第二章農(nóng)藥的分離與純化方法

第二章農(nóng)藥的分離與純化方法演示文稿目前一頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)優(yōu)選第二章農(nóng)藥的分離與純化方法目前二頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)農(nóng)藥分析——分離、提純的方法和原理

農(nóng)藥分離的主要類別原藥分析：各種農(nóng)藥異構(gòu)體及有效成分含量。殘留分析：土、水、動植物體中農(nóng)藥殘留量分析。原藥的一般組成原藥（固體）：含填料，加工成粉劑，可濕粉劑顆粒時加入。加入目的：原藥粉，不易粉碎；農(nóng)藥藥效高,單位面積用量少，加入填料后易稀釋。加入成分：藥石、粘土、碳酸鹽類。原藥（液體）：含溶劑、助劑、乳化劑、非有效成分（合成副產(chǎn)物、降解成分等）。目前三頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)農(nóng)藥分析對象與特點(diǎn)原藥分析對象：主要對有效成分分析。原藥分析的特點(diǎn)：含量高，有固定的提純與分析方法。殘留分析對象：對人、畜、環(huán)境有害成分。殘留分析特點(diǎn)：殘留量少，組成復(fù)雜。要提取、富集，分離提純。分離提純與分析方法靈活多樣。共同點(diǎn)：基本原理和方法一致。分離提純（富集）——物理和化學(xué)方法；分析類別：定性分析、定量分析目前四頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)固體農(nóng)藥的純化方法簡介固體農(nóng)藥（有效成分）制標(biāo)準(zhǔn)樣時用重結(jié)晶法提純。提純原理：在某一種溶劑中，固體農(nóng)藥的溶解度隨溫度變化有較大的變化。在較高溫度時的飽和溶液趁熱過濾除不溶性雜質(zhì)。母液放冷，在較低溫度時農(nóng)藥以晶體析出，過濾，可溶性雜質(zhì)留在母液中而除去。（可反復(fù)重結(jié)晶直到提純農(nóng)藥熔點(diǎn)不變?yōu)橹梗Ｄ壳拔屙揬總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)重結(jié)晶的關(guān)鍵因素關(guān)鍵：選合適溶劑。重結(jié)晶溶劑具備條件：a.不與被提純成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)b.被提純物與雜質(zhì)要有顯著溶解度差c.被提純物在該溶劑中溶解度隨溫度變化變化大d.溶劑沸點(diǎn)適中（不高也不低）如沒有合適的純?nèi)軇﹦t用混合溶劑重結(jié)晶。目前六頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)混合溶劑的選擇方法1、確定兩種溶劑可以互相混溶，而且一種是被提純農(nóng)藥的良好溶劑，一種是不良溶劑。如乙醇和水；苯和乙醇；丙酮和三氯甲烷等。2、取0.02g—0.03g樣品溶解于一定量（1mL）的良好溶劑中（試管），然后在不斷搖動下緩慢滴加不良溶劑，直到出現(xiàn)渾濁為止。3、記下不良溶劑的體積，計(jì)算得到混合溶劑的組成比例，通過重復(fù)試驗(yàn)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。目前七頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)重結(jié)晶的一般操作步驟1、制成飽和熱溶液（接近溶劑的沸點(diǎn)）2熱過濾（除不溶雜質(zhì)）。3、自然冷卻結(jié)晶4、過濾晶體與洗滌。5、干燥6、標(biāo)準(zhǔn)品多次重結(jié)晶，直到m.p不變?yōu)橹鼓壳鞍隧揬總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)重結(jié)晶操作要點(diǎn)1、制成飽和熱溶液視被提純物質(zhì)多少選用適當(dāng)容積的燒瓶，將被提純物質(zhì)放入燒瓶，裝好回流裝置。在不超過溶劑沸點(diǎn)的熱浴溫度下緩慢滴加溶劑，并攪動，使溶質(zhì)在接近容積沸點(diǎn)時剛好溶解，立刻停止滴加溶劑。記下溶劑的體積與溶質(zhì)的質(zhì)量。2（用保溫漏斗）熱過濾?；蛘邔岬牟际下┒泛蜑V紙用熱溶劑潤濕后減壓過濾。目前九頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)重結(jié)晶操作要點(diǎn)3、結(jié)晶：濾液自然冷卻結(jié)晶（易揮發(fā)溶劑或者易于吸潮的溶劑應(yīng)密閉結(jié)晶）。如果冷至室溫不結(jié)晶，則可以放入晶種或用玻棒擦容器器壁；或放入冰箱進(jìn)行結(jié)晶（注意冰箱溫度應(yīng)該在溶劑凝固點(diǎn)之上）。4、過濾與洗滌晶體：減壓過濾、用低溫、少量溶劑洗滌。注意：減壓過濾應(yīng)該在布氏漏斗完全沒有液滴滴下為止。5、干燥a、低熔點(diǎn)固體、不吸潮物質(zhì)，可以在空氣中干燥。b、高熔點(diǎn),熱穩(wěn)定的物質(zhì)用烘箱中干燥c、熱不穩(wěn)定，或吸潮、空氣中不穩(wěn)定的物質(zhì)，低于m.p20—30℃，真空干燥。目前十頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)干燥程度與純度檢驗(yàn)檢驗(yàn)干燥程度一般用恒重法檢驗(yàn)，即稱重后再干燥一段時間，看重量是否發(fā)生變化。也可以用熔點(diǎn)法檢驗(yàn)干燥程度。純度檢驗(yàn)一般用熔點(diǎn)法。一種是與標(biāo)準(zhǔn)樣品同時測熔點(diǎn)進(jìn)行比較；另一種是測一次熔點(diǎn)后再重結(jié)晶一次，再干燥測熔點(diǎn)，兩次熔點(diǎn)不變化則物質(zhì)已經(jīng)提純。純度檢驗(yàn)還可以用薄層法檢驗(yàn)，液相色譜或者氣相色譜更好。目前十一頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)液體農(nóng)藥分離提純方法

