抗核抗體檢測及臨床意義張瑾

風(fēng)濕免疫性疾病診斷方法癥狀、體征自身抗體影像學(xué)檢查病理

目前一頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)風(fēng)濕免疫性疾病相關(guān)自身抗體抗核抗體譜（ANAs）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)抗體(RF,抗CCP等)抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）抗自身免疫性肌炎譜自身免疫性肝病相關(guān)抗體譜抗磷脂抗體譜目前二頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗核抗體譜檢測的意義有助于彌漫性結(jié)締組織病的分類和診斷抗Sm抗體是SLE的標(biāo)記抗體；抗Scl-70抗體是SSc的標(biāo)記抗體；抗Jo-1抗體是PM/DM的標(biāo)記抗體；觀察疾病活動(dòng)度和治療反應(yīng)抗dsDNA抗體研究發(fā)病機(jī)理抗核小體抗體、抗dsDNA抗體目前三頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)基本概念A(yù)NA熒光核型ANAs中的常見抗體目前四頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗核抗體自身抗體：指抗自身組織、器官、細(xì)胞及其成分的抗體ANA：指抗細(xì)胞核成分（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）的抗體。ANA存在一個(gè)譜。ANA新概念：抗核酸(Nucleicacid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗體總稱某些核抗原成分在核仁和胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更豐富

(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)目前五頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)ANA檢測方法-IIF法ANA滴度ANA核型目前六頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)ANA滴度的意義結(jié)締組織病的粗篩（>1:160）陽性標(biāo)本還需進(jìn)一步識別感染、腫瘤及5%正常人可出現(xiàn)低滴度陽性ANA陰性基本可以除外SLEANA滴度與疾病活動(dòng)性無明確相關(guān)性目前七頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)熒光顯微鏡下ANA的染色型別均質(zhì)型（H）核膜型（M)斑點(diǎn)型（S）核仁型（N）著絲點(diǎn)型（ACA）胞漿型（C）混合型目前八頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)均質(zhì)型(H)抗組蛋白抗ds/ssDNA抗核小體主要出現(xiàn)在SLE中目前九頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)均質(zhì)型

(H)目前十頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)核膜型

(M)主要與抗dsDNA有關(guān)

與抗原底物片固定方法和備制過程有關(guān)出現(xiàn)在SLE中部分與抗核包膜蛋白有關(guān)

抗板層素抗gp210出現(xiàn)在PBC中

目前十一頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)核膜型

(M)目前十二頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)與抗ENA成分有關(guān)

抗Sm

抗RNP

抗SS-A

抗SS-B出現(xiàn)在SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM等

斑點(diǎn)型(S)目前十三頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)斑點(diǎn)型(S)目前十四頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)與抗核仁蛋白有關(guān)抗Scl-70

抗RNA多聚酶I

抗PM-Scl出現(xiàn)在SSc中核仁

型(N)目前十五頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)核仁

型(N)目前十六頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)與抗著絲點(diǎn)染色質(zhì)有關(guān)存在于有絲分裂期出現(xiàn)在SSc、CREST綜合征等中著絲點(diǎn)

型(ACA)目前十七頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)著絲點(diǎn)

型(ACA)目前十八頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)與抗胞漿成分有關(guān)抗核糖體P蛋白（rRNP）：出現(xiàn)在SLE中抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ抗信號識別顆粒（SRP)抗線粒體：出現(xiàn)在PBC中抗高爾基體抗溶酶體等等

胞漿型

(C)見于PM/DM目前十九頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)

胞漿型(C)目前二十頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)ANA熒光核型小結(jié)均質(zhì)型（H）：像大餅，SLE相關(guān)核膜型（M)：像圈圈，SLE相關(guān)斑點(diǎn)型（S）：像藕片，抗ENA核仁型（N）：像紐扣，SD相關(guān)著絲點(diǎn)型（ACA）：像滿天星，抗ACA胞漿型（C）：像空心大餅,SLEPM/DMPBC相關(guān)混合型：稀釋后檢測有助于區(qū)分目前二十一頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗核抗體譜（ANAs）ANAs抗核不溶成分抗核可溶成分（抗ENA）抗染色體DNA蛋白抗核仁抗體

抗DNA抗體

抗核小體抗體

抗組蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4

抗Sm,U1RNP,SSA,SSB抗Scl-70,Jo-1,PM-1抗rRNP,PCNA…….dsDNAssDNA抗著絲點(diǎn)抗體（ACA)抗5sRNA目前二十二頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗dsDNA檢測方法以短膜蟲或馬疫錐蟲為底物的間接免疫熒光法(IIF)：≥1:5短膜蟲或馬疫錐蟲的動(dòng)基體內(nèi)含有天然純dsDNA，未經(jīng)人工處理，不含組蛋白與ssDNA，抗原性純一特異。優(yōu)點(diǎn)：特異性好

