血液標本采集

血液標本采集第1頁/共57頁

臨床檢驗的概念臨床檢驗的發(fā)展簡史臨床檢驗在醫(yī)學中的作用

學習臨床檢驗基礎(chǔ)的目的和要求

緒論INTRODUCTION

第2頁/共57頁一、概念（ConceptorDefinition)醫(yī)學檢驗學中的重要分支，醫(yī)學檢驗專業(yè)的主干課程之一“臨床檢驗學”“臨床檢驗基礎(chǔ)”

Rick于1986曾撰寫“醫(yī)學顯微鏡技術(shù)(medicalmicroscopy)”

1995年衛(wèi)生部會議（青島）專家們推薦使用“臨床基礎(chǔ)檢驗學”第3頁/共57頁臨床檢驗基礎(chǔ)借助先進的檢測技術(shù)，對來自離體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標本進行理學、化學、病原學和顯微鏡形態(tài)學的檢查，以簡便、快速的檢測結(jié)果，滿足臨床醫(yī)學檢驗篩檢疾病的要求第4頁/共57頁二、簡史(History)公元前400年，希臘名醫(yī)Hippocrates感官直覺17世紀末荷蘭人Leeuwenhook顯微鏡19世紀末Ehrlich和Romanowsky染色技術(shù)1928年P(guān)apanieolaou脫落細胞學現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展

第5頁/共57頁現(xiàn)代醫(yī)學檢驗的特點從手工檢測步入儀器自動化、電腦化檢測床邊檢測試劑批量化、配套化、專業(yè)化和多樣化檢驗方法的標準化全面的質(zhì)量管理和質(zhì)量保證第6頁/共57頁三、應(yīng)用(Utilization)1．為準確診斷、及時治療提供證據(jù)

2．為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)3．為預(yù)防疾病提供資料4．為配合臨床科研提供可靠數(shù)據(jù)第7頁/共57頁四、臨床檢驗的一般方法

目視檢查：直接觀察被檢標本理學檢查：借助物理學方法化學檢查：用定性和定量分析的方法顯微鏡檢查：臨檢的主要檢查手段自動化儀器檢查第8頁/共57頁要求

(Request)1．掌握檢驗的基礎(chǔ)理論2．掌握檢驗的實驗技能3．熟悉檢驗的方法學評價4.了解檢驗項目的參考值5.熟悉檢驗項目的臨床意義

第9頁/共57頁第一章血液一般檢驗第一節(jié)血液標本采集與處理

采血方法靜脈采血皮膚采血真空采血

第10頁/共57頁

血量＜0.1ml的檢驗項目：RBC計數(shù)、WBC計數(shù)、

BPL計數(shù)、Hb測定等

皮膚采血法Skinpunctureforbloodcollection第11頁/共57頁[采血部位]WHO推薦采取外周血以左手無名指或中指指尖內(nèi)側(cè)1、手指采血：

優(yōu)點：方便→獲較多血量→檢查結(jié)果比較恒定

缺點：與靜脈血仍在某些差異。2、耳垂采血：

優(yōu)點：痛感輕→方便→適用于反復(fù)采集

缺點：血循環(huán)差→受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定

RBC、WBC、Hb、Hct結(jié)果均比靜脈血高，特別是冬季。第12頁/共57頁3、其他部位：

拇指、拇趾或足跟采血——半歲以下嬰幼兒皮膚完整處——嚴重燒傷者[采血針]

三棱針或?qū)Ｓ玫摹安裳槨睘楹茫褂们罢邞?yīng)高壓滅菌，一人一針。第13頁/共57頁一、皮膚采血器材（vacuumbloodcollector）

2008-10-21采血器材第14頁/共57頁[注意事項]1、采血部位皮膚完整。2、無菌技術(shù)操作：防采血部位感染，一人一針防肝炎、艾滋病。3、采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中。4、多項檢查時，采血次序為：BPL計數(shù)（不擦第一滴血）→RBC計數(shù)、Hb→WBC計數(shù)與分類。5、取血用于自動化血細胞分析儀，要防止棉球纖維混入堵塞儀器。第15頁/共57頁

靜脈采血法

(venipunctureforbloodcollection)凡需血量較多的檢查＞0.5ml

如：ESR、Hct、凝血因子的測定等。[部位]

淺表靜脈均可常用肘部靜脈，不明顯時可用手背、踝部，幼兒可用頸外靜脈。P4第16頁/共57頁第17頁/共57頁[注意事項]1、采血前應(yīng)向病人作適當解釋：2、檢查注射器：3、止血帶壓迫時間不能過長：4、抽血時，只能向外抽，不能向內(nèi)推：第18頁/共57頁兩種采血方法的優(yōu)缺點比較皮膚采血靜脈采血缺點限制了重復(fù)實驗和追加實驗，標本量少，局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)優(yōu)點價廉、快速、操作簡便，標本可直接測定標本代表性大，無組織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實驗和追加其他實驗第19頁/共57頁三、真空采血法（40年代，美國BD公司）

（vacuumtubeforbloodcollection）套筒式和頭皮靜脈式兩種優(yōu)點：血樣無需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少溶血現(xiàn)象，保持血液標本的完整性，使檢驗結(jié)果更加準確，也有利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的交叉感染和環(huán)境保護。缺點：真空采血管價格較高第20頁/共57頁2.真空采血器材

I.采血針2008-10-21第21頁/共57頁

II.持針器2008-10-212008-10-21醫(yī)學全在線網(wǎng)站

第22頁/共57頁III.真空采血管2008-10-21第23頁/共57頁血液標本采集的質(zhì)量保證一、采血服務(wù)