液體農(nóng)藥分離提純一般首先考慮蒸餾法蒸餾法原理：依液體混合物中各組分沸點(diǎn)不同而分離。關(guān)鍵：控制溫度緩慢上升，收集不同溫度范的圍餾份。蒸餾方法分類：常壓蒸餾適用于b.p較低，在b.p時不分解的物質(zhì)。減壓蒸餾適用于b.p較高，或在b.p發(fā)生分解的物質(zhì)。水蒸氣蒸餾適用于不與水反應(yīng)，b.p較高的物質(zhì)。目前十二頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)常壓蒸餾注意事項(xiàng)

１.正確裝置，不扭不歪，不漏２.溫度計(jì)水銀球位置３.加沸石４.容器中液體體積５.熱源選擇６.餾出速度v=2—３D/S目前十三頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)液體的干燥溶劑含水，干燥劑脫水后再蒸餾（干燥劑不可進(jìn)入蒸餾體系）（容量與速度）脫水劑（干燥劑）種類及性能：CaO中、堿性化合物可用，脫水力高。CaCl2

鹵烴、烴、酯、醚可用（醇、酸不可用，發(fā)生反應(yīng)）脫水力高。Na2SO4

多數(shù)溶劑可用，脫水能力不高。K2CO3

堿性化合物、醇、酯脫水力較高。P2O5

鹵烴、烴（醇、酸不可用發(fā)生反應(yīng)），脫水力高。NaOH飽和烴、肼、胺（酸性物質(zhì)不可用）分子篩多數(shù)可用，脫水力高。目前十四頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)減壓蒸餾原理減壓蒸餾的原理液體的沸點(diǎn)隨液面壓強(qiáng)降低而降低。減壓蒸餾前要對沸點(diǎn)和壓強(qiáng)進(jìn)行估算，可以通過如下途徑進(jìn)行估算。1、查T-P關(guān)系圖如右圖，從左到右三根線分別為A、B、C。A線上標(biāo)有減壓的沸點(diǎn)數(shù)據(jù)，B線是正常壓強(qiáng)沸點(diǎn)刻度，C線是壓強(qiáng)刻度（mmHg).ABC沸點(diǎn)低沸點(diǎn)低壓強(qiáng)小壓強(qiáng)大目前十五頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)用