目前二十三頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗dsDNA檢測方法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）:≥100IU/ml優(yōu)點(diǎn)：敏感性最高

缺點(diǎn)：過于敏感，同時(shí)可能檢測到ssDNA抗體和低親和力dsDNA抗體,而這兩種致病力均不強(qiáng)

放射免疫法(Farr):≥20%

優(yōu)點(diǎn)：對高親和度DNA抗體的檢測優(yōu)于CL-IIF缺點(diǎn)：具有放射性，對技術(shù)人員身體造成一定影響蛋白印跡法（WB）

缺點(diǎn)：dsDNA抗原在純化包備過程中可變性解鏈，變成ssDNA,導(dǎo)致假陽性結(jié)果不同方法檢測SLE患者抗dsDNA抗體的結(jié)果：everythingispossible至少用兩種方法做（報(bào)告結(jié)果時(shí)注明方法學(xué)）,互為補(bǔ)充。如：IIF法+ELISA法

目前二十四頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)目前二十五頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)目前二十六頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗dsDNA抗體臨床意義SLE的血清特異性抗體多有致病性（IgG型），與親和力（高）有關(guān)與LN與SLE疾病活動(dòng)性相關(guān)，活動(dòng)期達(dá)90％可用于SLE疾病活動(dòng)期判斷＆藥物療效觀察與SLE急性皮疹、血管炎、漿膜腔炎、白細(xì)胞減少等有關(guān)目前二十七頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)目前二十八頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗組蛋白抗體（AHA）

（酶聯(lián)免疫吸附法X2SD)可出現(xiàn)于多種結(jié)締組織病，不具有診斷特異性SLE：50%

活動(dòng)期SLE可達(dá)90.2%與LN相關(guān)，與SLE疾病活動(dòng)性存在一定意義的相關(guān)性藥物性狼瘡（DIL）：>90%如：異煙肼、苯妥因鈉、青霉胺、雌激素等

僅有AHA而無其他ANA，強(qiáng)烈支持DIL其他結(jié)締組織?。?3-30%如：RA、PBC、SSc等

目前二十九頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)核小體是真核細(xì)胞染色質(zhì)的基本復(fù)制單位，由組蛋白與DNA組成。參與SLE發(fā)病機(jī)制：多克隆B細(xì)胞活化劑產(chǎn)生ANuA，先于其他ANA促進(jìn)抗dsDNA與AHA形成參與LN的發(fā)生

抗核小體抗體（ANuA）目前三十頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗核小體抗體臨床意義SLE標(biāo)記性/高特異性自身抗體敏感性：58%-66%（優(yōu)于抗dsDNA及抗Sm）特異性：98%-100%（與抗dsDNA相當(dāng)）用于SLE的早期診斷ANuA的產(chǎn)生早于抗dsDNA、AHA抗dsDNA陰性者有1/4～1/2ANuA陽性與LN相關(guān)，用于SLE疾病活動(dòng)性監(jiān)測目前三十一頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)ANuA、抗dsDNA、AHA聯(lián)合檢測意義目前三十二頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗ENA抗體

extractablenuclearantigen可提取性核抗原成分：核酸與核蛋白，不含染色質(zhì)成分功能：參與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白翻譯合成來源：無種屬差異，有組織不均一性理化特性：對溫度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A）意義：抗ENA抗體是ANAs中范圍最廣、最為重要的一簇抗體，與疾病活動(dòng)性大多無相關(guān)目前三十三頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)

抗ENA抗體檢測方法免疫雙擴(kuò)散法(ID)對流免疫電泳法(CIE)免疫印跡法(IBT)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Proteinchip）目前三十四頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗Sm抗體與抗U1RNP抗體靶抗原：位于細(xì)胞核內(nèi)的一組含尿嘧啶豐富的核糖核蛋白，Sm和U1RNP是同一分子復(fù)合物中的不同位點(diǎn)目前三十五頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗Sm抗體與抗U1RNP抗體抗Sm：SLE的標(biāo)記性抗體，是前瞻性及回顧性診斷的指標(biāo)。陽性率低：SLE（30%）抗U1RNP：多種CTD均可出現(xiàn)，與手指腫脹、雷諾現(xiàn)象、肌炎、指端硬化等相關(guān)，但腎炎發(fā)生率低。

陽性率：40-60%，其中SLE(30-40%),SSc(14%),pSS(12%),PM/DM(15%)高滴度抗U1RNP+抗Sm-MCTD抗U1RNP+抗Sm+SLE抗U1RNP-抗Sm+實(shí)驗(yàn)室誤差?U1RNP丟失?目前三十六頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗rRNP抗體靶抗原：胞漿中60S核糖體大亞基上的磷酸化蛋白

目前三十七頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗rRNP抗體SLE的高度特異性抗體，與SLE腦病相關(guān)常在SLE活動(dòng)期存在,但不會(huì)隨病情的緩解立即消失,可持續(xù)1-2年后才轉(zhuǎn)陰。陽性率：24%可出現(xiàn)在SLE早期（ANA及抗dsDNA陰性）

