抗病毒生防菌F-01菌株發(fā)酵條件優(yōu)化畢業(yè)論文

抗病毒生防菌F-01菌株發(fā)酵條件優(yōu)化摘要：以高氏1號(hào)培養(yǎng)基為基礎(chǔ),通過(guò)單因素分析和正交試驗(yàn),對(duì)抗病毒生防菌F-01菌株最佳培養(yǎng)基和最優(yōu)培養(yǎng)、條件進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:適宜FX05產(chǎn)抑綠膿桿菌活性物質(zhì)的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為小米粉（2g）、酪蛋白胨（0.1g）、K2HPO4(0.05g)、MgSO4.7H2O(0.05g)、NaCl(0.05g)、FeSO4.7H2O(0.001g)。發(fā)酵條件為初始pH為8.0,培養(yǎng)溫度為28℃,培養(yǎng)120h產(chǎn)抑菌物質(zhì)達(dá)最大值。關(guān)鍵詞：抗病毒生防菌;活性物質(zhì);培養(yǎng)條件優(yōu)化第一章緒論1.1鏈霉菌活性產(chǎn)物鏈霉菌是放線菌目的一科?；鶅?nèi)菌絲不斷裂，氣生菌絲通常發(fā)育良好，形成長(zhǎng)（有時(shí)短）的孢子絲。孢子不能運(yùn)動(dòng)，外鞘上常有疣、刺或毛發(fā)等狀飾物。鏈霉菌是抗生素產(chǎn)生最豐富最多的放線菌種屬，長(zhǎng)期以來(lái)一直被開(kāi)發(fā)各種用途的抗生素，隨著天然產(chǎn)物化學(xué)和病理學(xué)研究的不斷深入，人們從鏈霉菌中逐漸發(fā)現(xiàn)的生物活性物質(zhì)除了抗生素外，還有酶制劑、免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)、藥理活性物質(zhì)、抗菌劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、殺蟲(chóng)殺螨和除草劑等多種物質(zhì)。鏈霉菌是天然活性物質(zhì)與藥物的重要微生物資源，是研究微生物生長(zhǎng)、發(fā)育和次生代謝功能的良好材料。由于其復(fù)雜的形態(tài)、獨(dú)特的代謝途徑及次生代謝產(chǎn)物的多樣性，鏈霉菌已成為人們關(guān)注和研究的重點(diǎn)對(duì)象，顯示了鏈霉菌在科學(xué)、經(jīng)濟(jì)以及社會(huì)領(lǐng)域巨大的研究?jī)r(jià)值。放線菌中以鏈霉菌合成抗生素次生代謝產(chǎn)物的能力最強(qiáng)，鏈霉菌可產(chǎn)生多種次生代謝產(chǎn)物，包括水解酶與抗生素等物質(zhì)，其在醫(yī)藥、飼料添加劑等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，而且在植物保護(hù)方面發(fā)揮了相當(dāng)大的作用。鏈霉菌基因組是目前己知的最大的原核生物基因組，其基因組染色體呈線狀，而且具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)?；蚪M中GC含量平均為73％。天藍(lán)色鏈霉菌假（Streptomy-ces.coelicolor）作為鏈霉菌屬的典型代表種，其全基因組序列已于2001年7月在英國(guó)劍橋Sanger中心測(cè)序完成，這是第一個(gè)完成的全基因組測(cè)序的鏈霉菌，也是第一個(gè)完成全基因組測(cè)序的放線菌。鏈霉菌染色體富含次生代謝基因簇和調(diào)控基因,鏈霉菌中某一特定次生代謝途徑相關(guān)的基因通常以基因簇"7VK6MAI#的形式存在線狀染色體上,鏈霉菌基因組富含次生代謝物合成基因簇.鏈霉菌基因組同樣富含編碼調(diào)控蛋白的基因,鏈霉菌這種基因組構(gòu)成特點(diǎn)與其生存在高度競(jìng)爭(zhēng)的土壤環(huán)境中相適應(yīng)。土壤中存在各種脅迫壓力（化學(xué)、物理和生物的），而鏈霉菌是靜止生物，面對(duì)脅迫相對(duì)被動(dòng)。因此，鏈霉菌除產(chǎn)生抗生素抑殺“異己”外，其基因組富含編碼調(diào)控、轉(zhuǎn)錄蛋白的基因也有利于其感應(yīng)各種環(huán)境信號(hào)和生理信息并作出反應(yīng)，行使各種復(fù)雜功能，從而在具有高度競(jìng)爭(zhēng)的土壤環(huán)境得以良好的生存。放線菌產(chǎn)生的抗生素中有90％是以鏈霉菌作為生產(chǎn)菌種生產(chǎn)的．現(xiàn)已從鏈霉菌中得到土霉素、金霉素，氯霉素、紅霉素等氨基糖苷類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)，多烯類(lèi)、聚醚類(lèi)抗生素。由于抗生素的廣泛及長(zhǎng)期應(yīng)用，細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性問(wèn)題日益嚴(yán)重，因此迫切要進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)新型、高效、低毒的抗耐藥菌抗生素。隨著抗生素?cái)?shù)量的不斷增加，從鏈霉菌中篩選到的新抗生素就變得越來(lái)越困難，篩選得到的化學(xué)物質(zhì)重復(fù)率非常高。然而這并不意味著鏈霉菌中可發(fā)掘的資源沒(méi)有了，根據(jù)天然產(chǎn)物趨勢(shì)推測(cè)，鏈霉菌中還存在大量未知的抗生素有待進(jìn)一步挖掘。作為一種很有潛力的發(fā)掘新抗生素的途徑，共培養(yǎng)誘導(dǎo)方法為現(xiàn)有微生物資源的開(kāi)發(fā)與利用揭示了新思路。鏈霉菌是存在于土壤當(dāng)中的一類(lèi)重要的微生物類(lèi)群，其可以產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物，是重要的天然抗生素來(lái)源，一些鏈霉菌代謝產(chǎn)生的抗生素類(lèi)的次生代謝產(chǎn)物可以有效抑制水稻紋枯病的發(fā)生。拮抗放線菌生物防治病害的途徑主要有兩種途徑：一是寄生在植物組織體內(nèi)，誘導(dǎo)植物自身產(chǎn)生抗病性或代謝出一些具有抑菌作用的活性物質(zhì)（抗生素）影響病原菌的新陳代謝過(guò)程，從而達(dá)到防病治病的目的；二是在寄主體外利用。鏈霉菌是具有復(fù)雜生活周期的革蘭氏陽(yáng)性放線菌，系統(tǒng)生物學(xué)上歸于鏈霉菌屬，該屬的許多成員都能產(chǎn)生對(duì)人類(lèi)具有重要意義的天然代謝物，如目前臨床上應(yīng)用的抗生素約三分之二來(lái)源于鏈霉菌(該屬產(chǎn)生的代謝物還包括抗腫瘤劑)免疫抑制劑，抗蟲(chóng)劑以及其他胞外水解酶!如淀粉酶，幾丁質(zhì)酶，纖維素酶，果膠酶，木聚糖酶和蛋白酶等。鏈霉菌對(duì)植物病害的生防作用機(jī)制包括拮抗作用、競(jìng)爭(zhēng)作用和誘導(dǎo)植物抗性作用等方面，其生防效果往往不是單方面的，而是以上幾種方式作用的綜合結(jié)果，不同生防機(jī)制之間往往存在著協(xié)同作用。