近似公式估算2、用

近似公式

lgP=A+B/TP蒸汽壓;T絕對溫度;A、B為常數(shù)（可以通過化合物物理性質(zhì)手冊或者化工手冊查閱）目前十六頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)減壓蒸餾裝置儀器：克萊森燒瓶、真空尾接管（單口接頭）帶橡皮套的毛細(xì)管、容積=1/2V、不用平底接受器減壓泵（水泵7-20mmHg）機(jī)械泵（油泵）0.1mmHg（要連接吸收裝置）裝置如右下圖減壓蒸餾裝置圖注意：負(fù)壓與正壓操作一樣要帶護(hù)目鏡防爆！目前十七頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)減壓蒸餾操作步驟1、查蒸餾系統(tǒng)可否達(dá)應(yīng)有真空度

開始：關(guān)安全瓶活塞，擰緊毛細(xì)管上橡皮套螺絲夾，開動抽氣泵，看壓力計(jì)指示數(shù)據(jù)是否達(dá)到要求。

停止：慢慢打開安全瓶活塞，直到壓力與外界平衡為止,擰松毛細(xì)管上螺絲夾，關(guān)閉抽氣泵。2、加液料、關(guān)活塞、開抽氣、調(diào)毛細(xì)（氣泡與線）、達(dá)到所需壓力后（平衡、穩(wěn)定）再

加熱。3、熱源溫度高于b.p20-30℃，壓力不穩(wěn)則調(diào)熱源，使餾出速度V=0.5—1D/S4、多組分蒸餾、餾出溫度上升時轉(zhuǎn)換接收器（使用多頭接受器）。5、蒸餾完后先撤除熱源、再慢慢開活塞

壓力平衡后關(guān)氣泵與打開毛細(xì)管夾。

可旋轉(zhuǎn)多用接頭目前十八頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)旋轉(zhuǎn)濃縮蒸餾法

用于提取液濃縮。壓力400—600mmHg,蒸餾瓶50—160轉(zhuǎn)/分。旋轉(zhuǎn)使溶劑在瓶壁形成一層薄膜，擴(kuò)大蒸餾面積，提高蒸餾速度。操作步驟：1、裝好儀器2、調(diào)熱浴溫度高于b.p10℃以上3、冷卻水接蛇形冷凝管（低于b.p20℃）4、接真空泵（不低于300mmHg）5、加熱、開自動加液旋塞，液自動流入蒸餾瓶（可隨時加料）。6、開動電機(jī)、使旋轉(zhuǎn)。結(jié)束：關(guān)電機(jī)除熱源關(guān)加液旋塞壓力平衡后停止抽氣。

