第 五章 黃酮類化合物

（二）分類1、根據(jù)C3鏈結(jié)合狀態(tài)可將黃酮類化合物分為15個類型；（1）根據(jù)C3的氧化程度；有黃酮、黃酮醇，二氫黃酮和二氫黃酮醇。黃酮:

木犀草素現(xiàn)在是1頁\一共有153頁\編輯于星期一

黃苓素

榕堿異榕堿現(xiàn)在是2頁\一共有153頁\編輯于星期一

黃酮醇

槲皮素（3-O-云香糖：蘆?。舳潼S酮

法爾杜鵑素現(xiàn)在是3頁\一共有153頁\編輯于星期一

苦參醇A

現(xiàn)在是4頁\一共有153頁\編輯于星期一

二氫黃酮醇水飛蘚素現(xiàn)在是5頁\一共有153頁\編輯于星期一（2）根據(jù)B環(huán)的連接位置；若苯環(huán)連接在3-位上，為異黃酮，二氫異黃酮類。

異黃酮

大豆素7，4ˊ-二OH

葛根素7，4ˊ-二OH，8-O-glc

大豆苷4ˊ-OH，7-O-glc現(xiàn)在是6頁\一共有153頁\編輯于星期一異黃酮類(isoflavones)（2）根據(jù)B環(huán)的連接位置；若苯環(huán)連接在3-位上，為異黃酮，二氫異黃酮類。主要存在于豆科、鳶尾科等植物中。如葛根主要含有下列幾種異黃酮類成分。葛根總黃酮具有擴冠、增加冠脈流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有類似罌粟堿的解痙作用。大豆苷、葛根素及大豆素均能緩解高血壓患者的頭痛等癥狀?，F(xiàn)在是7頁\一共有153頁\編輯于星期一

二氫異黃酮紫檀素R=CH3高麗槐素R=H現(xiàn)在是8頁\一共有153頁\編輯于星期一

高異黃酮

現(xiàn)在是9頁\一共有153頁\編輯于星期一（3）根據(jù)C3鏈是否成環(huán)；若C3為開環(huán)的，稱為查爾酮，二氫查爾酮類。

查爾酮二氫查爾酮

紅花苷（無色）紅花苷（黃色）

醌式紅花苷（紅色）現(xiàn)在是10頁\一共有153頁\編輯于星期一（4）其它；

花色素類

花青素母核R=H矢車菊素

R=OH飛燕草素

現(xiàn)在是11頁\一共有153頁\編輯于星期一

兒茶素類

（-）表兒茶素（+）兒茶素（黃烷-3-醇類）現(xiàn)在是12頁\一共有153頁\編輯于星期一

黃烷-3，4-二醇類R1=OH，R2=H無色矢車菊素R1=R2=OH無色飛燕草R1=R2=H無色天竺葵素現(xiàn)在是13頁\一共有153頁\編輯于星期一

山酮類異芒果素現(xiàn)在是14頁\一共有153頁\編輯于星期一

橙酮和異橙酮類

紫鉚花素硫磺菊素現(xiàn)在是15頁\一共有153頁\編輯于星期一2、雙黃酮類；兩分子黃酮或二氫黃酮或黃酮—二氫黃酮通過C—C和C-O-C（醚鍵）聯(lián)接而成。（1）

5ˊ，8-雙芹菜素型，為兩分子黃酮通過5ˊ-位和8-位聯(lián)接。R1R2CH3H銀杏素

HH白果素

HCH3異銀杏素現(xiàn)在是16頁\一共有153頁\編輯于星期一（2）苯醚型；

檜黃素現(xiàn)在是17頁\一共有153頁\編輯于星期一（3）8，8ˊ-雙芹菜素型；

柏黃素

從以上分類可以看出，天然黃酮類是以C6-C3--C6為基本母體，常見的取代基；-OH，-OCH3，CH3，亞甲二氧基及萜類等。如苦參醇A；在C-8聯(lián)接一個單萜結(jié)構(gòu)，及一些結(jié)構(gòu)較復(fù)雜的；如水飛薊素，榕堿等?，F(xiàn)在是18頁\一共有153頁\編輯于星期一（3）黃酮苷類；

黃酮類化合物多以苷類形式存在，由糖的種類，數(shù)量，連接位置及方式，組成各種黃酮苷類化合物。

單糖類；D-葡萄糖，D-木糖，L-鼠李糖，L-阿拉伯糖及D-葡萄糖醛酸等。

雙糖類；槐糖（D-glcβ1-2glc）,龍膽二糖（D-glcβ1-6glc）,云香糖（rhα1-6glc）,新橙皮糖（rhα1-2glc）等。

三糖類；龍膽三糖，槐三糖等。

連接位置；一般說，分子中所有-OH都有成苷的可能，但，一般常見的多在3-，6-，3ˊ，4ˊ位上。有些為雙糖鏈苷等?，F(xiàn)在是19頁\一共有153頁\編輯于星期一

碳苷（C-苷）；如葛根素，即葡萄糖連接在碳原子上。

葛根素牡荊素現(xiàn)在是20頁\一共有153頁\編輯于星期一三、黃酮類化合物的生物活性

1.對心血管系統(tǒng)的作用Vp樣作用：蘆丁、橙皮苷等有Vp樣作用，能降低血管脆性及異常通透性，可用作防治高血壓及動脈硬化的輔助治療劑。擴冠作用：蘆丁、槲皮素、葛根素、人工合成的力可定。降血脂及膽固醇：木樨草素現(xiàn)在是21頁\一共有153頁\編輯于星期一2.

抗肝臟毒作用從水飛薊種子中得到的水飛薊素具有保肝作用，用于治療急、慢性肝炎、肝硬化及多種中毒性肝損傷。（+）-兒茶素(catergen)也可抗肝臟毒作用，治療脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝損傷?，F(xiàn)在是22頁\一共有153頁\編輯于星期一3.抗炎蘆丁及其衍生物羥乙基蘆丁、二氫槲皮素等具抗炎作用。

4.抗菌及抗病毒作用如木樨草素、黃芩苷、黃芩素

5.解痙作用異甘草素、大豆素：解除平滑肌痙攣；大豆苷、葛根素及葛根總黃酮可緩解高血壓患者的頭痛等癥狀；杜鵑素、川陳皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、羥基芫花素：止咳祛痰。現(xiàn)在是23頁\一共有153頁\編輯于星期一6.雌性激素樣作用大豆素(daidzein)等異黃酮具有雌性激素樣作用，可能與它們與己烯雌酚結(jié)構(gòu)類似。現(xiàn)在是24頁\一共有153頁\編輯于星期一7.清除人體自由基作用黃酮類化合物多具有酚羥基，易氧化成醌類而提供氫離子，故有顯著的抗氧特點。

另外還有降血脂、血糖，抗動脈粥樣硬化及抗癌抗突變等作用?，F(xiàn)在是25頁\一共有153頁\編輯于星期一第二節(jié)黃酮類化合物的性質(zhì)與顏色反應(yīng)

一、性狀1、黃酮類化合物多數(shù)為結(jié)晶性固體，少數(shù)（苷類）為無定形粉末。2、旋光性；C環(huán)（C3鏈）飽和的，如二氫黃酮，二氫黃酮醇，黃烷等，在C環(huán)上產(chǎn)生一個手性碳（1—2個），二氫黃酮的C2為手性碳，二氫黃酮醇的C2和C3兩個手性碳，因而具有旋光性。現(xiàn)在是26頁\一共有153頁\編輯于星期一3、顏色；黃酮，黃酮醇的顏色與分子中有無交叉共軛體系有關(guān)。

同時，助色團的數(shù)目及取代基的位置有關(guān)

一般說：（1）黃酮，黃酮醇及其苷類多顯灰黃至黃色。（2）查爾酮顯黃色至橙黃色。（3）二氫黃酮，二氫黃酮醇，異黃酮一般為無色，異黃酮顯微黃色?，F(xiàn)在是27頁\一共有153頁\編輯于星期一

