超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定稻蝦中多類獸藥殘留

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定稻蝦中多類獸藥殘留

摘要：建立稻蝦中11種獸藥（氯霉素類、喹諾酮類、四環(huán)素類）同時(shí)測(cè)定的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。樣品以0.2%甲酸乙腈溶液提取，經(jīng)OasisPRiMEHLB柱凈化后用WatersHSST3柱分離，在ESI+/-多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下采集，外標(biāo)法定量。11種獸藥在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r>0.996，方法定量限低于5μg/kg，在5、10、20μg/kg加標(biāo)水平下回收率為72.5～114.5%，RSD為1.9～7.0%。該方法簡(jiǎn)便、靈敏，適用于稻蝦中多類獸藥的快速測(cè)定和篩查。關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；獸藥；稻蝦引言稻蝦綜合種養(yǎng)是為適應(yīng)新時(shí)期農(nóng)業(yè)農(nóng)村發(fā)展要求、穩(wěn)定水稻生產(chǎn)、促進(jìn)漁業(yè)增效，在原稻田種植的基礎(chǔ)上發(fā)展的綜合種養(yǎng)技術(shù)。在濟(jì)寧市魚臺(tái)周邊縣區(qū)得到大力推廣。在稻蝦種養(yǎng)過程中由于疾病防控和飼料帶入的獸藥，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量造成潛在風(fēng)險(xiǎn)，已受到廣泛關(guān)注[1]。當(dāng)前獸殘檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中常用的固相萃取等技術(shù)存在前處理過程繁瑣、試驗(yàn)周期時(shí)間長[2]等問題，檢測(cè)效率低；而近年來興起的多殘留通過式凈化前處理技術(shù)在獸藥殘留分析中獲得了良好的應(yīng)用。本文針對(duì)龍蝦中食品安全風(fēng)險(xiǎn)較高的氯霉素類、喹諾酮類、四環(huán)素類殘留，采用同步通過式凈化技術(shù)，建立可靠的稻蝦中高風(fēng)險(xiǎn)藥物同時(shí)快速篩查的方法，為稻蝦產(chǎn)品藥物殘留風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)、質(zhì)量安全監(jiān)管及隱患排查提供技術(shù)支撐。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器ExionLC-triplequad3500液質(zhì)聯(lián)用儀（美國SCIEX）；高速冷凍離心機(jī)（湖南湘儀）；全自動(dòng)平行濃縮儀（美國Labtech）；超純水儀（美國Millipore）；XSE104天平（梅特勒-托利多）。1.2試劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：土霉素/金霉素/四環(huán)素/強(qiáng)力霉素、喹諾酮類、氯霉素/甲砜霉素/氟苯尼考（FirstStandard100μg/mL）；試劑：乙腈（色譜純，F(xiàn)isher）；甲酸（分析純，阿拉?。?；WatersOasisPRiMEHLB柱（3mL/60mg）。試驗(yàn)樣品來源于我市50個(gè)養(yǎng)殖戶。1.3基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液制備采用“1.5”項(xiàng)下方法處理陰性樣品獲取基質(zhì)空白溶液，再采用上述標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（2μg/L～250μg/L（喹諾酮及四環(huán)素類）、0.5μg/L～50μg/L（氯霉素類））。1.4色譜和質(zhì)譜條件WatersHSST3柱（1.8μm，100mm×2.1mm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0~1min90%A、1~6min90%~5%A、6-8min5%A~90%A；流速：0.3mL/min，進(jìn)樣量：5μL.掃描模式：MRM，ESI+/-，電噴霧電壓：5500V(+)/4500V(-)；離子源溫度：550℃。去簇電壓（DP）和碰撞氣能量（CE）見表1。1.5實(shí)驗(yàn)方法將樣品去頭、殼，取可食部分打碎成肉泥。稱取5g樣品于50mL離心管中，加10.0mL含0.2%甲酸的乙腈-水（80:20）溶液，渦旋10min，8000r/min離心8min。取上清液過凈化柱，收集濾液5.0mL，N2下吹干，加1.0mL初始流動(dòng)相復(fù)溶，過0.22μm濾膜，待測(cè)。2結(jié)果與分析2.1前處理方法優(yōu)化研究表明乙腈對(duì)喹諾酮及四環(huán)素類藥物共提取效果良好，且甲酸能夠提升其對(duì)藥物的提取能力[4]，分析發(fā)現(xiàn)乙腈中添加適量水可有效改善基質(zhì)的蛋白沉淀效應(yīng)，最終確定了80%乙腈-水提取效果較佳。在提取液中加入0.1%、0.2%、0.5%甲酸，結(jié)果表明0.2%甲酸對(duì)多數(shù)組分具有最優(yōu)回收率。2.2質(zhì)譜條件優(yōu)化對(duì)質(zhì)譜分析中對(duì)各物質(zhì)的DP和CE進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)合分析靈敏度和特征離子專屬性確定最優(yōu)參數(shù)（見表1）。表1

