DB44T 512-2008松毛蟲質型多角體病毒生產(chǎn)及作用技術規(guī)程

松毛蟲質型多角體病毒生產(chǎn)及使用技術規(guī)程2008-05-26發(fā)布廣東省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I Ⅱ1范圍 12術語和定義 13松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的生產(chǎn) 14松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的劑型 35松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的質量檢測 36松毛蟲質型多角體病毒的包裝、運輸、貯存 37松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的使用 38松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑防治效果評價 4附錄A(規(guī)范性附錄)松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑生產(chǎn)情況記錄表 5附錄B(規(guī)范性附錄)松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑防治效果檢查表 6附錄C(規(guī)范性附錄)松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑防治效果檢查表 7附錄D(資料性附錄)松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑基本知識 8Ⅱ本標準的附錄A、附錄B、附錄C為規(guī)范性附錄，附錄D為資料性附錄。本標準由廣東省林業(yè)局科技與對外合作處提出。本標準由廣東省林業(yè)局歸口。本標準起草單位：茂名市林業(yè)科學研究所、廣東省森林病蟲害防治與檢疫總站。本標準主要起草人：林思誠、古錦漢、陳沐榮、柯沛強、章寧。DB44/T512—2008松毛蟲質型多角體病毒生產(chǎn)及使用技術規(guī)程1范圍本標準規(guī)定了松毛蟲質型多角體病毒(DCPV)殺蟲劑的生產(chǎn)工藝流程、產(chǎn)品質量檢測及產(chǎn)品包裝、運輸、貯存、使用方法等技術要求。本標準適用于松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的生產(chǎn)及使用。2術語和定義下列術語和定義適用于本標準。通過病毒在寄主體內(nèi)的復制，擴大病毒數(shù)量。質型多角體病毒的包含體。松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑致靶標害蟲感病、死亡的能力，以感染率、死亡率表示。3松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的生產(chǎn)3.1病毒的增殖3.1.1林間自然增殖方法在松毛蟲蟲口密度較高的松林中噴灑病毒種源，接種松毛蟲林間自然種群，病毒種源在林間自然增殖后，回收松毛蟲幼蟲，加工提取病毒，林間自然增殖方法適用于病毒的規(guī)?；a(chǎn)。病毒種源多角體含量達30億/g以上，保存期限一年。用作增殖病毒的林地，應滿足以下條件：——松樹純林，面積10hm2以上，交通方便?！獦涓卟怀^10m,針葉豐富，樹下植被少?！迥陜?nèi)未使用松毛蟲質型多角體病毒?！骄x口密度40頭/株～100頭/株，蟲體發(fā)育正常，無明顯的流行病跡象。接種應在松毛蟲幼蟲3齡~5齡進行，蟲口密度較高時，可適當提前。不同世代的增殖效果，以越冬代最好，第一代次之。接種濃度為10℃PB/ml～10CPB/ml。用機動噴霧器作常量噴霧，均勻噴灑，噴后第三天重噴一次。采收感染病毒的蟲體按染病蟲體中腸顏色的變化，將中腸病變程度劃分為三個等級：2I級：中腸白色或黃白色，單蟲病毒含量約2×10℃PB～5×10℃PB;接種8天后，每日抽樣調查林間松毛蟲中腸顏色的變化，當中腸病變程度達到I級的蟲體占60%時，死蟲體內(nèi)多角體大部分已隨糞便排出，無采收價值，僅采收樹上活蟲。樹高2m以下，可直接從樹上收集活蟲。樹高超過2m時，振落樹上活蟲再從地面收集，也可用菊酯類化學農(nóng)藥與柴油配制成煙霧劑，噴煙收集的染病蟲體，按重量加入2%的食鹽，裝入塑料桶保存，待加工。用塑料薄膜圍成200cm×100cm×80cm的圍欄，四角用插桿固定，下方用土壓實，上方設遮陰防雨棚。