知識(shí)補(bǔ)充高效液相色譜法

HPLC

HighPerformanceLiquidChromatography17.1概述17.2高效液相色譜儀17.3高效液相色譜的固定相和流動(dòng)相17.4高效液相色譜法的主要類型目前一頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1HPLC的發(fā)展歷史1952James和Martin發(fā)展了氣相色譜；1967Kirkland等研制高效液相色譜法；吸附柱色譜1906GC1950年代GC-MS1950年代末HPLC1960年代毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管電動(dòng)色譜等一系列新的色譜法1980年代中期目前二頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)2HP1100型高效液相色譜儀目前三頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)317.1.2HPLC與GC的比較氣相色譜（GC）適合分析在操作溫度下能氣化而不分解的有機(jī)化合物，僅占15%，衍生后也只有不到20%。

GC不適合高沸點(diǎn)、難揮發(fā)及熱不穩(wěn)定化合物、離子性化合物、高聚物等。目前四頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)4補(bǔ)充高效液相色譜法

保留值塔板數(shù)塔板高度分離度選擇性氣相色譜﹦液相色譜塔板理論速率方程液相色譜所用基本概念：目前五頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)517.1.2HPLC與經(jīng)典LC的比較目前六頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)6HPLC：高效色譜柱、高壓泵、高靈敏檢測(cè)器經(jīng)典LC：粒徑150-200m，流速0.xml/min，分離時(shí)間數(shù)小時(shí)（依重力流動(dòng)）tS目前七頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)7

用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入待測(cè)樣品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析的方法稱為高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography,HPLC)。17.1.3HPLC定義目前八頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)817.1.4現(xiàn)代高效液相色譜法的特點(diǎn)：(1)高效：(2)高壓：HPLC工作壓力高達(dá)20MPa-30MPa。(3)高速：分離一個(gè)樣品只需幾分鐘至幾十分鐘。(4)高靈敏度：紫外檢測(cè)器的檢測(cè)限可達(dá)10－9g，熒光檢測(cè)器的檢測(cè)限可達(dá)10－12g。一般GC的填充色譜柱是數(shù)千塔板／米，高效液相色譜法的塔板數(shù)可達(dá)約8萬(wàn)塔板/米，使分離效率大大提高。目前九頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)9高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)是：

其缺點(diǎn)是：價(jià)格昂貴，要用各種填料柱，容量小，流動(dòng)相消耗大且有毒性的居多。17.1.5高效液相色譜法的優(yōu)、缺點(diǎn)檢測(cè)的分辨率和靈敏度高，分析速度快，重復(fù)性好，定量精度高，應(yīng)用范圍廣。適用于分析高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、具有生物活性、熱穩(wěn)定性差的化合物。目前十頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)10色譜分離的過(guò)程目前十一頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1117.1.6樣品分子在色譜柱中的分離過(guò)程目前十二頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1217.1.6樣品分子在色譜柱中的分離過(guò)程目前十三頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)13

色譜分離的實(shí)質(zhì)是樣品分子（即溶質(zhì)）與溶劑（即流動(dòng)相或洗脫液）以及固定相分子間的作用，作用力的大小，決定色譜過(guò)程的保留行為。17.1.7色譜分離的實(shí)質(zhì)目前十四頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1417.2高效液相色譜儀目前十五頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1517.2高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)目前十六頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1617.2高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)示意圖輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)目前十七頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1717.2高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)進(jìn)樣器貯液器高壓泵色譜柱餾分收集器檢測(cè)器記錄儀輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)目前十八頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1817.2高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)進(jìn)樣器貯液器高壓泵梯度洗脫裝置色譜柱餾分收集器檢測(cè)器記錄儀高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)示意圖輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)目前十九頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)1917.2高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)17.2.1輸液系統(tǒng)17.2.2進(jìn)樣系統(tǒng)