目前十九頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)水蒸汽蒸餾水蒸氣蒸餾主要是用于那些沸點(diǎn)比較高，容易熱分解，或者與其他有機(jī)物性成不容易分離的糊狀物中的成分。水蒸氣蒸餾原理：混合體系中總的蒸汽壓等于各組分蒸汽分壓之和。當(dāng)被蒸餾體系接近100℃時，水的蒸汽壓接近1atm，故被蒸餾的物質(zhì)蒸汽可以和水蒸氣合計(jì)等于1atm，從而在接近100℃的溫度從混合物被蒸餾出來。被蒸餾物質(zhì)必須滿足的條件：不與水反應(yīng)；在100℃時不低與5mmHg的蒸汽壓目前二十頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)水蒸氣蒸餾操作水蒸氣蒸餾操作與常壓蒸餾操作類似，其裝置比常壓蒸餾裝置多一個水蒸氣發(fā)生器。水蒸氣發(fā)生器T形管安全管目前二十一頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)三、柱層析柱層析技術(shù)是分離混合物的重要方法，簡單實(shí)用。架設(shè)一個帶活塞的玻璃柱，填入吸附劑，就可以用于分離混合物。柱色譜的幾種技術(shù)指標(biāo)直徑與長度比：1：10~1：40短而粗的柱子，分離快，分離效果差長而細(xì)的柱子，分離慢，分離效果好色譜柱的分離效果還與吸附劑和洗脫劑的選擇、柱子的裝填質(zhì)量有關(guān)。目前二十二頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)柱層析原理與分類簡介原理：當(dāng)混合物被束縛在色譜柱的固定相上后，流動相自上而下流經(jīng)固定相，帶動被分離組分向下移動。與固定相作用力大的組分在流動過程中留在了后面，與固定相作用力小的組分在流動過程中跑在了前面（略），混合物因而被分離。柱層析分類：吸附、分配、凝膠吸附色譜柱：吸附劑固體表面吸附各種成分。分配色譜柱：惰性載體表面涂高沸點(diǎn)液體，被分離物在淋洗劑與高沸點(diǎn)液體之間溶解分配。凝膠色譜柱：多凝膠填粒、淋洗，凝膠網(wǎng)眼大小篩分不同尺寸的分子目前二十三頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)吸附柱的裝填要求吸附劑要裝填均實(shí)，淋洗劑才會等速水平下降，分離效果才會好。干裝：吸附劑通過漏斗直接裝入盛有洗脫劑的色譜柱（邊裝邊敲），最后應(yīng)使吸附劑上有一薄層溶劑。為保持柱上有平整表面，最上層可加一些石英砂。濕裝：先裝洗脫劑于柱內(nèi)，加用淋洗劑調(diào)成糊狀的吸附劑，使慢慢沉降。最后應(yīng)使吸附劑上有一薄層溶劑。亦應(yīng)邊加邊敲。目前二十四頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)吸附劑的分類吸附劑種類：氧化鋁、硅膠、弗羅里硅土、纖維素、氧化鎂、碳酸鈣、火性碳等為常用品種。吸附劑的要求：要對被吸附物有一定的作用，與被吸附物，淋洗劑無化學(xué)反應(yīng)。吸附能力：與顆粒粗細(xì)有關(guān)，粗則流速快，分離效果差；粗則流速慢，分離效果好。氧化鋁分為酸性、中性、堿性三種酸性——１％HCl浸泡，蒸餾水洗至pH4—４.５，用于分離酸性物質(zhì)中性——pH為７.５左右，用于分離中性物質(zhì)堿性——pH９—１０，用于分離堿性物質(zhì)或烴類。目前二十五頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)吸附劑的活性吸附劑活性與含水量有關(guān)，含水量越低活性越高。如：氧化鋁依含水量分為五級，含水量分別為０；３％；６％；１０％；１５％硅膠五級對應(yīng)含水量為０；５％；１５％；２５％；３８％一般制備方法：３５０——４００℃烘至無水（３小時）加入相應(yīng)水量得相應(yīng)級別。吸附力與分子極性有關(guān)。極性越強(qiáng)吸附力越大。目前二十六頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)淋洗劑選擇極性遞增順序：Cl-Br-I-<C=C<-OCH3<<—CO2R<C=O<--CHO<-SH<-NH2<-OH<-CO2H吸附力與淋洗劑性質(zhì)有關(guān)。選淋洗劑時應(yīng)考慮被洗脫物質(zhì)的極性與溶解度。極性大的化合物用極性大的淋洗劑洗脫；極性小的化合物用小極性淋洗劑洗脫；幾種極性差別大的混合物用幾種不同極性的淋洗劑分批洗脫。亦可以用混合淋洗劑。目前二十七頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)淋洗劑洗脫能力淋洗劑洗脫能力依以下順序遞增：正己烷〈CCl4〈C6H5-CH3〈C6H6〈CH2Cl2〈CHCl3〈Et2O〈CH3CO2C2H5〈Me2CO〈C3H7OH〈MeOH〈H2O淋洗要點(diǎn)：連續(xù)不斷，不快不慢，吸附劑不露出液面。淋洗速度V=1—２滴/S為宜?？靹t交換不平衡；慢則具有大表面的吸附劑使某些成分破壞。目前二十八頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)淋洗曲線淋洗曲線：分段收集標(biāo)準(zhǔn)品洗脫液進(jìn)行含量分析，繪成的淋洗劑體積—樣品含量曲線。目的—使要收集的組分盡可能收集完全，對于無色化合物應(yīng)該用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分段收集洗脫液進(jìn)行含量分析，繪成曲線。依此確定淋洗過程應(yīng)收集的洗脫液體積，同時還可以確定淋洗所需溶劑。含量％淋洗劑體積目前二十九頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)常見吸附劑的處理中性氧化鋁：５５０℃活化４h，使用前130℃活化5h，可保一周，過期重新活化；８００℃時中性變堿性。