食用菌制種技術(shù)

食用菌制種技術(shù)第1頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四教學(xué)目標(biāo)、重點(diǎn)、難點(diǎn)教學(xué)目的：熟練使用制種用品、用具、設(shè)備、設(shè)施進(jìn)行制種生產(chǎn)。本節(jié)重點(diǎn)：食用菌制種條件，制種工具的使用。

第2頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四一、食用菌菌種的概念與級別(一)、菌種的概念

菌種是指經(jīng)人工培養(yǎng)并可供進(jìn)一步繁殖或栽培使用的食用菌菌絲體，常常包括供菌絲體生長的基質(zhì)在內(nèi)，共同組成繁殖材料。菌種是食用菌生產(chǎn)的首要條件，菌種性狀的優(yōu)劣直接影響到生產(chǎn)的成敗。常言道：“有收無收在于種（種子），多收少收在于種（栽培）”第3頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（二）菌種的級別1.一級種（母種）用分離法首次得到的

純次生菌絲體

概念概況培養(yǎng)環(huán)境試管、斜面培養(yǎng)基用途再生母種擴(kuò)大原種

保藏用種菌絲弱而少、不可直接栽培特點(diǎn)第4頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四第5頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四2.二級種（原種）將母種擴(kuò)大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲較多而壯、適應(yīng)性較強(qiáng)特點(diǎn)用途擴(kuò)大栽培種大口瓶、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基第6頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四第7頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四3.三級種（栽培種）將原種擴(kuò)大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲多而壯、適應(yīng)性強(qiáng)特點(diǎn)用途栽培生產(chǎn)菌種袋、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基不可再擴(kuò)第8頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四第9頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四母種、原種和栽培種第10頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四二、制種常用的設(shè)備與用品（一）、滅菌設(shè)備1、手提式高壓滅菌鍋第11頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四使用壓力：1.5kg/c㎡滅菌時(shí)間：25—30min對象：玻璃器皿、母種培養(yǎng)基、無菌水等?？捎酶邏猴堝佁娲珳缇鷷r(shí)間延長至40min第12頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四2、臥式高壓滅菌鍋第13頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四使用壓力：1.5kg/c㎡滅菌時(shí)間：1.5—2h對象：原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌使用方便，但造價(jià)高，一般菇農(nóng)用常壓滅菌灶。第14頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四3、常壓滅菌灶第15頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四使用溫度：100---105℃滅菌時(shí)間：維持8—10h對象：原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌第16頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（二）、制種容器第17頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（三）、接種設(shè)備與工具1、接種設(shè)備（1）、超凈工作臺（局部凈化設(shè)備空，氣過濾除菌）第18頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（2）、接種箱第19頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四2、接種工具接種針、接種環(huán)、接種刀、接種鏟、鑷子等第20頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（四）、菌種培養(yǎng)設(shè)備放置接種后各級菌種，并提供適宜溫度和通氣條件，使菌絲生長良好的專用設(shè)備第21頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四1、恒溫培養(yǎng)箱根據(jù)需要使溫度恒定在一定范圍內(nèi),一般用于培養(yǎng)斜面試管和少部分原種。第22頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四2、培養(yǎng)室培養(yǎng)架：以操作方便為宜,寬0.7~1.2米，層間40cm調(diào)溫：電爐、紅外線、暖氣管、門窗、抽風(fēng)機(jī)測溫：干濕球溫度計(jì)照明：避免使用藍(lán)光滅菌：紫外燈第23頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四第24頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四三、菌種的制作(一)母種的制作1、母種培養(yǎng)基①PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000亳升，PH值自然。適合以一般母種的培養(yǎng)第25頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四②.PDA加富培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200克，麥麩100克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000亳升，PH值自然。適合母種的復(fù)壯培養(yǎng)。③.PDA綜合培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，維生素B15—10mg，水1000亳升，PH值自然。適合草菇、靈芝、猴頭菇、茯苓母種的培養(yǎng)。④.母種保藏培養(yǎng)基：在PDA培養(yǎng)基中加10g蛋白胨。第26頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四粉狀條狀屬天然植物多糖