以上顏色深淺的不同，主要取決于分子中是否存在交叉共軛體系及助色團（-OH，-OCH3）的數(shù)量。以黃酮來說；色原酮本無色，但在2-位引入苯基后，產(chǎn)生交叉共軛體系，通過電子轉(zhuǎn)移，重排，使共軛鏈延長而顯色。現(xiàn)在是28頁\一共有153頁\編輯于星期一（4）花色素及其苷的顏色隨PH而變化，當PH<7時，（弱酸性）顯紅色，PH=8.5時，顯紫色，PH>8.5時，顯蘭色?，F(xiàn)在是29頁\一共有153頁\編輯于星期一二、溶解度

與其它化合物一樣，黃酮類化合物的溶解度也受其結(jié)構(gòu)及結(jié)合狀態(tài)不同而有很大差異，如取代基的種類，數(shù)量不同，均有很大影響，一般情況下，溶解順序為；花色素>二氫黃酮>黃酮醇現(xiàn)在是30頁\一共有153頁\編輯于星期一1、結(jié)構(gòu)影響（1）立體因素：黃酮，黃酮醇，查爾酮等為平面型分子，雖然有酚-OH，但分子堆砌緊密，分子間引力大，不易水化，因而難溶于水。而二氫黃酮，查爾酮等平面型分子等，因C環(huán)飽和，取椅式型象，為為非平面型分子排列不緊密，有利于水分子進入，溶解度較大?，F(xiàn)在是31頁\一共有153頁\編輯于星期一。現(xiàn)在是32頁\一共有153頁\編輯于星期一（2）引入-OH即增加了極性基團，將增大水中溶解度，引入-OH越多，增加越大，若甲基化后，相當于減少了極性基團，則使溶解度降低，相反，卻增大了在有機溶劑中的溶解度，如，川陳皮素（5，6，7，8，3ˊ，4ˊ-六甲氧基），可溶于石油醚。（3）花色素，溶解度較大，雖為平面型結(jié)構(gòu)，但因以離子狀態(tài)存在，有普通鹽的性質(zhì)，在水中電離成所以在水中較易溶解?，F(xiàn)在是33頁\一共有153頁\編輯于星期一2、結(jié)合狀態(tài)；

一般游離苷元難溶于水或不溶于水，而易溶于乙醇，乙酸乙酯，乙醚等有機溶劑及稀堿溶液中，是因為分子中的酚-OH具有酸性，可與堿成鹽。但黃酮類化合物一般多具有酚-OH，具有一定的極性，所以，一般不溶于石油醚等很低極性的溶劑。苷；結(jié)合成苷后，由于極性基團糖的引入，水溶性相應(yīng)增大，糖鏈增長，溶解度也隨之增大，一般易溶于水，醇等強極性溶劑中，而在低極性溶劑，如苯，氯仿等中，溶解度很小或不溶解。現(xiàn)在是34頁\一共有153頁\編輯于星期一

但糖的結(jié)合位置對水中的溶解度也有一定的影響，4ˊ或7ˊ-O苷的溶解度就小于3ˊ-O苷，原因是結(jié)合在極性強的-OH上，將使分子少了一個較強的極性基團，例；棉黃素；C5或C3-OH與C=O形成氫鍵，對溶解度供獻不大，結(jié)合成苷后，對原-OH對溶解度影響不大，相反，若結(jié)合在C7或C4-OH是，影響就很大，形成苷后，該-OH的原有的溶解度較大的貢獻消失，所以C7-O-苷的溶解度小于C3-O-苷?，F(xiàn)在是35頁\一共有153頁\編輯于星期一三、酸堿性

（一）酸性黃酮類化合物因分子中多有酚-OH，顯弱酸性，可溶于堿性水溶液，吡啶等。1、酚-OH數(shù)目越多，其酸性越強。2、位置；7-OH，4ˊ-OH與C=O交叉共軛，酸性最強。3或5-OH與C=O有氫鍵締合，酸性較弱，其酸性強弱順序為：

7，4ˊ-二-OH>7或4ˊ-OH>一般酚-OH>5-OHNaCHO3Na2CO3NaOH現(xiàn)在是36頁\一共有153頁\編輯于星期一（二）堿性氧原子的性質(zhì)C環(huán)（γ-吡喃酮環(huán)）上的1-位氧原子，有末共用電子對，有微弱的堿性，可與強酸形成羊鹽，該羊鹽極不穩(wěn)定，加水即時分解，且生成的羊鹽常帶有特殊顏色，可用于鑒別。如；現(xiàn)在是37頁\一共有153頁\編輯于星期一四、顯色反應(yīng)

（一）還原試驗

1、HCl-Mg反應(yīng)（鹽酸-鎂粉反應(yīng)）；是鑒別黃酮類化合物的常用方法，多數(shù)黃酮，黃酮醇，二氫黃酮，二氫黃酮醇顯橙紅—蘭色，一般說，-OH多，或B環(huán)上有-OH，OCH3+顏色加深。實際工作中，要注意的是，反應(yīng)陰性時，即可證實沒有黃酮類，但陽性時也不能絕對確定含有黃酮，尤其有花色素，在酸性條件下，顯紅色，干擾反應(yīng)，應(yīng)先作對照，即取樣品溶液，先酸化（濃鹽酸）觀察。現(xiàn)在是38頁\一共有153頁\編輯于星期一

查耳酮、橙酮、兒茶素類則不反應(yīng)。花色素及部分查耳酮、橙酮等在濃鹽酸酸性條件下也會發(fā)生色變，故須先做一對照。現(xiàn)在是39頁\一共有153頁\編輯于星期一2、NaBH4反應(yīng)

與二氫黃酮類反應(yīng)生成紅--橙色，其它無此反應(yīng)，可用作二氫黃酮的鑒別反應(yīng)。若-OH，-OCH3數(shù)目增加，顏色加深。

操作：取樣品1-2mg溶于甲醇，加NaBH410mg，然后加1%HCl，呈紅—紫色，可在紙上進行。此外，尚有一些反應(yīng)，也常有于黃酮類鑒定反應(yīng)，如鹽酸鋅粉反應(yīng)等?，F(xiàn)在是40頁\一共有153頁\編輯于星期一（二）金屬鹽試劑絡(luò)合反應(yīng)

黃酮類化合物中含有氧原子，如：-OH，C=O，具有末共用電子對，可與具有空軌道的金屬離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，但要形成較穩(wěn)定的絡(luò)合物，需要這些含氧基團有適當位置，具有下列結(jié)構(gòu)的；可與金屬鹽類產(chǎn)生有色絡(luò)合物，常用的金屬鹽類有鋁鹽，鉛鹽，鎂鹽等?，F(xiàn)在是41頁\一共有153頁\編輯于星期一1、鋁鹽

鋁鹽可與具有上述結(jié)構(gòu)的黃酮產(chǎn)生絡(luò)合物，顯黃色，紫外燈下顯熒光，一般用1%AlCl3溶液。

2、鉛鹽常用的有醋酸鉛（Pb(Ac)2）和堿式醋酸鉛（Pb(OH)(Ac)），1%濃度，與黃酮類反應(yīng)產(chǎn)生黃---紅色沉淀。

Pb(Ac)2；與含上述結(jié)構(gòu)（即鄰-二酚-OH，C5-OH或C3-OH）的化合物反應(yīng)，即生成沉淀。

Pb()H)(Ac);沉淀范圍更廣，除上述結(jié)構(gòu)外，含一般酚-OH者都能與之沉淀，此性質(zhì)可用于鑒定，甚至可用于分離純化。可以說；與Pb(Ac)2產(chǎn)生沉淀，就可能含有上述結(jié)構(gòu)，反之則無。若與Pb(OH)(Ac)沉淀，而不與Pb(Ac)2可能不含上述結(jié)構(gòu)，而含有一般酚-OH?，F(xiàn)在是42頁\一共有153頁\編輯于星期一