1.環(huán)境要求

a）空間

b）窗口

2.生物安全

a）防止交叉感染

b）履行環(huán)境消毒

二、患者狀態(tài)要求（自學）第24頁/共57頁三、采血操作對檢驗結(jié)果的影響1.采血時間2.采血部位3.采血體位4.壓脈帶使用5.輸液6.溶血第25頁/共57頁血標本溶血：

①注射器和容器：干燥、清潔。②抽血速度不能太快。③抽血時避免產(chǎn)生大量泡沬。④抽血后應(yīng)先拔針頭，再注入。⑤抗凝不能用力振蕩。⑥離心速度不能過高。第26頁/共57頁

一、血液標本運輸

1.唯一標識原則

2.生物安全原則

3.盡快運輸原則二、標本拒收

血液標本運輸、保存與處理第27頁/共57頁三、血液檢驗前的預(yù)處理1.分離血清或血漿2.分離細胞第28頁/共57頁分離后的標本：一般應(yīng)置于4℃，保存一個月的標本，應(yīng)-20℃冰箱。保存3個月以上的標本，分離后應(yīng)該-70℃保存。立即送檢標本檢測后的標本標本信息的保存四、血液標本保存第29頁/共57頁

二、抗凝劑選擇1、檸檬酸鈉（枸櫞酸鈉）a.抗凝原理：螯合鈣離使用方法配成109mmol/L的濃度和血液1：9106mmol/L的濃度和血液1：4化學名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c.適用范圍：止血學檢驗、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。ヾ.不適用于：血細胞計數(shù)第30頁/共57頁2.草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a.抗凝原理：草酸鈣沉淀b.使用方法：草酸鈉0.1mol/L和血液1：9c.適用范圍：止血學檢驗(制備正吸漿)。d.不適用于：對凝血因子V保護功能差，影響PT測定；沉淀物影響自動凝血儀的使用。第31頁/共57頁3.雙草酸鹽抗凝劑

a.抗凝原理：草酸鈣沉淀使用方法：草酸鉀0.8g,草酸銨1.2g（100ml）與血液1：10（80°C以下烘干）適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞比積、計數(shù)）

d.不適于:血小板計數(shù)和白細胞分類計數(shù),電解質(zhì)測定第32頁/共57頁4.肝素（含硫酸基團的粘多糖）抗凝原理：低濃度時抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，加強抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高濃度時阻斷凝血酶和纖維蛋白的反應(yīng)。

b.適用方法：1g/L濃度的肝素鈉與血液1：10第33頁/共57頁優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、紅細胞比積）和多種生化分析e.不適用于：WBC和BPL計數(shù)、血涂片檢查、凝血象檢驗。第34頁/共57頁5.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a.抗凝原理：螯合鈣離子b.使用方法：15g/L濃度EDTA和血液1：10適用范圍：對血細胞形態(tài)影響小,適合血常規(guī)檢查、

Hct不適用于：影響血小板聚集和白細胞吞噬功能,

不宜凝血象檢查和血小板功能試驗。第35頁/共57頁

物理方法抗凝

脫纖維蛋白：

將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血成凝塊。適用于免疫學檢驗和紅斑性狼瘡細胞檢查。第36頁/共57頁第二節(jié)血涂片制備和細胞染色血涂片的制備方法血涂片制備的注意事項血液細胞染色細胞染色時注意事項第37頁/共57頁一、血涂片的制備技術(shù)血涂片的用途：

血細胞形態(tài)學檢驗、網(wǎng)織紅、異常細胞、寄生蟲檢驗。

2.血涂片制備步驟：（手工推片法）第38頁/共57頁〈一〉玻片清潔：

1、新玻片處理：有游離堿質(zhì)。

2、用過玻片處理：

3、使用中玻片處理：只能持玻片邊緣，保持清潔、干燥、中性、無油膩。P6第39頁/共57頁〈二〉血涂片制作：揮動使之干燥，而后在血膜上寫編號或病人姓名。第40頁/共57頁

將推玻片向1的方向稍抽回，當血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向2的方向滑動。第41頁/共57頁〈三〉影響因素：第42頁/共57頁

二、血液細胞染色第43頁/共57頁細胞染色技術(shù)

（一）染料（天然染料和人工染料）

發(fā)色基團和助色基團使生物學染色劑產(chǎn)生顏色和被染組織親合。第44頁/共57頁堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細胞核的染料。如亞甲藍、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合細胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等。3.復(fù)合染料：同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料第45頁/共57頁（二）細胞染色原理：1.物理作用：毛細管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學作用：

a.染料的化學成分：助色基團的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細胞內(nèi)帶負電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。第46頁/共57頁b.蛋白質(zhì)的化學性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同數(shù)量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同時還有其他活性基團。在游離狀態(tài)時，

-NH2獲得一個H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個H+變成帶負電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。第47頁/共57頁c.周圍環(huán)境的酸堿度：如環(huán)境pH＜pI（pI為等電點），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之，pH＞pI，則結(jié)合堿性染料。

PH↓→

H＋增多→易與伊紅結(jié)合→染色偏紅

PH↑→

H＋減少→易與美藍結(jié)合→偏藍第48頁/共57頁

（三）細胞染色法的類型

1.普通染色法：經(jīng)物理和/或化學作用的吸附、結(jié)合

2.熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡

3.細胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍等

4.細胞化學染色法：用化學反應(yīng)顯示細胞內(nèi)某種成分。細胞免疫化學染色法（應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標記技術(shù)）

第49頁/共57頁

瑞氏染色法（一）染色原理分兩相進行，第一相是酸性伊紅與細胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性染料天青

B與細胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、血小板結(jié)合。第二相是天青B和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的天青B-伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲的染色質(zhì)成紅色），中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。第50頁/共57頁

（二）試劑

1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml

磷酸鹽緩沖液（PBS）：

（PH6.4－6.8）磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g,

蒸餾水加到