氧化鋁吸附色素最佳。硅膠：水玻璃加鹽酸，沉淀脫水得無定形多孔物質(zhì)。表面Si-OH稱硅醇，與不飽和化合物或極性基形成氫鍵而吸附；Si-O-Si氧橋可水解，稱溶解度，pH=９以上顯著，故不可用強(qiáng)堿性淋洗液；硅膠層析性能與多孔骨架及坑穴體系密切相關(guān)，加熱有變。活化溫度不超過２００℃。130℃活化２h備用。用于有機(jī)氯農(nóng)藥分離。目前三十頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)混合吸附劑柱用混合吸附劑裝柱柱可以用于純化多種雜質(zhì)的樣品。不同的農(nóng)藥樣品的提純用不同的混合柱。常見混合柱如下?；钚蕴肌趸V，用于有機(jī)磷農(nóng)藥分離?；钚蕴迹w維素，由于有機(jī)磷，有機(jī)氯農(nóng)藥分離。弗羅里硅土—中性氧化鋁—酸性硅藻土，用于植物食品中有機(jī)氦農(nóng)藥凈化；活性碳—中性氧化鋁，CHCl3淋洗由于提純有機(jī)磷農(nóng)藥。目前三十一頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)分配柱與凝膠滲透柱層析法分配柱層析法：把有機(jī)氯農(nóng)藥從極性小的農(nóng)藥樣品中分配到極性大的溶劑中去。主要分離含脂肪、蠟質(zhì)試樣的有機(jī)氯。凝膠滲透柱層析法：用凝膠sephadexLH-20作有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分離凈化。被純化物質(zhì)的分子量范圍：有機(jī)磷200-400；色素500-900。用118g葡聚糖LH-20裝柱。乙醇或丙酮淋洗；淋洗速度V=4.5ml/h。多數(shù)有機(jī)磷（殘留水平0.05—0.005ppm）淋洗體積在305—428ml；回收率可達(dá)66-98%。目前三十二頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)薄層色譜薄層色譜是比柱色譜更加應(yīng)用廣泛的分離分析手段。薄層色譜用于分離提純具有簡單快速的特點(diǎn)。但是其分離容量不及柱色譜大，分離效果也不及柱色譜好。薄層分類：吸附與分配色譜，分配色譜又分正相色譜與反相色譜。正相：含水吸附劑（固定相），弱極性流動相，極性小的移動快。反相：鈍化吸附劑（固定相），強(qiáng)極性流動相，極性強(qiáng)的移動快。目前三十三頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)薄層吸附色吸附色譜固定相：硅膠、氧化鋁活化；加石膏為G型，不加為H型，加熒光劑為GF或HF正相分配色譜固定相：纖維素或用緩沖水溶液處理過的硅膠、或用極性有機(jī)溶劑處理過的硅膠。反相分配色譜固定相：用硅酮、石蠟等非極性溶劑處理過的硅膠或纖維素。薄層涂層：薄層自然晾干后進(jìn)行活化?；罨瘻囟扰c時間：硅膠板105-120℃，1h；氧化鋁板：70℃，40min。目前三十四頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)吸附劑選擇吸附劑用途吸附劑用途硅膠吸附，分配氧化鋁吸附，分配硅藻土分配纖維素分配氫氧化鈣吸附聚酰胺吸附離子交換樹脂離子交換氧化鎂吸附，分配吸附劑粒度的要求：5-50μm。粒度太大推進(jìn)快，影響分離；粒度太小則展開慢，出現(xiàn)拖尾或橫向擴(kuò)散過度。目前三十五頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)制備薄層板的參數(shù)薄層板規(guī)格：20×20cm，20×15cm，10×20cm，10×15cm，7.5×20cm，7.5×15cm，5×20cm，5×15cm。制板：皂液洗凈，烘干備用。漿液與活化硅膠G:水=1:2（W∶W），110-130℃，1h氧化鋁G:水=1:1—1:3（W∶W），80-100℃，30min硅藻土G:水=1:2（W∶W），110℃，30min纖維素粉:95%乙醇（丙酮）=1:5—1:6（W∶W），100℃，3-5min聚酰胺:甲醇=1:4—1:6（W∶W），60-70℃，1h。目前三十六頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)薄層板的制備制漿：按照比例將吸附劑和相應(yīng)的液體加入燒杯，攪拌均勻。鋪板：一般將均勻漿液適量倒在薄板上，兩手指夾薄板兩側(cè)，旋轉(zhuǎn)傾斜，讓漿液在薄板上流均勻，也可以適度敲擊震蕩，使?jié){液流平?；蛘邔砂遒N緊，插入漿液中，在提起，讓多余漿液流下，一次可以制備兩塊板。還有用涂布器鋪板的。薄板鋪好后置平臺自然晾干，活化備用。目前三十七頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)展開劑選擇展開劑選擇標(biāo)準(zhǔn)，與淋洗劑標(biāo)準(zhǔn)一致。官能團(tuán)極性如下：H—＜—Cl＜—C2H5＜—CH=CH2＜—OCH3＜—NO2＜—NMe2＜—COCH3＜—CO2R＜＞C=O＜—CHO＜—SH＜—NH2＜—NHCOR＜—OH＜—CONH2＜—CO2H一般單一展開劑沒有很好的適合的極性，多用相容的展開劑混合，以調(diào)節(jié)展開劑極性。目前三十八頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)被分離物質(zhì)、淋洗（展開劑）及固定相的極性選擇關(guān)系用右下圖指導(dǎo)選擇展開體系。圓弧內(nèi)三角形可以繞圓心轉(zhuǎn)動，其三個角頂點(diǎn)分別指向三類物質(zhì)的極性區(qū)限。