分離系統(tǒng)17.2.4

檢測(cè)系統(tǒng)目前二十頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)2017.2高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)17.2.1輸液系統(tǒng)高壓輸液泵在線脫氣裝置梯度洗脫裝置目前二十一頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)2117.2.1高壓輸液泵作用：將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜系統(tǒng)。輸液泵的穩(wěn)定性直接關(guān)系到分析結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。目前二十二頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)2217.2.1高壓輸液泵性能：⑴足夠的輸出壓力⑵輸出恒定的流量⑶輸出流動(dòng)相的流量范圍可調(diào)節(jié)

⑷壓力平穩(wěn),脈動(dòng)小

目前二十三頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)2317.2.1高壓輸液泵注意事項(xiàng)：⑴防止任何固體顆粒進(jìn)入泵體⑵流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)⑶泵工作時(shí)防止溶劑瓶流動(dòng)相用完

⑷不要超過(guò)最高壓力⑸流動(dòng)相應(yīng)先脫氣目前二十四頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)24在線脫氣、超聲脫氣、真空脫氣等作用：脫去流動(dòng)相中的溶解氣體。流動(dòng)相先經(jīng)過(guò)脫氣裝置再輸送到色譜柱。脫氣不好時(shí)有氣泡，導(dǎo)致流動(dòng)相流速不穩(wěn)定，造成基線飄移，噪音增加。O2,N2,CO2…17.2.1在線脫氣裝置目前二十五頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)2517.2.1梯度洗脫裝置Isocraticelution恒定組成的單一溶劑體系Gradientelution以一定速度改變多種溶劑的配比淋洗，目的是分離多組容量因子相差較大的組分。High-PressureMixing作用:縮短分析時(shí)間,提高分離度,改善峰形,提高監(jiān)測(cè)靈敏度目前二十六頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)26補(bǔ)充、液相色譜中的柱外譜帶展寬色譜柱本身以外區(qū)域的譜帶展寬，稱為柱外譜帶展寬。樣品注入色譜柱后，在色譜柱以外的任何死空間（如進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的擴(kuò)展，而使柱效降低，所以柱外死體積影響是不能忽略的。目前二十七頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)27進(jìn)樣系統(tǒng):密封性好，死體積小，重復(fù)性好1注射器進(jìn)樣裝置優(yōu)點(diǎn)：可以任意改變進(jìn)樣體積，注射快速,不易造成峰擴(kuò)張。缺點(diǎn)：重現(xiàn)性較差，試液容易滲漏目前二十八頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)2817.2.2進(jìn)樣系統(tǒng)2高壓定量進(jìn)樣閥(六通閥)優(yōu)點(diǎn)：進(jìn)樣量的可變范圍大，耐高壓，易于自動(dòng)化缺點(diǎn)：容易造成色譜峰擴(kuò)張目前二十九頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)2917.2.2進(jìn)樣系統(tǒng)目前三十頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)30色譜柱

色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件。要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。

17.2.3分離系統(tǒng)：色譜柱目前三十一頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)31常用內(nèi)壁拋光過(guò)的不銹鋼制成顆粒直徑早期大（20~75μm），柱管徑一般為2mm，柱長(zhǎng)為50~100cm.近年來(lái)，用高效微型填料（3~10μm）管徑為4~5mm，長(zhǎng)為10cm~50cm的直形不銹鋼柱。每米柱效可達(dá)8萬(wàn)塔板數(shù)目前三十二頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)32sphericalandirregularsilicaparticles

Macroporoussphericalsilicaparticle.[K.K.Unger,Poroussilica,Elsevier,1979]

基質(zhì)：載體或擔(dān)體。數(shù)m~數(shù)十m，球形。硅膠或有機(jī)高分子聚合物17.2.3分離系統(tǒng)：色譜柱填料目前三十三頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)33柱性能指標(biāo):柱壓理論塔板高度H理論塔板數(shù)n對(duì)稱因子f容量因子k選擇性因子α分離度R目前三十四頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)3417.2.4檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)器應(yīng)具有：溶質(zhì)性檢測(cè)器有：紫外、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器等總體檢測(cè)器有：示差折光、介電常數(shù)檢測(cè)器等靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、響應(yīng)快，死體積小、定量準(zhǔn)確、適應(yīng)范圍廣等特點(diǎn)，同時(shí)還應(yīng)該對(duì)溫度和載液流速的變化不敏感。目前三十五頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)35

