抗血清的制備

抗血清的制備抗血清的制備第1頁試驗(yàn)原理在抗原刺激下能夠使機(jī)體產(chǎn)生對應(yīng)抗體，因?yàn)榭贵w通常存在于血清中，所以也將機(jī)體受到抗原刺激后血清稱為免疫血清，免疫血清中含有對應(yīng)于該抗原多個決定簇各種抗體—即多克隆抗體?？寡逯苽淇寡宓闹苽涞?頁試驗(yàn)原理

抗血清制備分為三個步驟：

抗原制備與純化動物免疫（注射路徑、注射次數(shù)、間隔時間等）血清分離純化與效價判定

抗血清制備抗血清的制備第3頁試劑與器材

抗原與免疫對象細(xì)菌菌種（傷寒沙門菌O901）、健康家兔。

試劑生理鹽水、麥?zhǔn)媳葷峁?、石炭酸、防腐劑?.02%疊氮鈉或0.01%硫柳汞）等

設(shè)備與器材剪刀、鑷子、注射器、試管等器材和冰箱、離心機(jī)等設(shè)備抗血清制備抗血清的制備第4頁試驗(yàn)方法

傷寒桿菌O抗原制備取經(jīng)革蘭染色做細(xì)菌純度判定傷寒沙門菌，密集劃線接種于普通瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24～48小時；用生理鹽水將細(xì)菌菌苔洗于清潔、無菌三角燒瓶中，置60℃水浴或隔水煮沸1小時使細(xì)菌菌毛破壞（破壞H抗原）；抗血清制備抗血清的制備第5頁3.將菌液移入離心管4000r/min離心10min，棄去上清，并用無菌生理鹽水洗滌2次；4.取少許處理過菌液再次接種于瓊脂平板上進(jìn)行無菌試驗(yàn)（37℃，24h），確定無活菌后用生理鹽水調(diào)整菌液濃度至109個/ml，加石炭酸至終濃度為0.5%，即為細(xì)菌O抗原。抗血清的制備第6頁試驗(yàn)方法

傷寒桿菌H抗原制備取有鞭毛傷寒桿菌密集劃線接種于普通瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24～48小時；取出培養(yǎng)板，用含有5%石炭酸（苯酚）生理鹽水洗下瓊脂平板上菌苔，移入無菌三角燒瓶中，置37℃水浴24h（或4℃3～5天固定殺菌）；做無菌試驗(yàn)，用生理鹽水稀釋成10*9個/ml，即為細(xì)菌H抗原。

抗血清制備抗血清的制備第7頁免疫日期（天）免疫路徑抗原免疫劑量（ml）1(9.8)多點(diǎn)皮內(nèi)傷寒桿菌O或H抗原1.06(9.13)靜脈傷寒桿菌O或H抗原0.511(9.18)靜脈傷寒桿菌O或H抗原0.516(9.23)靜脈傷寒桿菌O或H抗原1.019(9.26)靜脈傷寒桿菌O或H抗原2.0

試驗(yàn)方法

免疫方案抗血清制備抗血清的制備第8頁試驗(yàn)方法

抗血清獲取試血：末次免疫7d后試血，試血普通耳靜脈或心臟采血，分離血清與傷寒沙門菌O或H抗原做試驗(yàn)管凝集試驗(yàn)，凝集效價（滴度）在1：1600～3200之間時即能夠放血，若效價較低，可繼續(xù)加強(qiáng)免疫；放血：采專心臟采血以取得最大血量，置37℃促進(jìn)血塊收縮，并用吸管吸收血清，3000r/min離心10min去除殘余紅細(xì)胞?？寡逯苽淇寡宓闹苽涞?頁試驗(yàn)方法

抗血清判定

效價測定效價測定可依據(jù)抗體不一樣性質(zhì)，分別采取環(huán)狀沉淀試驗(yàn)、瓊脂雙向擴(kuò)散、單項(xiàng)免疫擴(kuò)散、溶血試驗(yàn)、凝集反應(yīng)、酶免疫測定及放射免疫分析等方法進(jìn)行測定。本試驗(yàn)以凝集反應(yīng)為例?？寡逯苽淇寡宓闹苽涞?0頁

特異性測定抗體特異性通常以交叉反應(yīng)率表示,交叉反應(yīng)率能夠用競爭抑制試驗(yàn)測定。

親和力測定親和力測定主要有平衡透析法、酶聯(lián)免疫法和放射分析法。親和力高低是由抗原分子大小、抗體分子結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型適當(dāng)度決定?？寡宓闹苽涞?1頁試驗(yàn)方法

抗體保留抗體保留濃度為20～30mg/ml為宜，加入1/10000硫柳汞或1/1000疊氮鈉防腐，并加入等體積中性甘油，分裝