例：豆科植物葛根，所含異黃酮，因C3被苯取代，因此，不含C3-OH，也不含上述結(jié)構(gòu)，則不與中性醋酸鉛沉淀，利用這下性質(zhì)，可于分離精制。即先于提取液中加中性醋酸鉛，沉淀雜質(zhì)，再用堿性醋酸鉛沉淀異黃酮，然后，脫鉛后即得到較純的化合物。

現(xiàn)在是43頁\一共有153頁\編輯于星期一3、鋯鹽，2%甲醇溶液，與具有上述前兩種結(jié)構(gòu)者，即C5-OH，或C3-OH的黃酮類，產(chǎn)生有色絡(luò)合物。

由于C5-OH和C3-OH位置不同，所形成的絡(luò)合物穩(wěn)定性也不同，（C3-OH>C5-OH），（二氫黃酮醇除外，因其C3-OH為醇-OH），當于反應(yīng)液中加入枸緣酸后，由C5-OH形成的絡(luò)合物分解，顏色退去，而C3-OH不退色，由此可區(qū)別C3-OH和C5-OH黃酮類。反應(yīng)可在紙上進行，絡(luò)合物一般呈黃綠色，并有熒光。現(xiàn)在是44頁\一共有153頁\編輯于星期一

現(xiàn)在是45頁\一共有153頁\編輯于星期一4、鎂鹽；主要用于區(qū)別二氫黃酮及二氫

黃酮醇與黃酮，黃酮醇。二氫黃酮及二氫黃酮醇，顯天蘭色熒光。黃酮，黃酮醇和異黃酮顯黃，橙黃，褐色。此反應(yīng)常在紙上進行。5、氯化鍶反應(yīng)；主要與具有鄰二酚-OH結(jié)構(gòu)的黃酮類反應(yīng)，與具有鄰二酚-OH的黃酮類化合物產(chǎn)生綠色—棕色—黑色沉淀。6、三氯化鐵反應(yīng)（FeCl3）；不是黃酮類特有反應(yīng)，三氯化鐵與含酚-OH的化合物，均有顏色反應(yīng)。黃酮類化合物多含酚-OH，顯色，不能用為鑒別?，F(xiàn)在是46頁\一共有153頁\編輯于星期一

（三）硼酸顯色反應(yīng)

硼酸只與含有結(jié)構(gòu)的黃酮類反應(yīng)，產(chǎn)生亮黃色，顯然，只有C5-OH或者2ˊ-OH查爾酮可有反應(yīng)，作為該兩類成份的的鑒別有價值，與其它類區(qū)別。

一般:

枸緣酸丙酮存在下，只顯黃色，無熒光。草酸存在下，黃色帶有綠色熒光?，F(xiàn)在是47頁\一共有153頁\編輯于星期一四、堿性試劑顯色反應(yīng)1、二氫黃酮類在堿性條件下開環(huán)生成查爾酮，即呈棕色--黃色。2、黃酮醇類在堿性下，先呈黃色，通入空氣后，顯棕色。3、分子中有鄰二酚-OH或3，4ˊ-二OH時，堿性條件下不穩(wěn)定，很快被氧化，由黃色變深紅，再轉(zhuǎn)成綠棕色?，F(xiàn)在是48頁\一共有153頁\編輯于星期一第三節(jié)黃酮類化合物的提取分離一、提取在植物的花，葉，果，樹皮等組織中，黃酮類一般以苷類形式存在，而在木質(zhì)部則多以苷元形式存在。因此在提取時，要根據(jù)原料情況及提取目標，選擇適當溶劑，才能獲得滿意的結(jié)果。

現(xiàn)在是49頁\一共有153頁\編輯于星期一1、苷類及極性大的苷元提取，一般常選用丙酮，乙醇，甲醇，乙酸乙酯，水。最常用的是醇或醇—水。

方法；可用溫浸，回流，水煎煮。對于多糖苷，則可用沸水提取，為防止酶水解，一般應(yīng)先破壞酶，花色素在植物中一般是以鹽的形式存在，提取時，先加少量的酸，如1%（HCl），使花色素游離出來，再用水提取。對于含脂肪較多的原料，也可先用石油醚脫脂，除去雜質(zhì)。甲醇，乙醇穿透力強，提取效果好，但甲醇有毒，所以習(xí)慣上，常用乙醇提取，如下列流程。乙醇提取物→石油醚除雜質(zhì)→乙醚提取苷元→乙酸乙酯提取苷?，F(xiàn)在是50頁\一共有153頁\編輯于星期一2、苷元的提取；常用氯仿、乙醚、苯、乙酸乙酯作溶劑。

總之，提取方法多種多樣，實際工作中，應(yīng)根據(jù)具體情況，設(shè)計合理的方法?，F(xiàn)在是51頁\一共有153頁\編輯于星期一

（一）溶劑萃取法

一般是提取液先用石油醚，氯仿，乙酸乙酯，丁醇順次萃取；現(xiàn)在是52頁\一共有153頁\編輯于星期一

提取液

石油醚萃取

石油醚層水層（油脂，葉綠素）氯仿萃取

氯仿層水層（含苷元）乙酸乙酯萃取

水層乙酸乙酯層（含苷）現(xiàn)在是53頁\一共有153頁\編輯于星期一

對于水提取物，含雜質(zhì)較多，萃取時易乳化，可先用幾倍量的乙醇沉淀雜質(zhì)，（主要是蛋白質(zhì)，多糖等），回收乙醇后，加適當水，再按上述方法萃取，對于一些含量高的黃酮類，往往通過上述萃取，即可得到較純的黃酮類化合物。

現(xiàn)在是54頁\一共有153頁\編輯于星期一

（二）黃酮類化合物由于分子中多含有酚-OH，顯弱酸性，可溶于堿液中，但難溶于酸水中，故可以用堿提取，酸沉淀法。當于堿提取液中加入酸時，黃酮類即可析出沉淀，但要注意的是；堿性過強會使黃酮破壞。

一般多選用氫氧化鈣（Ca(OH)2）法，其優(yōu)點是；（1）堿性中等，較適合。（2）

可與多糖，粘液質(zhì)，樹膠等產(chǎn)生沉淀，達到除去雜質(zhì)的目的。如蘆丁的提?。含F(xiàn)在是55頁\一共有153頁\編輯于星期一

槐花米

水煎煮Ca(OH)2調(diào)PH8—9，趁熱過濾提取液

60--70℃，調(diào)PH=5

水溶液沉淀水洗，60℃干燥粗蘆丁水重結(jié)晶蘆丁純品現(xiàn)在是56頁\一共有153頁\編輯于星期一

注意：（1）堿性不宜過強，尤其在加熱時易破壞黃酮。（2）酸沉淀時，酸性不宜過強，否則，黃酮形成羊鹽而損失。（3）用Ca(OH)2,可沉淀雜質(zhì)，有利于純化。

現(xiàn)在是57頁\一共有153頁\編輯于星期一（三）活性炭

主要用于苷類的精制。分兩步：1、吸附，通常是在甲醇提取液中，分次加入活性炭，不斷攪拌下，加至提取液不再顯黃酮反應(yīng)為止。2、洗脫；己吸附黃酮的活性炭，依次用沸甲醇。沸水，7%酚水，15%酚水洗脫，對各部分進行定性檢查，對含黃酮的部分，除去醇或酚，水溶液濃縮，即可得到較純的黃酮。通過上述方法，雖有時可獲得部分較純的黃酮，但多數(shù)情況睛，大多數(shù)黃酮僅靠上述方法尚不能得到有較分離，要想更好地分離提取物中的黃酮，尚需進一步分離?，F(xiàn)在是58頁\一共有153頁\編輯于星期一二、分離

分離的主要依據(jù)：1、極性大小不同；選用吸附層析或分配層析，極性大的用分配層析，極性小的用吸附層析。如極性大的用氧化鋁，吸附太強，不易洗脫。2、根據(jù)酸性不同，可采用PH梯度法。3、分子大小不同，用葡聚糖凝膠進行分離。分子中功能基團不同，利用與金屬鹽絡(luò)合能力不同的特點進行分離?，F(xiàn)在是59頁\一共有153頁\編輯于星期一