紫外-可見檢測(cè)器光源檢測(cè)室光柵二極管陣列檢測(cè)UVdetectorcell內(nèi)容積：1-10l光路長(zhǎng)：2-10mm目前三十六頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)3617.2.4熒光檢測(cè)器特點(diǎn)：有非常高的靈敏度和良好的選擇性，靈敏度要比紫外檢測(cè)法高23個(gè)數(shù)量級(jí)，特別適合于藥物和生物化學(xué)樣品的分析。目前三十七頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)3717.2.4熒光檢測(cè)器目前三十八頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)3817.2.4質(zhì)譜檢測(cè)器HPLC-ESI/MS目前三十九頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)3917.2.4數(shù)據(jù)處理

計(jì)算機(jī)進(jìn)行峰面積的積分、分析結(jié)果的計(jì)算、誤差的分析或色譜圖的輸出，記錄的信號(hào)進(jìn)行程序化、自動(dòng)化處理。目前四十頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)40復(fù)習(xí):高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)進(jìn)樣器貯液器高壓泵色譜柱餾分收集器檢測(cè)器記錄儀輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)目前四十一頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)4117.2MainstagesofHPLCanalysisPrepareSampleinjectintocolumnelutewithmobilephasedetectsamplecomponentsidentifyandquantify目前四十二頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)4217.2高效液相色譜儀的工作流程進(jìn)樣器貯液器高壓泵梯度洗脫裝置色譜柱餾分收集器檢測(cè)器記錄儀高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)示意圖目前四十三頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)4317.2高效液相色譜儀的工作流程進(jìn)樣器貯液器高壓泵梯度洗脫裝置色譜柱餾分收集器檢測(cè)器記錄儀高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)示意圖目前四十四頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)4417.2高效液相色譜儀的工作流程進(jìn)樣器貯液器高壓泵梯度洗脫裝置色譜柱餾分收集器檢測(cè)器記錄儀高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)示意圖目前四十五頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)4517.2高效液相色譜儀的工作流程進(jìn)樣器貯液器高壓泵梯度洗脫裝置色譜柱餾分收集器檢測(cè)器記錄儀高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)示意圖tS目前四十六頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)46目前四十七頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)47高效液相色譜的應(yīng)用：

醫(yī)藥衛(wèi)生、食品、

人體化學(xué)成分、各類合成藥物成分、各種天然植物和動(dòng)物藥物化學(xué)成分。17.3高效液相色譜法的應(yīng)用目前四十八頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)48高效液相色譜的應(yīng)用：

醫(yī)藥衛(wèi)生、食品、環(huán)保

等各個(gè)領(lǐng)域最為重要的分離分析技術(shù)。17.3高效液相色譜法的應(yīng)用

有機(jī)酸、氨基酸、糖、維生素、脂肪酸、香料、甜味劑、防腐劑、人工色素、病原微生物、霉菌毒素等。目前四十九頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)49南京市兒童醫(yī)院，徐進(jìn)，兒科藥學(xué)雜，1999年第5卷第2期色譜條件色譜條件:島津LC—10AD高效液相色譜儀；RF一l0AxL熒光檢測(cè)器，熒光激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)430nm;LD一I0A泵，分析柱為SpherisorbODS5μm,200x4.6mm,預(yù)柱為WatersODS柱，室溫;流動(dòng)相為0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(pH=4.0):乙睛(78:22v/v)，內(nèi)含0.05mol/L戊磺酸鈉，流速為1ml/min17.3HPLC法測(cè)定人血漿中氨芐青霉素濃度目前五十頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)50樣品分離良好，保留時(shí)間為7.3分鐘