如果沒有適當(dāng)?shù)牧鲃酉?，可以采用混合溶劑調(diào)節(jié)極性。弧線A代表吸附劑的活性，順箭頭方向增大?；【€B代表展開劑的極性，順箭頭方向增大?；【€C代表被分離物質(zhì)極性，順箭頭方向增大。三角形的三個角所指位置就是三者的關(guān)系目前三十九頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)一般薄層色譜實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作環(huán)節(jié)：點(diǎn)樣—展開—顯色—計(jì)算Rf值點(diǎn)樣：在距薄板下沿1cm處的水平線上毛細(xì)管的液滴與薄層表面相切，切忌玻璃管戳破薄層，可以重復(fù)點(diǎn)樣。展開：薄層板下沿水平插入層析缸，展開劑一定不能淹沒樣點(diǎn)，層析缸內(nèi)要充滿展開劑蒸汽，層析缸要蓋蓋子，展開劑呈水平線上升，接近薄層上沿時為止。顯色：大多數(shù)被展開物質(zhì)沒有顏色，要進(jìn)行物理或者化學(xué)方法顯色。薄層從層析缸取出，在展開劑前沿作一記號，待展開劑揮發(fā)干后顯色。物理方法：紫外燈照射；碘蒸汽熏蒸等?；瘜W(xué)方法：可以產(chǎn)生有色物質(zhì)的反應(yīng)。目前四十頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)幾種點(diǎn)樣方法直接點(diǎn)點(diǎn)樣：離下沿處，毛細(xì)管分次點(diǎn)樣d≤0.3cm（凸出液滴與薄層表面相切）。間接點(diǎn)樣：打孔器打?yàn)V紙片2-3mm直徑。試液點(diǎn)滿濾紙片，晾干；打孔器打薄層2-3mm直徑的孔，濾紙片嵌入。制備薄層可以將試樣液用打孔器打下的吸附劑吸收，干后填入孔中；也可以在薄層上挖一條溝槽，試樣液用吸附劑吸收，干后填入溝槽（展開后是平行帶狀）薄板置于密閉的層析缸中展開分離。要確保薄板平行放置，樣點(diǎn)在展開劑液面之上。目前四十一頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)等溫吸附線與分離效果的關(guān)系在恒溫下以展開相濃度為橫坐標(biāo)，吸附相濃度為縱坐標(biāo)作圖，得到等溫吸附曲線。曲線中，A物質(zhì)斜率大，說明被吸附作用強(qiáng)，展開速度就慢，Rf值就小。Ⅰ是理想狀況，顯色后是標(biāo)準(zhǔn)圓斑；Ⅱ和Ⅲ出現(xiàn)“拖尾”現(xiàn)象，分離效果也不好。、ⅠⅡⅢ目前四十二頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)有機(jī)磷農(nóng)藥的極性農(nóng)藥分子的極性是影響分離效果的重要因素。硫酮型農(nóng)藥小于硫醇型農(nóng)藥的極性二硫代型小于磷酸酯、磷酰胺型共軛雙鍵增多則增強(qiáng)分子極性；甲基同系物大于乙基同系物極性目前四十三頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)影響Rf的因素薄層厚度吸附劑種類、活度、展開劑極性、展層的飽和度展開方法：一般不加黏合劑，薄板水平展開。單向上行一次展開，傾角70-80°Rf值接近的物質(zhì)要多次單向展開。每次可用同一展開劑，也可不同的展開劑。雙向展開法：用正方形薄板，展開劑一次走到上沿后取出風(fēng)干，旋轉(zhuǎn)90°后再展開邊緣效應(yīng)：溶劑前沿線一般朝下彎造成Rf不準(zhǔn)，且使色斑大小及形狀不規(guī)則顯色是配合薄層進(jìn)行鑒別。目前四十四頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)掃集共蒸餾法分離原理：將試樣用注射器注入事先填入的無吸附性的填充劑（玻璃棉、玻璃珠、海砂等）的凈化柱內(nèi)，在規(guī)定溫度下，農(nóng)藥和溶劑蒸汽隨氮?dú)饬鬟M(jìn)冷凝管，冷凝后進(jìn)入接收器。脂肪、色素不能汽化的雜質(zhì)沉積在柱內(nèi)填充劑上，使雜質(zhì)得以分離。本法可用于有機(jī)磷、有機(jī)氮農(nóng)藥的分離提純。構(gòu)成部件：柱溫箱、溫度控制器、載氣流量控制器、自動淋洗裝置、凈化柱、冷凝管、冷阱、收集器。目前四十五頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)低溫冷凍分離法食品中農(nóng)藥殘留的分析，取樣后殘留農(nóng)藥與大量的脂肪、蠟質(zhì)混合在一起，給分離造成困難。由于動植物組織中的脂肪、蠟質(zhì)可以在低溫下于丙酮溶液中生成沉淀，將樣品用丙酮反復(fù)萃取，萃取液經(jīng)過冷凍，過濾而分離掉脂肪、蠟質(zhì)沉淀，而農(nóng)藥留在丙酮中。冷凍溫度一般在-70℃目前四十六頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)液相萃取法萃取原理：一組互不相溶的溶劑中溶有某一成分溶質(zhì)。這種溶質(zhì)以一定比例（濃度比）在兩相中分配。兩相中分配比稱分配系數(shù)。利用同組溶劑中各物質(zhì)分配系數(shù)不同或同種物質(zhì)在不同溶劑組中分配系數(shù)不同而分開。（選擇合適溶劑，反復(fù)分配）等容一次分配：一組等容互不相溶的溶劑中加入某一溶質(zhì)，平衡后弱極性溶劑中農(nóng)藥比值是P；強(qiáng)極性溶劑中比值是Q;顯然P+Q=1，兩相濃度比為P/Q。目前四十七頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)等容多次分配與不等容分配取幾份等體積強(qiáng)極性溶劑在1份弱極性溶劑中萃取幾次后，弱極性溶劑中溶質(zhì)含量是Pn,強(qiáng)極性溶劑中溶劑含量是1-Pn

