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文檔簡介
試驗目標(1)學習動物基本操作技能—小鼠捉拿、固定及不一樣給藥路徑給藥方法。
(2)掌握藥效學研究試驗設計基本標準。
(3)學習抗精神分裂癥、抗驚厥藥品作用研究方法。
(4)利用小鼠電刺激激怒試驗,小鼠驚厥試驗觀察未知化合物或混合物藥品作用??股窬至寻Y抗驚厥藥物作用研究專家講座第1頁(1)小鼠捉拿與固定
(2)給藥路徑一、試驗基本試驗操作技能試驗內(nèi)容抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第2頁右手提起鼠尾,左手拇指和食指捏住雙耳及頭部皮膚,無名指、小指和掌心夾其背部皮膚及尾部,便可將小鼠完全固定。單手捉持,用拇指和食指抓住小鼠尾巴,用小指、無名指和手掌壓住尾根部,再用騰出拇指、食指及中指抓住鼠耳及頭部皮膚而固定。注意事項:小鼠捉拿與固定方法抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第3頁注意事項:1.取背部及后腿皮下,注射時用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚,右手持注射器將針頭刺入,固定后即進行注射。
皮下注射給藥路徑抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第4頁注意事項:
1、針頭刺入部位不宜太靠近上腹部或太深,以免刺破內(nèi)臟。針頭與腹腔角度不宜太小,防止刺入皮下。
2、使用針頭不宜太粗,防止藥液注射后從注射孔流出。注射后可用棉球按一下注射部位。
腹腔注射給藥路徑抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第5頁注意事項:1.用左手拇指和食指抓住鼠兩耳和頭部皮膚,其它三指抓住背部皮膚,將鼠抓持在手掌內(nèi),固定好動物,頭部和頸部保持很平,右手取注射器進行灌胃。
2.灌時針頭沿鼠口角經(jīng)過食管進入胃內(nèi)。灌時如很通暢,則表示針頭已進入胃內(nèi);如動物有嘔吐動物或強烈掙扎,必須拔出后按上述方法重新操作。決不可進針不順硬向里插。
灌胃給藥給藥路徑抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第6頁注意事項:1.操作時先將動物固定在暴露尾部鼠尾固定器中,使尾巴露出。尾部用45~50℃溫水浸潤半分鐘或用75%酒精重復擦拭,使血管擴張,并可使表皮角質(zhì)軟化。2.采取右手持注射器連4(1/2)號細針頭,對準血管中央以小于30°角進針,普通盡可能選取尾靜脈下1/3處,約距尾尖2-3厘米。當針頭在尾靜脈平行推進少許后,左手三指將針頭和鼠尾一起捏住并固定。先緩注少許藥液,如無阻力,表示針頭已進入靜脈,可繼續(xù)注入。如出現(xiàn)白色皮丘說明未刺入血管,應拔出針頭重新穿刺。注射完成后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。靜脈給藥給藥路徑抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第7頁二、藥理學試驗設計基本標準
一、對照標準
1.陰性對照
2.陽性對照
3.模型對照
4.配對對照
5.組間對照
6.歷史對照二、隨機標準
三、重復標準
1.重現(xiàn)性
2.重復數(shù)四、量—效關系標準五、單盲和雙盲標準抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第8頁教學分組在一個教學單元內(nèi),依據(jù)學生人數(shù),將學生分為8組,每組2~5人,分為上、下兩個班。試驗方案受試樣品:受試藥A,B。上半班采取受試藥A試驗,下半班采取受試藥B試驗。提議樣品:A-洋金花水提取物;B-洋金花醇提取物。教學試驗安排及內(nèi)容抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第9頁試驗材料0.08%氯丙嗪,5%可拉明,1%苯巴比妥鈉,生理鹽水。
小白鼠18~22g,雄性,非同籠喂養(yǎng)。
動物試劑、藥品A藥、B藥。提議受試藥A-洋金花水提物;B-洋金花醇提物。受試物YSD-4(或5)型藥理生理多用儀及附件激怒盒,萬用電表,小動物電子秤,鼠籠,1ml注射器,5號針頭試驗器材抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第10頁試驗一電刺激小鼠激怒試驗
試驗二抗驚厥試驗
試驗內(nèi)容抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第11頁原理:以弱電流或低電壓刺激鼠足部,引起鼠間對峙、格斗和互咬等激怒反應,以此為指標觀察受試物對狂躁動物鎮(zhèn)靜作用。以氯丙嗪為陽性對照藥、生理鹽水為陰性對照藥。1
電刺激小白鼠激怒試驗抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第12頁篩選指標:取異籠喂養(yǎng)小鼠各一只,稱重后,放入附件激怒盒導電銅絲板上,把蓋子蓋上后,將電源打開,調(diào)整交流電輸出旋鈕,直至小鼠出現(xiàn)激怒反應,刺激電壓普通為30V左右。激怒反應表現(xiàn)為:兩鼠對立、前肢離地、對峙、相互嘶咬等,若刺激1min以上仍未出現(xiàn)者棄之不用。以上方法挑選有激怒反應合格小鼠四對,編號。并統(tǒng)計刺激電壓值。
小鼠篩選方法:抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第13頁試驗步驟第一對小鼠第二對小鼠第三對小鼠第四對小鼠生理鹽水
0.08%氯丙嗪
4mg/ml(按原生藥含量)A藥或B藥高濃度
2mg/ml(按原生藥含量)A藥或B藥低濃度給藥:腹腔注射給藥體積0.1ml/10g
給藥20min后,先用萬用電表調(diào)整刺激輸出電壓至給藥前引發(fā)激怒反應閾電壓,斷開電源,將一對小鼠置于導電銅絲板上,再打開電源,刺激1min觀察兩對小鼠給藥前后反應差異。造急性模型抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第14頁原理:可拉明為中樞興奮藥,過量可引發(fā)驚厥。本試驗以可拉明為驚厥模型,觀察受試藥品抗驚厥作用。戊巴比妥鈉為長期有效抗驚厥藥。本試驗以之為陽性藥。2
抗驚厥試驗抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第15頁1%苯巴比妥溶液
生理鹽水
受試物高劑量組,4mg/mlA或B溶液受試物低劑量組2mg/mlA或B溶液陰性對照組陽性對照組受試藥品組給藥方式:預防i.p.給藥給藥體積均為0.1ml/10g試驗步驟
造模方法:給藥20min后皮下注射5%可拉明(0.1ml/10gb.w.)觀察并統(tǒng)計小鼠反應和死亡情況??股窬至寻Y抗驚厥藥物作用研究專家講座第16頁表1
受試物對電刺激小白鼠激怒作用影響原始統(tǒng)計抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第17頁表2受試物對可拉明致小鼠驚厥作用影響原始統(tǒng)計抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第18頁按上下班統(tǒng)計數(shù)據(jù),計算陽性率或死亡率,并進行顯著性差異比較。數(shù)據(jù)用表格表示,示范表格以下:結(jié)果處理試驗結(jié)果抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第19頁
表3受試物對電刺激小鼠激怒作用影響試驗結(jié)果抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第20頁表4受試物對可拉明致小鼠驚厥作用影響試驗結(jié)果抗神精分裂癥抗驚厥藥物作用研究專家講座第21頁1.刺激電壓必須由小到大,過低不能引發(fā)激怒,過高會引發(fā)小鼠逃避。2.且每次刺激完后,應將刺激電壓調(diào)至最小,并將小鼠放回鼠籠,以免在銅絲板上排便影響導電。3.小白鼠驚厥前兆為豎尾、洗臉等反應。4.腹腔注射在小白鼠下
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