目前五十一頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)51取含有氨芐青霉素的血漿0.2m1.加人10%三氯醋酸0.2m1，渦旋振蕩混勻，12000r/min離心10min，取上清液0.2m1于安瓿中，再加人0.5mol/L鹽酸0.2m1，密封安瓿后置100℃水浴90min，冷卻后再加人蒸餾水0.2m1,渦旋振蕩混勻后，進(jìn)樣20微升測(cè)定。以外標(biāo)法峰面積定量。

血樣處理方法目前五十二頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)52HP1100型高效液相色譜儀色譜柱：Hypersil-ODS2-C18，4.6mmX250mm柱檢測(cè)波長(zhǎng)215nm，進(jìn)樣量20μL，流動(dòng)相為甲醇+0.02mol/L乙酸銨(35+65)，流量0.50mL/min17.3HPLC法快速測(cè)定食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸

目前五十三頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)53目前五十四頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)54色譜圖2:高良姜色譜圖1diarylheptanoidA

2高良姜素3diarylheptanoidB目前五十五頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)55一、液相色譜的速率理論二、影響分離的因素補(bǔ)充高效液相色譜法目前五十六頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)56n為色譜柱的理論塔板數(shù)。因?yàn)閠R是熱力學(xué)常數(shù)，當(dāng)色譜柱的長(zhǎng)度一定，理論板數(shù)目n越大，色譜峰越窄。一、液相色譜的速率理論目前五十七頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)57液相色譜的速率方程為：D為擴(kuò)散系數(shù)，Cd、

C’為有關(guān)項(xiàng)的板高系數(shù)，dp和df

為填充粒子直徑和固定液膜的厚度一、液相色譜的速率理論目前五十八頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)58一、液相色譜的速率理論H∝d2p當(dāng)粒度從45μm降至6μm時(shí),板高要降低10倍。目前五十九頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)59二、影響分離的因素

速率方程：H=A+Cu故液相色譜H-u曲線與氣相色譜的形狀不同，如圖

影響分離的主要因素有流動(dòng)相的流量、性質(zhì)和極性。目前六十頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)601.影響分離的因素——流速流速大于0.5cm/s時(shí),H～u曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。目前六十一頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)612.固定相及分離柱選擇短柱、細(xì)內(nèi)徑提高分析速度；研制高效柱填料是一活躍領(lǐng)域。目前六十二頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)623.流動(dòng)相組成流動(dòng)相按組成不同可分為單組分和多組分；按極性可分為極性、弱極性、非極性；按使用方式有等度洗脫和梯度洗脫。目前六十三頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)633.流動(dòng)相組成常用溶劑:己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間。目前六十四頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)644.選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問題：（1）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相。（2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。（3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度。（4）流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。目前六十五頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)65提高柱效的方法(降低板高)：①固定相填料要均一，顆粒細(xì)，裝填均勻。②流動(dòng)相粘度低。③低流速。④適當(dāng)升高柱溫。一、液相色譜的速率理論目前六十六頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)6617.4高效液相色譜法的主要類型17.4.1分配色譜17.4.2液固（吸附）色譜17.4.3離子交換色譜17.4.4尺寸排阻色譜目前六十七頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)6717.4高效液相色譜法的分離機(jī)理及分類

液相色譜的固定相可以是吸附劑、化學(xué)鍵合固定相（或在惰性載體表面涂上一層液膜）、離子交換樹脂或多孔性凝膠；流動(dòng)相是各種溶劑。被分離混合物由流動(dòng)相液體推動(dòng)進(jìn)入色譜柱。根據(jù)各組分在固定相及流動(dòng)相中的吸附能力、分配系數(shù)、離子交換作用或分子尺寸大小的差異進(jìn)行分離。

目前六十八頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)6817.4高效液相色譜法的分離機(jī)理及分類吸附色譜分配色譜尺寸排斥色譜離子交換色譜吸附能，氫鍵疏水分配作用溶質(zhì)分子大小庫(kù)侖力