較常用的方法：（一）柱層析法，常用于分離黃酮類化合物的吸附劑，主要有硅膠，聚酰胺和纖維素，此外也有用氧化鋁，氧化鎂及硅燥土等。1、硅膠柱層析是應(yīng)用最廣泛的吸附劑之一，對分離黃酮類化合物來說，主要用于異黃酮，二氫黃酮和二氫黃酮醇及一些極性較小的黃酮類，如高度甲基化的黃酮。對于少數(shù)極性較大的黃酮類，有時則需要加水去活化。硅膠加水后，則有分配和吸附兩種性質(zhì)?，F(xiàn)在是60頁\一共有153頁\編輯于星期一2、聚酰胺柱層析

取酰胺對分離黃酮類化合物，是一種較為理想的吸附劑。與纖維素粉相比，其具有吸附容量大，分辨能力強的特點。

其吸附主要是通過聚酰胺中的C=O與黃酮分子中的酚-OH及氨基與黃酮中的C=O形成氫鍵而吸附的，其吸附強弱取決于：現(xiàn)在是61頁\一共有153頁\編輯于星期一（1）黃酮類與聚酰胺形成氫鍵的能力大不同，如分子中的酚-OH的數(shù)目，位置等。（2）洗脫劑與聚酰胺或洗脫劑與黃酮類形成氫鍵的能力越強，洗脫力越大。如水和甲醇，二者中甲醇與聚酰胺形成氫鍵盤的能力比水強，洗脫力就大于水?，F(xiàn)在是62頁\一共有153頁\編輯于星期一

黃酮類在聚酰胺層析中有以下幾個規(guī)律性：

苷元相同，三糖苷>雙糖苷>單糖苷>苷元母核上酚-OH增加，洗脫力相應(yīng)減慢。無酚-OH>一個酚-OH>二個酚-OH>三個酚-OH...

酚-OH數(shù)目相同，其位置不同不有影響。由于分子內(nèi)氫鍵形成，如5-OH，3-OH，鄰二-OH。所以，洗脫力為鄰二酚-OH>對二酚-OH。不同類型的黃酮，先后洗脫順序為：異黃酮>二氫黃酮>黃酮>黃酮醇分子中芳核，共軛雙鍵多的吸附力強，如查爾酮，難洗脫。現(xiàn)在是63頁\一共有153頁\編輯于星期一3、葡聚糖凝膠；

sephadexG和HL-20型。

葡聚糖凝膠分離黃酮類主要有兩種形式：（1）分子篩；以分子量大小來分離，主要分離黃酮苷，分子量越大，洗脫速度越快。以Ve為總洗脫體積，Vo為空柱體積，則Ve/Vo值可以說明化合物的洗脫能力。（2）分離苷元，主要靠吸附作用，一般說，游離酚-OH多，吸附力強，Ve/Vo大，洗脫難。現(xiàn)在是64頁\一共有153頁\編輯于星期一（二)梯度PH萃取法

主要根據(jù)黃酮分子中的酚-OH數(shù)目和位置不同，其酸性也不同的性質(zhì)，可用堿性溶劑萃取，達到分離目的?！舨煌琍H溶液中，用有機溶劑萃取?！魪挠袡C溶劑中，用不同PH溶液萃取。一般情況下，7-OH和4ˊ-OH酸性較強，當分子中同時存在時，用NaHCO3萃取。當分子中只有7-OH或4ˊ-OH時，用Na2CO3萃取，其它酚-OH需要用不同濃度NaOH溶液萃取。現(xiàn)在是65頁\一共有153頁\編輯于星期一（三）根據(jù)分子中某些特殊官能團進

行分離

黃酮類化合物用于分離作用的官能團，主要是分子中的鄰二酚-OH與PbAc2產(chǎn)生沉淀，與不具該結(jié)構(gòu)的分離。鉛鹽的用途一是除雜質(zhì)，也是分離精制中常用的。實際分離中，硼酸也一種常用試劑。具有鄰二酚-OH的黃酮與硼酸形成的絡(luò)合物易溶于水，借此可與其它成份分離?，F(xiàn)在是66頁\一共有153頁\編輯于星期一

實例1：從檸檬果皮中分離降壓有效成份：

檸檬果皮（2400g）攪碎成勻漿，熱水提取濾液濃縮至小體積，加三倍量乙醇,靜止過夜，過濾，濾液濃縮，冷凍干燥水提取物（183g），取179g，用500ml水溶解，過濾濾液現(xiàn)在是67頁\一共有153頁\編輯于星期一

濾液

依次用Hexane,n-BuOH提取

Hexane提取物n-BuOH（38.5g）水溶性部份（3．6g）溶于1500ml水中，(134.5g)

加220gPb(OH)(Ac)

飽和溶液黃色鉛鹽沉淀加20gNaHCO3飽和水溶，攪拌1小時，靜止，過濾濾液現(xiàn)在是68頁\一共有153頁\編輯于星期一

濾液6mol/LHCl調(diào)PH5.3,n-BuOH提取，（500ml×5）

水層n-BuOH提取物凝膠過濾

FrA-HFrI-PFrO-K(PH5酸水)（PH7水洗部份）PH9堿水洗脫部份洗脫部份)

各部份分別進行反復(fù)硅膠柱層析，化合物L(fēng)-1–L11現(xiàn)在是69頁\一共有153頁\編輯于星期一第四節(jié)黃酮類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)測定

黃酮類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)測定常用的方法有：1、化學(xué)法；定性，測定理化常數(shù)，化學(xué)降解，化學(xué)相關(guān)。2、層析法，薄層，常用硅膠，紙層，聚酰胺薄膜。3、光譜法；質(zhì)譜；分子式測定，及主要碎片可提供結(jié)構(gòu)信息。UV光譜；通過測定其甲醇中的UV光譜及各種診斷試劑。IR光譜；提供一些起官能團信息。NMR光譜；1H-NMR，13C-NMR，2D-NMR。4、文獻對照；己知化合物可對照標準光譜或文獻數(shù)據(jù)?，F(xiàn)在是70頁\一共有153頁\編輯于星期一

未知化合物要通過與文獻相關(guān)化合物對照，常可得出正確的結(jié)構(gòu)信息。

對于一些結(jié)構(gòu)復(fù)雜的化合物，往往還需要進行化學(xué)降解，化學(xué)相關(guān)等方法，如苷類的水解，乙?；?，甲基化等。必要時還需進行化學(xué)全合成。

現(xiàn)在是71頁\一共有153頁\編輯于星期一一、層析法在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用（一）紙層析紙層析廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離鑒定中，同樣也適用于分離和鑒定各種黃酮類及其苷。對于混合物來說，常用雙向?qū)游龇?。展開劑現(xiàn)在是72頁\一共有153頁\編輯于星期一1、溶劑選擇；

對于分離黃酮類來說，所用溶劑大致可分為兩大類。（1）醇性溶劑：常用：

n-BuOH-HOAc-H2O(4:1:5上層)，BAW，

t-BuOH-Hac-H2O(3:1:1),TBA,

水飽和的n-BuOH。（2）水性溶劑：常用，水，2—6%HAc，3%NaCl,HAc-HCl-H2O(30:3:10)等。雙向?qū)游鰰r可先用醇性溶劑展開，再用水性溶劑展開。對于苷元來說，一般選用醇性溶劑，或極性更低的溶劑。如苯-HAc-H2O（125：72：3）等?；ㄉ栈蜍赵?；多以鹽的形式存在，可用含HCl或HAc的溶劑展開。現(xiàn)在是73頁\一共有153頁\編輯于星期一2、顯色：黃酮類多具有顏色，直接觀察斑點。熒光，在紫外燈下觀察。對一些顏色或熒光都較弱的，則需要顯色，常用的顯色劑有5%FeCl3乙醇溶液，2%AlCl3甲醇溶，1%FeCl3-1%K3Fe_[(CH)6]3水溶液等。以氨處理后也常發(fā)生顏色變化。現(xiàn)在是74頁\一共有153頁\編輯于星期一3、紙層析（PPC）時，Rf值與結(jié)構(gòu)的關(guān)系：（1）不同類型的苷元：平面型分子，黃酮，黃酮醇，查爾酮等，用水性溶劑展開（如3--5%HAc，Rf值<.0.02，幾乎在原點不動。非平面型分子，二氫黃酮類，二氫黃酮醇類等，親水性較強，故用水性溶劑展開時，Rf較大，0.1—0.3。（2）同類型苷元分子中羥基增多，極性增大，在醇性溶劑展開時，Rf值越小。反之，Rf增大。分子中的-OH一但甲基化，極性降低，在醇性溶劑展開時，Rf值增大，但3-OH，5-OH除外，因這兩個羥基有氫鍵締合，對分子極性影響不大。甲基化后變化不明顯。現(xiàn)在是75頁\一共有153頁\編輯于星期一（3）苷化后，極性增大：在醇性溶劑展開時，Rf值降低，次序為：Rf值：苷>單糖苷>雙糖苷。苷元>0.7，苷<0.7