監(jiān)測(cè)離子對(duì)優(yōu)化參數(shù)母離子，m/z子離子，m/zDP/VCE/eV恩諾沙星360.0316.0a9027245.19038氧氟沙星362.1318.0a9527261.09539沙拉沙星386.1299.1a11540342.011527環(huán)丙沙星332.1230.9a9052314.09028氯霉素320.9151.9a-72-25256.9-72-26甲砜霉素353.8184.9a-80-29289.9-80-18氟苯尼考355.7335.8a-72-16184.9-72-25土霉素461.0426.1a7926443.27921四環(huán)素445.1410.0a9130427.19123金霉素479.1441.1a8231462.18221強(qiáng)力霉素445.2428.1a9125410.19126a定量離子2.3方法學(xué)驗(yàn)證水產(chǎn)品中獸藥檢測(cè)易受到基質(zhì)效應(yīng)的干擾和影響[5]，因此本法采用陰性基質(zhì)配制工作曲線。各組分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r≥0.996。以10倍信噪比確定各物質(zhì)定量限（0.29～4.5μg/kg），均低于同類國家標(biāo)準(zhǔn)方法。在5、10、20μg/kg水平下回收率為72.5～114.5%，RSD為1.9～7.0%，表明方法精密度和準(zhǔn)確度良好（見表2）。表211種獸藥線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、定量限、回收率及精密度線性范圍，μg/L定量限，μg/kg相關(guān)系數(shù)r加標(biāo)回收率（RSD），%5μg/kg10μg/kg20μg/kg土霉素2～2503.10.99785.7（3.9）83.4（2.1）80.5（1.9）四環(huán)素4.00.99979.0（4.2）72.5（7.0）86.1（3.6）金霉素3.80.99895.6（5.1）101.7（4.0）106.1（3.2）強(qiáng)力霉素4.30.99690.1（6.0）106.6（4.1）107.1（2.3）氧氟沙星2.10.99990.3（2.6）92.6（2.5）103.1（2.2）環(huán)丙沙星3.50.99891.5（6.6）98.6（4.3）101.9（5.0）沙拉沙星3.00.996113.5（4.9）109.3（2.6）114.5（6.5）恩諾沙星3.40.99786.7（5.1）82.6（3.4）81.5（4.5）氯霉素0.5～500.290.99781.3（6.1）84.0（5.5）86.7（6.2）甲砜霉素0.450.99676.8（4.5）78.9（4.9）82.5（3.7）氟苯尼考0.470.999475.5（6.5）85.0（5.2）79.2（5.0）2.5樣品測(cè)定本研究抽取了我市養(yǎng)殖戶的50個(gè)龍蝦樣本驗(yàn)證本法的可靠性。其中1個(gè)樣本檢出恩諾沙星，含量為5.11μg/kg；采用國標(biāo)方法進(jìn)行對(duì)比測(cè)定[2]，結(jié)果為5.08μg/kg，一致性較高。3結(jié)論本法采用0.2%甲酸乙腈提取、OasisPRiMEHLB通過式凈化技術(shù)去除干擾物，能夠有效提升對(duì)稻蝦中多種獸藥的提取能力、保證分析準(zhǔn)確性并大幅提高分析效率。方法驗(yàn)證結(jié)果表明本法具有良好的線性關(guān)系、較低的檢出限和定量限，及滿意的精密度和準(zhǔn)確度。表明本方法具有快速、簡(jiǎn)單、靈敏度高、準(zhǔn)確性和重復(fù)性好、基質(zhì)適用性強(qiáng)等特點(diǎn)，適用于稻蝦中多類獸藥的快速測(cè)定和篩查。Reference[1]沈可伊，鄒曉霜，王軍.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定蝦肉中4種獸藥殘留及其熱穩(wěn)定性分析[J/OL]．食品與發(fā)酵工業(yè).[2]GB31658.17-2021動(dòng)物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

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