2022mRNA疫苗在感染性疾病的研究進(jìn)展

mRNA疫苗在感染性疾病的研究進(jìn)展前言以mRNA為基礎(chǔ)的治療代表了一個(gè)相對(duì)新穎和高效的藥物類別。最近發(fā)表的幾項(xiàng)研究強(qiáng)調(diào)了mRNA疫苗在治療不同類型的惡性腫瘤和傳染病方面的潛在療效，這些疾病中傳統(tǒng)的疫苗策略不能引起保護(hù)性免疫反應(yīng)。傳染病疫苗是目前mRNA療法中最領(lǐng)先的應(yīng)用。目前正在進(jìn)行臨床前試驗(yàn)和臨床使用的大多數(shù)mRNA疫苗都是以單次給藥的形式注射到皮膚、肌肉或皮下，在那里它們被免疫或非免疫細(xì)胞吸收并轉(zhuǎn)化為抗原，展示給T細(xì)胞和B細(xì)胞。們認(rèn)為mRNA疫苗至少還需要5-6年才能獲得監(jiān)管部門的批準(zhǔn)。但是，當(dāng)2020年初COVID幾個(gè)月里，mRNA疫苗的研發(fā)、制造和部署都進(jìn)入了飛速跨越的階段。SARS-CoV-2疫苗大多數(shù)SARS-CoV-2候選疫苗對(duì)病毒表面的棘突蛋白產(chǎn)生免疫反應(yīng)。棘突蛋白與其宿主細(xì)胞表面的受體血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2結(jié)合。然后，細(xì)胞的跨膜絲氨酸蛋白酶2將附著的棘突蛋白切開，該蛋白酶誘導(dǎo)構(gòu)象變化，暴露棘突蛋白的融合肽并促進(jìn)與細(xì)胞或內(nèi)體膜的融合。通常，疫苗mRNA編碼的抗原要么是全長(zhǎng)棘突蛋白，要么是棘突蛋白的受體結(jié)合域。截至2021年6月18日，185個(gè)CVID-19疫苗候選處于臨床前開發(fā)階段，另外102ABNT162b2疫苗獲得了FDA的緊急授權(quán)，成為第一個(gè)獲準(zhǔn)用于人體的mRNA藥物。一ModernamRNA授權(quán)在美國(guó)使用。最終，它們是第一批在美國(guó)、英國(guó)、加拿大和其他幾個(gè)國(guó)家獲得授權(quán)的SARS-CoV-2疫苗。輝瑞和BioNTech共同開發(fā)了五種mRNA候選疫苗，它們編碼棘突蛋白抗原的變體。兩個(gè)主要候選藥物BNT162b1和BNT162b2使用AcuitasTherapeutics的可電離脂質(zhì)ALC-0315和核苷修飾的mRNA，其中所有尿苷被N1甲基假尿苷取代，以增強(qiáng)mRNA翻譯。BNT162b1編碼三聚體分泌型棘突蛋白的受體結(jié)合域，而BNT162b2編碼全長(zhǎng)SARS-CoV-2棘突糖蛋白，S2亞基中有兩個(gè)脯氨酸替換，將蛋白鎖定在融合前構(gòu)象。在兩種疫苗的第一階段試驗(yàn)中，都可誘導(dǎo)高滴度的中和抗體，并產(chǎn)生強(qiáng)烈的CD4+和CD8+反應(yīng)，伴有輕度至中度不良反應(yīng)。兩種候選疫苗耐受性良好且有效，但只有BNT162b2疫苗因其較輕的全身和局部不良反應(yīng)而進(jìn)入II/III期試驗(yàn)。在第三階段試驗(yàn)中，BNT162B2顯示了95%的整體預(yù)防和90~100%的療效。Moderna與國(guó)立衛(wèi)生研究院合作開發(fā)了mRNA-1273。該疫苗使用了可電離脂質(zhì)SM-102制備LNP，該LNP封裝N1甲基假尿苷修飾的mRNA。該序列編碼SARS-CoV-2棘突蛋白，帶有兩個(gè)脯氨酸替換，賦予融合前構(gòu)象。在1期臨床試驗(yàn)中，mRNA-1273非常有效且耐受性良好。在涉及30420名志愿者的III期試驗(yàn)中，兩支100μg劑量疫苗的預(yù)防率為94.1%，注射部位的局部疼痛是最常見的副作用。