在用水性溶劑展開時，與醇性溶劑相反，苷元幾乎在原點，苷的Rf值則大于0.5，并隨糖鏈增加而加大。另外糖結(jié)合的位置也有影響?，F(xiàn)在是76頁\一共有153頁\編輯于星期一（二）薄層析（TLC）；吸附薄層；常用的吸附劑為硅膠，其次為纖維素。1、吸附薄層：硅膠G，（或CMC-Na作粘合劑）常用的溶劑：甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5：4：1），根據(jù)分離情況，還可以調(diào)整甲苯、甲酸的比例，還有苯-甲醇（95：5）等溶劑。分離苷元的甲醚等衍生物等中性成份，展開劑的極性可進一步降低，如苯：丙酮（9：1）等?，F(xiàn)在是77頁\一共有153頁\編輯于星期一2、聚酰胺薄層，

適用范圍較廣，由于氫健形成，吸附力增大，故要加大洗脫劑的極性。實際中，根據(jù)具體情況，通常選擇不同濃度的乙醇，如：乙醇：水（3：2），水飽和的n-BuOH-HAc（100：1）、（100：2）等。以上所講的溶劑系統(tǒng)多為一些經(jīng)驗，只能參考，在具體工作中，還要視具體情況而定?，F(xiàn)在是78頁\一共有153頁\編輯于星期一二、紫外光譜在黃酮類化合物結(jié)

構(gòu)測定中的應(yīng)用

一般程序如下：1、測定樣品在甲醇溶液中的紫外光譜。2、于樣品溶液中加入各種診斷試劑，測定其UV光譜，常用的診治斷試劑有NaOMe,NaOAc,醋酸鈉/硼酸，AlCl3和AlCl3/HCl等。3、苷類樣品，則可進行水解，或甲基化后水解再測苷元或衍生物的UV光譜?，F(xiàn)在是79頁\一共有153頁\編輯于星期一

（一）黃酮類化合物在甲醇溶液中

的UV光譜苯甲酰部分黃酮（R=H）肉桂酰部分帶II；220-280nm黃酮醇（R=OH）帶I；300-400nm

現(xiàn)在是80頁\一共有153頁\編輯于星期一1、黃酮與黃酮醇

兩者圖形相近，但帶I位置不同，帶I：黃酮類：304-350nm,

黃酮醇：352-385nm（3-OH游離）

328-357（3-OH取代）。帶I受母核上所有含氧基團影響，母核上含氧基團數(shù)目增多，帶I向紅移，尤其4ˊ位引入-OH，紅移更大些。見下表；現(xiàn)在是81頁\一共有153頁\編輯于星期一

化合物（λmaxHOMe）帶I3,5,7-三羥基黃酮（高良姜素）3503,5,7，4ˊ-；四羥基黃酮（山奈酚）3673,5,7，3ˊ，4ˊ-五羥基黃酮3703,5,7，3ˊ，4ˊ，5ˊ-六羥基黃酮374

現(xiàn)在是82頁\一共有153頁\編輯于星期一

帶II；主要受A環(huán)氧取代影響，B環(huán)影響很小，但影響其峰形，當B環(huán)僅有4ˊ-OH時，帶II呈單峰，當B環(huán)上有3ˊ，4ˊ-二OH時，帶II呈雙峰，可根所帶II的峰形初步推測B環(huán)上取代情況。

現(xiàn)在是83頁\一共有153頁\編輯于星期一

化合物帶II

（λmaxHOMe）

7-羥基黃酮2505-羥基黃酮2525-羥基黃酮及5，7-二羥基黃酮2625,6，7-三羥基黃酮2745,7，8-三羥基黃酮281現(xiàn)在是84頁\一共有153頁\編輯于星期一

甲基化和苷化后，相應(yīng)的吸收帶將紫移，尤其帶I。

乙?；?，原-OH對光譜的影響消失，以此可以判斷-OCH3取代位置，例：某黃酮具有5，7-二羥基，另有一-OCH3位置末確定，可先將其乙?；c己知光譜的比較，若與己知-OCH3在4ˊ位的光譜一致，則可確定該–OCH3在4ˊ位?，F(xiàn)在是85頁\一共有153頁\編輯于星期一2、查爾酮和橙酮：共同特征；帶I很

強，為主峰，帶II很弱，為次強峰。

圖：查爾酮：帶I；340—390nm，帶II；220—270nm.

有時分裂成Ia;340--390nm，Ib;300—320nm。引入氧取代基，同樣帶I紅移，其中2ˊ-OH影響最大，當2ˊ-OH甲基化時，帶I紫移15—20nm，其它的影響不大。但6，7-二OH中的7-OH除外，若該7-OH取代時，將紫移18nm，現(xiàn)在是86頁\一共有153頁\編輯于星期一3、異黃酮，二氫黃酮及二氫黃酮醇類由于B環(huán)桂皮酰共軛系統(tǒng)消失，帶I很弱，（圖）其主要吸收帶為苯甲酰系統(tǒng)引起的吸收峰，帶II，而帶I常在主峰的一側(cè)呈一肩峰，（圖）。主峰位置：異黃酮：245—270nm，二氫黃酮和二氫黃酮醇；270—295，（區(qū)別）現(xiàn)在是87頁\一共有153頁\編輯于星期一（二）加入診斷試劑引起的位移在結(jié)構(gòu)測定中的意義1、加入甲醇鈉引起的位移（1）黃酮及黃酮醇類加入甲醇鈉（強堿），黃酮分子中所有-OH均可游離，將引起相應(yīng)的吸收帶大幅度紅移。

4ˊ-OH，帶I紅移40—60nm,3-OH,帶I紅移50—60nm,7-OH游離，在320—330nm之間有吸收。存在對堿敏感系統(tǒng)時（3，4ˊ-二-OH，3，3ˊ，4ˊ-三OH,5,6,7-三-OH，5，7，8-三OH，3ˊ，4ˊ，5ˊ-三-OH等），吸收帶將隨處理時間處長而衰退。現(xiàn)在是88頁\一共有153頁\編輯于星期一（2）異黃酮類，二氫黃酮，二氫

黃酮醇類▲主峰不紅移，示A環(huán)上無-OH取代?！?，7-二OH，主峰恒定地向紅移35—

40nm?！鴮A敏感系統(tǒng)同上?！恍┒潼S類，在甲醇鈉堿性下，轉(zhuǎn)變成查爾酮，帶I移至400nm處?，F(xiàn)在是89頁\一共有153頁\編輯于星期一（3）查爾酮和橙酮

查爾酮：帶I：▲紅移60—100nm，強度相應(yīng)加強，示有4ˊ-OH?！t移60—100nm強度不增加，示有2ˊ-OH或4ˊ-OH。（無4-OH）?！t移40—50nm，示有2ˊ-OH，或4-OR。（使由4ˊ-OH引起的紅移減少）橙酮：帶I；▲紅移80—95nm，強度增加，示有4ˊ-OH。▲紅移60—70nm，示有6ˊ-OH（若分中同時存在6，4ˊ-二OH，或6ˊ-OH，4-OH紅移還要小。