類型

主要分離機(jī)理目前六十九頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)691.吸附色譜（液-固吸附色譜）以固體吸附劑為固定相，如硅膠、氧化鋁等，較常使用的是5～10μm的硅膠吸附劑。流動(dòng)相可以是各種不同極性的一元或多元溶劑。2.分配色譜（液-液分配色譜）早期通過(guò)在擔(dān)體上涂漬一薄層固定液制備固定相,現(xiàn)多為化學(xué)鍵合固定相，即用化學(xué)反應(yīng)的方法通過(guò)化學(xué)鍵將固定液結(jié)合在擔(dān)體表面。目前七十頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)703.離子交換色譜固定相為離子交換樹脂，流動(dòng)相為無(wú)機(jī)酸或無(wú)機(jī)堿的水溶液。各種離子根據(jù)它們與樹脂上的交換基團(tuán)的交換能力的不同而得到分離。4.凝膠色譜（空間排阻色譜）

以凝膠為固定相。凝膠是一種經(jīng)過(guò)交聯(lián)的、具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和不同孔徑的多聚體的通稱。如葡聚糖凝膠、瓊脂糖等軟質(zhì)凝膠；多孔硅膠、聚苯乙烯凝膠等硬質(zhì)凝膠；目前七十一頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)7117.4.1

分配色譜partitionchromatography

樣品分子在流動(dòng)相和固定相間的溶解度不同（分配作用）而實(shí)現(xiàn)分離的液相色譜分離模式優(yōu)點(diǎn)：1.均一性和穩(wěn)定性好2.不易流失3.柱效高4.重現(xiàn)性好5.流動(dòng)相和固定相選擇范圍廣6.分離性能好目前七十二頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)7217.4.1

分配色譜partitionchromatography液-液分配色譜：固定液易流失（物理吸附）liquid-liquid鍵合相色譜：化學(xué)鍵bondedphase目前七十三頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)7317.4.1

分配色譜partitionchromatography目前七十四頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)74OHOHOHOOO+C18H37SiCl3SiC18H37

分配色譜一、化學(xué)鍵合固定相目前七十五頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)75非極性鍵合固定相：鍵合在載體表面的功能分子是烷基（C8和C18）

、苯基等非極性有機(jī)分子。（極性很小）極性鍵合固定相：鍵合在載體表面的功能分子是具有丙氨基、二醇基、氰乙基、氨基等極性基團(tuán)的有機(jī)分子。

分配色譜一、化學(xué)鍵合固定相如最常用的ODS（Octa-decyltrichloroSilane）柱或C18柱就是最典型的代表，其極性很小。目前七十六頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)76

分配色譜1.反相HPLC（reversedphaseHPLC）：非極性固定相：如ODS柱或C18柱等極性流動(dòng)相：如水、甲醇、乙腈等2.正相HPLC（normalphaseHPLC）：極性固定相：

如氰乙基、氨基等非極性（或弱極性）流動(dòng)相：如正己烷等目前七十七頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)77一般地，正相色譜是固定液的極性大于流動(dòng)相的極性，而反相色譜是固定相的極性小于流動(dòng)相的極性。正相色譜適宜于分離極性化合物，反相色譜則適宜于分離非極性或弱極性化合物。

分配色譜目前七十八頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)78二、固定相和流動(dòng)相的選擇各種分析物質(zhì)功能基的極性按下列順序增加：烷烴＜醚＜酯＜酮＜醛＜酰胺＜胺＜醇，水的極性最大。液相色譜中常用流動(dòng)相的性質(zhì)（表17-2）

分配色譜目前七十九頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)79舉例：反相液相色譜法流動(dòng)相的選擇水甲醇或乙腈弱酸、弱堿或緩沖鹽（PH:2~8）目前八十頁(yè)\總數(shù)八十八頁(yè)\編于二十二點(diǎn)802.選擇色譜柱類型的方式：第一，固定相的極性與分析物質(zhì)的極性粗略匹配，用極性明顯不同的流動(dòng)相洗脫；第二，流動(dòng)相的極性與分析物質(zhì)的極性相匹配，用極性明顯不同的固定相；第三，固定相與分析物質(zhì)的極性極為相似，僅由流動(dòng)相極性差異使分析物質(zhì)沿柱移動(dòng)。

分配色