第二次給藥后，一半的志愿者報(bào)告了中度至重度系統(tǒng)性副作用(例如疲勞、肌肉疼痛、關(guān)節(jié)疼痛)，這些副作用在48小時(shí)內(nèi)消失。盡管輝瑞和Moderna公司生產(chǎn)的疫苗已證明具有良好的療效和安全性，但它們mRNA273可在4-8℃下儲(chǔ)存持續(xù)一個(gè)月，而BNT162b2則需要在-60℃條件下儲(chǔ)存。CureVac的候選疫苗CVnCoV在5℃下可穩(wěn)定儲(chǔ)存3個(gè)月。CVnCoV使用AcuitasTherapeutics(可能是ALC-0315)的可電離脂質(zhì)和編碼具有兩個(gè)脯氨酸替代物的全長(zhǎng)棘突蛋白的未修飾mRNA。在第一階段臨床試驗(yàn)中，志愿者產(chǎn)生的中和抗體與CVID-19恢復(fù)期患者相似，耐受性良好。然而不幸的是，在包括4萬(wàn)人的III期臨床試出現(xiàn)的SARS-CoV-2變異。CureVac與GSK合作，開發(fā)第二代候選藥物——CV2CoV，該藥物經(jīng)過優(yōu)化，以增強(qiáng)相對(duì)于CVnCoV的翻譯和免疫原性。CV2CoV使用來自人類羥基類固醇17-β-脫氫酶4基因的5′UTR和來自人類蛋白酶體20S亞單位β3基因的3′UTR。在臨床前研究中，CV2CoV在體外顯示出比CVnCoV高1.8倍的蛋白表達(dá)，并在大鼠中誘導(dǎo)針另一種耐熱候選疫苗ARCoV由中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院與Walvax生物技術(shù)公司合作開發(fā)，可以在25℃穩(wěn)定一周。ARCoV編碼棘突蛋白的受體結(jié)合域。在臨床前研究中，在食蟹猴中可誘導(dǎo)高SARS-CoV-2特異性IgG抗體和強(qiáng)病毒中和滴度。盡管CVnCoV和ARCoV熱穩(wěn)定性背后的原因尚不清楚，但mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)、較小的其它一些mRNA候選疫苗也正在研制中。LNP-nCoVsaRNA由倫敦帝國(guó)理工學(xué)劑量遞增方案進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)評(píng)估(ISRCTN17072692)，其使用了所有候選mRNA疫苗中最低的RNA劑量。另一種自擴(kuò)增mRNA疫苗候選物ARCT-021(也稱為L(zhǎng)UNAR-COV19)由Arcturus公司利用其專有的LUNAR脂質(zhì)載體和自轉(zhuǎn)錄和復(fù)制RNA(STARR)平臺(tái)開流感病毒疫苗全世界每年約有29萬(wàn)至65萬(wàn)人死于流感病毒。目前的疫苗以促進(jìn)病毒進(jìn)入的病毒血凝素蛋白為靶標(biāo)。傳統(tǒng)的流感疫苗是生長(zhǎng)在雞蛋中的滅活流感病毒，生產(chǎn)時(shí)間長(zhǎng)，純化困難。此外，病毒會(huì)在雞蛋中發(fā)生變異以獲得最佳生長(zhǎng)，有時(shí)會(huì)使它們?cè)谌祟愔袩o(wú)效。因此，確實(shí)需要替代的抗原靶點(diǎn)和生產(chǎn)方法。體外轉(zhuǎn)錄的合成mRNAs可以滿足這一需求，并確保在出現(xiàn)全新流感毒株時(shí)快速生產(chǎn)疫苗。例如，2013年，基于LNP (DLinDMA)的自我擴(kuò)增mRNA疫苗在中國(guó)H7N9爆發(fā)后8天內(nèi)迅速研制成功，然而不幸的是，由于當(dāng)時(shí)沒有用于mRNA制造的GMP設(shè)施，未能進(jìn)行臨床試驗(yàn)。也有人致力于研制一種不需要每年修改的通用流感疫苗。這種疫苗可以對(duì)幾種流感病毒株和亞型產(chǎn)生免疫力。