由于鏈霉菌防治植物病害時(shí)存在防治效果難以穩(wěn)定、持久等缺點(diǎn)，尋找提高鏈霉菌防治植物病害效果的途徑顯得十分重要。提高鏈霉菌防治植物病害效果的途徑有誘變育種、固定化技術(shù)和改良發(fā)酵工藝等，其目標(biāo)是為了提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量和純度，減少副產(chǎn)物，改變生物合成途徑，以獲得高產(chǎn)的新產(chǎn)品。人們經(jīng)常通過(guò)種內(nèi)融合或者紫外誘變等方式提高鏈霉菌分泌抗生素的能力，以提高其抑菌能力。1.2病毒危害病毒（virus)由一個(gè)核酸分子（DNA或RNA）與蛋白質(zhì)（Protein）構(gòu)成或僅由蛋白質(zhì)構(gòu)成（如朊病毒）。病毒個(gè)體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。病毒沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，由于沒(méi)有實(shí)現(xiàn)新陳代謝所必需的基本系統(tǒng)，所以病毒自身不能復(fù)制。但是當(dāng)它接觸到宿主細(xì)胞時(shí)，便脫去蛋白質(zhì)外套，它的核酸（基因）侵入宿主細(xì)胞內(nèi)，借助后者的復(fù)制系統(tǒng)，按照病毒基因的指令復(fù)制新的病毒。約75％的傳染病是由病毒引起的，其中動(dòng)物病毒是引起人類(lèi)疾病的重要病原。病毒的結(jié)構(gòu)、酶和復(fù)制機(jī)制是抗病毒藥物的作用靶點(diǎn)，所以抗病毒藥物在攻擊病毒的同時(shí)，往往對(duì)宿主產(chǎn)生毒性反應(yīng)。病毒是一類(lèi)形態(tài)最小，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的細(xì)胞內(nèi)寄生微生物。病毒利用宿主細(xì)胞的酶系統(tǒng)進(jìn)行代謝活動(dòng)，其復(fù)制周期與宿主細(xì)胞的代謝密切相關(guān)。植物病毒是一類(lèi)侵染被子植物、裸子植物和蕨類(lèi)植物的重要病原微生物。植物病毒種類(lèi)多、繁殖速率快、傳播途徑廣，并且缺少有效的防治藥劑和應(yīng)對(duì)措施，植物病毒病一旦發(fā)生流行，就會(huì)造成嚴(yán)重的損失。植物病毒病的危害，已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)真菌、細(xì)菌病害，而且近些年來(lái)由于全球一體化進(jìn)程的發(fā)展，國(guó)際商品貿(mào)易日趨發(fā)達(dá)，農(nóng)產(chǎn)品流通迅速，加快了植物病毒病在世界范圍內(nèi)的傳播。植物病毒在全世界范圍內(nèi)引起農(nóng)作物、果樹(shù)、花卉、牧草、藥用植物的病害，造成產(chǎn)量和品質(zhì)的下降，嚴(yán)重影響到人類(lèi)的生產(chǎn)生活。煙草花葉病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)是人類(lèi)最早進(jìn)行科學(xué)研究的一類(lèi)植物病毒，但因?yàn)閷?duì)其特性了解仍不夠充分，只歸類(lèi)到屬，沒(méi)有科的分類(lèi)。植物病毒病有“植物癌癥”之稱(chēng)，是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要病害之一。由于植物病毒屬絕對(duì)內(nèi)寄生生物，自身無(wú)能量代謝系統(tǒng)，對(duì)寄主植物細(xì)胞具有高度依賴(lài)性，因而植物病毒病的防治一直是植物病害防治中的一大難題。為控制植物病毒病造成的危害，人們對(duì)其防治進(jìn)行了許多有益的嘗試。煙草花葉病毒病是全世界煙草栽培地區(qū)普遍發(fā)生的一類(lèi)病害，也是我國(guó)各煙區(qū)的重要病害。煙草花葉病流行年份田間發(fā)病率一般在30--50％，通常受TMV侵染的煙草植株體內(nèi)代謝會(huì)受到嚴(yán)重影響，葉片不均勻地褪綠、枯黃，光合速率下降，這使得植株生長(zhǎng)矮小，干物質(zhì)積累減少，一般年份減產(chǎn)20-30％，流行年份則毀種甚至絕收，不僅造成煙草的產(chǎn)量損失，而且使煙葉的質(zhì)量嚴(yán)重下降，特別是中上等煙葉比例和內(nèi)在質(zhì)量下降使得煙草花葉病已成為煙葉優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)栽培的重大障礙，造成極大的經(jīng)濟(jì)損失，挫傷了煙農(nóng)的生產(chǎn)積極性。由于植物病毒對(duì)寄主細(xì)胞具有絕對(duì)寄生性，以及植物缺乏與動(dòng)物類(lèi)似的免疫代謝系統(tǒng)，使得植物一旦被感染就處于終身受害的狀態(tài)，這給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)相當(dāng)大的破壞。因此，控制煙草花葉病的危害已成為當(dāng)前煙草生產(chǎn)中急需解決的問(wèn)題。病毒感染是許多傳染病和菲傳染病甚至癌癥的病因，由于其特殊的生存方式，人類(lèi)在對(duì)付病毒性疾病的過(guò)程中還沒(méi)有找到有效的方法。天然產(chǎn)物是研究開(kāi)發(fā)薪藥的重要資源，自1983～1994年間．約60％被批準(zhǔn)應(yīng)用的抗癌和抗感染藥物來(lái)源于天然產(chǎn)物“’。藍(lán)藻是地球上最早出現(xiàn)的光合自養(yǎng)生物，在長(zhǎng)期的演化過(guò)程中形成了廣泛的適應(yīng)性。從藍(lán)藻中分離具有不同生物活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，并以此為先導(dǎo)化合物進(jìn)行新藥物開(kāi)發(fā)，已引起藥學(xué)工作者極大的關(guān)注。TMV是煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)的代表種。該屬病毒為正義單鏈RNA(positiveSENSEsingle-strandedRNA，+ssRNA)病毒，病毒復(fù)制時(shí)正鏈基因組RNA首先復(fù)制出負(fù)鏈RNA(negmivesenseRNA，．RNA)，再以負(fù)鏈RNA為模版產(chǎn)生正鏈基因組及亞基因組RNA。病毒粒子為剛直的長(zhǎng)桿狀，長(zhǎng)300hm，直徑18nm，螺旋對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)，有2130個(gè)蛋白亞基以右手螺旋排列，螺距為2．3nm，負(fù)染色后在電鏡下中央軸槽清晰可見(jiàn)。1.3抗病毒活性成分植物病毒是危害農(nóng)作物的一類(lèi)重要病原，因其危害大、防治困難，俗有植物癌癥之稱(chēng)。