欄內(nèi)架設長160cm的橫桿2根(離地面高60cm),橫桿上懸掛有豐富針葉的松枝。自林間采集松毛蟲5齡~6齡幼蟲，投入圍欄內(nèi)飼養(yǎng)，每欄投入約8000頭。用1×107CPB/ml的病毒懸液噴灑松針，讓松毛蟲取食，3天后重噴一次。在8天后，每天抽樣檢查松毛蟲感病情況。當染病蟲體中腸病變程度達到I級的蟲體數(shù)量占70%時，即可采收。集蟲圍欄增殖方法適用于高純度病毒的生產(chǎn)，但不宜作病毒的大量生產(chǎn)。每個圍欄的病毒產(chǎn)量約1.5×用雙滾刀切肉機或鉸肉機將蟲尸切片或鉸碎，重復鉸切1至2次，鉸切成0.5cm以下的小塊。將蟲尸碎片放入攪拌機，加入10倍清水，以80轉/min～100轉/min的速度攪拌30分鐘，使中腸上皮放出洗液，過120目尼龍紗濾網(wǎng)，濾液進入貯液罐，濾渣經(jīng)脫水機脫水10分鐘，重新加人攪拌機重復用潛水泵將貯液罐中的濾液抽至沉降塔，靜置。沉降塔設透明的觀察窗，當觀察到塔內(nèi)液體明顯分層時，放出上層清液進入離心機離心，下層濁液以240目絹紗過濾，濾渣直接去掉，濾液重回攪拌機，與后面的初濾濾液一起再次沉降。當天最后一次沉降產(chǎn)生的下層濁液，經(jīng)240目絹紗過濾后，濾液直接進人離離心機安裝在低于沉降塔的水平面上，以形成一定的落差，方便濾液自然進入離心機。離心機轉速15000轉/分鐘。多角體在離心力作用下沉淀于離心管管壁上。取離心沉淀物加工，離心上清液進入排污池離心沉淀物，加入7%鹽水或中性甘油，用打蛋機打碎。待該批次蟲尸加工完畢后，將所有離心沉淀物混合，用磨漿機磨碎，逐次調低磨漿機的間隙，重復磨漿三次。最終的細度應達到所有的顆粒直徑小于100μm,90%以上的顆粒直徑小于50μm。3生產(chǎn)人員應作生產(chǎn)記錄，將有關數(shù)據(jù)記入附錄A的記錄表。4松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的劑型松毛蟲質型多角體病毒可加工成水劑、油乳劑、油劑、粉劑。離心沉淀物直接加水磨漿即成水劑；離心沉淀物加等量中性甘油磨漿即成50%中性甘油懸浮劑；離心沉淀物加入礦物油及乳化劑、助懸劑及保護劑磨漿，可制成超低容量噴霧油劑；離心沉淀物加填料抽濾，真空脫水，加入濕潤劑，可制成可濕性粉劑。5松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的質量檢測5.2檢測方法用多點抽樣的方法，稱取1g藥劑，逐級稀釋，用血球計數(shù)板計數(shù)，對角線法取樣，共取40小格，最后平均每格以4個～6個為宜。按下式計算多角體含量：每克藥劑多角體含量=平均每格多角體數(shù)x稀釋倍數(shù)×(4×105)含量未達質量要求時，應重新加水混勻、過濾、沉降、離心。包裝上標明產(chǎn)品名稱、廠名、廠址、批號、凈重、毛重、執(zhí)行標準、質檢人、出廠日期、保存方法及保質期、含量、防治對象、使用方法。避免曝曬、受熱和紫外光照射。放在陰涼、干燥、通風處，保存期一年。置4℃以下冷庫或冰柜中，保存期七年。7松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑的使用應保證病毒在噴灑后能被害蟲取食。在廣東防治松毛蟲、松茸毒蛾，全年均可使用。一般情況下，在氣溫高于20℃低于35℃,相對濕度70%左右時，使用效果最好。在蟲口上升期，大部分幼蟲發(fā)育至3齡時施藥防治。7.4使用劑量使用劑量1500億CPB/hm2~3000億CPB/hm2。蟲口密度低、蟲齡小時使用較低的劑量，蟲口密度高、蟲齡大時適當增加病毒用量。按預定的噴液量及藥箱容積計算好病毒用量，量取病毒，以少量清水稀釋，倒入藥箱，加入清水定容，攪拌均勻，噴霧。地面超低容量噴霧使用松毛蟲質型多角體病毒油劑，直接噴灑不需稀釋，特別適合于山高、路陡、林密等地形及缺乏水源的地區(qū)使用。一般采用10m寬的噴幅，噴液量3000ml/hm2。航空低量噴霧使用水劑或油乳劑，仍需以清水稀釋。每架次噴灑面積控制在133hm2以內(nèi)，藥液中加入1%的食鹽作助沉劑。松毛蟲質型多角體病毒與一些致死速度快的微生物殺蟲劑、抗生素或低毒化學農(nóng)藥的合理配伍使用，可兼具速效與持效的作用。通常選用蘇云金桿菌(B.t.)、阿維菌素及酯類化學農(nóng)藥參配。混配時，松毛蟲質型多角體病毒的用量為750億CPB/hm2~1500億CPB/hm2,其它參配藥劑以亞致死劑量或正常用量的1/3混入。8松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑防治效果評價單對角線法于防治區(qū)設置標準木40株，在類似條件林地設對照區(qū)并設標準木10株。