金黃色葡萄球菌檢測(cè)概述

金黃色葡萄球菌檢測(cè)概述第1頁(yè)/共28頁(yè)金黃色葡萄球菌

檢測(cè)概述第2頁(yè)/共28頁(yè)生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征革蘭氏陽(yáng)性球菌，直徑為0.8-1.0微米，鏡檢時(shí)呈單個(gè)、成對(duì)、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群；無(wú)芽孢，不運(yùn)動(dòng)；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長(zhǎng)最好；可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長(zhǎng),在20%-30%的二氧化碳中，可產(chǎn)生大量的毒素。第3頁(yè)/共28頁(yè)第4頁(yè)/共28頁(yè)生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征大多數(shù)菌株能生長(zhǎng)在25-46℃之間（最適溫度30-37℃）能在pH4.2-9.3之間生長(zhǎng)（最適pH為7.0-7.5）；大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團(tuán)呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長(zhǎng)的條件，而且在單個(gè)菌株中可能也有變化第5頁(yè)/共28頁(yè)生物學(xué)特性

---菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征好氧生長(zhǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生接觸酶；產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶，大多數(shù)菌株可水解天然的動(dòng)物蛋白，例如血紅蛋白、纖維蛋白、卵白、酪朊和多肽類如明膠，水解脂類、吐溫類和磷脂蛋白質(zhì)，并釋放脂肪酸；所有的毒株產(chǎn)生凝固酶，人和動(dòng)物來(lái)源的菌株通?？赡掏谩⑷?、馬和豬的血漿。第6頁(yè)/共28頁(yè)致病性金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：

a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；

b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；

c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；

d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來(lái)作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；

e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E五種。第7頁(yè)/共28頁(yè)致病性金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見(jiàn)的病原菌，臨床表現(xiàn)多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。第8頁(yè)/共28頁(yè)致病性葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時(shí)，經(jīng)8-10小時(shí)即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。第9頁(yè)/共28頁(yè)分布在自然界中廣泛存在，空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到。作為人和動(dòng)物的常見(jiàn)病原菌，其主要存在于人和動(dòng)物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機(jī)會(huì)很多。傳播媒介為被該菌污染的食品，主要為淀粉類(如剩飯、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及魚、肉、蛋類等。被污染的食物在室溫20℃-22℃放置5小時(shí)以上時(shí)，病菌大量繁殖，并產(chǎn)生腸毒素。第10頁(yè)/共28頁(yè)葡萄球菌皮膚感染第11頁(yè)/共28頁(yè)流行病學(xué)季節(jié)分布，多見(jiàn)于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報(bào)道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。第12頁(yè)/共28頁(yè)流行病學(xué)

金黃色葡萄球菌腸毒素是個(gè)世界性衛(wèi)生問(wèn)題，在美國(guó)由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個(gè)細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國(guó)每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。第13頁(yè)/共28頁(yè)流行病學(xué)腸毒素形成條件：存放溫度，在37°C內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時(shí)間越短；存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時(shí)含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。第14頁(yè)/共28頁(yè)耐受力幾乎所有的消毒試劑以及熱加工過(guò)程對(duì)金黃色葡萄球菌都有嚴(yán)重的破壞作用腸毒素可耐受100℃30分鐘不被破壞。對(duì)于加工過(guò)的食品或食品加工設(shè)備而言，此菌或其腸毒素的存在通常作為衛(wèi)生條件差的一種指標(biāo)。第15頁(yè)/共28頁(yè)污染的控制防止金黃色葡萄球菌污染食品

防止帶菌人群對(duì)各種食物的污染：定期對(duì)生產(chǎn)加工人員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時(shí)停止其工作或調(diào)換崗位。第16頁(yè)/共28頁(yè)污染的控制防止金黃色葡萄球菌污染食品

防止金黃色葡萄球菌對(duì)奶及其制品的污染：如牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、細(xì)菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保存。第17頁(yè)/共28頁(yè)污染的控制防止金黃色葡萄球菌污染食品

對(duì)肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進(jìn)行加工生產(chǎn)。第18頁(yè)/共28頁(yè)污染的控制防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成

應(yīng)在低溫和通風(fēng)良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風(fēng)陰涼地方也不應(yīng)超過(guò)6小時(shí)，并且食用前要徹底加熱。第19頁(yè)/共28頁(yè)檢測(cè)步驟

---增菌利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌。第20頁(yè)/共28頁(yè)檢測(cè)步驟

---分離血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。血平板上其典型菌落呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血圈。第21頁(yè)/共28頁(yè)檢測(cè)步驟

---分離BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素丙酮酸鈉是一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑亞碲酸鹽對(duì)除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營(yíng)養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對(duì)金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。第22頁(yè)/共28頁(yè)檢測(cè)步驟

---分離在BP平板上其典型菌落為：圓形，光滑突起，濕潤(rùn)，直徑2-3mm，顏色呈灰色到黑玉色，邊緣常為淡色（米黃色或灰白色略帶灰色或黃色的白色），周圍為一混濁帶，在其外緣常有一透明圈。用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。偶然會(huì)遇到不分解脂肪菌株，除無(wú)混濁帶及透明圈外，其他外觀基本相同。長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落，其黑色常較典型菌落淡些，且外觀可能粗燥，質(zhì)地較干燥。第23頁(yè)/共28頁(yè)B-P平板第24頁(yè)/共28頁(yè)檢測(cè)步驟

---鑒定金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生凝固酶，因此對(duì)其鑒別的主要實(shí)驗(yàn)是測(cè)定其凝固酶。對(duì)于凝固不完全的菌株，可以通過(guò)一些其他實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步確認(rèn)，例如：厭氧葡萄糖發(fā)酵、溶葡萄球菌酶敏感性實(shí)驗(yàn)、耐熱核酸酶實(shí)驗(yàn)等。所有這些實(shí)驗(yàn)不能作為鑒別其產(chǎn)毒與否的依據(jù)。第25頁(yè)/共28頁(yè)25g樣品+225ml生理鹽水

5mL樣品勻液（1:10）+50mL胰酪胨大豆肉湯血平板36±1℃

24hr

鏡檢營(yíng)養(yǎng)肉湯血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果定性檢測(cè)36±1℃

24hr

36±1℃

24hr

36±1℃6hr

BP平板第26頁(yè)/共28頁(yè)25g樣品+225ml生理鹽水

選三個(gè)連續(xù)梯度，每個(gè)梯度分別取1mL接種之至表面干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL）平板計(jì)數(shù)（分別記錄每種類型的菌落數(shù)）36±1℃

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