由于植物病毒對(duì)植物細(xì)胞的絕對(duì)寄生性，病毒復(fù)制所需要的物質(zhì)、能量場(chǎng)所等完全由寄主提供，病毒能夠脅迫寄主細(xì)胞的生化機(jī)理，使其與病毒本身的生化機(jī)理糾纏在一起難以識(shí)別，所以藥物難以只對(duì)病毒進(jìn)行選擇性攻擊而不傷害寄主細(xì)胞，導(dǎo)致研究高選擇性的化學(xué)抗病毒制劑面臨極大的困難，至今仍未取得重大突破。對(duì)煙草花葉病(TobaccoMosaicVirus，簡(jiǎn)稱(chēng)TMV)的防治，國(guó)內(nèi)外已做了大量的研究，特剃是在植物抗病毒基因研究上取得了一系列進(jìn)展，但是由于遠(yuǎn)緣雜交的不親和性，使由抗性基因轉(zhuǎn)移翡難度很大。其次，農(nóng)業(yè)栽培措施壺于受耕作制度和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的限制，在生產(chǎn)中有效的實(shí)施仍有一定難度，使用化學(xué)或生物制劑防治煙草花葉病不失為一種經(jīng)濟(jì)有效的措施?，F(xiàn)有的藥劑菌奇演、寧南霉素、病毒A、病毒必克有一定防效(防效大多在30,．-60％)，但藥劑防治效果還不理想。植物病毒病是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要因素之一，全世界每年因植物病毒病害所造成的產(chǎn)量損失大約占糧食總產(chǎn)量的10％(Fraser，1985)。有效地控制病毒的為害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的當(dāng)務(wù)之急。迄今為止，幾乎沒(méi)有能有效地從感染病毒的植物上除去病毒的化學(xué)藥劑。有些化學(xué)藥劑(如嘌呤、嘧啶類(lèi)似物)能減緩病毒的增殖，但無(wú)根除之效，而且常常比病毒更易傷害作物。近年來(lái)，植物源抗病毒制劑（生物源農(nóng)藥）由于其高效、低毒、無(wú)殘留的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，在植物病毒病害防治過(guò)程中發(fā)揮出越來(lái)越重要的作用。自1925年Duggur等從商陸(phytolacca）上發(fā)現(xiàn)第一個(gè)植物病毒抑制物以來(lái)[14]，陸續(xù)開(kāi)發(fā)了很多抗病毒制劑，像病毒A、植病靈、金葉寶等。目前研究發(fā)現(xiàn)的抗病毒活性物質(zhì)，既有生物小分子的次生代謝產(chǎn)物，也有大分子的多糖、核酸和蛋白質(zhì)等。其中蛋白質(zhì)類(lèi)活性物質(zhì)廣泛存在于自然界各種生物體內(nèi)，包括植物、微生物、動(dòng)物等，最受關(guān)注，同時(shí)也是研究較多的一類(lèi)活性物質(zhì)。動(dòng)物病毒廣泛侵襲各類(lèi)動(dòng)物，對(duì)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物也不例外，在家禽家畜養(yǎng)殖中屢見(jiàn)不鮮。在如今的抗動(dòng)物病毒活性成分化合物中，主要都是黃酮類(lèi)相關(guān)的化合物。黃酮類(lèi)化合物泛指具有15個(gè)碳原子(C6-C3一C6)的多元酚化合物，廣泛存在于自然界中。按結(jié)構(gòu)可分為黃酮和黃酮醇類(lèi)、雙黃酮類(lèi)、二氫黃酮及二氫黃酮醇類(lèi)、查耳酮類(lèi)、異黃酮類(lèi)以及其它黃酮類(lèi)等。許多中草藥的抗病毒活性成分都是黃酮類(lèi)化合物，如從甘草中分離出的黃酮類(lèi)成分甘草素與異甘草素有很強(qiáng)的抑制艾滋病病毒(HIV)能力，甘草香豆素屬于異黃酮類(lèi)的衍生物，甘草吡喃香豆素等多種甘草黃酮類(lèi)成分可抑制H1V誘導(dǎo)的巨細(xì)胞形成，且未見(jiàn)細(xì)胞毒性。自從1993年首次從短葉紅豆杉的韌皮部分分離到一株產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌后，研究者就開(kāi)始不斷地從內(nèi)生菌中分離出各種活性代謝產(chǎn)物?，這其中就包括抗病毒活性代謝產(chǎn)物。目前臨床上常用的藥物主要有如下幾種：抗流感病毒及呼吸道病毒藥物：抗皰疹病毒藥物：抗巨細(xì)胞病毒藥物；抗肝炎病毒藥物：抗人類(lèi)免疫缺陷病毒藥物?？共《舅幬锏闹委熞延薪?0年的歷史，由于病毒進(jìn)入機(jī)體后，模仿宿主的生化機(jī)理在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和繁殖，因此，能抑制病毒繁殖的藥物對(duì)宿主細(xì)胞或機(jī)體有不同程度的損害，使得抗病毒藥的發(fā)展與抗生素相比較為緩慢。到目前為止，尚無(wú)令人完全滿意的抗病毒藥。1.4目的意義在農(nóng)藥的投入上，生物農(nóng)藥的比重越來(lái)越小，工業(yè)化生產(chǎn)出的化學(xué)農(nóng)藥卻逐年增加。但是化學(xué)農(nóng)藥的大量使用和長(zhǎng)期延續(xù)，已給人類(lèi)帶來(lái)了不利的影響，它不僅嚴(yán)重破壞了人們賴(lài)以生存的自然環(huán)境，影響了正常的生態(tài)循環(huán)，還危及到人類(lèi)的健康。如土壤的嚴(yán)重板結(jié)和酸化，既造成農(nóng)藥浪費(fèi)，又破壞土壤結(jié)構(gòu)，降低農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)；還會(huì)污染水源，造成江河湖泊水華現(xiàn)象和海洋赤潮；而水的負(fù)營(yíng)養(yǎng)化，對(duì)水生動(dòng)植物的生存造成極大的威脅：地下水與地表水的污染，使農(nóng)作物的品質(zhì)下降，嚴(yán)重影響到人類(lèi)的生存與健康。盡量減少化學(xué)農(nóng)藥的使用成為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中人們所十分關(guān)心的問(wèn)題。因此如何研究出高效，高質(zhì)，高優(yōu)的化學(xué)產(chǎn)品，減少化學(xué)藥品的使用量，采用生物農(nóng)藥，生物防治至關(guān)重要。從而在未來(lái)的抗病毒，抗真菌，細(xì)菌的舞臺(tái)上，更多的需要依靠生物菌來(lái)防治病害，病毒等，這其中最主要的就是放線菌。放線菌在自然界的分布極為廣泛,存在于各種不同的自然生態(tài)環(huán)境里,其種類(lèi)繁多,代謝功能各異,是一類(lèi)有著廣泛實(shí)際用途的生物資源。放線菌所產(chǎn)生的抗生素能有效地防治人類(lèi)和牲畜的多種傳染性疾病。目前人們?cè)谏矬w內(nèi)發(fā)現(xiàn)的6000多種抗生素中,約60%來(lái)自放線菌,其中包括許多在醫(yī)藥上有重要作用的抗生素,因而成為近代抗生素等制藥工業(yè)的最重要的微生物資源之一。