現(xiàn)在是90頁\一共有153頁\編輯于星期一2、醋酸鈉：

弱堿，只能使7-OH游離，而引起帶II紅移5—20nm，帶I在長波一測有一肩峰，示4ˊ-OH，但無3-，及/或7-OH?，F(xiàn)在是91頁\一共有153頁\編輯于星期一（1）黃酮及黃酮醇▲7-OH游離，帶II紅移5—20nm（若同時有6，或8-O取代時，則上述紅移幅度降低。▲4ˊ-OH，如有7-OH被取代，則其帶I紅移比在NaOMe中稍大，或相同。▲堿敏感系統(tǒng)存在時，吸收帶將隨處理時間處長而衰退?，F(xiàn)在是92頁\一共有153頁\編輯于星期一（2）異黃酮，二氫黃酮，二氫

黃酮醇▲7-OH游，主峰紅移6—20nm（7-OH異黃酮）。▲紅移35nm（5，7-二-OH二氫黃酮，二氫黃酮醇）現(xiàn)在是93頁\一共有153頁\編輯于星期一（3）查爾酮和橙酮4ˊ-OH及/或4-OH查爾酮和4ˊ-OH及或6-OH時，帶I紅移或在長波方向顯一肩峰。

3、醋酸鈉-硼酸；分子中有鄰二酚-OH時，在堿性條件下，與硼酸形成螯合物，引起吸收帶紅移。A環(huán)或B環(huán)有鄰二酚-OH，將引起相應(yīng)的吸收帶紅移。

現(xiàn)在是94頁\一共有153頁\編輯于星期一

（1）黃酮及黃酮醇類帶I紅移12—30nm示B環(huán)有鄰二酚-OH。帶II紅移5—10nm示B環(huán)有鄰二酚-OH。（不包括5，6-位）（2）異黃酮，二氫黃酮，二氫黃酮醇A環(huán)有鄰二酚-OH，主峰紅移10—15nm。（3）橙酮和查爾酮B環(huán)上有鄰二酚-OH，主峰紅移8—36nm，A環(huán)有鄰二酚-OH影響較小。現(xiàn)在是95頁\一共有153頁\編輯于星期一4、AlCl3及AlCl3/HCl：

分子中有鄰二酚-OH；3-OH，4C=O，或5-OH，4C=O時，可與AlCl3絡(luò)合，引起吸收帶紅移。

現(xiàn)在是96頁\一共有153頁\編輯于星期一

不同-OH形成的絡(luò)合物穩(wěn)定性也不同，順序如下：3-OH>5-OH>5-OH（二氫黃酮）>鄰二酚-OH>3-OH（二氫黃酮）由此順序可以看出，鄰二酚-OH和二氫黃酮醇3-OH形成的絡(luò)合物很不穩(wěn)定，加少量HCl即可分解，則由其產(chǎn)生的位移消失。絡(luò)合物形成，若分子中同時存在3-OH，4C=O和5-OH，4C=O時，則優(yōu)先形成3-OH，4C=O絡(luò)合物?，F(xiàn)在是97頁\一共有153頁\編輯于星期一

以上性質(zhì)在AlCl3及AlCl3/HCl中的UV光譜將有如下規(guī)律：（1）有5-OH，無游離3-OH時，帶I紅移33—55nm。（2）有3-OH，或同時還有5-OH時，帶I紅移50—60nm。（3）B環(huán)上有鄰二酚-OH時，帶I在AlCl3中要比在AlCl3/HCl中紅移30—40nm，若A，B環(huán)上同時有鄰二酚-OH時，這種位移將增加20—25nm。上述所述為一經(jīng)驗規(guī)律，在黃酮類藥合物結(jié)構(gòu)測定中相當有用。現(xiàn)在是98頁\一共有153頁\編輯于星期一三、1H-NMR光譜在黃酮類化合物

結(jié)構(gòu)測定中的核磁共振氫譜，在鑒定黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中，是一種重要方法。是一種不可缺少的方法，過去由于受到溶劑等因素限制，使其應(yīng)用范圍受到限制。近年來，核磁共振技術(shù)發(fā)展極為迅速，如600兆超導(dǎo)核磁共振儀，所用樣品越來越小，使這一技術(shù)變得越來直重要。測定核磁共振光譜，所用的溶劑需是氘代試劑，如氘代氯仿，重水，氘代甲醇等?，F(xiàn)在是99頁\一共有153頁\編輯于星期一

氘代試劑很貴，有時也將黃酮類作成三甲基硅醚衍生物，有如下優(yōu)點：1、可溶于CCl4中，而不需要昂貴的氘代試劑。2、無干擾信號。3、容易回收（用含水甲醇處理）。4、可幫助了解C-3，C-6，C-8位的取代情況。5、容易轉(zhuǎn)化成甲醚衍生物。現(xiàn)在是100頁\一共有153頁\編輯于星期一

黃酮化合物的質(zhì)子，可分成A環(huán)質(zhì)子，B環(huán)質(zhì)子，C環(huán)質(zhì)子三個部分，各部分質(zhì)子信號特征不同，則可以通過各質(zhì)子信號的化學(xué)位移，偶合常數(shù)，歸屬各質(zhì)子，進而做出結(jié)構(gòu)推測。

現(xiàn)在是101頁\一共有153頁\編輯于星期一（一）A環(huán)質(zhì)子，常見有下列幾種情況。1、5，7-二OH取代

有兩個質(zhì)子，H-6和H-8，這兩個質(zhì)子處于C=O的間位，受其去屏蔽影響較小，而且位于兩個-OH的鄰位，由-OH共電效應(yīng)產(chǎn)生的屏蔽效應(yīng)使這兩個質(zhì)子處于較高場，一般在5.7—6.9之間，并且一般H-6總是比H-8位于高場。當7-OH成苷時，這兩個信號將向低場位移約0.1—0.3ppm。現(xiàn)在是102頁\一共有153頁\編輯于星期一2、7-OH黃酮類A環(huán)上有三個質(zhì)子，H-5，H-6，H-8。5-H因處于C=O鄰位，受其強的去屏蔽效應(yīng)影響，位于較低場，因與6-H鄰位偶合，(δ=8ppm左右，雙峰，J=Ca9Hz)。6-H,8-H位于C=O的間位，影響較小，且在-OH鄰位（供電）處于較高場，此二個質(zhì)子容易區(qū)別，H-6因同時與H-5，H-8偶合，為dd峰，J=Ca2.5，8Hz，H-8僅與H-6偶合為d峰，Ｊ＝Ca2.5Hz，所以不難看出。

現(xiàn)在是103頁\一共有153頁\編輯于星期一（四）Ｂ環(huán)質(zhì)子。常見有下列情況：1、4ˊ-氧取代

從結(jié)構(gòu)上看出，化學(xué)環(huán)境相同的兩組質(zhì)子為2ˊ，6ˊ和3ˊ，5ˊ。相互鄰位偶合為雙重峰。2ˊ，6ˊ-H受C環(huán)吸電效應(yīng)，去屏蔽，處于較低場，δ值在7.1—8.0ppm，3ˊ，5ˊ-H受4ˊ-OR屏蔽（供電），處于較高場，δ6.5—7.1ppm?，F(xiàn)在是104頁\一共有153頁\編輯于星期一2、3ˊ，4ˊ-二氧取代

有2ˊ，5ˊ，6ˊ-位三個質(zhì)子，也很容易區(qū)分。2ˊ，6ˊ位質(zhì)子信號位于較低場，δ7.2—7.9ppm，5ˊ-Hˊ位于較高場，d峰，δ6.7—7.1ppm，Ｊ＝Ca8.0Hz。2ˊ-H較高場，J=2.5Hz6ˊ-H較高場，dd峰，J=8.0,2.5Hz。現(xiàn)在是105頁\一共有153頁\編輯于星期一2和6-H兩個信號有時重疊，不好分辨。

