細菌與病毒的病原學檢查法

第七章細菌與病毒的病原學檢查法診斷方法：形態(tài)學檢查分離培養(yǎng)和鑒定檢測抗原檢查基因序列檢測抗體標本的采集與運送：無菌操作部位時間用抗生素前雙份血清：急性期、恢復期盡快送檢：冷藏運送、做好標記目前一頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點第一節(jié)細菌感染的微生物學檢查法一、細菌學診斷形態(tài)學檢查1.普通光學顯微鏡檢查法：2.暗視野顯微鏡檢查法：檢查活菌、螺旋體及其動力3.熒光顯微鏡檢查法：病原菌的分離培養(yǎng)生化試驗血清學鑒定:玻片凝集試驗動物實驗：毒力、致病性毒力檢測：LD50、ID50，毒素藥物敏感試驗：紙片擴散法目前二頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點二、檢測病原菌成分抗原檢測：凝集試驗、對流免疫電泳、酶免疫技術(shù)、免疫熒光技術(shù)核酸檢測：1.核酸雜交技術(shù):Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、原位雜交2.PCR技術(shù)3.基因芯片4.16rRNA基因序列分析：編碼rRNA，保守區(qū)、可變區(qū)目前三頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點三、抗體的檢測（血清學診斷）凝集試驗：直接、間接、協(xié)同、冷凝集沉淀試驗：環(huán)狀、絮狀、雙向、對流電泳補體結(jié)合試驗：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：取雙份血清，抗體效價比早期高4倍以上有意義。目前四頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點第二節(jié)病毒感染的微生物學檢查法目前五頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點一、形態(tài)學檢查1.電子顯微鏡檢查直接鏡檢法：107顆粒/ml，電鏡觀察病毒顆粒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)免疫電鏡法（IEM）：標本+特異性抗體病毒顆粒聚集電鏡觀察輪狀病毒的糞便、HAV、HBV的血清、皰疹病毒的皰疹液，可早期診斷。2.光學顯微鏡檢查痘病毒、觀察包涵體、CPE目前六頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點二、病毒分離培養(yǎng)的方法1、動物接種常用動物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴等；接種途徑：皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔、靜脈等接種；觀察：動物出現(xiàn)感染癥狀，取病變組織進一步檢查目前七頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點2、雞胚培養(yǎng)：孵化9～14天的雞胚接種途徑有：絨毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黃囊。鑒定：血凝和血凝抑制試驗尿囊腔接種羊膜腔接種目前八頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點卵黃囊接種絨毛尿囊膜接種目前九頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點3、組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)：單層細胞培養(yǎng)、懸浮細胞培養(yǎng)；原代細胞培養(yǎng)：由新鮮組織制備二倍體細胞：二倍體性質(zhì)，傳40~50代，人胚肺成纖維細胞傳代細胞系：由突變的二倍體細胞或腫瘤細胞建立的，HeLa細胞目前十頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點三、病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的鑒定指標細胞的變化：CPE紅細胞吸附（HAd）：紅細胞凝集：病毒干擾作用：風疹病毒，埃可病毒,Vero細胞。中和試驗（NT）：是病毒在活體內(nèi)或細胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗空斑形成試驗：蝕斑形成單位（PFU），感染性病毒的滴度用PFU/ml表示。四、病毒成分的檢測病毒抗原的檢測：HIV和HBV抗原病毒核酸的檢測目前十一頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點

ABCA：未感染的成纖維細胞。B：單純皰疹病毒感染后使細胞變圓。C：呼吸道合胞病毒感染后出現(xiàn)細胞融合。目前十二頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點五、病毒抗體的檢測：中和試驗：陽性：可能以前有過隱性感染，用于流行病學調(diào)查。補體結(jié)合試驗：用已知病毒的可溶性抗原檢測病人血清中有無相應抗體，作為近期感染的指標。目前十三頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點血凝抑制試驗病毒+紅細胞血凝現(xiàn)象病毒+抗體+紅細胞血凝現(xiàn)象消失用于流感病毒、副流感病毒的診斷、流行病學調(diào)查及鑒定病毒的型和亞型。ELISA法：HSV、CMV、EB病毒等蛋白印跡技術(shù)：用已知病毒蛋白檢測未知病毒目前十四頁\總數(shù)十五頁\編于二十三點小結(jié)