微生物發(fā)酵的生產(chǎn)水平最基本的是取決于生產(chǎn)菌種的性能,但有了優(yōu)良的菌種之后,還需要有最佳的環(huán)境條件即發(fā)酵工藝加以配合,才能使其生產(chǎn)能力充分表現(xiàn)出來(lái)。因此必須研究生產(chǎn)菌種的最佳發(fā)酵工藝條件,如營(yíng)養(yǎng)要求、培養(yǎng)溫度、pH條件、對(duì)氧的需求等,據(jù)此設(shè)計(jì)出合理的發(fā)酵工藝,使生產(chǎn)菌種處于最佳的產(chǎn)物合成條件,進(jìn)而取得優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的效果。本實(shí)驗(yàn)采用抗病毒生防菌F-01菌株，以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，作為菌株碳氮源及實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件的篩選準(zhǔn)則，采取單因素變化，采用梯度實(shí)驗(yàn)初步確定最優(yōu)原料比例和條件。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，分別用各種單糖代替2%的淀粉選出較優(yōu)碳源，同理用氮源代替0.1%硝酸鉀選出較優(yōu)碳源，然后用較優(yōu)碳源和氮源進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，得到最優(yōu)碳源，氮源。利用最優(yōu)碳源，氮源對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。最終得出最適合F-01生長(zhǎng)的發(fā)酵條件。材料和方法2.1實(shí)驗(yàn)菌株F-02菌株；F-07菌株；F-12菌株；F-ZH菌株。（實(shí)驗(yàn)室保存菌株）2.2實(shí)驗(yàn)儀器及試劑2.2.1實(shí)驗(yàn)儀器精密電子天平，立式電熱壓力蒸汽滅菌器，數(shù)顯酸度計(jì)，凈化工作臺(tái)，移液槍?zhuān)F形瓶，研缽，恒溫培養(yǎng)箱，搖床，量筒，冰箱2.2.2實(shí)驗(yàn)試劑淀粉，果糖，麥芽糖，甘露糖，半乳糖，葡萄糖，玉米粉，小米粉，大米粉，黃豆粉，蛋白胨，大豆蛋白胨，酪蛋白胨，硝酸鉀，硫酸銨，K2HPO4，MgSO4·7H2O；NaCl；FeSO4·7H2O；氯化鉀，TMV病毒液。2.3培養(yǎng)基放線菌培養(yǎng)基(高氏1號(hào)培養(yǎng)基)：淀粉（2g）KNO3(0.1g)K2HPO4(0.05g)MgSO4.7H2O(0.05g)NaCl(0.05g)FeSO4.7H2O(0.001g)水100mL2.4實(shí)驗(yàn)方法2.4.1菌株培養(yǎng)方法：以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為菌株提供生長(zhǎng)環(huán)境，采用統(tǒng)一規(guī)格的錐形瓶（250mL），由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中才用碳源十種（淀粉，果糖，麥芽糖，甘露糖，半乳糖，葡萄糖，玉米粉，小米粉，大米粉，黃豆粉），氮源五種（蛋白胨，大豆蛋白胨，酪蛋白胨，硝酸鉀，硫酸銨），在做碳源篩選的時(shí)候，分別用所選碳源代替高氏一號(hào)中的碳源淀粉；同理，在做氮源的時(shí)候，用所選氮源代替高氏一號(hào)培養(yǎng)基中的氮源硝酸鉀。用精準(zhǔn)天平分別稱(chēng)取高氏一號(hào)培養(yǎng)基中所需試劑分量，稱(chēng)取完畢后，分別加入100ml的蒸餾水，并將其密封，將培養(yǎng)基放入滅菌框中在立體式電熱壓力蒸汽滅菌器中滅菌30分鐘（120℃），滅菌完成后，取出滅菌后的培養(yǎng)基，冷卻至室溫，在超凈工作臺(tái)里將菌株接種培養(yǎng)基中并密封，將接種的培養(yǎng)基放在搖床（28℃，180rpm）環(huán)境下培養(yǎng)7天，7天后取出培養(yǎng)基，在超凈工作臺(tái)中，用移液槍從培養(yǎng)基中取菌液于2ml離心管中，菌液培養(yǎng)完成。2.4.2TMV病毒液制作：取癥狀明顯感染TMV病毒的煙草葉片，并稱(chēng)取其質(zhì)量，將病毒葉放入研缽中，加入少量的石英砂和PBS（PhosphateBufferedSaline）進(jìn)行研磨，研磨大概30分鐘，按照1g病毒葉配100mLpbs配置病毒液，完成后再加入適量的石英砂（有利于在接種的時(shí)候損傷葉片，從而更好的使煙草葉片感染TMV），完成后將病毒液放入冰箱保存。PBS（PhosphateBufferedSaline）PBS1L配方pH7.4：磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.24g，磷酸氫二鈉(Na2HPO4)1.44g，氯化鈉(NaCl)8.0g，氯化鉀(KCl)0.2g，加水至1000mL。2.4.3ELISA:酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)：ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌，下同)。

2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O·D值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。2.4.4半葉枯斑法：挑選健康且長(zhǎng)勢(shì)一致的心葉煙，將事先提取的TMV病毒液混勻，并取出適量病毒液，采用摩擦接種的方法，將TMV病毒液接種到心葉煙的葉片上，由于接種損傷葉片，因此接種后葉片會(huì)有短暫的萎焉現(xiàn)象，將其放置3-4小時(shí)，即待葉片基本恢復(fù)正常狀態(tài)，用毛筆將菌液均勻的涂在接種TMV病毒葉片的左半部分，每種菌液設(shè)置重復(fù)2-3次，菌液涂抹完成，做好標(biāo)簽，涂上菌液后4-5天統(tǒng)計(jì)結(jié)果，分別統(tǒng)計(jì)葉片左右的病斑數(shù)，并算出抑制率，可得出菌液的效果，通過(guò)活性得較優(yōu)碳源，氮源組分。抑制率=(對(duì)照枯斑數(shù)一處理枯斑數(shù))／對(duì)照枯斑數(shù)×100％培養(yǎng)基優(yōu)化3.1菌株優(yōu)化3.1.1菌株培養(yǎng)基：以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，所選碳源麥芽糖，甘露糖，半乳糖，葡萄糖，果糖代替原培養(yǎng)基中的2%淀粉，制作培養(yǎng)基，通過(guò)高溫滅菌，冷卻至常溫，并接種F-02菌株；F-07菌株；F-12菌株；F-ZH菌株四種菌株在搖床（28℃，180rpm）中培養(yǎng)七天。