融點(diǎn)96℃以上

凝點(diǎn)40℃以下

冷水中不溶

透明度好、粘著力強(qiáng)

不被微生物分解利用特性第27頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四2、母種培養(yǎng)基的制備PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g、蔗糖20g、瓊脂15-20g、水1000ml馬鈴薯去皮，切片，稱取200克，沸水煮20-30分鐘，過濾，取濾汁添水至1000ml，加葡萄糖或蔗糖20克、瓊脂15-20克煮熔，pH自然，常規(guī)滅菌即可。第28頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四準(zhǔn)備工作第29頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四

稱量、材料預(yù)處理按配方準(zhǔn)確稱量各營養(yǎng)物質(zhì)。將馬鈴薯去皮、挖掉芽眼后稱量200g，切成1cm見方的小塊。瓊脂剪碎后用水浸泡。第30頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四熬煮將切好的馬鈴薯塊加適量水后放入電飯鍋中，煮至酥而不爛。第31頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四過濾、加可溶藥物用雙層沙布過濾，取濾汁，放在電飯鍋中加入糖第32頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四熬瓊脂、定容在沸騰狀態(tài)下加入瓊脂，直到瓊脂完全溶化為止，定容至1000ml。第33頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四母種培養(yǎng)基制作流程1.分裝試管2.塞棉塞3.打捆4.滅菌5.擺斜面第34頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（1）、裝管：18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃試管，分裝量掌握在試管長度的1/4-1/5，原則上是擺放成斜面后，斜面的長度為試管長度的1/2-2/3。（2）、滅菌：母種培養(yǎng)基滅菌時(shí)，需用1.05~1.1kg/cm2的壓強(qiáng)，溫度為121℃，滅菌（保持121℃）30min。（3）、斜面的擺置：趁熱擺好斜面第35頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四擺斜面滅菌結(jié)束后鍋蓋開1/5的小縫，用余熱烘干報(bào)紙和棉塞，然后擺斜面。斜面長是試管總長的1/2第36頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四第37頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四3、種菇的組織分離（1）種菇的選擇：外觀典型、大小適中、無任何污染、7--8成熟、第1~2茬的子實(shí)體。（2）接種箱與分離工具的消毒接種箱：科達(dá)氣霧消毒粉2—3g或高錳酸鉀5g，甲醛10ml混合氣霧消毒30min.分離工具的消毒：用70--75﹪酒精擦拭后，再在酒精燈上反復(fù)灼燒。第38頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（3）種菇的解剖分離縱剖（撕）菇體

尖頭鑷取柄蓋交界處綠豆粒大的組織

放入新斜面中部第39頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四金針菇是橫切菌蓋上薄的菌肉或取未開傘的幼嫩子實(shí)體的菌褶片第40頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四靈芝組織分離所取的部位是菌蓋邊緣的白色生長圈第41頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四木耳等膠質(zhì)菌類的菌肉薄，子實(shí)體經(jīng)無菌水反復(fù)沖洗后，撕開子實(shí)體或用刀片將兩層耳片切開，挑取一小塊菌肉組織即可。第42頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（4）種菇分離后的觀察培養(yǎng)

將分離好的試管放入23--25℃的溫箱中培養(yǎng)，24—36h后開始萌發(fā)菌絲，2—3d后形成菌落，此時(shí)注意淘汰雜菌污染或菌絲生長希弱的試管，10d左右菌絲可長滿試管，放入冰箱中儲存。選擇適宜的季節(jié)做出菇試驗(yàn)。第43頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四4、母種的轉(zhuǎn)管培養(yǎng)母種的接種必須在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行。否則將會造成嚴(yán)重污染，給生產(chǎn)造成造成巨大損失。然后將所有試管及接種器具放入接種箱里進(jìn)行消毒滅菌，力求滅菌徹底。在點(diǎn)燃酒精燈火焰上進(jìn)行操作，將菌種試管和接種用斜面培養(yǎng)基放在火焰旁。撥去棉塞，把消毒滅菌的接種針伸入菌種試管內(nèi)，挑小塊菌種放入斜面培養(yǎng)基中，一支母種可移栽30—40支試管。原始母種可轉(zhuǎn)管2—4代。第44頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四圖3-14斜面試管轉(zhuǎn)管接種第45頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四培養(yǎng)：將移接好的試管放入20--25℃的溫箱中培養(yǎng)，同時(shí)注意反復(fù)觀察，清雜去劣，經(jīng)10d左右菌絲可長滿試管。第46頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（二）原種的制作1、原種培養(yǎng)基配方與配制①木屑培養(yǎng)基：木屑78%，麩皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水適量。適用于培養(yǎng)平菇、木耳、香菇、猴頭。②棉子殼培養(yǎng)基：棉子殼78%，麩皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水適量。水適量。適用于培養(yǎng)平菇、猴頭、金針菇、雞腿菇。第47頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四③谷粒配方：稻谷98%，石膏粉2%④棉子殼谷粒配方：棉子殼50%，谷粒,49%，石膏粉1%第48頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四培養(yǎng)料的配制

