1）JAK-STAT3信號的激活過程:JAK-STAT3通路可被細(xì)胞因子受體（如IL-6受體）、GPCR、TLR等受體激活。與RTK不同的是，這些受體缺乏內(nèi)在激酶活性。相反，當(dāng)與配體結(jié)合后，這些受體會發(fā)生構(gòu)象變化，與胞質(zhì)中的接頭蛋白結(jié)合傳遞生物信號。例如，IL-6受體依賴于酪氨酸激酶JAK1或JAK2，通過gp130相關(guān)聯(lián)，并直接磷酸化（P）STAT3。細(xì)胞因子受體和TLRs在配體激活后作為二聚體發(fā)揮作用，g蛋白結(jié)合GPCRs催化鳥嘌吟核甘酸的轉(zhuǎn)化，激活包括JAK2在內(nèi)的下游信號效應(yīng)和激酶序列?；罨腏aks，如JAK1和JAK2，在Tyr705磷酸化STAT3，導(dǎo)致活化的STAT3二聚體易位到細(xì)胞核。同時(shí)，絲氨酸/蘇氨酸激酶介導(dǎo)STAT3的Ser727磷酸化，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性。在細(xì)胞核中，STAT3與基因的啟動子結(jié)合，調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)，促進(jìn)癌癥進(jìn)展所需的各種細(xì)胞過程。（配體與受體結(jié)合受體二聚化一一二聚化受體激活JAK，后者使受體磷酸化一一STAT與磷酸化的受體結(jié)合后進(jìn)一步被JAK磷酸化，形成二聚體，暴露出入核信號一一STAT進(jìn)入核內(nèi)，調(diào)節(jié)基因表達(dá)。）2）對上皮細(xì)胞的影響：對上皮細(xì)胞的存活、增殖及遷移產(chǎn)生影響致癌性轉(zhuǎn)化（惡性轉(zhuǎn)化）3）對免疫細(xì)胞的影響：對免疫細(xì)胞的存活有影響促炎或抗炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生形成腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移前微環(huán)境4）在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用：經(jīng)典：增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活、增殖、侵襲能力，引起抗腫瘤免疫抑制新：促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中髓系細(xì)胞的存活或增殖；形成腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移前微環(huán)境；參與肥胖介導(dǎo)的炎癥過程，與細(xì)胞癌性轉(zhuǎn)化相關(guān)；促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞自我更新.G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）是藥物開發(fā)工作中的重要靶點(diǎn)，相關(guān)的研究已經(jīng)獲得了10次諾貝爾獎(jiǎng)，請選擇你所熟悉的任一作用于GPCR的激素（如緩激肽、腎上腺素、甲狀旁腺激素、胰高血糖素……）或藥物（如降壓藥纈沙坦，鎮(zhèn)痛藥嗎啡，抗過敏藥、抗抑郁藥……）簡要描述其產(chǎn)生生物效應(yīng)的關(guān)鍵信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。答：腎上腺素通過GPCR通路產(chǎn)生生物效應(yīng)的關(guān)鍵信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制：1）腎上腺素與其特異性受體結(jié)合后，受體構(gòu)象改變，與G蛋白親和力增加。2）結(jié)合腎上腺素的受體使與Gs結(jié)合的GDP為GTP所替代（Ga亞單位釋放GDP，結(jié)合GTP），由此激活Gs。3）Gs的a亞單位結(jié)合并活化腺甘酸環(huán)化酶（AC）。4）AC催化形成cAMP（第二信使）。5）cAMP激活PKA（蛋白激酶A）6）PKA磷酸化胞內(nèi)蛋白，引起對腎上腺素的細(xì)胞應(yīng)答。7）cAMP降解，消除對PKA的活化作用，細(xì)胞應(yīng)答終止。.請解釋細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死（非程序性）的差異。特征細(xì)胞凋亡細(xì)胞壞死性質(zhì)生理性和病理性，特異性病理性，非特異性誘發(fā)因素較弱刺激，非隨機(jī)發(fā)生強(qiáng)烈刺激，隨機(jī)發(fā)生細(xì)胞膜膜發(fā)泡，PS外翻，保持完整完整性破壞，溶解或通透性增加細(xì)胞漿皺縮腫脹細(xì)胞器完整受損細(xì)胞核先固縮，后在核小體間裂解DNA呈180-200bp的梯狀條帶彌散性隨機(jī)降解，DNA呈彌散狀溶酶體完整破裂線粒體 跨膜電位受損，細(xì)胞色素c釋放 腫脹，破裂，ATP生成受損蛋白合成 主動過程，有新蛋白合成 被動過程，無新蛋白合成能量需求 依賴ATP 不依賴ATP抗死亡分 Bcl-2家族，IAPs 無子結(jié)局 形成凋亡小體，被鄰近細(xì)胞吞噬、分解，無細(xì)胞內(nèi)容物溶解釋放，引起局部炎癥反應(yīng) 炎癥反應(yīng).