3.1.2活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長(zhǎng)勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。3.1.3結(jié)果及分析單糖重復(fù)2#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2左右抑制率%左右抑制率%麥芽糖28372424302022甘露糖12214315264242半乳糖14315510256057葡萄糖29361916140612果糖8195812275657單糖重復(fù)7#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2左右抑制率%左右抑制率%麥芽糖781385013甘露糖67149143625半乳糖41573792247葡萄糖2231298195843果糖59446166353單糖重復(fù)12#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2左右抑制率%左右抑制率%麥芽糖6933109033甘露糖8102386241半乳糖4850245050葡萄糖760354040果糖9174712130828單糖重復(fù)ZH菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2左右抑制率%左右抑制率%麥芽糖18201013161915甘露糖19273014171824半乳糖2128257196344葡萄糖2728313224122果糖121383132035通過(guò)五種不同的碳源培養(yǎng)基對(duì)4種菌株抗病毒活性測(cè)定的結(jié)果可以看出，F(xiàn)-02，F(xiàn)-07兩種菌株的效果較好。3.2碳源優(yōu)化3.2.1菌株培養(yǎng)基：以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，所選碳源麥芽糖，甘露糖，果糖。葡萄糖，半乳糖，淀粉，黃豆粉，大米粉，小米粉，玉米粉。代替原培養(yǎng)基中的2%淀粉，制作培養(yǎng)基，通過(guò)高溫滅菌，冷卻至常溫，并接種F-02菌株；F-07菌株2種菌株在搖床（28℃，180rpm）中培養(yǎng)七天。3.1.2活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長(zhǎng)勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。3.1.3結(jié)果及分析單糖重復(fù)2#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2左右抑制率%左右抑制率%淀粉5617525329.5玉米粉256020241738.5小米粉51155693344大米粉55013182828黃豆粉23261217191111.5麥芽糖28372424302022甘露糖12214315264242半乳糖14315510256057葡萄糖29361916140612果糖8195812275657單糖重復(fù)7#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2左右抑制率%左右抑制率%淀粉891111337543玉米粉9143626373033小米粉172119354030大米粉682527423630.5黃豆粉10174115202533麥芽糖781385013甘露糖67149143625半乳糖41573792247葡萄糖2231298195843果糖59446166353通過(guò)對(duì)十種碳源的實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)分析可得較優(yōu)碳源四種：果糖，淀粉，小米粉，玉米粉。3.3氮源優(yōu)化3.3.1菌株培養(yǎng)基：以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，，所選氮源：硝酸鉀，硫酸銨，大豆蛋白胨，蛋白胨，酪蛋白胨。代替原培養(yǎng)基中的0.1%硝酸鉀，制作培養(yǎng)基，通過(guò)高溫滅菌，冷卻至常溫，并接種F-02菌株；F-07菌株2種菌株在搖床（28℃，180rpm）中培養(yǎng)七天。3.3.2活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長(zhǎng)勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。3.3.3結(jié)果及分析氮源重復(fù)2#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2左右抑制率%左右抑制率%硝酸鉀2431232219023硫酸銨252774307蛋白胨37603844038大豆蛋白胨6145715212943酪蛋白胨15335514244248.5氮源重復(fù)7#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2左右抑制率%左右抑制率%硝酸鉀1118399154039.5硫酸銨9246315274453.5蛋白胨20215171605大豆蛋白胨46334147152酪蛋白胨13265013325954.5通過(guò)對(duì)五種氮源的實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)分析可得較優(yōu)碳源三種：硝酸鉀，大豆蛋白胨，酪蛋白胨。3.4碳氮源組合優(yōu)化3.4.1菌株培養(yǎng)基：以高氏一號(hào)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)。所選碳源：果糖，淀粉，小米粉，玉米粉；所選氮源：硝酸鉀，大豆蛋白胨，酪蛋白胨。兩兩組合制作培養(yǎng)基，通過(guò)高溫滅菌，冷卻至常溫，并接種F-02菌株；F-07菌株2種菌株在搖床（28℃，180rpm）中培養(yǎng)七天。碳氮源組合表碳源氮源果糖淀粉小米粉玉米粉硝酸鉀果糖/硝酸鉀淀粉/硝酸鉀小米粉/硝酸鉀玉米粉/硝酸鉀大豆蛋白胨果糖/大豆蛋白胨淀粉/大豆蛋白胨小米粉/大豆蛋白胨玉米粉/大豆蛋白胨酪蛋白胨果糖/酪蛋白胨淀粉/酪蛋白胨小米粉/酪蛋白胨玉米粉/酪蛋白胨3.4.2活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長(zhǎng)勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。