但若C環(huán)飽和，（為二氫黃酮或二氫黃酮醇時）則C環(huán)C=O吸電效應(yīng)減弱，對B環(huán)的影響降低，則這三個質(zhì)子的化學(xué)位移較接近，常出現(xiàn)兩組復(fù)雜的多重峰。

現(xiàn)在是106頁\一共有153頁\編輯于星期一3、3ˊ，4ˊ，5ˊ-三氧取代：

只有2ˊ，6ˊ位兩個質(zhì)子，當3ˊ，5ˊ位的R相同時，兩個質(zhì)子的化學(xué)環(huán)境相同，為一個單峰，δ6.5—7.5ppm，若不同時，為兩組雙重峰，間位偶合，J=Ca2.0Hz。現(xiàn)在是107頁\一共有153頁\編輯于星期一（三）C環(huán)質(zhì)子

C環(huán)上只有C-3位一個質(zhì)子，黃酮醇類C-3位為-OH取代無質(zhì)子。1、黃酮類，3-H附近無其它質(zhì)子，無其它干擾。所以作為一個尖銳單峰，幾乎恒定地在6.3ppm處，與此區(qū)間的其它芳質(zhì)子易混，但A環(huán)上的芳質(zhì)子常受其它基團遠程偶合，信號變寬，峰強變小。可與3-H區(qū)別。現(xiàn)在是108頁\一共有153頁\編輯于星期一2、異黃酮類

苯環(huán)取代在3-位上，2-H位于C=O的β-位，受C=O強的吸電子影響，出現(xiàn)在低場（7.6—7.8）,亦因不受其它質(zhì)子干擾，為一單峰?，F(xiàn)在是109頁\一共有153頁\編輯于星期一3、二氫黃酮

有三個質(zhì)，2-H，3-2H，為飽和碳上質(zhì)子，信號出現(xiàn)在較高場，C-2與氧相連，δ5.2左右，C3-H位于C=O的α-位，δ2.8附近。因C-2為手性碳，則C-3上的兩個質(zhì)子化學(xué)不等價，分別與H-2偶合，使H-2信號裂分為dd峰，J值分別為：反式者，J=11Hz，順式者，J=Ca5Hz。

C-3上的兩個質(zhì)子，中心位于2.8ppm，除相互偶合，J=17Hz，以分別與2-H偶合，反式者，J=11Hz，順式者，J=Ca5Hz，同樣也分別以dd峰出現(xiàn)。

現(xiàn)在是110頁\一共有153頁\編輯于星期一4、二氫黃酮醇

有C-2和C-3上兩個質(zhì)子，天然黃酮的這兩個質(zhì)子互成反式的豎鍵系統(tǒng)，分別為d峰，J值約為11Hz，H-2，δ4.9ppm，H-3；δ4.3ppm。C3-OH成苷后，則該兩個信號均向低場位移現(xiàn)在是111頁\一共有153頁\編輯于星期一5、查爾酮和橙酮

查爾酮中，在C=O的α，β位上兩個質(zhì)子，為反式雙鍵上，受C=O影響，α-H比β-H處于較高場，分別為α-Hδ6.7—7.4ppm,β-Hδ7.3-7.7ppm。橙酮；就一個芐基質(zhì)子，為一單峰，位于δ6.5-6.7ppm處?，F(xiàn)在是112頁\一共有153頁\編輯于星期一（四）糖上質(zhì)子1、端基質(zhì)子；1H-NMR中，糖上最重要的信號就是端基質(zhì)子信號，該信號一般出現(xiàn)在5.0左右，很容易辨認，該信號可提供糖基的連接位置，端基構(gòu)型等重要信息，由J值可知其端基構(gòu)型，見下表；現(xiàn)在是113頁\一共有153頁\編輯于星期一

黃酮苷類糖上端基質(zhì)子信號

化合物糖上H-1"

黃酮醇3-O-葡萄糖苷5.7-6.0

黃酮類7-O-葡萄糖苷黃酮類4ˊ-O-葡萄糖苷4.8-5.2

黃酮類5-O-葡萄糖苷黃酮類6-O-葡萄糖苷黃酮醇3-O-鼠李糖苷5.0-5.1

二氫黃酮醇3-O-葡萄糖苷4.1-4.3

二氫黃酮醇3-O-鼠李糖苷4.0-4.2現(xiàn)在是114頁\一共有153頁\編輯于星期一2、從表中可以看出；（1）C3-糖苷很容易與其它苷區(qū)別。（2）3-O-glc與3-O-rh也好區(qū)別。（3）但二氫黃酮醇的3-O-glc與3-O-rh不易區(qū)別。但由于鼠李糖的C-6位是CH3，一般多以d峰出現(xiàn)在δ0.8-1.2ppm。因此也很容易區(qū)別?，F(xiàn)在是115頁\一共有153頁\編輯于星期一3、通過δ3—4ppm之間的質(zhì)子數(shù)，可推斷是五碳糖還是六碳糖。4、雙糖苷雙糖苷中，對于糖的種類不難判斷，如薄層，紙層就可以解決，重要的是聯(lián)接順序和位置的確定?，F(xiàn)在是116頁\一共有153頁\編輯于星期一

以葡萄糖和鼠李糖，其中鼠李糖連在葡萄糖的6-位和2-位，其端基的化學(xué)位移不同，例如：蘆丁的糖基和新橙皮的糖基：化合物H-1"（δppm）H-6"ˊ(δppm)蘆丁糖基(glc6-1Rh)4.2-4.4,d,J=2Hz0.7-10(重峰)新橙皮糖基(glc2-1Rh)4.9-5.0,d,J=2Hz1.1-1.3,d還可通過碳譜，質(zhì)譜亦可。且效果更好?，F(xiàn)在是117頁\一共有153頁\編輯于星期一（五）6-及8-CH3質(zhì)子

黃酮母核上的甲基質(zhì)子，其化學(xué)位移一般在δ2.0-2.6ppm之間，而6-CH3信號恒定地比8-CH3高0.2ppm，乙?；系募谆|(zhì)子，當?；〈诜?OH上，該甲基信號也在上述范圍，應(yīng)注意區(qū)別。乙酰基若取代在醇-OH上，其CH3信號一般在δ1.6—2.1之間，多數(shù)情況下都小于2.0ppm。

（六）甲氧基信號

該信號很簡單，以單峰出現(xiàn)在δ3.5—4.1ppm，極易辨認?，F(xiàn)在是118頁\一共有153頁\編輯于星期一四、13C-NMR在黃酮類結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用

13C-NMR是測定化合物的骨架的強有力的工具，在一張?zhí)甲V中，每一個碳都產(chǎn)生一個信號。常用的有以下幾種技術(shù)：1、噪聲去偶譜：每一個單峰信號，即為一個碳，但不能給出每一個碳的結(jié)合狀態(tài)，即碳結(jié)合質(zhì)子的個數(shù)，很難確定各碳信號歸屬，一般通過以下幾種方法，可以測出種碳信號是由那一類碳引起的。2、偏共振去偶譜。3、DEPT譜。4、INEPT譜。確定各信號碳的類型后，就可以通過與己知化物比較，根據(jù)各類取代基的位移效應(yīng)，以推測結(jié)構(gòu)?，F(xiàn)在是119頁\一共有153頁\編輯于星期一（一）骨架類型的判斷現(xiàn)在是120頁\一共有153頁\編輯于星期一現(xiàn)在是121頁\一共有153頁\編輯于星期一（二）取代圖式的確定

同氫譜一樣，13CNMR譜中，當黃酮母核上有取代基時，將引起相應(yīng)的碳（即鄰近碳）信號發(fā)生位移，通過比較取代前后的δ值，可以判斷取代基的位置。現(xiàn)在是122頁\一共有153頁\編輯于星期一1、取代基的影響

當引入取代基時，將引起鄰近碳化學(xué)環(huán)境發(fā)持變化，使其13C信號發(fā)生變化，對黃酮類化合物來講，常見的取代基主要是-OH和-OCH3。

-OH和-OCH3由于氧的電負性，吸電子效應(yīng)，使直接與其連接的碳原子的13C信號向低場有較大范圍的位移，25-32ppm.