目前三十八頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗SSA與抗SSB抗體靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相鄰結(jié)構(gòu)在不同的細(xì)胞周期，在細(xì)胞內(nèi)的定位不同（細(xì)胞核內(nèi)和胞漿中均可存在）pSS的SS-A存在于細(xì)胞核內(nèi)SLE的SS-A存在于胞漿中SS-B主要位于細(xì)胞核內(nèi)45KD47KD48KD目前三十九頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗SSA與抗SSB抗體抗SS-A：結(jié)締組織病中出現(xiàn)頻率最高的抗體（60-75%），見于pSS（75%）SLE（25%）

RA（10%）SSc（24%）PBC（20%）等抗SSB：常與抗SSA相伴出現(xiàn)，診斷pSS更特異，見于pSS（40%）、SLE（10%）臨床意義：與新生兒狼瘡和先天性心臟傳導(dǎo)阻滯、平滑肌受累、光過敏、血管炎、皮損、紫癜、淋巴結(jié)腫大、WBC減少有關(guān)ANA陰性的SCLE：常為抗SSA抗體陽性。目前四十頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)目前四十一頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)目前四十二頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗Jo-1抗體(抗PL-1抗體)靶抗原：組氨酸t(yī)RNA合成酶胞漿中的磷酸蛋白目前四十三頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗Jo-1抗體(抗PL-1抗體)PM/DM的標(biāo)記抗體，陽性率20-30%抗體效價(jià)與疾病活動(dòng)性相關(guān)抗Jo-1抗體綜合征：急性發(fā)熱,對稱性關(guān)節(jié)炎,技工手,雷諾現(xiàn)象,肌炎（相對輕）,肺間質(zhì)病變其他抗合成酶抗體：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ目前四十四頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)抗ScL-70抗體靶抗原：DNA拓樸異構(gòu)酶I的降解產(chǎn)物主要存在核仁中SSc的標(biāo)記抗體，陽性率20-30%多見于dSSc，病情進(jìn)展快，提示預(yù)后不良與ILD、彌漫性皮膚硬化有關(guān)，而PAH少見目前四十五頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)主要靶抗原：著絲點(diǎn)蛋白-B多見于ISSc，病程緩慢，提示預(yù)后較好CREST綜合征：軟組織鈣化（C）,雷諾現(xiàn)象（R）,食道功能障礙（E）,指端硬化（S）,毛細(xì)血管擴(kuò)張（T），但并非標(biāo)記抗體，也見于孤立性雷諾現(xiàn)象、SS、PBC、AIH等國外文獻(xiàn)：與PAH相關(guān)，而ILD少見中國人群：未發(fā)現(xiàn)與PAH相關(guān)，但I(xiàn)LD少見白伊娜，王遷等.中國系統(tǒng)性硬化癥患者硬皮病相關(guān)自身抗體的檢測及其臨床意義.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志.2011（5）:452-455.抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)目前四十六頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)TakeHomeMassageANA熒光核型對抗體性質(zhì)范圍有一定提示作用，尤其在靶抗原陰性時(shí)。ANA陰性而靶抗原陽性主要見于抗胞漿成分抗體，如：SS-A、Jo-1、rRNP、線粒體等?？购巳市涂贵w常與SSc有關(guān)?？咕|(zhì)型或核膜型抗體常與SLE有關(guān)。目前四十七頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)TakeHomeMassage抗dsDNA：SLE特異性抗體，與LN及疾病活動(dòng)度有關(guān)，至少兩種方法聯(lián)合檢測（如：IIF法+ELISA法）?？购诵◇w、抗組蛋白、抗dsDNA三抗體陽性者強(qiáng)烈提示增殖性LN。與疾病活動(dòng)性相關(guān)的抗體：抗dsDNA、抗核小體、抗組蛋白、抗Jo-1、抗rRNP與預(yù)后相關(guān)的抗體：抗Scl-70（差）、ACA（好）目前四十八頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)案例1女性，34歲游走性多關(guān)節(jié)痛，雷諾現(xiàn)象半年RF56U/L；抗CCP抗體陰性；ANA1：320胸部CT：輕度肺間質(zhì)病變診斷？治療？（核仁型）UCTDILD發(fā)展為

SSc可能性大Pred+CTX目前四十九頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)案例2男性，50歲雙腕關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象半年ANA全套：陰性；抗CCP、RF：陰性胸部CT：輕度肺間質(zhì)病變右腕關(guān)節(jié)MRI：骨髓水腫和滑膜炎診斷？

復(fù)查：ANA陰性，抗Jo-1弱陽性診斷：抗Jo-1抗體綜合征Pred+TⅡ目前五十頁\總數(shù)五十五頁\編于十三點(diǎn)案例3女性32歲手指關(guān)節(jié)痛2月ANA（+）S1:80抗SSA（+++）135抗Ro