3.4.3結(jié)果及分析正交重復(fù)2#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3左右抑制率%左右抑制率%左右抑制率%淀/鉀1726352230278133833淀/豆212722594414233935淀/酪11204530392327352331果/鉀25291421333614233930果/豆9154014192616253634果/酪27352317263527433732玉/鉀12141419273033412021玉/豆9195316304719262742玉/酪23281814192629382423小/鉀32473217334818365043小/豆693318304029453636小/酪11245423424517375451正交重復(fù)7#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3左右抑制率%左右抑制率%左右抑制率%淀/鉀7113615192117242929淀/豆11204521323439淀/酪131724594420272631果/鉀232921583721251625果/豆17201513161920272620果/酪1217298154727342132玉/鉀1422368133829372232玉/豆13193221282514274835玉/酪1927309174712234842小/鉀12204091540594441小/豆2528111623309133024小/酪8266910184456.5碳源(淀----淀粉;果-----果糖;玉----玉米粉;小----小米粉)氮源(鉀----硝酸鉀;豆---大豆蛋白胨;酪----酪蛋白胨)通過(guò)對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)的分析，可得出當(dāng)碳源為小米粉，氮源為酪蛋白胨的組合時(shí)，其對(duì)煙草TMV病毒的活性最好，因此，得出最優(yōu)組合為碳源為小米粉，氮源為酪蛋白胨4.培養(yǎng)基條件優(yōu)化4.1溫度的優(yōu)化：4.1.1菌株培養(yǎng)基：利用最優(yōu)碳氮源（碳源—小米粉；氮源—酪蛋白胨）組合制作培養(yǎng)基，121℃高溫高壓滅菌30分鐘，冷卻至室溫后，分別接種F-01（2#，7#，）2種菌種，然后26℃，28℃，30℃，32℃、180rpm搖床培養(yǎng)7天。4.1.2活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長(zhǎng)勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。4.1.3結(jié)果及分析溫度重復(fù)2#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3左右抑制率%左右抑制率%左右抑制率%26℃3948192329211824252228℃304533213946618674930℃1124541825283245293732℃2942311724299133130溫度重復(fù)7#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3左右抑制率%左右抑制率%左右抑制率%26℃2232314152213039232528℃1221431932411728394130℃816503348312439384032℃18304022312925383434在對(duì)培養(yǎng)條件溫度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)所得菌液對(duì)煙草TMV病毒活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在溫度為28℃時(shí)，抗煙草TMV病毒活性最高4.2pH的優(yōu)化：4.2.1菌株培養(yǎng)基：利用最優(yōu)碳氮源（碳源—小米粉；氮源—酪蛋白胨）組合制作培養(yǎng)基，分別用ph計(jì)將培養(yǎng)基的ph調(diào)至ph6，ph7，ph8，ph9四個(gè)不同的pH值，121℃高溫高壓滅菌30分鐘，冷卻至室溫后，分別接種F-01（2#，7#，）2種菌種，然后28℃、180rpm搖床培養(yǎng)7天。4.2.2活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長(zhǎng)勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。4.2.3結(jié)果及分析ph重復(fù)2#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3左右抑制率%左右抑制率%左右抑制率%6.0222719344117192524207.0153253213743244951498.0263933102864163858529.033412025281114192619ph重復(fù)7#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3左右抑制率%左右抑制率%左右抑制率%6.0121729243123212825267.0314937295042183040408.0283936203238132752429.07113641481535442024在對(duì)培養(yǎng)條件pH優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)所得菌液對(duì)煙草TMV病毒活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在pH為8.0時(shí)，抗煙草TMV病毒活性最高。4.3培養(yǎng)時(shí)間的優(yōu)化：4.3.1菌株培養(yǎng)基：利用最優(yōu)碳氮源（碳源—小米粉；氮源—酪蛋白胨）組合制作培養(yǎng)基，用ph計(jì)將培養(yǎng)基的ph調(diào)至pH為8.0,121℃高溫高壓滅菌30分鐘，冷卻至室溫后，分別接種F-01（2#，7#，）2種菌種，然后28℃、180rpm搖床培養(yǎng)，分別在第4天，第5天，第6天，第7天同一時(shí)間段采集菌液。4.3.2活性測(cè)定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對(duì)應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長(zhǎng)勢(shì)基本一樣的心葉煙做活性測(cè)定。4.3.3結(jié)果及分析重復(fù)時(shí)間2#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3左右抑制率%左右抑制率%左右抑制率%4d314835253119112861385d153050305343324935436d233839283520193241337d33432326383219293430重復(fù)時(shí)間7#菌株平均抑制率%重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3左右抑制率%左右抑制率%左右抑制率%4d284639354929365737355d254544132854345336456d365939274945193241427d12214333462834574037在對(duì)培養(yǎng)基條件優(yōu)化培養(yǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)所得菌液對(duì)煙草TMV病毒活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在溫度為28℃，ph值為8.0時(shí)，120h左右抑菌物質(zhì)產(chǎn)量達(dá)最高峰。