請介紹負(fù)責(zé)起始凋亡和執(zhí)行凋亡的caspase的亞型、剪切活化的差異，并舉例催化底物。答：1）負(fù)責(zé)凋亡起始的為caspase-2、8、9、10亞型，實(shí)行自我剪切并活化，屬于同源活化;caspase-3、6、7被凋亡起始組的caspase剪切活化，起執(zhí)行凋亡、放大信號的作用，為異源活化。2）催化底物有：DFF（DNA斷裂因子）促使DNA片段化；PARP（多聚ADP核糖聚合酶），受caspase抑制，使核酸內(nèi)切酶活性增加；核纖層，位于內(nèi)層核膜和染色質(zhì)之間的纖維蛋白片層，caspase促進(jìn)核纖層斷裂；細(xì)胞骨架蛋白，caspase促進(jìn)細(xì)胞膜發(fā)泡。.請介紹檢測細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)方法。答：1）形態(tài)學(xué)檢測光學(xué)顯微鏡：凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。熒光顯微鏡：I期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased）,部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；Ha期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；lib期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。電鏡：凋亡I期（pro-apoptosisnuclei）的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)；Ha期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；Hb期細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。2）磷脂酰絲氨酸外翻及碘化丙啶染色分析（AnnexinV和PI染色法）?磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35?36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進(jìn)行熒光素(FITC、PE)或biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。?碘化丙啶(propidineiodide,PI)一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。3)DNA片斷化檢測?瓊脂糖電泳180?200bp整數(shù)倍的寡核甘酸片段在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNAladder)。細(xì)胞經(jīng)處理后，采用常規(guī)方法分離提純DNA，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳和澳化乙咤染色，在凋亡細(xì)胞群中可觀察到典型的DNAladder。4)末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)---TUNEL法?脫氧核糖核昔酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatednickendlabeling,TUNEL)細(xì)胞凋亡中，染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的3’-OH末端。在脫氧核糖核甘酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下，將脫氧核糖核甘酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3‘OH-末端，可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。5)Caspase-3活性的檢測?WesternBlot：分析Procaspase-3，活化的Caspase-3及其對底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase，PARP]等的裂解。.興奮性毒性中，鈣離子通道開放后通過哪幾方面作用誘導(dǎo)神經(jīng)元死亡？答：胞漿內(nèi)鈣離子濃度升高會導(dǎo)致線粒體對鈣的攝取增加，從而導(dǎo)致ROS產(chǎn)生增加及ATP產(chǎn)生減少。因此，鈣離子是興奮性毒性的關(guān)鍵介導(dǎo)因子。鈣離子激活calpain，進(jìn)一步活化caspase級聯(lián)。鈣離子激活氧合酶(如參與花生四烯酸代謝級聯(lián)的氧合酶)干擾線粒體鈣和能量代謝，誘導(dǎo)膜脂質(zhì)過氧化。