。不等容一次分配：設(shè)弱極性溶劑體積是強(qiáng)極性體積的α倍。依定義，一次分配后弱極性溶劑中含量是αP，強(qiáng)極性溶劑中含量為Q；弱極性溶劑中所含農(nóng)藥占農(nóng)藥總量比例為：αP/（Q+αP）。用此比例式可以計(jì)算兩相的農(nóng)藥含量。設(shè)P=0.7Q=0.3因兩相濃度比不變。設(shè)0.7的相用2倍體積，則有0.7的液相中含有2×0.7/（0.3+2×0.7）=1.4/1.7目前四十八頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)乙腈提取樣品中的殘留農(nóng)藥果蔬，特別是新鮮果蔬樣品，含有大量水分，極性小的有機(jī)溶劑不能萃取其中的微量殘留農(nóng)藥。首先用與水互溶的乙腈萃取，萃取液再用極性小的有機(jī)溶劑（不溶于水）萃取乙腈中的農(nóng)藥。萃取液中加入濃的Na2SO4溶液以降低農(nóng)藥在其中溶解度；用CH2Cl2加入正己烷增加農(nóng)藥在有機(jī)相溶解度，加入中等酸度緩沖液防農(nóng)藥水解。目前四十九頁\總數(shù)五十四頁\編于七點(diǎn)分離操作取100—125ml提取液，于500mL容量瓶中，加10mlCH2Cl2，20mLpH=6的磷