5結(jié)論與展望5.1結(jié)論不同的菌種能夠利用的碳源和氮源往往不同,同一個(gè)菌種對(duì)不同碳源和氮源的利用速度也不同,碳源物質(zhì)為細(xì)胞提供能源,組成菌體細(xì)胞成分的碳架,構(gòu)成代謝產(chǎn)物,氮源物質(zhì)也是構(gòu)成菌體細(xì)胞結(jié)構(gòu)的物質(zhì),在碳源不足的情況下也可為微生物提供能源。各種微生物在生長(zhǎng)繁殖和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物中,除了需要碳源和氮源物質(zhì),還需要磷、鎂、硫、鐵、鉀、鈉等無(wú)機(jī)鹽和微量元素作為酶的激活劑、生理活性物質(zhì)的組成或生理活性作用的調(diào)節(jié)劑。這些物質(zhì)一般在較低濃度時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成有促進(jìn)作用,而在高濃度時(shí)常表現(xiàn)出顯著的抑制作用。通過(guò)對(duì)放線菌F-01菌株培養(yǎng)基和發(fā)酵條件的研究,得出F-01菌株的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為淀粉（2g）、酪蛋白胨(0.1g)、K2HPO4(0.05g)、MgSO4.7H2O(0.05g)、NaCl(0.05g)、FeSO4.7H2O(0.001g)、水100mL。發(fā)酵條件為培養(yǎng)基初始pH為8.0,28℃培養(yǎng),120h左右抑菌物質(zhì)產(chǎn)量達(dá)最高峰。小米粉是一種成本廉價(jià)的物質(zhì),含有豐富的還原糖、氨基酸、磷、微量元素、生長(zhǎng)素及有機(jī)酸,它作為F-01菌株的能源物質(zhì),達(dá)到了降低成本提高效價(jià)的目的,為進(jìn)一步放大試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。5.2論文工作的不足5.2.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程中在F-01菌系中從四種菌株篩選出F-02菌株、F-07菌株，通過(guò)五種不同的碳源篩選結(jié)果可能存在偏差。同時(shí)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中同時(shí)進(jìn)行F-02菌株、F-07菌株兩種菌株的培養(yǎng)基碳氮源和培養(yǎng)條件的篩選，雖然兩種菌株的性質(zhì)，功能相似，但也存在細(xì)小的差異，因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中會(huì)存在許多的誤差和結(jié)果偏差。5.2.2由于本身能力因素，對(duì)于正交實(shí)驗(yàn)理解不夠，因此只能進(jìn)行碳氮源的簡(jiǎn)單組合實(shí)驗(yàn)，這樣對(duì)于實(shí)驗(yàn)工作量大大的提高，同時(shí)也遠(yuǎn)遠(yuǎn)的降低了實(shí)驗(yàn)的精確度。5.2.3在培養(yǎng)基條件的篩選中，溫度，pH,培養(yǎng)時(shí)間的梯度較大。在培養(yǎng)條件pH篩選中，選取pH6.0、7.0、8.0、9.0。在pH7.0和pH8.0的發(fā)酵產(chǎn)菌量差不多，本身實(shí)驗(yàn)過(guò)程中未調(diào)節(jié)pH，pH位于7.0-8.0之間，增加了實(shí)驗(yàn)誤差。5.3展望5.3.1鏈霉菌在生物防治和環(huán)境保護(hù)領(lǐng)域具有重大應(yīng)用前景，是許多病原微生物的生防因子，也是目前研究應(yīng)用廣泛的生防菌。隨著鏈霉菌研究的不斷擴(kuò)展和深入，相信會(huì)有更多鏈霉菌被篩選，進(jìn)而豐富我國(guó)的鏈霉菌種群及其系統(tǒng)分類(lèi)學(xué)研究。篩選優(yōu)良菌株或利用基因工程技術(shù)和原生質(zhì)體融合技術(shù)，為構(gòu)建高產(chǎn)、高效鏈霉菌的生防菌株防治植物病害等提供有力的保障。研究出其準(zhǔn)確的碳氮源配比和發(fā)酵條件，如溫度、pH，培養(yǎng)時(shí)間，轉(zhuǎn)速，無(wú)機(jī)因子等。從而更有利于產(chǎn)生最大產(chǎn)菌量，為醫(yī)藥，工業(yè)，農(nóng)業(yè)等服務(wù)。5.3.2：采用現(xiàn)代發(fā)酵工程和代謝工程技術(shù)研究微生物定向發(fā)酵調(diào)控工藝。建立優(yōu)化的發(fā)酵、增殖生產(chǎn)工藝技術(shù)，提高有效活性物質(zhì)的生產(chǎn)率。用抗病機(jī)制有交叉的生防菌復(fù)配協(xié)同抗病。許多學(xué)者的研究表明，使用幾種拮抗菌的混合物可以獲得良好的病害防治效果，多菌復(fù)配可以拓寬鏈霉菌使用范圍，防治多種病原菌；可以增強(qiáng)其有效性，減少使用頻率，可結(jié)合不同微生物的防治優(yōu)勢(shì)，提高生防效果。通過(guò)對(duì)鏈霉菌的遺傳改良包括提高抗菌物質(zhì)的表達(dá)增強(qiáng)競(jìng)爭(zhēng)能力和誘導(dǎo)抗性等，增強(qiáng)其抗菌活性，擴(kuò)大抑菌譜，增強(qiáng)在植物寄主上的定殖能力，從而提高防病能力。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的運(yùn)用，鏈霉菌的研究及開(kāi)發(fā)應(yīng)用將會(huì)出現(xiàn)新的發(fā)展，對(duì)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義，同時(shí)有較強(qiáng)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力和良好經(jīng)濟(jì)效益，能產(chǎn)生巨大的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益，將會(huì)有廣闊的應(yīng)用前景。