鈣離子誘導(dǎo)促凋亡蛋白活化，如Bax,Par-4及p53,導(dǎo)致線粒體膜通透性改變，細(xì)胞色素c釋放，caspase活化。>MDARGlutamate鈣超載YDCCAMPA/KARc釋放，caspase活化。>MDARGlutamate鈣超載YDCCAMPA/KARMHRinitocliondnaProtases()\vj>eiiasesROS.簡述NMDA受體的生理學(xué)功能及其屬于慢受體的機(jī)理。答：1）生理功能：介導(dǎo)興奮性信息傳遞，增強(qiáng)突觸功能，促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶。2）慢受體機(jī)理：NMDA受體的主要特征是靜息電位時(shí)，NMDA被Mg以電壓依賴方式阻斷而失活。當(dāng)高頻刺激作用于纖維、突觸后膜去極化到一定程度時(shí)，鎂離子阻滯作用即可除去，NMDA受體才被激活，離子通道開放引起大量鈣離子內(nèi)流，介導(dǎo)持續(xù)、緩慢的去極化過程，引起下游一系列反應(yīng)。在突觸傳遞過程中，NMDA受體的激活需要非NMDA受體的參與，其中主要是AMPA受體的參與。當(dāng)刺激達(dá)到一定強(qiáng)度時(shí)，突觸前膜釋放的谷氨酸作用于AMPA受體，通過AMPA受體通道的離子流增強(qiáng)，使得鄰近NMDA受體的突觸后膜局部去極化，進(jìn)而解除鎂離子對通道的阻滯，NMDA受體才能被激活。此外NMDA受體還需要一個(gè)共同的激動劑甘氨酸存在方可產(chǎn)生功能。當(dāng)有甘氨酸結(jié)合到甘氨酸結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，通過變構(gòu)調(diào)控可以大大增強(qiáng)谷氨酸作用于NMDA受體后所產(chǎn)生的效應(yīng)。.試述類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎慢性滑膜炎中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常。答：滑膜細(xì)胞的功能活化被認(rèn)為是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)破壞的驅(qū)動者，炎癥細(xì)胞比如巨噬細(xì)胞，T細(xì)胞，B細(xì)胞釋放細(xì)胞因子如IL-1,TNF-a等-活化滑膜細(xì)胞內(nèi)信號通路如MAPK通路，NF-KB通路和JAK-STAT通路―滑膜細(xì)胞活化—分泌高水平促炎性細(xì)胞因子、化學(xué)趨化因子、基質(zhì)蛋白降解酶等-它們相互作用，持續(xù)刺激滑膜細(xì)胞，形成惡性循環(huán)，其功能在于過度增殖、刺激炎癥和降解軟骨基質(zhì)，最終破壞關(guān)節(jié)。.自身免疫性疾病的概念及其特征。答：1）自身免疫性疾病（Autoimmunedisease）:是原發(fā)的病理性自身免疫反應(yīng)。機(jī)體對自身成分發(fā)生的免疫應(yīng)答反應(yīng)達(dá)到一定強(qiáng)度，導(dǎo)致組織損傷和器官功能障礙所引發(fā)的疾病狀態(tài)2）特征：1、患者體內(nèi)可檢測到針對自身抗原成分的高效價(jià)特異性自身抗體和（或）自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞；2、自身抗體和（或）自身反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)對自身細(xì)胞或組織成分的獲得性免疫應(yīng)答，造成組織或功能障礙；3、病情的轉(zhuǎn)歸與自身免疫應(yīng)答強(qiáng)度密切相關(guān)；4、反復(fù)發(fā)作和慢性遷延；5、疾病的發(fā)生有遺傳傾向；6、部分自身免疫性疾病易發(fā)于女性。33.在自身免疫性受體病中產(chǎn)生的抗體分為哪些類型？針對每種類型抗體結(jié)合一種疾病說明其致病作用機(jī)制。答：分類1）刺激型抗體：可模擬信號分子或配體的作用，激活特定的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使靶細(xì)胞功能亢進(jìn)。如Graves病。2）阻斷型抗體：該抗體與受體結(jié)合后，可阻斷受體與配體的結(jié)合，從而阻斷受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的效應(yīng)，導(dǎo)致靶細(xì)胞功能低下。如橋本病、重癥肌無力。作用機(jī)制：1）Graves病血液中存在刺激型TSH受體抗體時(shí)，抗體與TSH受體結(jié)合能模擬TSH的作用，通過激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)甲狀腺素分泌和甲狀腺腺體生長，故表現(xiàn)出甲狀腺功能亢進(jìn)和甲狀腺腫大。2）橋本病血液中存在的是阻斷型15口受體抗體，抗體與TSH受體的結(jié)合減少了15口與受體的結(jié)合，減弱或消除了TSH的作用，從而抑制甲狀腺素分泌造成甲狀腺功能減退。34.熱休克蛋白的生理功能