⑴木屑、棉籽殼培養(yǎng)料的拌料配制木屑、棉籽殼培養(yǎng)料按配方稱量后，堆制混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水中再拌入。拌料時(shí)要控制料的含水量在60﹪左右。第49頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四⑵谷粒培養(yǎng)料的配制谷粒因其營養(yǎng)較豐富，制作的菌種具有菌絲萌發(fā)早、吃料快、抗衰老能力強(qiáng)、產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)，在生產(chǎn)中應(yīng)用較多。一般是采用浸泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。注：煮熟至將開口為度第50頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四2、裝瓶

滅菌

將培養(yǎng)料拌勻裝入菌種瓶（或袋）內(nèi)、裝料松緊適宜，上下一致，裝料高度以齊瓶（袋）肩為宜。然后用手指在瓶的中央向下大一個小洞，以利接種定植，塞上棉塞。裝好的料瓶（袋）要當(dāng)天滅菌，以免培養(yǎng)料發(fā)霉變質(zhì)。第51頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四培養(yǎng)基的滅菌

通常采用高壓蒸氣滅菌法和常壓蒸氣滅菌法以達(dá)到滅菌的目的。高壓滅菌2小時(shí)或常壓滅菌于100℃維持8-10小時(shí)，滅菌后培養(yǎng)基最好放在適溫下，空白培養(yǎng)5-7天，以檢查培養(yǎng)基滅菌的效果。如在此期間沒有出現(xiàn)任何雜菌，說明滅菌效果良好。待其冷卻30℃以下可接種。也可高壓滅菌（1.5—2h)第52頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四3、原種的接種接原種用接種耙取蠶豆大母種放于瓶中接種穴內(nèi)，一支母種可4—6瓶原種。第53頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四4、原種的培養(yǎng)培養(yǎng)室的大小和床架數(shù)量應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模來定。

注意：適溫培養(yǎng)，對多數(shù)食用菌而言，可保持20~25℃，定期檢查雜菌。時(shí)間25—40天。正常菌絲：潔白、粗壯。雜菌：有黃、綠、黑橘紅等多種顏色，且生長速度快，稀疏無力。第54頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四第55頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四（三）、栽培種的制作基本上同原種，可參照執(zhí)行。容器可用15cm30cm0.005cm聚丙烯朔料袋加套環(huán)替代。第56頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四接栽培種用接種匙（鑷、鏟）取棗大原種放于袋的兩端或瓶中料面上注意表面老菌絲及

老種塊勿接入返回本節(jié)第57頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四第58頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四第59頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四四、菌種的保藏（一）菌種的保藏的原理及設(shè)備1、菌種的保藏的原理：采用干燥、低溫、隔氧等方法，盡可能地降低菌種的代謝活動，并保證原種的純度。2、菌種的保藏的設(shè)備：普通冰箱或超低溫冰箱、真空干燥器（機(jī)）第60頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四特點(diǎn)簡便

保藏時(shí)間短

易污染及退化

不適于草菇等菌類1.斜面低溫法

斜面菌種置4~6℃冰箱中（3~4個月）返回本節(jié)（二）菌種常用的保藏方法第61頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四返回本節(jié)第62頁，共66頁，2023年，2月20日，星期四2、礦油保藏法：將高溫滅菌后的