鏟光標準木樹冠投影范圍內(nèi)的地被物，施藥后第8天始每日調查記錄死蟲數(shù)，數(shù)據(jù)記入附錄B的調查表，殺蟲死亡率計算在自然死亡率5%～10%之間，可進行校正死亡率計算。噴藥后25天，振落標準樹上活蟲，用剪刀在背上輕剪一刀，露出中腸，根據(jù)中腸病變程度判斷是否感染(I級、Ⅱ級為感染，Ⅲ級為未感染),相關調查數(shù)據(jù)填人附錄B的調查表。以下式計算感染率：感染率在防治后的松毛蟲第n代種群中，按8.1方法取樣，按8.3方法計算感染率，相關數(shù)據(jù)填入附錄C的調5DB44/T512—2008(規(guī)范性附錄)松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑生產(chǎn)情況記錄表病蟲來源增殖方法接種濃度批次病蟲重量洗脫時間表(分鐘)沉淀時間(分沉淀物重保存介質重量產(chǎn)品質量6))松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑防治效果調查表地點縣鎮(zhèn)村，防治面積hm2,林分組成平均樹高m害蟲種類蟲齡有蟲株率(%),平均蟲口密度頭/株，藥劑名稱,濃度或用量,施藥方法,施藥日期。標準數(shù)號死蟲數(shù)死蟲數(shù)死蟲總數(shù)存活蟲數(shù)感染蟲數(shù)感染率8天9天9天天天3天天天6天6天8天天天天天天天7害蟲種類,蟲齡,有蟲株率,平均蟲口密度,檢查號檢查結果檢查蟲感染蟲數(shù)感染率備注感染(+)不感染(-)1234567898DB44/T512—2008(資料性附錄)松毛蟲質型多角體病毒殺蟲劑基本知識D.1松毛蟲質型多角體病毒的分類地位松毛蟲質型多角體病毒屬呼腸孤病毒科(Reoviridae)質型多角體病毒屬(Cypovirus)的成員，為RNA病毒，基因組電泳圖譜屬于第一類型。D.2松毛蟲質型多角體病毒的形態(tài)特征松毛蟲質型多角體病毒的包含體平面投影為六邊形、五邊形、近圓形，直徑0.5μm～8.4μm不等。松毛蟲質型多角體病毒的病毒粒子為正二十面體，單層衣殼結構，位于正二十面體的十二個頂端有十二個管狀結構的突起，直徑約50μm。病毒粒子隨機地包埋在蛋白質性質的包含體中，病毒粒子的核酸為雙鏈RNA,基因組由10個等克分子摩爾數(shù)的RNA片段組成。D.3松毛蟲質型多角體病毒的感染部位松毛蟲質型多角體病毒主要通過寄主取食帶有病毒的食物而感染，其感染部位僅限于幼蟲中腸上皮細胞，嚴重感染的中腸變?yōu)榘咨螯S白色，與正常中腸易于區(qū)別。被感染細胞解體后連同形成的多角體隨糞便排出體外，隨著上皮細胞的不斷增生再感染，所以多角體是先后不斷形成的，大小也不等。因此包含的病毒粒子數(shù)量差異也十分懸殊、成熟的大型包含體呈典型的多面體，含病毒粒子多達1000個以上，而小型的多角體多呈近圓形，含病毒粒子較少。D.4松毛蟲質型多角體病毒病松毛蟲感病初期，一般外部病癥不明顯。隨著病情的發(fā)展，幼蟲食欲減退，發(fā)育緩慢，神態(tài)表現(xiàn)萎糜，蟲體逐漸縮短，形成頭大體小不正常的病態(tài)，尾部常帶有黃白色的稀糞。經(jīng)過一段時間，幼蟲陸續(xù)死亡，病死蟲體壁不易破裂。D.4.2組織病變馬尾松毛蟲感病初期，中腸仍為透明的淡綠色。4、5天后，中腸上可見到有分散的乳白色的小斑點。隨病勢加重，腸道上的白點增多，逐漸連成一片。白色程度增加，面積也不斷增大，直到全部中腸變?yōu)榘咨螯S白色，并且變得腫脹而不透明，表面出現(xiàn)許多橫紋皺褶。腸中食物甚少，前腸堆積較多未消化的針葉，使前腸伸長。病變一般由中腸后部開始，逐漸向中腸前端擴展。到感病后期，體內(nèi)脂肪體大大減少，但體液仍澄清。最后中腸完全被破壞，通過鏡檢，可發(fā)現(xiàn)吐液及蟲糞中有大量的多角體。當多角體大部分排出后，幼蟲隨即死亡。D.5松毛蟲質型多角體病毒的致病特點D.5.1宿主域松毛蟲質型多角體病毒具有較高的宿主特異性，對脊椎動物不感染而安全。但相對于核型多角體病毒而言，松毛蟲質型多角體病毒具有更寬的宿主域，除能感染松毛蟲屬中不同的種外，還對松茸毒蛾、棉蛉蟲、斜紋夜蛾、粉紋夜蛾等其它鱗翅目昆蟲有較高的感染率。D.5.2感染途徑松毛蟲質型多角體病毒只感染寄主中腸上皮細胞，多角體主要通過寄主的取食經(jīng)口進人寄主中腸，在腸內(nèi)堿性溶液的作用下釋放病毒粒子，病毒粒子攻擊寄主中腸上皮細胞，造成寄主中腸上皮細胞的病變、破裂、壞死。D.5.3潛伏期松毛蟲質型多角體病毒病的潛伏期與寄主吞食的多角體數(shù)量、寄主種類、寄主發(fā)育期、氣溫等有關，一般5天~7天。寄主從發(fā)病至死亡也有一個過程，這一過程的長短主要與氣溫有關，