參考文獻(xiàn)基于C8051F單片機(jī)直流電動(dòng)機(jī)反饋控制系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與研究基于單片機(jī)的嵌入式Web服務(wù)器的研究MOTOROLA單片機(jī)MC68HC（8）05PV8/A內(nèi)嵌EEPROM的工藝和制程方法及對(duì)良率的影響研究基于模糊控制的電阻釬焊單片機(jī)溫度控制系統(tǒng)的研制基于MCS-51系列單片機(jī)的通用控制模塊的研究基于單片機(jī)實(shí)現(xiàn)的供暖系統(tǒng)最佳啟停自校正（STR）調(diào)節(jié)器單片機(jī)控制的二級(jí)倒立擺系統(tǒng)的研究基于增強(qiáng)型51系列單片機(jī)的TCP/IP協(xié)議棧的實(shí)現(xiàn)基于單片機(jī)的蓄電池自動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)基于32位嵌入式單片機(jī)系統(tǒng)的圖像采集與處理技術(shù)的研究基于單片機(jī)的作物營(yíng)養(yǎng)診斷專(zhuān)家系統(tǒng)的研究基于單片機(jī)的交流伺服電機(jī)運(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)基于單片機(jī)的泵管內(nèi)壁硬度測(cè)試儀的研制基于單片機(jī)的自動(dòng)找平控制系統(tǒng)研究基于C8051F040單片機(jī)的嵌入式系統(tǒng)開(kāi)發(fā)基于單片機(jī)的液壓動(dòng)力系統(tǒng)狀態(tài)監(jiān)測(cè)儀開(kāi)發(fā)模糊Smith智能控制方法的研究及其單片機(jī)實(shí)現(xiàn)一種基于單片機(jī)的軸快流CO〈,2〉激光器的手持控制面板的研制基于雙單片機(jī)沖床數(shù)控系統(tǒng)的研究基于CYGNAL單片機(jī)的在線間歇式濁度儀的研制基于單片機(jī)的噴油泵試驗(yàn)臺(tái)控制器的研制基于單片機(jī)的軟起動(dòng)器的研究和設(shè)計(jì)基于單片機(jī)控制的高速快走絲電火花線切割機(jī)床短循環(huán)走絲方式研究基于單片機(jī)的機(jī)電產(chǎn)品控制系統(tǒng)開(kāi)發(fā)基于PIC單片機(jī)的智能手機(jī)充電器基于單片機(jī)的實(shí)時(shí)內(nèi)核設(shè)計(jì)及其應(yīng)用研究基于單片機(jī)的遠(yuǎn)程抄表系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與研究基于單片機(jī)的煙氣二氧化硫濃度檢測(cè)儀的研制基于微型光譜儀的單片機(jī)系統(tǒng)單片機(jī)系統(tǒng)軟件構(gòu)件開(kāi)發(fā)的技術(shù)研究基于單片機(jī)的液體點(diǎn)滴速度自動(dòng)檢測(cè)儀的研制基于單片機(jī)系統(tǒng)的多功能溫度測(cè)量?jī)x的研制基于PIC單片機(jī)的電能采集終端的設(shè)計(jì)和應(yīng)用基于單片機(jī)的光纖光柵解調(diào)儀的研制氣壓式線性摩擦焊機(jī)單片機(jī)控制系統(tǒng)的研制基于單片機(jī)的數(shù)字磁通門(mén)傳感器基于單片機(jī)的旋轉(zhuǎn)變壓器-數(shù)字轉(zhuǎn)換器的研究基于單片機(jī)的光纖Bragg光柵解調(diào)系統(tǒng)的研究單片機(jī)控制的便攜式多功能乳腺治療儀的研制基于C8051F020單片機(jī)的多生理信號(hào)檢測(cè)儀基于單片機(jī)的電機(jī)運(yùn)動(dòng)控制系統(tǒng)設(shè)計(jì)Pico專(zhuān)用單片機(jī)核的可測(cè)性設(shè)計(jì)研究基于MCS-51單片機(jī)的熱量計(jì)基于雙單片機(jī)的智能遙測(cè)微型氣象站MCS-51單片機(jī)構(gòu)建機(jī)器人的實(shí)踐研究基于單片機(jī)的輪軌力檢測(cè)基于單片機(jī)的GPS定位儀的研究與實(shí)現(xiàn)基于單片機(jī)的電液伺服控制系統(tǒng)用于單片機(jī)系統(tǒng)的MMC卡文件系統(tǒng)研制基于單片機(jī)的時(shí)控和計(jì)數(shù)系統(tǒng)性能優(yōu)化的研究基于單片機(jī)和CPLD的粗光柵位移測(cè)量系統(tǒng)研究單片機(jī)控制的后備式方波UPS提升高職學(xué)生單片機(jī)應(yīng)用能力的探究基于單片機(jī)控制的自動(dòng)低頻減載裝置研究基于單片機(jī)控制的水下焊接電源的研究基于單片機(jī)的多通道數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)基于uPSD3234單片機(jī)的氚表面污染測(cè)量?jī)x的研制基于單片機(jī)的紅外測(cè)油儀的研究96系列單片機(jī)仿真器研究與設(shè)計(jì)基于單片機(jī)的單晶金剛石刀具刃磨設(shè)備的數(shù)控改造基于單片機(jī)的溫度智能控制系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)基于MSP430單片機(jī)的電梯門(mén)機(jī)控制器的研制基于單片機(jī)的氣體測(cè)漏儀的研究基于三菱M16C/6N系列單片機(jī)的CAN/USB協(xié)議轉(zhuǎn)換器基于單片機(jī)和DSP的變壓器油色譜在線監(jiān)測(cè)技術(shù)研究基于單片機(jī)的膛壁溫度報(bào)警系統(tǒng)設(shè)計(jì)基于AVR單片機(jī)的低壓無(wú)功補(bǔ)償控制器的設(shè)計(jì)基于單片機(jī)船舶電力推進(jìn)電機(jī)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)基于單片機(jī)網(wǎng)絡(luò)的振動(dòng)信號(hào)的采集系統(tǒng)基于單片機(jī)的大容量數(shù)據(jù)存儲(chǔ)技術(shù)的應(yīng)用研究基于單片機(jī)的疊圖機(jī)研究與教學(xué)方法實(shí)踐基于單片機(jī)嵌入式Web服務(wù)器技術(shù)的研究及實(shí)現(xiàn)基于AT89S52單片機(jī)的通用數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)基于單片機(jī)的多道脈沖幅度分析儀研究機(jī)器人旋轉(zhuǎn)電弧傳感角焊縫跟蹤單片機(jī)控制系統(tǒng)基于單片機(jī)的控制系統(tǒng)在PLC虛擬教學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用研究基于單片機(jī)系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)通信研究與應(yīng)用基于PIC16F877單片機(jī)的莫爾斯碼自動(dòng)譯碼系統(tǒng)設(shè)計(jì)與研究基于單片機(jī)的模糊控制器在工業(yè)電阻爐上的應(yīng)用研究基于雙單片機(jī)沖床數(shù)控系統(tǒng)的研究與開(kāi)發(fā)基于Cygnal單片機(jī)的μC/OS-Ⅱ的研究基于單片機(jī)的一體化智能差示掃描量熱儀系統(tǒng)研究基于TCP/IP協(xié)議的單片機(jī)與Internet互聯(lián)的研究與實(shí)現(xiàn)變頻調(diào)速液壓電梯單片機(jī)控制器的研究