在2012年首次展示的流感mRNA疫苗，三次皮內(nèi)注射在小鼠中分別誘導(dǎo)針對(duì)H1N1和H5N1毒株的同源和異源免疫。值得注意的是，不易發(fā)生突變的血凝素保守柄區(qū)最近已成為一種新型通用疫苗靶標(biāo)。還有另一項(xiàng)研究使用LNPs來遞送50ng劑量的mRNA，編碼三種保守的流感蛋白：神經(jīng)氨酸酶、核蛋白和基質(zhì)-2離子通道蛋白以及血凝素柄區(qū)。令人難以置信的是，這種微小的mRNA劑量產(chǎn)生了廣泛的保護(hù)性抗體。寨卡病毒疫苗寨卡病毒感染于1947年首次被發(fā)現(xiàn)，感染寨卡病毒的患者通常無(wú)癥狀或出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹和肌肉疼痛等輕微癥狀。然而，寨卡病毒在2015-2016年美洲流行期間成為全球健康危機(jī)，該病毒在懷孕期間導(dǎo)致嚴(yán)重胎兒神經(jīng)畸形和胎兒死亡。膜和包膜蛋白 (prM-E)是針對(duì)寨卡病毒的mRNA疫苗常見的抗原選擇，因?yàn)獒槍?duì)prM-E的中和抗體可以防止病毒融合。Moderna與華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院合作，開發(fā)了一種改良的prM-EmRNA，其中包含E蛋白中的突變?nèi)诤檄h(huán)形表位。兩個(gè)10μg劑量的mRNA可保護(hù)小鼠免受寨卡病毒攻擊，并減少登革熱增強(qiáng)抗體的產(chǎn)生。這些令人鼓舞的臨床前結(jié)果促進(jìn)了I期試驗(yàn)的進(jìn)良好。此外，另一項(xiàng)研究使用被動(dòng)免疫方法，利用基于角鯊烯的納米載體遞送編碼ZIKV中和抗體的mRNA。對(duì)于免疫系統(tǒng)受損而無(wú)法合成自身抗體的免疫缺陷患者來說，這是一種很有吸引力的方法。HIV病毒疫苗全球范圍內(nèi)，艾滋病毒目前影響3800萬(wàn)人，預(yù)計(jì)到2030年將影響多達(dá)4200萬(wàn)人。盡管已進(jìn)行了30年的研究，但尚未開發(fā)出有效的疫苗，這主要是因?yàn)镠IV包膜蛋白具有顯著的抗原性多樣性以及隱藏關(guān)鍵包膜蛋白表位“聚糖屏障”。幾項(xiàng)臨床前研究的抗原對(duì)于有效地靶向HIV是非常關(guān)鍵的。呼吸道合胞病毒疫苗呼吸道合胞病毒是全球急性下呼吸道感染的主要原因。每年，估計(jì)有60000名5歲以下兒童死亡，超過14000名65歲以上的人死亡。目前的RSV候選疫苗主要針對(duì)高度保守的F蛋白。盡管一些候選者由于中和抗體滴度不足而未能通過臨床試驗(yàn)，但對(duì)F蛋白構(gòu)象的新發(fā)現(xiàn)表明，針對(duì)融合前構(gòu)象接種疫苗可產(chǎn)生優(yōu)異的中和抗體反應(yīng)。這一發(fā)現(xiàn)有望改進(jìn)未來的疫苗設(shè)計(jì)。Moderna正在評(píng)估編碼融合前F蛋白的三種單劑量候選疫苗：mRNA-1172和1777誘導(dǎo)RSV中和抗體產(chǎn)生強(qiáng)烈的體液反應(yīng)，CD4+T細(xì)胞對(duì)RSVF蛋白產(chǎn)生反應(yīng)，mRNA77的翻譯和免疫原性。接種后1個(gè)月，mRNA-1345產(chǎn)生的中和抗體滴度約為mRNA-1777的八倍。最終，Moderna的目標(biāo)是將mRNA-1345與其兒科人類偏肺病毒/副流感病毒3型(hMPV/PIV3)候選疫苗mRNA-1653整合，并用單一配方為兒童接種針對(duì)三種不同病原體的疫苗。埃博拉病毒疫苗埃博拉病毒(EBOV)于1976年首次被確定為導(dǎo)致埃博拉病爆發(fā)的病原體。