對鄰，對位影響，-OH，-OCH3中的氧以其共軛效應(yīng)為主，向環(huán)內(nèi)供電，導(dǎo)致鄰、對位碳信號向高場位移，7-14ppm.

對間位影響較小，總的是向低場位移，約1.0-2.0ppm。根據(jù)大量實驗數(shù)據(jù)，總結(jié)出這兩個取代基對13C-NMR影響的規(guī)律。見下表：現(xiàn)在是123頁\一共有153頁\編輯于星期一

C5-OH：由于與4-C=O形成氫鍵，與其它羥基取代產(chǎn)生的效應(yīng)不同，除上述效應(yīng)外，還將導(dǎo)至C-4和C-2信號向低場位移，（4.5，0.8），C-3信號高移（1.99）。相反破壞這種氫鍵，C-4，C-2信號將向高場位移。而C-3信號向低場位。比較下列幾個化合物：XZiZoZmZpOH26.6-12.81.6-7.1OCH331.4-14.41.0-7.8現(xiàn)在是124頁\一共有153頁\編輯于星期一

黃酮芫花素

槲皮素芹菜素現(xiàn)在是125頁\一共有153頁\編輯于星期一2、5，7-二羥基黃酮中的C-6、C-8信號

在這一類化合物中，C-6、C-8信號一般在90-100ppm之間，其它信號均處于低場，因此，這兩個信號最好分辨。這兩個信號的區(qū)別是；C-6總是比C-8處于高場。另外，該兩個碳處于間位，相互間的取代基影響不大，即無論C-6上的-OH、CH3，glc取代，只引起C-6信號位移，而對C-8影響不大。同樣，C-8上的取代基對C-6影響也不大。

現(xiàn)在是126頁\一共有153頁\編輯于星期一（三）糖苷中糖的聯(lián)接位置

一般講，任何化合物苷元當成苷后，其成苷的碳原子及其鄰近碳的13C信號將發(fā)生位移，稱為苷化位移。這種苷化位移對確定糖的聯(lián)接位置極為有用，但對不同類型化合物，其苷化位移又有一點區(qū)別，對黃酮類化合物來說，其成苷的酚-OH位置不同，其苷化位移也不同，根據(jù)這些位移，可以確定糖的聯(lián)接位置?，F(xiàn)在是127頁\一共有153頁\編輯于星期一1、糖的苷化位移

糖成苷后，其端基13C信號將發(fā)生變化：連接在酚-OH上，端基13C信號將向低場位移4-6ppm。

一般酚苷中糖的端基信在89-100ppm。該信號位移特征不很強，并與C-6、C-8等信號混在一起，不易區(qū)別。所以，需要一些特殊手段，雙照射法加以區(qū)別，也可與文獻對照區(qū)別。由于上述因素，利用端基苷化位移來確定糖的聯(lián)接位置，還不是一個很有效的方法，測定糖的連接位置，主要是以苷元的苷化位移，根據(jù)苷元的苷化位移，可以較方便的確定糖的連接位置?，F(xiàn)在是128頁\一共有153頁\編輯于星期一2、苷元的苷化位移規(guī)律

對黃酮類化合物，（酚苷），成苷后，成苷碳原子的13C信號將向高場位移1—3ppm。鄰、對位碳信號將向低場位移0.5-2.0ppm。

C3-OH、C5-OH因與4-C=O形成氫鍵，苷化后，氫鍵消換，從交叉共軛可以看出，將對C-7、C-2及B環(huán)都有影響?，F(xiàn)在是129頁\一共有153頁\編輯于星期一（四）、雙糖苷及低聚糖中苷鍵及糖的連接順序

苷元與糖連接位置如上述，糖與糖之間的情況如下：以雙糖苷為例：糖上-OH與另一糖的端基結(jié)合成苷后，其直接相連的碳信號將向低場位移5-10ppm。與相應(yīng)的糖的13C譜比較，不難確定糖的聯(lián)接位置。比如：葡萄糖的C-6信號在66ppm左右，t峰，成苷后，將移至72ppm左右?，F(xiàn)在是130頁\一共有153頁\編輯于星期一五、質(zhì)譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)測

定中的應(yīng)用

質(zhì)譜在復(fù)核、確定黃酮類化合物結(jié)構(gòu)，尤其在樣品量很少時，更顯得重要，一般常用技術(shù)有以下三種：EIMS，F(xiàn)DMS，F(xiàn)ABMS。多數(shù)黃酮類化合物在EIMS中都有較強的分子離子峰（M+），對其苷來講，其苷鍵在質(zhì)譜中的電子轟擊下，極易斷裂，往往看不到M+，只能看到苷元的碎片峰。為解決這一問題，往往通過做成三甲基硅烷衍生物等方法，但近年來，質(zhì)譜技術(shù)不斷發(fā)展，F(xiàn)DMS、FABMS等的出現(xiàn)，使這一問題得到了解決。使苷類化合物在MS中也能得到清楚的分子離子峰（M+）?，F(xiàn)在是131頁\一共有153頁\編輯于星期一（一）EIMS

在EIMS中，黃酮類苷元，除分子離子峰外，也常出現(xiàn)M-1峰（M-H），如為甲基化物，則有M-15（M-HC3）等。更重要的裂解，由以下裂解得到的碎片，在結(jié)構(gòu)鑒定上很有意義。

1、RDA裂解（途徑I）

現(xiàn)在是132頁\一共有153頁\編輯于星期一2、途徑II

現(xiàn)在是133頁\一共有153頁\編輯于星期一1、黃酮類基本裂解：

[M-28]+。途徑I+H轉(zhuǎn)移途徑I

以黃酮及黃酮醇為例：和/或現(xiàn)在是134頁\一共有153頁\編輯于星期一

上述裂解除過程中，M+一般都很強，往往為基峰，但M-28和A1和B1也很突出。

由上述圖式看出：A1+來自A環(huán)，B1+來自B環(huán)，由此通過A1和B1的質(zhì)量，可以推算出A環(huán)和B環(huán)的取代情況，但不能確定取代位置。

化合物A1+B1+

黃酮1201025，7-二羥基黃酮1521025，7，4ˊ-三羥基1521185，7-二羥基，4ˊ-

甲氧基黃酮（刺槐素）152132

現(xiàn)在是135頁\一共有153頁\編輯于星期一

值得注意的是，3，6-或/及8-含有異戊基取代時，還將產(chǎn)生一些其它離子。如在下列化合物中：

現(xiàn)在是136頁\一共有153頁\編輯于星期一6-及/或8-OCH3時，往往先脫去先脫CH3·，隨后又失去C=O。

現(xiàn)在是137頁\一共有153頁\編輯于星期一2、黃酮醇類：裂解以途徑II為主。[A1+H]

途徑I+H轉(zhuǎn)移

途徑II[B2+]

特點：（1）多數(shù)以分子離子峰為主峰。（1）主要按途徑II裂解，即B2+是主要碎片。（2）次要峰有[M-1]+，[M-15]+，[M-14]+等。（3）具有2ˊ-OH或2ˊ-OCH3的黃酮醇類，裂時，主要特點即是通過失去OH或OCH3形成五元雜環(huán)?，F(xiàn)在是138頁\一共有153頁\編輯于星期一

[M+]（R=CH3或H）[M-17]+

（R=H）

[M-17]+（R=CH3）現(xiàn)在是139頁\一共有153頁\編輯于星期一（二）FDMS

苷類化合物在EIMS中，往往看不到M+峰，但用FDMS可以提供明顯的分子離子峰，同時，產(chǎn)生的部分碎片峰還可以提供重要的結(jié)構(gòu)信息。但在實際工作中，更多接觸的是化合物的分子量，分子式的確定。

現(xiàn)在是140頁\一共有1