果蠅唾腺染色體的制片與觀察

果蠅唾腺染色體的制片與觀察果蠅唾腺染色體的制片與觀察第1頁一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)1.了解唾腺CS特點(diǎn)2.學(xué)習(xí)分離唾腺技術(shù)3.掌握唾腺CS制片方法果蠅唾腺染色體的制片與觀察第2頁二、試驗(yàn)原理永久間期CS復(fù)制而不分開體細(xì)胞聯(lián)會橫紋結(jié)構(gòu)果蠅唾腺染色體的制片與觀察第3頁果蠅唾腺染色體特點(diǎn)：1.巨大染色體：這種染色體比普通染色體大得多，寬約5um，長約400um，相當(dāng)于普通染色體100—150倍，因而又稱為巨大染色體。果蠅唾腺染色體的制片與觀察第4頁2.多線染色體：果蠅唾腺細(xì)胞停頓在分裂間期（永久間期），染色體核蛋白纖維不停復(fù)制，平行排列形成巨大而伸展多線染色體唾腺染色體經(jīng)過屢次復(fù)制而并不分開，每條染色體大約有1000—4000根染色體絲拷貝，所以又稱多線染色體(polytenechromosome)。果蠅唾腺染色體的制片與觀察第5頁2.體聯(lián)會：類似有絲分裂中同源染色體聯(lián)會。因?yàn)橥慈旧w緊密配對幾乎相互融合，使果蠅唾腺染色體只有二倍體染色體數(shù)目標(biāo)單元數(shù)。果蠅唾腺染色體的制片與觀察第6頁3.橫紋結(jié)構(gòu)：染色體上有橫紋結(jié)構(gòu)，這些橫紋數(shù)目和位置往往是恒定，代表著果蠅等昆蟲種特征；可用于基因定位；4.Puff結(jié)構(gòu)：幼蟲不一樣發(fā)育期，濃縮染色質(zhì)纖維會成群解旋、松開，形成泡狀渙散結(jié)構(gòu)，使對應(yīng)基因得以表示，這種泡狀結(jié)構(gòu)稱Puff結(jié)構(gòu)，亦稱染色體疏松。果蠅唾腺染色體的制片與觀察第7頁三、試驗(yàn)材料、器具、藥品試劑大果蠅(D.virilis)活體三齡幼蟲解剖鏡,顯微鏡,培養(yǎng)箱;培養(yǎng)瓶,解剖針,鑷子,載片,蓋片,吸水紙0.7％NaCl,1molHCl;醋酸洋紅;培養(yǎng)基果蠅唾腺染色體的制片與觀察第8頁四、試驗(yàn)步驟1.

三齡幼蟲培養(yǎng)

營養(yǎng)豐富

1518℃

肥大,大唾腺果蠅唾腺染色體的制片與觀察第9頁培養(yǎng)要求①飼料松軟,含水量較高,營養(yǎng)豐富,發(fā)酵良好②追加酵母液③控制幼蟲密度④低溫培養(yǎng)果蠅唾腺染色體的制片與觀察第10頁2.解剖幼蟲肥大幼蟲,洗去雜物1d0.7%NaCl左手持解剖針壓住蟲體后端1/3處,右手持針扎住頭部,適當(dāng)用力向前拉,唾腺隨頭部拉出果蠅唾腺染色體的制片與觀察第11頁果蠅唾腺染色體的制片與觀察第12頁唾液腺解剖針解剖針果蠅唾腺染色體的制片與觀察第13頁唾液腺頭部口器脂肪帶挑出唾液腺果蠅唾腺染色體的制片與觀察第14頁唾腺腸道唾腺與腸道區(qū)分頭尾唾腺果蠅唾腺染色體的制片與觀察第15頁注意:剝離過程中,不能讓載片上生理鹽水干涸果蠅唾腺染色體的制片與觀察第16頁剔除脂肪果蠅唾腺染色體的制片與觀察第17頁3.解離和染色剝離唾腺置載片中央,加一滴HCl,解離23吸去HCl,沖洗23次,吸干;加1d染液,染色5果蠅唾腺染色體的制片與觀察第18頁4.壓片及觀察載片置平整處,加蓋片,輕敲;壓片低倍至高倍鏡檢果蠅唾腺染色體的制片與觀察第19頁果蠅唾腺染色體的制片與觀察第20頁果蠅唾腺染色體的制片與觀察第21頁五、注意事項(xiàng)1.水不可太多,不然幼蟲會漂浮而且活躍2.一定加生理鹽水,不然唾腺易干3.將脂肪組織去除潔凈4.吸水時勿將唾腺一起吸走5.染色時間不可過長,不然背景也著色6.壓片時要揉,用力要均勻果蠅唾腺染色體的制片與觀察第22頁六、作業(yè)1.制效果很好唾腺CS暫時片1-2張2.真實(shí)繪制觀察到唾腺CS繪圖3.思索題P661-2果蠅唾腺染色體的制片與觀察第23頁操作步驟幼蟲→清