這種病毒性出血熱在2014-2016年西非埃博拉疫情中奪走了11000多條生命。2019年，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了一種基于重組水泡性口炎病毒(VSV)的埃博拉疫苗(rVSV-EBOV)。盡rVSV-EBOV在預(yù)防埃博拉傳播方面的有效性為97.5%，但臨床試驗(yàn)注意到一些安全問題(例如急性關(guān)節(jié)炎和皮疹)。抗EBOV的mRNA疫苗可能比這種基于病毒的疫苗更安全，因?yàn)樗鼈儾粫?huì)在體內(nèi)復(fù)制。一種編碼EBOV糖蛋白的mRNA疫苗已在小鼠中證明了效力。該疫苗通過CD8+和CD4+T細(xì)胞誘導(dǎo)糖蛋白特異性IgG抗體和IFN-γ以及IL-2的強(qiáng)烈表達(dá)，可保護(hù)動(dòng)物免受致命病毒的傷害?？袢《疽呙缈袢∈且环N人畜共患病，以神經(jīng)癥狀為特征，死亡率近100%。盡管已有疫苗獲批，但每年仍有5萬(wàn)多人死于狂犬病，這突出表明需要更有效、更廉價(jià)的疫苗。為了滿足這一需求，CureVac利用其RNActive平臺(tái)，篩選出編碼狂犬病病毒糖蛋白的未經(jīng)修飾的mRNA疫苗CV7201。在一項(xiàng)臨床前研究中，CV7201可誘導(dǎo)小鼠和豬的高中和抗體滴度，并誘發(fā)抗原特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)。但是在I期臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，雖然給藥途徑不影響免疫反應(yīng)，但給藥裝置只有皮內(nèi)注射器產(chǎn)生短暫的體液免疫反應(yīng)。這種弱的給藥效果以及高發(fā)生率的不良事件表明需要進(jìn)一步優(yōu)化給藥平臺(tái)。隨后，CureVac使用AcuitasTherapeutics生產(chǎn)的專有LNP作為其新疫苗CV7202的載體。在一項(xiàng)臨床前研究中，CV7202誘導(dǎo)產(chǎn)生強(qiáng)抗體滴度和CD8+和CD4+T細(xì)胞反應(yīng)。I期臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，兩個(gè)1μg劑量可產(chǎn)生高滴度中和抗體以及強(qiáng)適應(yīng)性免疫反應(yīng)，耐受性良好。瘧原蟲疫苗盡管開發(fā)中的絕大多數(shù)mRNA疫苗是為了防止病毒感染，但也有預(yù)防其他傳染病的努力。瘧疾是由單細(xì)胞真核寄生蟲引起的，其發(fā)病率和殺傷力位居榜首。每年，瘧疾折磨著全世界2億多人，奪走40多萬(wàn)患者的生命。由于缺乏表面抗原和瘧原蟲的復(fù)雜生命周期，抗瘧疫苗的生產(chǎn)一直很困難。幸運(yùn)的是，人體對(duì)瘧原蟲感染的自然免疫反應(yīng)的研究已經(jīng)確定了潛在的非表面抗原靶點(diǎn)。例如，瘧原蟲分泌的細(xì)胞因子巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(PMIF)已被證明可阻止T細(xì)胞產(chǎn)生長(zhǎng)期記憶。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)，從基于角鯊烯的陽(yáng)離子納米乳劑中制備了一種疫苗，該納米乳劑裝載有編碼PMIF的自擴(kuò)增mRNA。兩個(gè)15μg劑量可改善輔助性T細(xì)胞的發(fā)育，并誘發(fā)抗瘧原蟲IgG抗體和記憶性T細(xì)胞反應(yīng)。另一項(xiàng)關(guān)于瘧疾感染的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，惡性瘧原蟲富含谷氨酸蛋