目的基因的獲得

序言基因工程技術(shù)又稱為重組DNA技術(shù)，指將一些特定基因或DNA片斷，經(jīng)過(guò)載體或其它伎倆送入受體細(xì)胞，使它們?cè)谑荏w細(xì)胞中增殖并表示一個(gè)遺傳學(xué)操作。所以目標(biāo)DNA片段取得是進(jìn)行DNA重組前提。目的基因的獲得第1頁(yè)方法一：直接從細(xì)胞中提取、酶切目的基因的獲得第2頁(yè)特點(diǎn)：（1）、假如從基因組DNA獲取目標(biāo)基因

相對(duì)于目標(biāo)基因長(zhǎng)度，基因組DNA長(zhǎng)度太大。（2）、從染色體以外遺傳物質(zhì)中取得目標(biāo)基因是慣用做法目的基因的獲得第3頁(yè)方法二、化學(xué)合成法人工合成寡聚核苷酸技術(shù)：<60bp1.2元/bp在60bp與120bp之間6.8元/bp提供DNA合成服務(wù)企業(yè)：上海生工生物工程有限企業(yè)上海英俊生物科技有限企業(yè)上海華諾生物科技有限企業(yè)北京奧科生物技術(shù)有限責(zé)任企業(yè)等目的基因的獲得第4頁(yè)

特點(diǎn)：1、合成產(chǎn)物是單鏈DNA2、5’、3’末端均為羥基3、應(yīng)用場(chǎng)所：真核生物基因在原核中表示；難以得到模板情況；目的基因的獲得第5頁(yè)取得雙鏈方法：（1）、3’末端部分反向互補(bǔ)，混合后在DNA聚合酶作用下互為模板形成雙鏈目的基因的獲得第6頁(yè)

（2）分段合成法OH，先用激酶處理，使磷酸化連接酶OH，先用激酶處理，使磷酸化目的基因的獲得第7頁(yè)

（3）、分段合成，結(jié)合PCR技術(shù)PCR目的基因的獲得第8頁(yè)目的基因的獲得第9頁(yè)

方法三、PCR技術(shù)（1）、直接從原核微生物細(xì)胞或質(zhì)粒中擴(kuò)增目標(biāo)片段（2）、引入突變a、引物5’端引入b、定點(diǎn)突變，SOE技術(shù)c、易錯(cuò)PCR目的基因的獲得第10頁(yè)方法四、RT-PCR技術(shù)

針對(duì)真核生物基因不連續(xù)特點(diǎn)，利用mRNA為核苷酸信息資源，用逆轉(zhuǎn)錄---PCR法取得目標(biāo)基因AAA…AAA3’5’T

T

T…T

T

TComplimentaryDNART：ReverseTranscriptase目的基因的獲得第11頁(yè)

Summary:1、細(xì)胞中提取；2、化學(xué)合成；3、PCR技術(shù)；4、RT-PCR目的基因的獲得第12頁(yè)

目的基因的獲得第13頁(yè)序言基因工程技術(shù)又稱為重組DNA技術(shù)，指將一些特定基因或DNA片斷，經(jīng)過(guò)載體或其它伎倆送入受體細(xì)胞，使它們?cè)谑荏w細(xì)胞中增殖并表示一個(gè)遺傳學(xué)操作。所以目標(biāo)DNA片段取得是進(jìn)行DNA重組前提。目的基因的獲得第14頁(yè)（一）DNA片段取得1、從基因所在生物體直接取得限制性內(nèi)切酶（restrictionenzymes）2、人工合成DNA片段（DNA合成儀）3、PCR反應(yīng)合成DNA4、mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA5、用機(jī)械方法超聲波、目的基因的獲得第15頁(yè)目的基因的獲得第16頁(yè)粘性末端、平整末端200各種限制性內(nèi)切酶，切點(diǎn)各不相同目的基因的獲得第17頁(yè)（二）DNA片段和載體連接

——重組體DNA載體：細(xì)菌中質(zhì)粒、溫和噬菌體重組體DNA：載體DNA+引入DNA粘性末端平整末端連接酶目的基因的獲得第18頁(yè)目的基因的獲得第19頁(yè)目的基因的獲得第20頁(yè)目標(biāo)基因表示目標(biāo)基因在插入載體后，在其編